pmid: "37511840"
title: "Efeitos Anti-inflamatórios, Antinociceptivos, Antipiréticos e Gastroprotetores de"
authors: "Subhawa S, Arpornchayanon W, Jaijoy K, Chansakaow S, Soonthornchareonnon N, Sireeratawong S"
journal: "Life (Basel, Switzerland)"
pubdate: "2023 Jun 28"
doi: "10.3390/life13071465"
source: "PMC Full Text"

Efeitos Anti-inflamatórios, Antinociceptivos, Antipiréticos e Gastroprotetores de

Autores

Subhawa S, Arpornchayanon W, Jaijoy K, Chansakaow S, Soonthornchareonnon N, Sireeratawong S

Periodico

Life (Basel, Switzerland) (2023 Jun 28)

Conteudo

Efeitos Anti-inflamatório, Antinociceptivo, Antipirético e Gastroprotetor do Extrato Etanólico de Eurycoma longifolia Jack
Tongkat ali (Eurycoma longifolia Jack) (ELJ) é uma planta da família Simaroubaceae. Suas raízes são utilizadas na medicina tradicional tailandesa para tratar inflamação, dor e febre; entretanto, as capacidades antiúlcera de seu extrato etanólico não foram estudadas. Este estudo examinou os efeitos anti-inflamatório, antinociceptivo, antipirético e gastroprotetor do extrato etanólico de ELJ em modelos animais e constatou que o ELJ reduziu eficazmente o edema de orelha induzido por EPP de maneira dose-dependente e que uma dose elevada de ELJ inibiu a formação de edema de pata traseira induzido por carragenina. Na formação de granuloma induzido por pellet de algodão, uma dose elevada de ELJ suprimiu os aumentos no peso úmido do granuloma, mas não no peso seco ou transudativo. No estudo de nocicepção induzida por formalina, o ELJ apresentou um impacto inibitório significativo e dose-dependente. Adicionalmente, o estudo constatou que a hipertermia induzida por levedura pôde ser significativamente reduzida pela ação antipirética na dose mais elevada de ELJ. Em todos os modelos de úlcera gástrica induzidos por substâncias químicas ou atividade física, os extratos de ELJ nas doses de 150, 300 e 600 mg/kg também preveniram eficazmente a formação de úlcera gástrica. No modelo de ligadura pilórica, contudo, os efeitos do extrato de ELJ sobre o volume gástrico, pH gástrico e acidez total não foram estatisticamente significativos. Estes achados corroboram o uso atual generalizado de Eurycoma longifolia Jack na medicina tradicional, sugerem o potencial medicinal da planta para o desenvolvimento de fitomedicamentos com propriedades anti-inflamatórias, antinociceptivas e antipiréticas, e apoiam seu uso no tratamento de úlceras gástricas devido às suas propriedades gastroprotetoras.

1. Introdução
   A inflamação é uma resposta complexa dos tecidos vivos a uma lesão, que pode afetar significativamente a saúde e o estilo de vida. Durante décadas, a inflamação tem sido tratada com medicamentos anti-inflamatórios, principalmente os anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs), embora vários efeitos colaterais desses medicamentos tenham sido relatados, incluindo náuseas, vômitos, dispepsia, dor de estômago, úlceras e sangramento. Um medicamento anti-inflamatório, os inibidores seletivos da ciclo-oxigenase-2 (COX-2), foi associado a efeitos colaterais cardiovasculares, motivando a busca por alternativas adequadas a esses fármacos frequentemente prescritos em alimentos e ervas. Além de reduzir o risco de efeitos adversos da exposição prolongada a anti-inflamatórios, outro objetivo desejável é identificar ingredientes naturais que não apenas não causem úlceras gástricas, mas que também possam reduzir sua incidência.
   Eurycoma longifolia Jack (ELJ), também conhecida como tongkat ali, é uma planta herbácea pertencente à família Simaroubaceae que possui diversas propriedades terapêuticas. Os efeitos farmacológicos terapêuticos da ELJ são atribuídos à presença de numerosos compostos bioativos, incluindo quassinoides, tirucalanos do tipo triterpeno, derivados de esqualeno, euricomolactona e esteroides bioativos. Vários compostos biologicamente ativos encontrados nas raízes, caules e folhas da ELJ, e até mesmo na casca, estão associados a diversos efeitos farmacológicos. Na tradição médica tailandesa, as raízes da ELJ possuem propriedades antipiréticas extraídas fervendo-se 1 punhado de raízes secas (pesando 8–15 g) com água potável antes do café da manhã e do jantar, duas vezes ao dia. Além disso, extratos de raiz de ELJ têm sido usados como tratamentos analgésicos e anti-inflamatórios. Ademais, preparações de raiz de ELJ têm sido usadas para tratar várias doenças, incluindo malária, febre, impotência e perda de desejo sexual. Em estudos anteriores, a atividade analgésica da ELJ foi avaliada usando os testes da placa quente e do ácido acético em camundongos, e seu efeito anti-inflamatório foi demonstrado no edema de pata induzido por carragenina em camundongos. Notavelmente, é um componente da receita Chantaleela, que na medicina popular tradicional tailandesa é prescrita para alívio da febre e como anti-inflamatório. Além dos efeitos antipiréticos e usos anti-inflamatórios, foi demonstrado que remédios fitoterápicos “Radix” feitos de Althaea officinalis L., incluindo ELJ, podem proteger com sucesso a mucosa gástrica contra lesões gástricas induzidas por etanol. Embora as raízes de ELJ tenham sido usadas na medicina tradicional tailandesa, particularmente na fórmula Chantaleela, que demonstrou eficácia como tratamento antipirético, houve investigações limitadas em animais sobre os efeitos anti-inflamatórios, antipiréticos ou gastroprotetores da ELJ.
   Para investigar as características terapêuticas que a medicina tradicional atribuiu a esta planta medicinal, estudamos os efeitos anti-inflamatórios e antinociceptivos do extrato etanólico da raiz de Eurycoma longifolia Jack (ELJ) in vivo em animais experimentais. Como vários medicamentos anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs) frequentemente produzem lesões na mucosa do estômago humano, também investigamos o efeito gastroprotetor dos extratos de ELJ usando modelos de úlceras gástricas.
2. Materiais e Métodos
   2.1. Produtos Químicos e Reagentes
   Aspirina, fenilbutazona, morfina e prednisolona foram adquiridas da Schering (Bangkok) Ltd., Bangkok, Tailândia. Etanol absoluto, carragenina, fenilpropiolato de etila (EPP), escopoletina, umbeliferona, cimetidina e indometacina foram obtidos da Sigma Chemical Company (St. Louis, MO, EUA). Todos os outros produtos químicos eram de grau analítico.
   2.2. Preparação do Extrato
   Eurycoma longifolia Jack (ELJ) foi obtida da Farmácia Vejpong-Osot em Bangkok, Tailândia. A identificação da espécie foi realizada pela Professora Associada Dra. Noppamas Soonthornchareonnon, incluindo a comparação da preparação de ELJ com uma amostra autêntica da droga vegetal no Museu de Plantas da Faculdade de Farmácia, Universidade Mahidol, Bangkok, Tailândia, e a avaliação de suas propriedades de acordo com os métodos da Farmacopeia de Fitoterápicos Tailandesa, como exame organoléptico, valores de extrativos, % de perda por dessecação, cinzas totais e cinzas insolúveis em ácido. Para preparar o extrato etanólico de ELJ, 5 kg de ELJ seco foram macerados em 18 L de etanol 95% por 5 dias, depois filtrados em papel de filtro Whatman nº 1 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA) e concentrados a 40 °C em evaporador rotativo (EYELA, Tóquio, Japão). O extrato da raiz de Eurycoma longifolia Jack apresentou um rendimento peso/peso de 1,80%.
   2.3. Constituintes Fitoquímicos de E. longifolia Determinados por CCD
   Os constituintes químicos dos extratos etanólicos de ELJ foram investigados utilizando uma abordagem modificada de Tung et al., empregando cromatografia em camada delgada (CCD). O extrato de ELJ foi aplicado em placas de alumínio pré-revestidas com sílica gel 60 GF (254) (Merck, Darmstadt, Alemanha), e diclorometano:metanol (95:5) foi utilizado como fase móvel. Os padrões de referência foram escopoletina e eurycomalectona. Após o desenvolvimento, as placas de CCD foram colocadas em uma câmara de secagem. Os componentes foram detectados sob luz UV de 254 nm e 366 nm, e a placa foi então borrifada com KOH a 10%, anisaldeído-ácido sulfúrico, anisaldeído-ácido sulfúrico e um reagente de aspersão para produtos naturais. As distâncias de migração dos pontos não identificados foram comparadas aos compostos padrão utilizando os valores de Rf, determinados da seguinte forma: Rf = distância de migração da mancha / distância de migração do solvente.
   2.4. Identificação de Fitoquímicos por Cromatografia Líquida de Alta Pressão (HPLC)
   Como em estudos anteriores, cada amostra foi analisada por cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC). Resumidamente, foi utilizada uma coluna HPLC Spheri-5 RP18, 220 mm × 4,6 mm d.i. (Perkin-Elmer®, Waltham, MA, EUA). As fases móveis consistiram em metanol e água (contendo 0,02% de ácido fosfórico) (23:77) em sistema isocrático, com vazão de 1,2 mL/min. Um volume de 20 μL de cada amostra foi injetado na coluna, com vazão de 1,0 mL/min, e monitorado com detector de arranjo de diodos a 345 nm; a temperatura da coluna foi mantida entre 23–25 °C.
   2.5. Animais
   Ratos machos Sprague-Dawley pesando entre 180 e 200 g, criados pelo National Laboratory Animal Center, Mahidol University, Nakhon Pathom, Tailândia, foram utilizados neste estudo. Os cuidados padrão com os animais foram mantidos durante todo o período do estudo, de acordo com as leis e regulamentos que regem o cuidado e uso de animais. A sala foi mantida a 25 ± 1 °C e 60% de umidade, com um ciclo claro/escuro de 12 horas. Água e ração foram fornecidas ad libitum durante todo o estudo. Após a transferência para a sala de animais, todos os animais receberam pelo menos 1 semana de cuidados antes do início do experimento. Todos os estudos com animais foram aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa com Animais (Código do estudo: 0003/2008), Faculdade de Medicina, Thammasat University, Pathum Thani, Tailândia.

