pmid: "33639933"
title: "Polimorfismo do gene metilenotetrahidrofolato redutase, metilação global do DNA e pressão arterial: um estudo de base populacional no Norte da Índia."
authors: "Yadav S, Longkumer I, Joshi S, Saraswathy KN"
journal: "BMC medical genomics"
pubdate: "2021 Feb 27"
doi: "10.1186/s12920-021-00895-1"
source: "PMC Full Text"

Polimorfismo do gene metilenotetrahidrofolato redutase, metilação global do DNA e pressão arterial: um estudo de base populacional no Norte da Índia.

Autores

Yadav S, Longkumer I, Joshi S, Saraswathy KN

Periodico

BMC medical genomics (2021 Feb 27)

Conteudo

Polimorfismo do gene metilenotetrahidrofolato redutase, metilação global do DNA e pressão arterial: um estudo de base populacional no Norte da Índia

Contexto
A hipertensão é um distúrbio complexo afetado por interações gene-ambiente. O gene da metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) é um dos genes na via do metabolismo de um carbono (OCM) que afeta tanto a pressão arterial quanto o fenômeno epigenético. O polimorfismo do gene MTHFR C677T leva a uma capacidade de metilação reduzida por meio do aumento das concentrações de homocisteína. A metilação global do DNA (5mC%) também é afetada em condições como a hipertensão. No entanto, não foram encontrados estudos para compreender a hipertensão em termos de genética e epigenética simultaneamente. O presente estudo visa compreender a relação entre metilação, polimorfismo do gene MTHFR C677T e hipertensão. Também busca compreender a relação (se houver) entre metilação e medicamentos anti-hipertensivos.

Métodos
Este é um estudo transversal no qual os dados foram coletados de um total de 1634 indivíduos de ambos os sexos na faixa etária de 35 a 65 anos. Hipertensos (PAS ≥ 140 mm Hg e PAD ≥ 90 mm Hg) (em tratamento/não em tratamento) e controles absolutos foram 236 (casos) e 307 (controles), respectivamente. Todas as amostras foram submetidas à triagem de polimorfismo do gene MTHFR C677T (PCR–RFLP) e ensaio de metilação global do DNA (ensaio colorimétrico baseado em ELISA). Os resultados de ambas as análises foram obtidos em 218 casos e 263 controles.

Resultados
A mediana de 5mC% foi relativamente menor entre os casos (p > 0,05) em comparação com os controles, apesar do controle de variáveis de confusão (idade, sexo, tabagismo, álcool, dieta) (r2-0,92, p-0,08). Os casos sem medicação apresentaram 5mC% significativamente reduzida em comparação com os controles (p < 0,05), apesar do ajuste para variáveis de confusão (r2-0,857, p-0,01). Entre os casos (independentemente do tratamento), houve uma variação significativa na 5mC% entre os três genótipos, ou seja, CC, CT e TT, sem tal variação entre os controles. Casos (sem medicação) com genótipo TT apresentaram níveis de metilação significativamente mais baixos em comparação com os controles com genótipo TT e casos (em medicação) (p < 0,01).