2.6. Administração da Substância Teste
Em cada experimento animal, o grupo controle recebeu a mesma via e volume de veículos que o grupo teste. No modelo de edema de orelha, 20 µL/orelha dos extratos de ELJ e um fármaco de referência (ibuprofeno) foram aplicados topicamente nas orelhas dos ratos. Um total de 5 mL/kg de peso corporal dos extratos de ELJ e fármacos de referência (aspirina, morfina e prednisolona) foram administrados por gavagem oral nos outros modelos.

2.7. Atividade Anti-inflamatória
2.7.1. Edema de Orelha Induzido por Fenilpropiolato de Etila (EPP)
Para investigar o efeito anti-inflamatório tópico dos extratos de ELJ, foi utilizada uma versão modificada do método descrito por Brattsand et al. (1982). Trinta ratos machos Sprague-Dawley pesando 40–60 g foram distribuídos aleatoriamente em cinco grupos de seis ratos cada. O EPP foi dissolvido em acetona e administrado topicamente nas superfícies interna e externa de ambas as orelhas na dose de 1 mg/orelha. A acetona (controle do veículo), os extratos de ELJ (1, 2 e 4 mg/orelha) ou o ibuprofeno (1 mg/orelha) foram aplicados na orelha imediatamente antes da administração do EPP. A espessura da orelha foi medida com paquímetro digital antes e aos 15, 30, 60 e 120 minutos após a indução do edema. Em seguida, determinou-se a inibição do edema auricular pelas substâncias teste. A porcentagem de inibição foi calculada comparando-se o aumento da espessura da orelha de cada grupo teste com o do seu grupo controle.

2.7.2. Edema de Pata Traseira Induzido por Carragenina em Ratos
Trinta e seis ratos pesando 100–120 g foram divididos aleatoriamente em seis grupos (6 ratos por grupo). Na face plantar da pata traseira direita dos ratos, carragenina (0,05 mL, 1% p/v em solução salina normal) foi injetada por via intradérmica. Aspirina (300 mg/kg, v.o.) ou extratos de ELJ (300, 600 e 1200 mg/kg) foram administrados 1 h antes da administração de carragenina. O edema da pata traseira direita foi medido previamente e 1, 3 e 5 h após a injeção de carragenina, utilizando um pletismômetro (modelo 7150, Ugo Basile, Itália). O grau de redução na diferença do volume do edema entre as patas traseiras esquerda (sem carragenina) e direita (com carragenina) foi utilizado para determinar a atividade anti-inflamatória dos extratos de ELJ (mL). A porcentagem de inibição foi estimada comparando-se a redução da espessura da pata de cada grupo teste com a do grupo controle correspondente.
2.7.3. Formação de Granuloma Induzido por Pelota de Algodão em Ratos
Vinte e quatro ratos pesando 200 a 250 g foram divididos aleatoriamente em quatro grupos de seis cada. Duas pelotas de algodão estéreis (19–21 mg) foram implantadas por via subcutânea, uma em cada lado do abdômen do rato, enquanto os ratos estavam sob anestesia. Cada grupo de ratos recebeu então água destilada (0,5 mL/100 g, v.o.), aspirina (300 mg/kg/dia, v.o.), prednisolona (5 mg/kg/dia, v.o.) ou extrato de ELJ (1200 mg/kg/dia, v.o.) diariamente por 7 dias. No oitavo dia, os ratos foram anestesiados e as pelotas implantadas foram dissecadas. Os pesos úmido e seco das pelotas (secas a 60 °C por 18 h) foram determinados. A inibição do granuloma e o peso transudativo foram calculados. O peso seco da glândula timo e o peso corporal dos animais também foram medidos.
2.8. Modelo de Nocicepção Induzida por Formalina
O teste da formalina foi conduzido utilizando camundongos albinos suíços seguindo os procedimentos descritos acima. O comportamento dos camundongos após receberem uma injeção intraplantar de 20 mL de formalina a 2,7% (1% de formaldeído) em solução salina na superfície ventral da pata traseira direita foi observado. O tempo de reação de lambedura durante os primeiros cinco minutos após a injeção foi registrado como a resposta neurogênica ou inicial; a reação de lambedura durante o período de 20–30 min após a injeção foi registrada como a resposta de dor inflamatória ou tardia. Uma hora antes da injeção de formalina, os camundongos receberam extratos de ELJ (300, 600 ou 1200 mg/kg) ou solução salina (10 mL/kg) por via oral (por gavagem). Como indicador de nocicepção, a duração da lambedura da pata injetada pelos animais foi medida com um cronômetro após a injeção de formalina e a colocação em cilindros de vidro de 20 cm de diâmetro. Os dados foram analisados utilizando a seguinte equação para determinar a porcentagem média de inibição da resposta de lambedura (PIL).
2.9. Atividade Antipirética
Trinta ratos machos pesando 180–200 g, divididos aleatoriamente em cinco grupos de seis ratos cada, foram submetidos ao modelo de hipertermia induzida por levedura, conforme Mizui et al.. Um termômetro eletrônico de 12 canais (LETICA, modelo TMP 812 RS, Panlab S.L., Cornellà de Llobregat, Espanha) foi utilizado para determinar as temperaturas retais basais. Para induzir hipertermia, foi injetada levedura por via subcutânea (1 mL/100 g de peso corporal, 25% de levedura de cerveja p/v em NSS). Após 18 h, as temperaturas retais foram medidas novamente. Doses de Tween 80 a 5%, aspirina (300 mg/kg) ou extratos de ELJ (75, 150 ou 300 mg/kg) foram administradas por via oral a ratos com aumento de temperatura superior a 1 °C. As temperaturas retais foram medidas aos 30, 60, 90, 120 e 180 min após o tratamento, e novamente após 18 h.
2.10. Modelos de Úlcera Gástrica
Todos os experimentos de úlcera gástrica foram realizados em ratos em jejum de 12 h. Água ad libitum foi permitida até 1 h antes da administração dos fármacos. Para cada experimento, 30 ratos foram distribuídos aleatoriamente em 5 grupos de 6 ratos cada, da seguinte forma: grupo 1 recebeu água estéril (controle), grupo 2 recebeu tratamento padrão (100 mg/kg de cimetidina), grupo 3 recebeu 150 mg/kg de extrato de ELJ, grupo 4 recebeu 300 mg/kg de extrato de ELJ e grupo 5 recebeu 600 mg/kg de extrato de ELJ. Os ratos foram monitorados quanto a sintomas e quaisquer efeitos adversos. Os ratos também receberam uma dose elevada de extrato de ELJ (600 mg/kg) diariamente por 14 dias para investigar se o ELJ poderia causar úlcera gástrica.
2.10.1. Lesões Gástricas Induzidas por Etanol/Ácido Clorídrico (EtOH/HCl)
A avaliação da ulceração gástrica por etanol foi conduzida utilizando uma solução acidificada, conforme modificação de uma metodologia publicada, utilizando trinta ratos (6 ratos por grupo). Uma hora após a administração oral dos fármacos de teste, 0,1 mL de solução de EtOH/HCl (consistindo em 60 mL de etanol absoluto, mais 12,5 mL de HCl e 27,5 mL de água) foi administrado por via oral aos ratos de todos os grupos. Após uma hora, os ratos foram sacrificados, utilizando indução com tiopental sódico, antes da avaliação das lesões gástricas. Foi feita uma incisão ao longo da curvatura maior do estômago, expondo a mucosa gástrica. O tamanho das úlceras gástricas foi medido em milímetros (mm) sob um microscópio com aumento de 10x. O tamanho das lesões foi convertido em um índice de úlcera (UI), utilizando a seguinte fórmula:
Em seguida, a porcentagem de inibição da úlcera gástrica (% de inibição) de cada fármaco de teste foi estimada utilizando a seguinte fórmula: onde UIc é o “índice de úlcera do grupo controle” e UIt é o “índice de úlcera do grupo teste”.
2.10.2. Lesões Gástricas Induzidas por Indometacina
A indometacina é conhecida por causar reações adversas significativas, incluindo hemorragia petequial, lesões inflamatórias e erosões da mucosa gástrica. Uma dose de 30 mg/kg de suspensão de indometacina em Tween 80 a 5% foi administrada por via intraperitoneal a cada um dos animais de todos os grupos. Cinco horas depois, os ratos foram sacrificados para determinar as lesões gástricas. Os índices de úlcera e a % de inibição das úlceras gástricas foram calculados.
2.10.3. Lesões Gástricas Induzidas por Estresse de Imersão em Água com Contenção
A imersão em água e as lesões gástricas induzidas por estresse em ratos, uma combinação de estressores físicos e psicológicos, resultaram em lesões que mimetizavam aquelas causadas por sepse, trauma ou cirurgia. Após os ratos terem sido submetidos a jejum de 48 h sem comida e 1 h sem água, eles foram aleatoriamente divididos em 5 grupos de seis cada, e os fármacos de teste foram administrados por via oral. Uma hora após a administração do fármaco, os ratos foram colocados em gaiolas de aço inoxidável que comportam apenas um animal por gaiola, com a cabeça ereta por 5 h, e as gaiolas imersas em um tanque de água fria (20 ± 2 °C). O nível da água foi mantido na altura do peito dos ratos. Os ratos foram então sacrificados, e as lesões gástricas foram medidas. Os índices de úlcera e a % de inibição foram comparados entre os grupos.