Conclusão
A hipometilação global do DNA parece estar associada à hipertensão e os medicamentos anti-hipertensivos parecem melhorar a metilação. Indivíduos hipertensos com genótipo TT, mas sem medicação, são mais propensos à hipometilação global do DNA. Precursores importantes na via OCM incluem micronutrientes como vitamina B-12, B-9 e B-6; suas intervenções nutricionais (seja dietéticas ou suplementares) podem servir como estratégias para prevenir a hipertensão em nível populacional. No entanto, mais estudos epidemiológicos longitudinais são necessários para validação adicional.
A hipertensão ou pressão arterial elevada é um distúrbio complexo afetado por uma interação entre genes e ambiente. Até o final da década de 1990, a hipertensão era considerada como sendo influenciada principalmente por genes. Os genes envolvidos em diversas vias afetam a hipertensão direta ou indiretamente por meio de outros metabólitos a jusante. O gene da metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) é um desses genes que afeta a hipertensão humana. Vários estudos foram conduzidos para entender a associação do polimorfismo do gene MTHFR C677T com a hipertensão, porém com resultados variáveis. O gene MTHFR também é o gene na via do Metabolismo de Um Carbono (MUC) que afeta o fenômeno epigenético através da liberação de grupos metil livres durante a redução irreversível de 5,10-metilenotetrahidrofolato a 5-metiltetrahidrofolato. Relata-se que o polimorfismo do gene MTHFR C677T reduz a atividade enzimática do gene MTHFR, resultando em concentrações diminuídas de 5-metil-THF, concentrações aumentadas de homocisteína e capacidade de metilação reduzida devido à indisponibilidade de grupos metil livres. A disponibilidade desses grupos metil é, portanto, influenciada por variações genéticas e epigenéticas nos genes envolvidos na via do Metabolismo de Um Carbono. A disponibilidade dos grupos metil também pode determinar a atividade de outros genes reguladores da pressão arterial. Evidências literárias sustentam que o alelo T do polimorfismo do gene MTHFR C677T está associado à hipometilação global do DNA e à hipertensão. A hipertensão, por sua vez, também é relatada como estando associada à hipometilação global do DNA. Assim, pode-se inferir que existe uma interação complexa entre a metilação global do DNA, a hipertensão e o polimorfismo do gene MTHFR, e que eles podem estar interligados. O gene MTHFR é, portanto, o gene-chave ligado tanto à hipertensão quanto à metilação global do DNA (5mC%). Embora alguns considerem o ensaio de metilação como metilação "de todo o genoma", outros o consideram como metilação global do DNA; a 5mC% ainda é uma técnica quantitativa, de alto rendimento e com melhor relação custo-benefício do que o ensaio de todo o genoma.

Estudos associando o polimorfismo do gene MTHFR e hipertensão, o gene MTHFR e metilação, e hipertensão e metilação de forma independente foram relatados. No entanto, não foi encontrado nenhum estudo para entender a hipertensão em termos de mecanismos genéticos (MTHFR C677T) e epigenéticos (metilação global do DNA). Assim, o presente estudo é uma tentativa de compreender a inter-relação entre a metilação global do DNA, o polimorfismo do gene MTHFR C677T e a hipertensão na população mendeliana selecionada. O estudo também tenta compreender a relação (se houver) entre a metilação e os medicamentos anti-hipertensivos.

Métodos
Protocolo do estudo
O presente estudo transversal é parte de um projeto de pesquisa financiado pelo Departamento de Biotecnologia (DBT) do Governo da Índia, no qual 1634 indivíduos de ambos os sexos, na faixa etária de 35 a 65 anos e não aparentados até o nível de primos de primeiro grau, foram recrutados aleatoriamente de uma única população mendeliana do Norte da Índia. A pressão arterial foi registrada em 1536 indivíduos, duas vezes com um intervalo de dez minutos entre cada leitura, utilizando a técnica padrão-ouro e esfigmomanômetro de mercúrio. Os participantes do estudo foram acomodados confortavelmente em uma cadeira com o antebraço posicionado ao nível do tórax sobre uma mesa durante a aferição da pressão arterial. Indivíduos com hipertensão crônica foram identificados de acordo com as diretrizes do 7º Relatório do JNC, ou seja, pressão arterial sistólica (PAS) ≥ 140 mmHg e pressão arterial diastólica (PAD) ≥ 90 mmHg. Indivíduos com pressão arterial normal, pré-hipertensão, hipertensão e pressão arterial baixa foram encontrados em 545, 387, 534 e 70, respectivamente. Indivíduos apresentando PAS elevada e PAD elevada (N=188) e indivíduos hipertensos clinicamente estabelecidos (N=48), resultando em um total de 236 casos, foram considerados para o presente estudo. Um total de 307 indivíduos, pareados por idade e sexo para cada indivíduo, foram identificados como controles absolutos (PAS < 120 mmHg e PAD < 80 mmHg). Indivíduos pré-hipertensos (PAS ≥ 120 mmHg, < 139 mmHg e PAD ≥ 80 mmHg, < 89 mmHg) foram excluídos do presente estudo. Dados também foram coletados sobre os medicamentos prescritos (nomes genéricos), como anlodipino, telmisartana, etc., dos participantes do estudo que estavam em uso de medicação.