2.11. Ligadura do Piloro
Uma hora após a administração do fármaco, anestesia geral foi administrada a cada rato. Foram realizadas laparotomia e ligadura do piloro, seguidas de fechamento da pele. Cinco horas depois, os animais foram sacrificados. Seus estômagos e conteúdos gástricos foram removidos. Após centrifugação a 2500 rpm por 5 min, o suco gástrico foi testado quanto ao volume total e pH, bem como acidez total no sobrenadante. A quantificação da acidez total do suco gástrico foi realizada por titulação com NaOH 0,1 N até um ponto final de pH 7,4 usando fenolftaleína como indicador para determinar a quantidade em ml e µEq por 100 g de peso corporal do rato a cada hora. As úlceras gástricas foram medidas em seu maior comprimento (mm), e então o IU e a porcentagem de inibição da úlcera foram calculados.

2.12. Análise Estatística
A análise de variância de uma via (ANOVA) e o teste post hoc de diferença mínima significativa (LSD) foram usados para comparar os dados entre os grupos utilizando o software GraphPad Prism 9.0 (GraphPad Software, Inc., San Diego, CA, EUA). Os dados são apresentados como média ± erro padrão da média (EPM). Valores de p menores que 0,05 foram considerados estatisticamente significativos.

3. Resultados
   3.1. Especificação de E. longifolia Jack por Determinações de TLC e HPLC
   A triagem fitoquímica foi realizada na raiz de ELJ de acordo com o protocolo do método padrão. A saponina, os terpenoides e um composto de cor azul não identificado foram encontrados na amostra testada. Os resultados de seus respectivos testes de qualidade, conduzidos de acordo com a Farmacopeia Herbácea Tailandesa de 2018, são mostrados na Tabela 1.
   Escopoletina e euricomalectona foram selecionadas como padrões de referência, e seus valores de Rf foram medidos, conforme representado na Figura 1. A escopoletina foi visualizada como manchas sob luz UV de 254 e 366 nm em KOH 10%, reagente de anisaldeído-ácido sulfúrico com UV a 366 nm e reagente de aspersão para produtos naturais, com Rf = 0,40. Enquanto sob luz UV de 254 nm e com reagente de anisaldeído-ácido sulfúrico, a euricomalectona apareceu como uma mancha com Rf = 0,50. O extrato etanólico de ELJ resultou em uma banda azul com Rf = 0,40 sob luz UV de 254 e 366 nm, KOH 10%, reagente de anisaldeído-ácido sulfúrico com UV a 366 nm e aspersão para produtos naturais, sugerindo a presença de escopoletina. Diferentemente do padrão de euricomalectona, o extrato etanólico de ELJ exibiu bandas sob luz UV de 366 nm, KOH 10% e reagente de aspersão para produtos naturais com Rf = 0,52. De acordo com o estudo anterior, foi relatado que a escopoletina e a euricomalectona são componentes do extrato etanólico de E. longifolia Jack.

Além da TLC, a escopoletina também foi observada como um pico nítido na HPLC, e a quantidade dela no extrato de ELJ foi então comparada quantitativamente ao padrão (Figura 2A) e a umbeliferona, com um tempo de retenção bem separado da escopoletina, foi usada como padrão interno para corrigir erros de volume (Figura 2B). De acordo com a análise por HPLC, a escopoletina correspondeu a 12,590 µg/mL do extrato de ELJ, o que foi determinado como 0,252% p/p do extrato bruto. O resultado indica que os achados de escopoletina na TLC foram consistentes com as análises por HPLC. Portanto, a presença de escopoletina e euricomalectona em nosso estudo sobre os extratos de ELJ analisados foi consistente com a pesquisa anterior. No futuro, a tecnologia de TLC poderá ser combinada com espectrometria de massas para a identificação dos componentes químicos que foram separados.

3.2. Edema de Orelha Induzido por EPP
Conforme indicado na Figura 3, o EPP aplicado topicamente nas orelhas de ratos causou edema de orelha após 15 min. O efeito máximo durou uma hora e depois diminuiu progressivamente. Todos os tratamentos, incluindo os extratos de ELJ e a fenilbutazona, diminuíram significativamente a formação de edema de orelha, com porcentagens de inibição equivalentes em todos os pontos de tempo de avaliação.