Amostras de sangue em jejum foram coletadas dos participantes do estudo após a obtenção de consentimento por escrito. Amostras de DNA foram extraídas das amostras de sangue obtidas de todos os participantes. A verificação da qualidade do DNA foi realizada usando espectrofotômetro nanodrop com A260/A230 < 1,5 como padrão.

Polimorfismo do gene MTHFR C677T
O polimorfismo do gene MTHFR C677T foi rastreado em todas as amostras de DNA usando o método PCR-RFLP. Dez por cento das amostras foram repetidas para genotipagem por outro indivíduo para verificar a precisão durante a análise.

Ensaio de metilação global do DNA (5mC%)
Os níveis globais de metilação do DNA foram analisados utilizando a técnica colorimétrica baseada em ELISA, conforme as instruções do fabricante (MethylFlash™ Methylated DNA Quantification Kit-Colorimetric, Epigentek Group Inc., Nova York, NY, EUA, cat. nº P-1034–96). Resumidamente, o DNA foi ligado a poços de tiras especificamente tratados com alta afinidade por DNA. A 5-metilcitosina do DNA foi detectada usando os anticorpos (fornecidos pelo fabricante) e quantificada pela leitura da absorbância a 450 nm usando um espectrofotômetro (MultiscanGo Spectrophotometer, Thermo Fisher Scientific, Waltham, Massachusetts, EUA). Para cada amostra, o ensaio de metilação foi realizado com 200 ng de DNA em duplicata, e os coeficientes de variação intra e inter-ensaio foram observados como sendo < 5%. O ensaio de metilação global do DNA foi realizado por um único indivíduo para evitar variação de manuseio. Os resultados do ensaio de metilação global do DNA puderam ser obtidos apenas para 218 casos e 263 controles devido ao controle de qualidade e outros motivos técnicos, como baixo valor de absorbância ou grandes variações nos resultados em duplicata.

Análises estatísticas
Os dados foram inseridos no MS-Excel e verificados duas vezes por dois indivíduos separadamente para garantir a integridade, a não duplicação e a precisão de todos os dados. Os dados foram apresentados como mediana e intervalo interquartil (IQR), onde a distribuição da variável não foi considerada normal. Os testes de Mann-Whitney e Kruskal-Wallis foram realizados para testar diferenças nos valores medianos para dois e mais de dois grupos, respectivamente. Um valor de p menor ou igual a 0,05 foi considerado estatisticamente significativo. O equilíbrio de Hardy-Weinberg para o polimorfismo do gene MTHFR C677T também foi testado. A análise estatística foi realizada usando o SPSS versão 16.0 para Windows (SPSS Inc., Chicago, Illinois, EUA).

Resultados
O presente estudo tenta compreender a inter-relação entre a metilação global do DNA (5mC%), o polimorfismo do gene MTHFR C677T e a hipertensão. As diferenças nos níveis de 5mC% foram avaliadas entre controles e casos hipertensos (em uso de medicação e sem uso de medicação). Casos (N=218) e controles (N=263) foram comparados em termos de suas variáveis demográficas (idade, sexo), estilo de vida (tabagismo, consumo de álcool, dieta), bioquímicas (folato, vitamina B-12 e homocisteína) e genotípicas (MTHFR C677T).

Distribuição das variáveis demográficas e de estilo de vida entre os casos hipertensos e controles
Controles Casos hipertensos valor de p Idade (anos)Mediana (IQR) 45 (38–52) 50 (42–57) < 0,01 Sexo  Masculino 56 (21,3%) 83 (38,1%) < 0,01  Feminino 207 (78,7%) 135 (61,9%) Tabagismo  Sim 122 (47,5%) 127 (58,5%) 0,02  Não 135 (52,5%) 90 (41,5%) Álcool  Sim 15 (5,7%) 24 (11,1%) 0,03  Não 247 (94,3%) 193 (88,9%) Dieta  Vegetariana 250 (95,4%) 194 (89,4%) 0,01  Não vegetariana 12 (4,6%) 23 (10,6%)

Nos grupos de caso-controle estudados, todos os fatores de confusão para hipertensão, ou seja, idade, sexo masculino, tabagismo, consumo de álcool e dieta não vegetariana, foram encontrados significativamente mais elevados entre os casos (Tabela 1).
Distribuição de variáveis bioquímicas e polimorfismo do gene MTHFR C677T entre os casos hipertensos e controles
Controles Casos valor de p Folato [mediana (IQR)] 3,81 (2,7–6,7) 3,54 (2,6–5,5) 0,30 Vitamina B-12 [mediana (IQR)] 232 (187,2–326,5) 256 (197–384) 0,09 Homocisteína [mediana (IQR)] 19,30 (13,4–28,8) 19,40 (13,7–29,1) 0,69 Genótipo MTHFR  CC 178 (70,1%) 139 (67,1%) 0,79  CT 65 (25,6%) 58 (28,0%)  TT 11 (4,3%) 10 (4,8%)  Valor de p de Hardy–Weinberg 0,291 0,483 Frequência do alelo T 0,17 0,18 0,738
A distribuição genotípica do polimorfismo do gene MTHFR C677T mostrou-se semelhante nos casos e controles (p-0,79). A frequência do alelo T também se mostrou semelhante em ambos os grupos estudados. Os parâmetros bioquímicos, isto é, folato, vitamina B-12 e homocisteína, que estão envolvidos no metabolismo de um carbono e influenciam o status global da metilação do DNA, também foram distribuídos de forma semelhante tanto nos casos quanto nos controles (Tabela 2).
Metilação global do DNA em controles e casos hipertensos
Foi observada metilação global diferencial do DNA (5mC %) entre as categorias selecionadas dos indivíduos estudados, isto é, controles e casos com hipertensão (independentemente da medicação) (Fig. 1). Os níveis medianos (IQR) de metilação global do DNA mostraram-se menores nos casos em comparação aos controles. No entanto, essas diferenças observadas não foram estatisticamente significativas quando comparadas aos controles. Resultados semelhantes foram encontrados na análise de regressão após ajuste para variáveis de confusão, onde nenhuma associação significativa foi observada entre a metilação global do DNA e a hipertensão (r2-0,92, p-0,08).
Distribuição de 5mC% entre controles e casos hipertensos (em tratamento e sem tratamento) com PAS-PAD elevadas
A distribuição dos níveis de metilação global do DNA foi então comparada entre controles e casos hipertensos em relação ao tratamento (Fig. 2). Os níveis de metilação global do DNA mostraram-se menores entre os casos sem medicação [0,82 (0,38–1,70)], seguidos pelos casos que estavam em medicação [0,93 (0,47–1,64)] e controles [1,04 (0,49–2,46)]. Apenas os casos que não estavam em medicação apresentaram níveis significativamente menores de metilação global do DNA em comparação aos controles (p-0,05). Resultados semelhantes foram encontrados na análise de regressão após ajuste para variáveis de confusão, onde foi observada associação significativa entre a metilação global do DNA e a hipertensão em relação à medicação (r2-0,859, p-0,01).
Distribuição de 5mC% entre casos hipertensos (com/sem medicação) e controles em relação ao polimorfismo do gene MTHFR C677T
Os níveis globais de metilação do DNA foram comparados adicionalmente entre controles e casos com relação ao polimorfismo do gene MTHFR C677T (Fig. 3). A tendência da metilação global do DNA parece variar entre os três genótipos, ou seja, CC, CT e TT, tanto nos casos quanto nos controles. Como esperado, entre os casos (sem medicação), observou-se uma tendência de declínio da metilação global do DNA entre os indivíduos com genótipo CC, seguidos pelos genótipos CT e TT, e essa diferença mostrou-se estatisticamente significativa (valor de p de Kruskal–Wallis < 0,001). Por outro lado, entre os controles, observou-se uma queda na metilação global do DNA entre os indivíduos portadores do genótipo CT em comparação com o genótipo CC, seguida por um aumento acentuado entre os indivíduos portadores do genótipo TT. Surpreendentemente, uma tendência semelhante foi observada entre os casos que estavam em uso de medicação, onde os níveis globais de metilação do DNA caíram drasticamente entre os indivíduos com genótipo CT em comparação com os indivíduos portadores do genótipo CC, seguidos por um aumento nos indivíduos portadores do genótipo TT. Quando os respectivos genótipos dos casos (em uso de medicação e sem medicação) e controles foram comparados, os níveis medianos de metilação global do DNA mostraram-se mais elevados entre os casos em uso de medicação com genótipo CC (1,08), seguidos pelos controles (0,99) e casos sem medicação (0,97), embora sem significância estatística (p=0,68). Além disso, com relação ao genótipo CT, os casos em uso de medicação exibiram níveis medianos de metilação global do DNA significativamente mais baixos (0,48) em comparação com os casos sem medicação (0,76) e controles (0,82) (p < 0,01). No entanto, com relação ao genótipo TT, os níveis medianos de metilação global do DNA mostraram-se mais elevados entre os casos em uso de medicação (1,08), seguidos pelos controles (0,96) e casos sem medicação (0,66), e essa diferença mostrou-se estatisticamente significativa (p < 0,01).