3.3. Edema de Pata Traseira Induzido por Carragenina
A Figura 4 mostra o efeito inibitório do tratamento oral com extratos de ELJ sobre o edema de pata induzido por carragenina em ratos. A injeção de carragenina causou edema da pata traseira em 1 h, com o efeito máximo ocorrendo após 3 h. Apenas o extrato de ELJ em dose alta (1200 mg/kg) e a aspirina (300 mg/kg) preveniram efetivamente a formação de edema da pata traseira em todos os pontos de tempo de avaliação, com a maior inibição em 1 h após a administração de carragenina. Esse impacto inibitório dos extratos de ELJ pareceu ser dependente da dose.

3.4. Formação de Granuloma Induzido por Pellet de Algodão
A aspirina (300 mg/kg/dia) e o extrato de ELJ (1200 mg/kg/dia) tenderam a reduzir os pesos transudativos e os pesos dos granulomas, conforme demonstrado por suas inibições do granuloma de 4% e 25%, respectivamente, exceto pela prednisolona (5 mg/kg/dia), que reduziu significativamente em relação aos grupos controle, com inibição do granuloma de 37% (Tabela 2). Como mostrado na Tabela 3, o ganho de peso corporal e o peso seco do timo não diferiram substancialmente entre os grupos prednisolona, aspirina e extrato de ELJ.
3.5. Modelo de Nocicepção Induzida por Formalina
No teste da formalina, a duração média de lambida no grupo controle foi de 67,8 s na fase inicial e aumentou para 93,8 s na fase tardia (Tabela 4). Todos os tratamentos (aspirina, morfina e extratos de ELJ) inibiram significativamente a lambida da pata em ambas as fases, de maneira dose-dependente. Na fase inicial, a porcentagem de inibição da lambida da pata pelos extratos de ELJ nas doses de 300, 600 e 1200 mg/kg foi quase a mesma, correspondendo a 34%, 38% e 43%, respectivamente. No entanto, na fase tardia, a inibição máxima foi registrada para a aspirina (100%), seguida pela morfina (98%) e pelos extratos de ELJ, variando de 88 a 97%, o que foi comparável ao padrão.
3.6. Atividade Antipirética
Conforme mostrado na Tabela 5, a temperatura retal de todos os camundongos aumentou 18 h após a injeção de levedura de panificação. A aspirina na dose de 300 mg/kg e o extrato de ELJ na dose de 1200 mg/kg reduziram significativamente a hipertermia em todos os pontos de tempo (Tabela 5).
3.7. Atividades Antiulcerogênicas do Extrato de ELJ em Modelos de Úlcera Gástrica
A administração de ELJ a ratos na dose mais alta (600 mg/kg) por 14 dias não resultou no desenvolvimento de úlceras estomacais (Figura 5). O efeito antiulcerogênico do extrato de ELJ foi investigado utilizando três modelos de úlcera gástrica. O modelo de lesões gástricas induzidas por EtOH/HCl resulta na lesão mais grave da mucosa gástrica, com várias áreas hemorrágicas na porção glandular do estômago. A administração dos extratos de ELJ nas doses de 150, 300 e 600 mg/kg e de cimetidina a 100 mg/kg pareceu reduzir as lesões estomacais em comparação com o grupo de indução. Em comparação com o modelo de lesões gástricas induzidas por EtOH/HCl, os modelos de indometacina e de estresse por imersão em água com contenção produziram menos manchas e menos danos à mucosa glandular do estômago. Em ambos os modelos, o dano à mucosa estomacal foi reduzido após o tratamento com extrato de ELJ ou cimetidina. Além disso, não houve evidência de dano ao estômago no grupo que recebeu apenas o extrato de ELJ.
3.7.1. Efeito do ELJ sobre a Úlcera Gástrica Induzida por EtOH/HCl em Ratos
No modelo de lesões gástricas induzidas por EtOH/HCl, o extrato ELJ nas doses de 150, 300 e 600 mg/kg demonstrou níveis de inibição de úlcera gástrica de 55, 60 e 62%, respectivamente (Tabela Suplementar S3). Os índices de úlcera foram drasticamente reduzidos em comparação ao grupo controle após o tratamento com 150, 300 e 600 mg/kg do extrato ELJ (Figura 6). Além disso, o extrato ELJ apresentou índices de úlcera e percentuais de inibição idênticos nas doses mais altas de 300 e 600 mg/kg. Adicionalmente, observou-se que a cimetidina teve um efeito mais pronunciado na redução das úlceras gástricas do que o extrato ELJ, sugerindo que os tratamentos com extrato ELJ podem ajudar a reduzir e prevenir lesões gástricas induzidas por EtOH/HCl.
3.7.2. Efeito do ELJ e da Cimetidina sobre a Úlcera Gástrica Induzida por Indometacina em Ratos
Com um índice de úlcera de 9,30 ± 0,59 mm, o dano induzido pela indometacina na mucosa glandular gástrica do grupo controle foi evidente (Tabela Suplementar S4). Ao contrário, em todas as doses, os ratos tratados com cimetidina ou ELJ exibiram lesões gástricas drasticamente reduzidas. Na dose de 600 mg/kg, o ELJ inibiu as úlceras gástricas em no máximo 93%, enquanto a cimetidina inibiu as úlceras em 95% (Figura 7).
3.7.3. Efeito do ELJ sobre a Úlcera Gástrica Induzida por Estresse de Imersão em Água com Contenção em Ratos
O extrato ELJ nas doses de 150, 300 e 600 mg/kg e a cimetidina na dose de 100 mg/kg reduziram significativamente a formação de úlceras gástricas induzidas pelo estresse de imersão em água com contenção nos ratos (Figura 8). Os percentuais de inibição da cimetidina na dose de 100 mg/kg e do extrato ELJ nas doses de 150, 300 e 600 mg/kg foram de 95, 71, 89 e 89% no modelo de lesões gástricas induzidas por estresse de imersão em água com contenção (Tabela Suplementar S5). Esses achados sugerem que o extrato ELJ pode ter a capacidade de reduzir a gravidade de úlceras gástricas induzidas química e fisiologicamente.
3.8. Modelo de Ligadura do Piloro
Nenhuma das doses do extrato ELJ reduziu a taxa secretória de ácido gástrico ou a acidez total, nem aumentou o pH intragástrico no modelo de ligadura do piloro em ratos (Tabela 6). Por outro lado, a taxa secretória e a acidez total nos ratos que receberam 100 mg/kg de cimetidina diminuíram significativamente em comparação aos controles.
4. Discussão
Atualmente, as ervas medicinais são comumente utilizadas como aditivos alimentares para a manutenção da saúde, e os produtos vegetais também têm sido cada vez mais encontrados no mercado, pois as ervas contêm diversos materiais naturais, incluindo ácidos fenólicos e flavonoides, que são usados no tratamento de doenças. As decocções das folhas de E. longifolia são usadas para lavar coceiras, enquanto a casca da raiz é utilizada no tratamento de úlceras gástricas, diarreia e febre. Além disso, suas raízes são empregadas como estimulante do apetite e suplemento nutricional. Várias investigações sobre a bioatividade dessa planta foram conduzidas; no entanto, as atividades anti-inflamatória, antinociceptiva e antipirética do extrato etanólico de E. longifolia Jack (ELJ) e sua eficácia protetora contra úlceras gástricas não foram investigadas. O presente estudo concentra-se no potencial antiúlcera do ELJ em modelos animais.
Além da extração, o etanol é comumente usado para a triagem de fitoconstituintes em extratos vegetais devido à facilidade com que penetra na membrana celular, alcançando assim alvos intracelulares. Adicionalmente, as plantas utilizadas na extração etanólica contêm fitoquímicos como ácidos fenólicos e flavonoides, que podem ser diretamente comparáveis a outros solventes (por exemplo, hexano, acetato de etila ou acetona), e o etanol pode ser usado de forma eficaz no tratamento de resíduos industriais. Os métodos de extração aumentam as quantidades de compostos dependendo do solvente utilizado e do processo de extração. Em 2010, Huang e Chang relataram que o etanol pode oferecer um rendimento mais elevado; neste estudo, portanto, optamos por usar etanol para a extração.
A partir do padrão químico do efeito do extrato de ELJ em TLC e HPLC, encontrado neste estudo, qualificamos agora a eficácia das ervas usando uma abordagem de modelo de controle seguindo a fórmula da Farmacopeia Herbária Tailandesa (THP) para gerar a monografia desta planta. Estudos de TLC demonstraram que nosso extrato de ELJ contém escopoletina, enquanto a triagem fitoquímica revelou a presença de fenólicos, taninos, flavonoides e terpenos. Além de promover a cicatrização de feridas, foi demonstrado que esses compostos exibem propriedades antioxidantes. De fato, a atividade antioxidante do extrato de ELJ está positivamente correlacionada com o conteúdo de flavonoides. As impressões digitais de TLC do extrato de ELJ (Figura 1) foram comparadas com os marcadores de referência, como a escopoletina. Em comparação com a eurycomalectona, o padrão cromatográfico do extrato de ELJ foi notavelmente mais fraco. Assim, a eurycomalectona no extrato de ELJ continha menos elementos químicos do que as outras amostras, indicando que era menos eficaz. Essa discrepância pode ter sido causada por diferenças nas condições ambientais em que as plantas foram cultivadas, ou pela idade das plantas quando foram colhidas, entre outros fatores. O padrão de TLC da escopoletina se assemelha ao padrão do extrato de ELJ que observamos neste estudo (Figura 1). Juntamente com os dois primeiros componentes do ELJ (escopoletina e eurycomalectona), os quassinoides são outro componente crucial que demonstrou proteger contra úlceras gástricas em ratos com ligadura pilórica e lesões gástricas induzidas por indometacina. A abordagem de fracionamento deve ser investigada mais a fundo para estudar fitoquímicos e substâncias ativas. Além disso, outros quassinoides, como eurycolactona A, B, D, E e F, possuem propriedades anti-inflamatórias, enquanto tanto a eurycolactona quanto o eurycomanol regulam vias de sinalização envolvidas no desenvolvimento celular, morte celular e inflamação.
Em um estudo anterior de um extrato aquoso de Eurycoma longifolia Jack (ELJ) sobre as funções reprodutivas em ratos, a faixa de dose eficaz para o ELJ foi de 200–800 mg/kg de peso corporal. Essa faixa de ELJ extraído por metanol ou água tem sido utilizada em várias investigações. A eficácia gastroprotetora do extrato de ELJ administrado na dose de 100 mg/kg, comparada à do fármaco padrão cimetidina (100 mg/kg), para a prevenção do desenvolvimento de úlceras gástricas agudas foi investigada em ratos contidos. Com base nesse estudo, uma faixa de dose de 150–600 mg/kg de peso corporal foi selecionada como uma concentração segura e eficaz para a administração de ELJ a ratos neste estudo. Devido à sua segurança, a Autoridade Europeia para a Segurança dos Alimentos (EFSA) classifica o ELJ como um novo alimento na Europa, e um efeito de toxicidade crônica de 12 meses em ratos com 250, 500 e 1000 mg/kg de peso corporal por dia não revelou toxicidade para o extrato de ELJ. Além disso, a Medicina Tradicional Tailandesa o utiliza há anos para tratar malária. Esses resultados indicam que o extrato de ELJ é seguro tanto para animais quanto para humanos. Usando vários modelos animais, este estudo pôde demonstrar, pela primeira vez, a atividade antinociceptiva da Eurycoma longifolia Jack, mas não as atividades anti-inflamatória e analgésica.
O ELJ tem sido um procedimento amplamente utilizado para triar e avaliar a atividade anti-inflamatória de compostos de teste usando o modelo de edema de orelha induzido por EPP. O EPP desencadeia a liberação de mediadores pró-inflamatórios, incluindo histamina, serotonina, cininas e prostaglandinas, resultando em uma resposta inflamatória aguda que causa alterações vasculares, incluindo vasodilatação e aumento da permeabilidade vascular, resultando na formação de edema de orelha. Este estudo usou fenilbutazona como fármaco de referência para inibir a ciclo-oxigenase (COX). Esses mediadores pró-inflamatórios, assim como tanto a fenilbutazona quanto os extratos de ELJ, reduziram efetivamente o edema de orelha induzido por EPP. Isso indica que o potencial mecanismo de ação dos extratos de ELJ pode envolver a supressão da produção desses mediadores pró-inflamatórios.
A injeção de carragenina na superfície plantar da pata traseira induz uma reação inflamatória inicial que resulta em uma fase bifásica de edema de pata, sendo um modelo bem estabelecido para testar a eficácia anti-inflamatória de vários tratamentos. Durante a primeira fase após a injeção de carragenina (0–2,5 h), cininas, serotonina e histamina são liberadas. A segunda fase (2,5–6 h) é caracterizada pela liberação de bradicinina, NO e PGs, que estão associados ao aumento das atividades da COX-2 e da óxido nítrico sintase (iNOS), bem como de radicais livres derivados do oxigênio, além da infiltração e ativação de neutrófilos nas áreas lesionadas. Em nosso estudo atual, apenas o tratamento oral com uma dose alta de ELJ (1200 mg/kg) ou de aspirina (300 mg/kg) reduziu significativamente a produção de edema de pata induzido por carragenina em ratos durante todos os períodos de medição, demonstrando a capacidade da formulação de modificar a intensidade da inflamação.