Discussão
A hipertensão é uma doença complexa multifatorial que resulta de interações entre genes e ambiente. A interação entre a metilação global do DNA e o polimorfismo do gene MTHFR C677T parece ser importante na hipertensão. Os resultados do presente estudo indicam que a hipometilação global do DNA é observada na hipertensão (independentemente do tratamento) e não está associada ao folato, à vitamina B-12 e à homocisteína. Os níveis globais de metilação do DNA parecem estar significativamente reduzidos em indivíduos com PAS-PAD elevadas que não estão em uso de medicação. A intervenção com medicação para o tratamento da hipertensão parece melhorar os níveis de metilação.
A hipometilação global do DNA tem sido relatada como uma consequência da idade em numerosos estudos envolvendo tanto humanos quanto camundongos. A metilação global do DNA também foi relatada como sendo maior entre os homens. No presente estudo, todos os fatores de confusão demográficos (idade e sexo) e de estilo de vida (tabagismo, consumo de álcool e dieta) selecionados para hipertensão mostraram-se significativamente maiores entre os casos, enquanto as variáveis bioquímicas (folato, vitamina B-12 e homocisteína) e genéticas (polimorfismo do gene MTHFR C677T) mostraram-se distribuídas de forma semelhante em ambos os grupos. A hipometilação global do DNA foi observada entre os casos mesmo após ajustes para todos os fatores de confusão para hipertensão, embora sem significância estatística, sugerindo que a hipometilação global do DNA pode estar associada à hipertensão independentemente dos fatores de confusão. Achados semelhantes que associam a hipertensão à hipometilação global foram relatados em estudos anteriores.

Os níveis de metilação global do DNA mostraram-se mais elevados entre os casos que estavam em uso de medicação em comparação com os casos que não estavam, ou seja, pode-se inferir que a metilação global do DNA parece melhorar após a medicação entre os casos. Não há literatura publicada disponível sobre a influência de medicamentos anti-hipertensivos na metilação global do DNA, mas os resultados do presente estudo sugerem uma melhoria nos níveis de metilação devido à intervenção com medicamentos anti-hipertensivos. O efeito desta hipometilação global do DNA nos genes que influenciam o controle da pressão arterial entre hipertensos, conforme também proposto por Smolarek et al., 2010, não pode ser ignorado. Embora Smolarek et al., 2010 tenham discutido sobre os efeitos pleiotrópicos dos medicamentos anti-hipertensivos na metilação global do DNA, nenhuma correlação foi observada entre o tratamento e a metilação global do DNA em seu estudo. Por ser uma população rural, os indivíduos hipertensos no presente estudo geralmente frequentam hospitais públicos locais, onde são prescritos medicamentos anti-hipertensivos comuns, como bloqueadores dos canais de cálcio, como a anlodipina, ou bloqueadores dos receptores de angiotensina (BRAs), como o telmisartana. Esses medicamentos parecem estar atuando também nos genes de controle da pressão arterial, conforme sugerido por Smolarek et al., 2010. No presente estudo, também foi observado que os medicamentos anti-hipertensivos parecem alterar os níveis de metilação global do DNA.
Como a hipertensão com PAS-PAD elevadas é uma forma grave de hipertensão que prediz risco cardiovascular, quando indivíduos com hipertensão PAS-PAD (sem medicação) foram considerados, eles pareciam apresentar uma redução significativa na metilação global do DNA em comparação com seus respectivos controles (Fig. 2). Observações semelhantes foram vistas após o ajuste para o efeito de fatores de confusão (r2-0,859, valor de p – 0,01). A hipometilação global do DNA, que é um efeito da hipertensão, por sua vez, pode levar a outras adversidades metabólicas (como adversidades cardiovasculares) devido à instabilidade genômica causada pela hipometilação global do DNA, mas pode ser reduzida ou revertida por meio de medicação. Curiosamente, a tendência de 5mC% entre os casos (PAS-PAD alta) parecia semelhante à dos controles, em que os níveis globais de metilação do DNA foram melhorados entre os casos em uso de medicação. Isso sugere que a medicação pode melhorar o status da metilação global do DNA.

Além disso, a metilação global do DNA também é relatada como sendo afetada por mutações em genes candidatos específicos da via metabólica de "um carbono", como o MTHFR. O gene MTHFR afeta a liberação de grupos metil livres na via metabólica da homocisteína durante a redução irreversível de 5,10-metilenotetrahidrofolato para 5-metiltetrahidrofolato. O polimorfismo do gene MTHFR C677T pode reduzir a atividade enzimática da MTHFR, resultando em concentrações diminuídas de 5-metil-THF, concentrações aumentadas de homocisteína e capacidade de metilação reduzida. Assim, indivíduos portadores do alelo T do polimorfismo do gene MTHFR C677T provavelmente exibirão hipometilação devido à maior capacidade de aceitação de grupos metil (maior entre indivíduos portadores do genótipo TT vs. indivíduos CT e CC). No presente estudo, quando se tentou compreender esse fenômeno entre casos e controles, observou-se uma tendência semelhante de diminuição da metilação com um aumento na dose do alelo T (TT < CT < CC) entre os casos (sem medicação). No entanto, tal tendência não foi encontrada entre os controles e casos (em uso de medicação). Os níveis globais de metilação do DNA foram considerados mais baixos entre os indivíduos portadores do genótipo CT em comparação com o genótipo CC, mas um aumento no nível global de metilação do DNA foi observado em relação ao genótipo TT tanto nos controles quanto nos casos em uso de medicação. Um estudo conduzido por Arruda et al., 2013 entre indivíduos saudáveis também relatou que os níveis globais de metilação do DNA em indivíduos portadores do genótipo CT são mais baixos em comparação com indivíduos portadores dos genótipos CC e TT. No entanto, a razão para tal tendência entre os indivíduos portadores do genótipo CT em relação à hipometilação global do DNA precisa ser explorada. Além disso, a variação da metilação global do DNA em relação aos genótipos parece ser diferente apenas entre os casos (em uso de medicação e sem medicação), enquanto nenhuma diferença desse tipo foi observada entre os controles.
A intervenção com medicação parece desempenhar um papel importante na melhoria do estado de metilação do DNA. Isso provavelmente se deve a dois mecanismos. Primeiro, a medicação pode melhorar diretamente os níveis de metilação e o fluxo de grupos metil pode ser desviado para os genes de controle da pressão arterial, ativando-os assim para controlar a pressão arterial. Segundo, o fármaco pode atuar diretamente no controle da pressão arterial e isso pode resultar na melhoria do estado de metilação.

Além disso, a intervenção com medicação é administrada independentemente do estado do genótipo MTHFR de um indivíduo, mas parece haver uma melhoria no estado de metilação apenas entre indivíduos homozigotos em uso de medicação com genótipos CC e TT. Uma queda abrupta nos níveis de metilação entre os casos em uso de medicação com genótipo CT é indicativa de uma resposta insatisfatória desses indivíduos aos medicamentos anti-hipertensivos. Supõe-se que a intervenção com medicação normalize os níveis elevados de pressão arterial e, portanto, os casos em uso de medicação parecem imitar o padrão de 5mC% entre os controles, como também observado no presente estudo, mas os mecanismos exatos envolvidos em tal fenômeno ainda precisam ser explorados. Não existem estudos abrangentes disponíveis que confirmem o papel do genótipo MTHFR em relação ao efeito dos fármacos e à metilação global do DNA.