A formação de granuloma induzida por pellet de algodão, cujas respostas podem ser classificadas em três estágios, é comumente usada para examinar os efeitos anti-inflamatórios de compostos-teste sobre a inflamação crônica. A fase inicial ou transudativa, que ocorre 0–3 h após a implantação do pellet de algodão, é caracterizada pelo extravasamento de líquido dos vasos sanguíneos devido ao aumento da permeabilidade vascular. A segunda fase, ou exsudativa, ocorre 3–72 h após a implantação do pellet de algodão e é caracterizada pelo extravasamento de proteínas da corrente sanguínea ao redor do granuloma devido ao aumento significativo da permeabilidade vascular. A fase final ou proliferativa, com duração de 3–6 dias, é caracterizada pelo desenvolvimento de tecidos granulomatosos resultantes da liberação contínua de mediadores pró-inflamatórios. De acordo com Swingle e Shideman (1972), o peso do líquido no granuloma está correlacionado com o componente transudativo. Em contraste, o peso do pellet seco está associado à quantidade de tecido granulomatoso depositado. Em termos de terapia, os esteroides podem diminuir significativamente tanto os estágios transudativo quanto proliferativo, enquanto os AINEs, como a aspirina, podem reduzir esses efeitos apenas moderadamente. O presente estudo mostrou que, embora o extrato de ELJ não tenha sido capaz de reduzir efetivamente o peso transudativo ou suprimir a formação de granuloma, esses efeitos foram mais pronunciados quando comparados à aspirina, mas menos pronunciados quando comparados à prednisolona. Além disso, o peso do timo e o ganho de peso geral não foram afetados pelo extrato de ELJ. Assim, parece improvável que o extrato de ELJ tenha uma ação semelhante a esteroide. Em conjunto, esses dados sugerem que o extrato de ELJ pode reduzir a inflamação crônica com um efeito superior ao da aspirina, mas inferior ao da prednisolona. No entanto, os mecanismos de ação do extrato de ELJ precisam ser mais explorados.
O teste da formalina é um modelo adequado e exaustivo para testar a eficácia antinociceptiva de fármacos. A fase inicial de dor neurogênica é causada pela estimulação direta dos nociceptores, enquanto a fase tardia de dor inflamatória é causada pela liberação de mediadores pró-inflamatórios. Nesta investigação, todos os tratamentos com extrato de ELJ inibiram significativamente as respostas de lambedura da pata em ambas as fases (Tabela 4). Este achado indicou que os extratos de ELJ possuem eficácia analgésica ao reduzir a dor neurogênica inicial e, em particular, a dor inflamatória tardia. A porcentagem de inibição da resposta de lambedura na fase tardia foi maior do que na fase inicial para todos os tratamentos, com efeitos comparáveis aos da aspirina, possivelmente devido à diminuição da produção ou inibição preferencial de mediadores pró-inflamatórios, como prostaglandina, adenosina e histamina, no tecido periférico.

Acredita-se geralmente que a hipertermia induzida por levedura é causada pela ativação de pirogênio endógeno e pela consequente síntese de mediadores pró-inflamatórios, que então atuam no hipotálamo e impulsionam a síntese de prostaglandina E2 (PGE2) na área pré-óptica dos centros termorreguladores do hipotálamo anterior. A inibição da síntese de prostaglandinas poderia ser um mecanismo de ação antipirética comparável ao do paracetamol e da aspirina, e a inibição da prostaglandina pode ser alcançada pela diminuição da atividade da enzima ciclo-oxigenase. Vários mediadores contribuem para a febre, e sua supressão é responsável pelo efeito antipirético. Apenas uma dose elevada de extrato de ELJ (1200 mg/kg) reduziu efetivamente a temperatura retal de ratos infectados com levedura. Assim, pode-se hipotetizar que o extrato de ELJ continha componentes farmacologicamente ativos capazes de inibir a liberação de prostaglandina. Este resultado levou à hipótese de que o extrato de ELJ poderia exercer efeitos antipiréticos centrais.

Uma vez que os efeitos colaterais gastrointestinais indesejáveis dos medicamentos anti-inflamatórios existentes são grandes desvantagens, pacientes e médicos receberão bem novos anti-inflamatórios que possam ajudar a evitar esses problemas, como o ELJ, um extrato derivado da planta florífera Eurycoma longifolia Jack (Tongkat ali), da família Simaroubaceae, nativa da Indonésia, Mianmar, Laos e Tailândia. A maioria dos AINEs usados para tratar inflamação e dor também resulta em úlceras estomacais. Administramos extrato de ELJ a ratos por quatorze dias, após primeiro investigar seu impacto sobre úlceras gástricas em ratos. Verificou-se que o extrato de EJL não poderia ser a causa de úlceras gástricas. Posteriormente, ratos que receberam 150 a 600 mg/kg de extrato de ELJ foram examinados para determinar se ele poderia prevenir úlceras do trato gastrointestinal.
O etanol acidificado pode ser administrado por via oral e é conhecido por causar estresse oxidativo intracelular na mucosa gástrica, além de romper o muco gástrico, o que pode perturbar a mucosa epitelial superficial, causar necrose celular e provocar úlcera gástrica. Além disso, o modelo EtOH/HCl mostrou que o ácido clorídrico induz a formação de úlcera gástrica por irritação direta da mucosa gástrica, enquanto o etanol diminui a produção de muco gástrico, a glutationa endógena, o fluxo sanguíneo da mucosa e as prostaglandinas. Os resultados deste estudo mostram que ratos que receberam extrato de ELJ nas doses de 150, 300 e 600 mg/kg apresentaram índices de úlcera consideravelmente menores do que os controles. De acordo com pesquisas anteriores, um extrato aquoso de E. longifolia contém quantidades significativas de superóxido dismutase (SOD) e capacidade de eliminação de radicais hidroxila. A SOD é um antioxidante que desempenha um papel crucial na prevenção do estresse oxidativo. Assim, é provável que o impacto antioxidante do extrato de ELJ contribua para a redução da formação de úlcera gástrica induzida por álcool acidificado. Esses achados são comparáveis aos estudos do grupo da cimetidina, indicando que o extrato de ELJ apresenta atividade gastroprotetora. No entanto, o mecanismo da atividade antioxidante do extrato de ELJ em relação ao modelo de úlcera gástrica induzida por EtOH/HCl deve ser explorado mais a fundo.

O uso de AINEs como a indometacina tipicamente causa úlceras gástricas ao romper a barreira mucosa gástrica natural de muco hidrofóbico e bicarbonatos. A inibição da enzima ciclooxigenase-1 (COX-1) perturba a síntese de prostaglandinas citoprotetoras. Além disso, a indometacina pode causar dano direto à mucosa ao desacoplar a fosforilação oxidativa mitocondrial, o que leva a um aumento na formação de espécies reativas de oxigênio (EROs). Os efeitos antiulcerogênicos foram confirmados no modelo de lesão gástrica induzida por indometacina. Em diferentes dosagens de extrato de ELJ, os índices de úlcera foram estatisticamente significativamente menores do que os dos controles. Em uma dose alta de extrato de ELJ (600 mg/kg), o índice de úlcera dos ratos tratados foi não inferior ao do grupo de ratos tratados com 100 mg/kg de cimetidina.

Quando ratos experimentais são expostos à água fria, o estresse pode induzir hiperatividade vagal, aumentando assim a secreção de ácido gástrico, enquanto diminui o fluxo sanguíneo da mucosa gástrica, levando à formação de úlcera gástrica. Como demonstrado no modelo de lesão gástrica induzida por estresse de imersão em água com contenção, os índices de úlcera dos grupos tratados com ELJ foram significativamente menores do que o do grupo não tratado com ELJ e foram quase os mesmos do grupo tratado com cimetidina.
Além dos modelos de úlcera péptica induzida por EtOH/HCl e indometacina, as características macroscópicas e microscópicas são fundamentais para elucidar os mecanismos celulares. Ambos os modelos geram escores totais a partir de escores de avaliação parciais semelhantes no nível macroscópico (tamanho, número e local das lesões hemorrágicas). Quando os tratamentos antiulcerosos foram estudados macroscopicamente, as lesões gástricas diminuíram, principalmente com a cimetidina e o extrato ELJ em doses altas (600 mg/kg). Em ambos os modelos animais, os medicamentos antiulcerosos reduziram significativamente a profundidade da erosão da mucosa. No entanto, o escore de avaliação microscópica, que inclui a profundidade da erosão, a gravidade da hemorragia, a inflamação e a apoptose, deve ser investigado mais a fundo para identificar os possíveis mecanismos de ação do extrato ELJ.