O tamanho da amostra no presente estudo não é robusto o suficiente para chegar a conclusões importantes sobre a complexa interação entre a metilação global do DNA, o polimorfismo do gene MTHFR C677T e a hipertensão. No entanto, os resultados do presente estudo são indicativos de uma melhoria nos níveis globais de metilação do DNA devido à intervenção com medicamentos anti-hipertensivos, o que é mais pronunciado entre indivíduos com genótipos CC e TT. As descobertas do presente estudo e de estudos anteriores parecem, portanto, construir evidências sobre a associação da hipometilação global do DNA com distúrbios no sistema cardiovascular. Além disso, o simples fato de que a medicação está melhorando a metilação global do DNA entre os casos é uma observação positiva que pode servir como base para as estratégias de intervenção adotadas na regulação da pressão arterial.

Conclusão
Em conclusão, os resultados do presente estudo indicam uma estreita associação entre hipertensão, polimorfismo do gene MTHFR C677T e metilação global do DNA. Além disso, os medicamentos anti-hipertensivos parecem melhorar a metilação entre os casos, o que sugere uma abordagem mais curativa do que preventiva no controle da pressão arterial. Micronutrientes como vitamina B-12, B-9 e B-6 são precursores importantes para a ativação da via metabólica de um carbono e melhoram a disponibilidade de grupos metil livres. Portanto, os níveis de metilação podem ser melhorados aumentando a capacidade desta via por meio de intervenções nutricionais (seja dietéticas ou suplementares) e isso pode servir como uma estratégia para prevenir a hipertensão em nível populacional. No entanto, as descobertas do presente estudo precisam ser validadas com estudos epidemiológicos longitudinais de grande porte para fortalecer ainda mais a associação entre essas três variáveis.

Forças e limitações
O presente estudo é o primeiro do seu tipo em que a relação entre o polimorfismo do gene MTHFR, a metilação global do DNA e a pressão arterial foi avaliada usando um desenho de estudo populacional de campo. Um dos principais pontos fortes do estudo é a consideração de casos com pressão arterial elevada (hipertensão) que desconhecem seu estado hipertensivo e não estão em uso de medicamentos anti-hipertensivos (como BRA, bloqueadores dos canais de cálcio ou betabloqueadores). A segunda vantagem de tal desenho de estudo é a seleção de uma população mendeliana com um pool gênico relativamente comum, de onde foram selecionados tanto os casos (hipertensos) quanto seus controles. A coleta de dados foi restrita a um distrito, ou seja, Palwal, no estado de Haryana, facilitando assim a correspondência geográfica entre casos e controles. Portanto, ao selecionar indivíduos do mesmo grupo étnico e região geográfica, a maioria dos fatores de confusão para a hipertensão e a variação do polimorfismo do gene MTHFR C677T, como etnia (pool gênico) e ambiente (cultura, hábitos alimentares, etc.), está sendo controlada ao máximo no presente estudo. Além disso, os principais fatores que influenciam os níveis de metilação, ou seja, folato, vitamina B-12 e homocisteína, também estão sendo controlados no presente estudo.

Abreviaturas
MTHFR
Metilenotetrahidrofolato redutase
5mC%
Metilação global do DNA
OCM
Metabólica de um carbono
SBP
Pressão arterial sistólica
DBP
Pressão arterial diastólica
IQR
Intervalo interquartil

Nota do editor
A Springer Nature permanece neutra em relação a reivindicações jurisdicionais em mapas publicados e afiliações institucionais.

Contribuições dos autores
SY e IL participaram da concepção e do desenho do estudo, realizaram a coleta de dados durante o trabalho de campo, os ensaios de metilação do DNA e a triagem do polimorfismo MTHFR C677T, estiveram envolvidos na análise dos dados e redigiram o manuscrito; SJ participou da coleta de dados durante o trabalho de campo e da triagem do polimorfismo MTHFR C677T; KNS concebeu e desenhou todo o estudo, esteve envolvido na redação do manuscrito e foi o investigador principal do projeto. Todos os autores leram e aprovaram o manuscrito final.
Financiamento
O financiamento para o estudo foi concedido pelo Departamento de Biotecnologia, Governo da Índia (BT/PR14378/MED/30/535/2010). Não há financiamento disponível para a publicação do presente estudo.
Disponibilidade de dados e materiais
Os conjuntos de dados utilizados e/ou analisados durante o presente estudo estão disponíveis com o autor correspondente mediante solicitação razoável.
Aprovação ética e consentimento para participar
O consentimento pré-informado por escrito foi obtido de todos os indivíduos recrutados para o estudo. O estudo foi aprovado pelo Comitê de Ética do Departamento de Antropologia da Universidade de Delhi.
Consentimento para publicação
Não aplicável.
Interesses conflitantes
Os autores declaram não possuir interesses conflitantes.
Referências
A interação de fatores genéticos e ambientais na etiologia da hipertensão
Genética molecular da hipertensão humana
Homocisteína e doença cardiovascular: evidências de causalidade a partir de uma metanálise
Uma metanálise da associação entre o polimorfismo C677T no gene da metilenotetrahidrofolato redutase e hipertensão
Associação entre os polimorfismos C677T/A1298C da metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) e hipertensão essencial: uma revisão sistemática e metanálise
Associações dos polimorfismos do gene MTHFR com hipertensão e hipertensão na gravidez: uma metanálise de 114 estudos com 15.411 casos e 21.970 controles
Folato e metilação do DNA: uma revisão dos mecanismos moleculares e as evidências do papel do folato
Avaliando a associação entre o polimorfismo 677C>T da metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) e as concentrações de folato no sangue: uma revisão sistemática e metanálise de ensaios e estudos observacionais
Alterações globais na metilação do DNA no sangue de pacientes com hipertensão essencial
Perfil de expressão gênica e efeitos tóxicos em células epiteliais brônquicas humanas expostas à zearalenona
Associação entre a metilação global do DNA leucocitário e risco cardiovascular em mulheres na pós-menopausa
Interações do polimorfismo C677T da metilenotetrahidrofolato redutase com fatores ambientais na suscetibilidade à hipertensão
Status de riboflavina, genótipo MTHFR e pressão arterial: evidências atuais e implicações para a nutrição personalizada
As mutações 677C→T e 1298A→C da 5,10-metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) estão associadas à hipometilação do DNA
Associação de polimorfismos nos genes DNMT1, DNMT3A, DNMT3B, MTHFR e MTRR com níveis globais de metilação do DNA e prognóstico de doença tireoidiana autoimune
O polimorfismo MTHFR C677T e a metilação global do DNA em células epiteliais orais
Determinando a associação entre polimorfismos do gene metilenotetrahidrofolato redutase (MTHFR) e o nível de metilação do DNA genômico: uma meta-análise
Associação entre metilação global do DNA leucocitário, função renal, espessura da camada íntima-média da carótida e homocisteína plasmática em pacientes com doença renal crônica estágio 2–4
O estresse oxidativo altera a modificação global de histonas e a metilação do DNA
Metilação do DNA e hipertensão: evidências emergentes e desafios
Um procedimento simples de "salting out" para extração de DNA de células nucleadas humanas
Espectro dos SNPs C677T e A1298C do gene MTHFR: um estudo entre 23 grupos populacionais da Índia
Gomes MV, Toffoli LV, Arruda DW, et al. Alterações relacionadas à idade no perfil global de metilação do DNA de leucócitos estão ligadas à nutrição, mas não estão associadas ao genótipo MTHFR C677T ou a capacidades funcionais. PLoS ONE 2012;7(12).
Variação dos níveis globais de metilação do DNA com a idade e em crianças autistas
Diferenças específicas de gênero nos níveis de metilação do DNA em loci selecionados de sangue total humano: uma tendência a níveis mais altos de metilação em homens
Diferenças sexuais no padrão de metilação do DNA em todo o genoma e impacto na expressão gênica, níveis de microRNA e secreção de insulina em ilhotas pancreáticas humanas
Aumento das concentrações de homocisteína e S-adenosil-homocisteína e hipometilação do DNA em doenças vasculares
Usando o risco previsto de doença cardiovascular em conjunto com a pressão arterial para orientar o tratamento medicamentoso anti-hipertensivo
Hipometilação do DNA e doenças humanas
A ligação entre o polimorfismo MTHFR C677T, o metabolismo do folato e a metilação global do DNA: uma revisão da literatura