A ligadura pilórica é um modelo cirúrgico utilizado para determinar a atividade antissecretora. A ligadura do piloro causa acúmulo intraluminal de HCl, que danifica agressivamente a mucosa gástrica. Neste estudo, a produção de ácido gástrico foi examinada em todos os grupos, mas apenas os animais do grupo cimetidina apresentaram redução significativa das taxas de secreção de ácido gástrico e da acidez total. O extrato ELJ não diminuiu o volume de ácido gástrico nem aumentou o pH intragástrico. A escopoletina, um composto purificado encontrado no extrato ELJ, demonstrou ter efeito preventivo contra o desenvolvimento de esofagite. No presente estudo, no entanto, é provável que a concentração de escopoletina no extrato ELJ, de 12,590 g/mL, tenha sido insuficiente para suprimir a secreção de ácido gástrico e a acidez total (Tabela 6). Além disso, obter escopoletina suficiente para usar em cada experimento foi problemático, pois a quantidade de extrato ELJ disponível era limitada. A cimetidina é um antagonista dos receptores de histamina-2 (HH2R) que controla a secreção de ácido gástrico pelas células parietais. Assim, os resultados indicam que a atividade antiulcerogênica do extrato ELJ não está relacionada à sua atividade antissecretora.
Um estudo anterior de um produto contendo ELJ como constituinte primário sobre efeitos gastroprotetores e antioxidantes gastrointestinais descobriu que este produto poderia prevenir úlceras gástricas no modelo de lesão gástrica induzida por EtOH, mas não conseguiu reduzir os níveis de MDA (malondialdeído) ou o ácido gástrico. Como pesquisas anteriores sobre ELJ foram inconclusivas, é necessário um estudo adicional de sua eficácia protetora contra úlceras gástricas. O presente estudo investigou os efeitos gastroprotetores do ELJ usando três tipos de úlceras gástricas induzidas em ratos por meio de etanol acidificado, indometacina e imersão em água com contenção, respectivamente. Em todos os modelos de úlcera gástrica, o extrato de ELJ nas concentrações de 150, 300 e 600 mg/kg preveniu efetivamente a formação de úlceras gástricas. A eficácia do extrato de ELJ a 600 mg/kg foi aproximadamente comparável à da cimetidina a 100 mg/kg, correspondendo a 62%, 93% e 82% nos modelos de lesão gástrica induzida por EtOH/HCl, induzida por indometacina e induzida por estresse de imersão em água com contenção, respectivamente. Em contraste, a eficácia nos grupos tratados com cimetidina foi superior à do ELJ, com 75%, 95% e 92%. No modelo de ligadura pilórica, no entanto, os efeitos do extrato de ELJ sobre o volume gástrico, pH gástrico e acidez total não foram estatisticamente significativos, indicando que o extrato de ELJ possui potentes propriedades antiúlcera gástrica, mas não tem efeito sobre o pH ou a acidez gástrica.
Esta investigação não clínica foi conduzida para examinar os efeitos gastroprotetores (isto é, inflamação, febre e dor) do extrato de ELJ in vivo usando modelos animais. Alguns estudos clínicos demonstraram que o extrato de ELJ é seguro para uso e pode até ser eficaz na indução de imunomodulação pela ingestão de cápsulas contendo 200 mg de um extrato de raiz de E. longifolia padronizado, hidrossolúvel, TA (Tongkat Ali), sem induzir toxicidade nos parâmetros sanguíneos ou análises bioquímicas. Embora tenha havido apenas alguns estudos clínicos sobre o extrato de ELJ, prevê-se que os resultados deste estudo possam levar a futuros ensaios clínicos para investigar a ação do extrato de ELJ e estabelecer possíveis mecanismos para sua capacidade de proteção contra úlceras gástricas.
5. Conclusões
O presente estudo demonstra que o extrato etanólico de Eurycoma longifolia Jack (ELJ) exerce ação anti-inflamatória e antinociceptiva dose-dependente contra a nocicepção induzida por formalina, enquanto apenas uma dose elevada do extrato ELJ apresenta atividade antipirética. Este estudo fornece evidências científicas, em fase pré-clínica, da atividade farmacológica do extrato de E. longifolia em suas ações anti-inflamatória, antinociceptiva, antipirética e gastroprotetora, e apoia seu uso, sem causar úlceras gástricas, no tratamento da úlcera gástrica. Por essas razões, o extrato ELJ deve ser considerado como tendo vantagens sobre alguns AINEs. Antes da promoção do uso clínico rotineiro, estudos pré-clínicos adicionais de seus atributos, por exemplo, atividades farmacológicas de curto e longo prazo e toxicidade, são necessários para avaliar a segurança do extrato ELJ.
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Materiais Suplementares
As seguintes informações de apoio podem ser baixadas em: , Tabela S1: Efeitos do extrato ELJ e da fenilbutazona no edema de orelha induzido por EPP em ratos.; Tabela S2: Efeitos dos extratos ELJ e da aspirina no edema de pata traseira induzido por carragenina em ratos.; Tabela S3: Efeitos do extrato ELJ, controle e cimetidina em um modelo de lesões gástricas induzidas por EtOH/HCl em ratos.; Tabela S4: Efeito do ELJ e da cimetidina na úlcera gástrica induzida por indometacina em ratos.; Tabela S5: Efeitos do extrato ELJ, controle e cimetidina em um modelo de lesões gástricas induzidas por estresse de imersão em água com contenção em ratos.
Contribuições dos Autores
Conceitualização, S.S. (Seewaboon Sireeratawong); metodologia, S.S. (Subhawat Subhawa), K.J. e S.C.; recursos e validação, N.S.; investigações, S.S. (Subhawat Subhawa), W.A. e K.J.; redação—preparação do rascunho original, S.S. (Subhawat Subhawa) e K.J.; redação—revisão e edição, S.S. (Seewaboon Sireeratawong), S.S. (Subhawat Subhawa), W.A., K.J. e S.C.; aquisição de financiamento, S.S. (Seewaboon Sireeratawong). Todos os autores leram e concordaram com a versão publicada do manuscrito.
Declaração do Comitê de Ética em Pesquisa
O protocolo do estudo animal foi aprovado pelo Comitê de Ética em Pesquisa para Estudos com Animais (Código do estudo: 0003/2008), Faculdade de Medicina, Universidade Thammasat, Pathum Thani, Tailândia.
Declaração de Consentimento Informado
Não se aplica.
Declaração de Disponibilidade de Dados
Não se aplica.
Conflitos de Interesse
Os autores declaram não haver conflito de interesses.
Referências
Análise da inflamação
Efeitos adversos dos anti-inflamatórios não esteroidais (AINEs, aspirina e coxibs) no trato gastrointestinal superior
Inibidores Naturais da COX-2 como Agentes Anti-inflamatórios Promissores: Uma Atualização
Peptídeos inspirados em alimentos da Rubisco do espinafre dotados de propriedades antioxidantes, antinociceptivas e anti-inflamatórias
Um Estudo sobre Caracterização Química e Habilidades Biológicas de Extratos de Alstonia boonei Obtidos por Diferentes Técnicas
Revisão sobre uma Medicina Herbal Tradicional, Eurycoma longifolia Jack (Tongkat Ali): Seus Usos Tradicionais, Química, Farmacologia Baseada em Evidências e Toxicologia
Constituintes citotóxicos e antimaláricos das raízes de Eurycoma longifolia
Monografia de matérias médicas tailandesas selecionadas: PLA LAI PUEAK-RAK
PLA LAI PUEAK
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Eurycomanona e eurycomanol de Eurycoma longifolia Jack como reguladores de vias de sinalização envolvidas na proliferação, morte celular e inflamação
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Efeitos do etanol na mucosa gástrica
As diferenças e semelhanças farmacológicas entre danos à mucosa gástrica induzidos por estresse e etanol
Doença ulcerosa péptica e anti-inflamatórios não esteroidais
Dano gástrico induzido por AINEs em ratos: Necessidade de inibição de ambas as ciclooxigenases 1 e 2
Dano à mucosa gástrica no estresse por imersão em água: Mecanismo e prevenção com GHRP-6
Modelos animais de lesão aguda da mucosa gástrica: Avaliação macroscópica e microscópica
Modelos in vivo utilizados para avaliação de potenciais agentes antiúlcera gastroduodenal
Avaliação da planta medicinal tradicional, Cissus setosa Roxb. (Vitaceae), quanto à propriedade antiúlcera
Efeitos do extrato aquoso do fruto de Morinda citrifolia e seu biomarcador escopoletina sobre esofagite de refluxo e úlcera gástrica em ratos
Imunomodulação em humanos de meia-idade por meio da ingestão do extrato aquoso padronizado da raiz de Eurycoma longifolia Jack Physta® — Um estudo randomizado, duplo-cego, controlado por placebo e paralelo
Cromatograma em CCD do extrato etanólico a 95% de Eurycoma longifolia Jack: Cromatograma em CCD do extrato etanólico de Eurycoma longifolia Jack (1), escopoletina (2) e euricomalecona (3), observado sob (A) UV a 254 nm, (B) UV a 366 nm, (C) KOH a 10%, (D) reagente anisaldeído–ácido sulfúrico, (E) reagente anisaldeído–ácido sulfúrico com UV a 366 nm e (F) reagente de aspersão para produtos naturais.
Cromatograma de CLAE da escopoletina do extrato etanólico de ELJ (A) comparado ao padrão (B). A umbeliferona, utilizada como padrão interno, com tempo de retenção bem separado da escopoletina, foi misturada à escopoletina para corrigir erros de volume.
Efeitos do extrato de ELJ e da fenilbutazona sobre o edema de orelha induzido por EPP em ratos. Os valores são expressos como média ± EPM (n = 6). Controle: tratado com acetona. * Significativamente diferente do grupo controle, p > 0,05. C, Controle. PBZ, fenilbutazona (1 mg/kg).
Efeitos dos extratos de ELJ e da aspirina sobre o edema de pata traseira induzido por carragenina em ratos. Os valores são expressos como média ± EPM (n = 6). Controle: tratado com acetona. * Significativamente diferente do grupo controle, p > 0,05. C, Controle. ASP, Aspirina (300 mg/kg).
Avaliação do efeito do extrato de Eurycoma longifolia Jack (ELJ) nas doses de 150, 300 e 600 mg/kg e da cimetidina a 100 mg/kg sobre a superfície gástrica em ratos, comparando três modelos diferentes de úlceras gástricas com o grupo controle. As setas pretas representam as bandas ou manchas necróticas típicas e pequenas erosões que podem evoluir para úlceras gástricas.
Efeitos do extrato de ELJ, controle e cimetidina em um modelo de lesões gástricas induzidas por EtOH/HCl em ratos. Os índices de úlcera são média ± E.P.M. (n = 6). * Significativamente diferente do grupo controle, p < 0,05; # Significativamente diferente do grupo cimetidina, p < 0,05.
Efeito do ELJ e da cimetidina sobre úlceras gástricas induzidas por indometacina em ratos. Os índices de úlcera são média ± E.P.M. (n = 6). * Significativamente diferente do grupo controle, p < 0,05; # Significativamente diferente do grupo cimetidina, p < 0,05.
Efeitos do extrato de ELJ, controle e cimetidina em um modelo de ratos com lesões gástricas induzidas por estresse de imersão em água com contenção. Os índices de úlcera são média ± E.P.M. (n = 6). * Significativamente diferente do grupo controle, p < 0,05; # Significativamente diferente do grupo cimetidina, p < 0,05.
Propriedades físicas e químicas da raiz de E. longifolia Jack.
Teste Resultado Matéria estranha (% p/p) Não encontrada Extrativo em hexano (% p/p) 0,66 Extrativo em diclorometano (% p/p) 0,94 Teor de extrativo em etanol (% p/p) 1,51 Teor de extrativo em água (% p/p) 10,57 Perda por dessecação (% v/p) 9,58 Cinzas totais (% p/p) 2,54 Cinzas insolúveis em ácido (% p/p) 0,90 Composição química saponina, terpenoides
Efeitos do extrato de ELJ, prednisolona e aspirina sobre o peso transudativo, peso do granuloma e porcentagem de inibição do granuloma na formação de granuloma induzido por pellet de algodão em ratos.
Grupos Dose (mg/kg) Peso Úmido do Granuloma (mg) Peso Seco do Granuloma (mg) Peso Transudativo (mg) Peso do Granuloma (mg/mg de algodão) IG (%) Controle - 450,0 ± 27,0 81,8 ± 4,4 368,2 ± 23,4 3,1 ± 0,2 - Prednisolona 5 291,0 ± 12,4 * 58,6 ± 2,4 * 232,5 ± 10,9 * 1,9 ± 0,1 * 37 Aspirina 300 415,8 ± 33,1 79,5 ± 4,9 336,3 ± 30,1 3,0 ± 0,2 4 Extrato de ELJ 1200 347,4 ± 25,6 * 66,2 ± 3,0 * 281,2 ± 21,7 2,3 ± 0,3 25
Os valores são expressos como média ± EPM (n = 6). Controle: tratado com acetona. * Significativamente diferente do seu grupo controle, p > 0,05.
Efeitos do extrato de ELJ, prednisolona e aspirina sobre o peso seco do timo com referência à formação de granuloma induzido por pellet de algodão em ratos.
Grupos Dose (mg/kg) Peso Corporal (g) Peso Seco do Timo (mg/100 g) Inicial Final Ganho Controle - 387,50 ± 13,34 394,17 ± 11,06 6,67 ± 3,07 21,91 ± 1,97 Prednisolona 5 365,00 ± 9,83 353,33 ± 10,14 * −11,67 ± 6,54 * 17,24 ± 1,79 Aspirina 300 360,83 ± 12,74 361,67 ± 11,38 * 0,83 ± 4,36 16,96 ± 1,27 Extrato de ELJ 1200 383,33 ± 3,80 380,00 ± 5,16 −3,33 ± 4,22 16,99 ± 1,82
Os valores são expressos como média ± EPM (n = 6). Controle: tratado com acetona. * Significativamente diferente do seu grupo controle, p > 0,05.
Efeitos do extrato de ELJ, prednisolona e aspirina sobre o peso seco do timo com referência à formação de granuloma induzido por pellet de algodão em ratos.
Grupos Dose Fase Inicial Fase Tardia (mg/kg) Tempo de Lambida (s) % de Inibição da Resposta de Lambida Tempo de Lambida (s) % de Inibição da Resposta de Lambida Controle - 67,8 ± 4,5 - 93,8 ± 7,1 - Aspirina 300 45,0 ± 5,3 * 34 0,0 ± 0,0 * 100 Morfina 10 0,0 ± 0,0 * 100 1,5 ± 1,5 * 98 Extrato de ELJ 300 44,8 ± 5,0 * 34 11,2 ± 9,5 * 88 600 41,8 ± 3,3 * 38 4,8 ± 3,4 * 95 1200 38,7 ± 3,2 * 43 3,2 ± 3,2 * 97
Os valores são expressos como média ± EPM (n = 6). Controle: tratado com acetona. * Significativamente diferente do seu grupo controle, p > 0,05.
Efeitos dos extratos de ELJ e aspirina sobre a hipertermia induzida por levedura em ratos.
Grupos Dose (mg/kg) Temperatura Retal (°C) Basal 18 h após Injeção de Levedura Tempo após Administração do Fármaco (min) 30 min 60 min 90 min 120 min Controle - 37,98 ± 0,22 39,20 ± 0,23 39,17 ± 0,30 39,03 ± 0,23 39,08 ± 0,21 39,03 ± 0,22 Aspirina 300 38,03 ± 0,21 39,07 ± 0,20 38,30 ± 0,25 * 37,98 ± 0,22 * 37,87 ± 0,18 * 37,75 ± 0,20 * Extrato ELJ 300 38,03 ± 0,23 39,23 ± 0,09 39,02 ± 0,15 38,85 ± 0,17 38,85 ± 0,17 38,83 ± 0,20 600 37,88 ± 0,16 39,23 ± 0,10 38,83 ± 0,20 38,60 ± 0,13 38,65 ± 0,10 38,73 ± 0,07 1200 38,07 ± 0,15 39,00 ± 0,13 38,30 ± 0,27 * 38,18 ± 0,25 * 38,27 ± 0,27 * 38,08 ± 0,31 *
Os valores são expressos como média ± EPM (n = 6). Controle: tratado com acetona. * Significativamente diferente do seu grupo controle, p > 0,05.
Efeitos do extrato ELJ, controle e cimetidina no modelo de ligadura pilórica em ratos.
Grupo Volume Gástrico (mL) Taxa de Secreção (mL/100 g/5 h) pH Acidez Total (mEq/100 g/5 h) Controle 3,25 ± 0,35 1,54 ± 0,19 1,95 ± 0,32 29,20 ± 2,65 Cimetidina 100 mg/kg 2,37 ± 0,16 0,87 ± 0,05 * 5,06 ± 0,79 * 13,30 ± 2,35 * Extrato ELJ 150 mg/kg 3,43 ± 0,39 1,18 ± 0,17 1,87 ± 0,10 27,02 ± 4,83 Extrato ELJ 300 mg/kg 3,05 ± 0,43 1,07 ± 0,13 2,31 ± 0,28 27,42 ± 3,25 Extrato ELJ 600 mg/kg 3,38 ± 0,24 1,26 ± 0,15 2,03 ± 0,42 34,76 ± 5,61
Todos os valores são média ± E.P.M. (n = 6). * Significativamente diferente do grupo controle, p < 0,05.