pmid: "40507094"
title: "O Efeito dos Probióticos na Saúde durante a Gravidez e em Lactentes: Um Ensaio Randomizado, Duplo-Cego, Controlado por Placebo."
authors: "Binda S, Chow-Shi-Yée M, El Salti S, Auclair-Ouellet N, Oula ML, Carton T, Leuillet S, Tomassi D, Hemmings R, Kadoch IJ"
journal: "Nutrients"
pubdate: "2025 May 28"
doi: "10.3390/nu17111825"
source: "PMC Full Text"

O Efeito dos Probióticos na Saúde durante a Gravidez e em Lactentes: Um Ensaio Randomizado, Duplo-Cego, Controlado por Placebo.

Autores

Binda S, Chow-Shi-Yée M, El Salti S, Auclair-Ouellet N, Oula ML, Carton T, Leuillet S, Tomassi D, Hemmings R, Kadoch IJ

Periodico

Nutrients (2025 May 28)

Conteudo

O Efeito dos Probióticos na Saúde na Gestação e em Lactentes: Um Ensaio Clínico Randomizado, Duplo-Cego, Controlado por Placebo

Contexto/Objetivos: Há um interesse crescente nos benefícios da suplementação com probióticos durante a gestação e lactação, mas as evidências que apoiam os efeitos benéficos para as díades mãe–bebê ainda são escassas. Este estudo avaliou os efeitos da suplementação com probióticos na frequência de infecções e na imunidade em gestantes e lactentes, e no estabelecimento do microbioma durante o primeiro mês de vida.

Métodos: Com 28 semanas de gestação, 180 gestantes saudáveis foram randomizadas para receber um placebo (n = 90) ou um suplemento probiótico (n = 90), Prenatis™, contendo 5 bilhões de UFC/dia de Lacticaseibacillus rhamnosus Rosell®-11 e Bifidobacterium bifidum HA-132.

Resultados: Houve um número significativamente menor de mulheres com uma ou mais infecções durante o estudo no grupo probiótico (8 vs. 18, p = 0,05) e uma tendência a um menor número de infecções durante a gestação (desfecho primário) no grupo probiótico (p = 0,07). Em relação aos lactentes, observou-se um menor número de dias com infecções durante o primeiro mês de vida no grupo probiótico (média de 4,7 dias vs. 10,5 dias, p = 0,03). A composição da microbiota vaginal durante a gestação e após o parto não mostrou diferenças significativas entre os grupos, enquanto o microbioma intestinal dos lactentes demonstrou uma abundância/prevalência significativamente maior de táxons benéficos no grupo probiótico. Os benefícios conferidos pelos probióticos foram especialmente notáveis quando se considerou o parto por cesariana. Os probióticos promoveram a transmissão vertical de espécies benéficas e a indução de uma microbiota altamente interconectada, estruturada em torno de espécies-chave. Conclusões: A suplementação com probióticos durante o terceiro trimestre de gestação e a lactação é uma estratégia válida para conferir benefícios às mães e aos lactentes.

Introdução

A gestação envolve alterações fisiológicas, hormonais, metabólicas e imunológicas para acomodar o feto em crescimento. Mudanças na composição do microbioma oral, intestinal e vaginal também ocorrem durante esse período. Essas múltiplas alterações não apenas tornam as mulheres mais vulneráveis a infecções bacterianas, virais e fúngicas durante a gestação, mas também aumentam a gravidade dessas infecções. O risco de infecções urogenitais, como candidíase vulvovaginal (CVV), vaginose bacteriana (VB) e infecções do trato urinário (ITUs), também é aumentado durante a gestação. Tratamentos típicos, como antibióticos ou antifúngicos, também podem afetar a composição dos microbiomas, causando disbiose. A disbiose em vários ecossistemas corporais durante a gestação tem sido associada a complicações como gengivite, diabetes gestacional, pré-eclâmpsia e parto pré-termo.
Alterações no microbioma não afetam apenas o metabolismo da mãe, mas também desempenham um papel na saúde e no desenvolvimento imunológico e metabólico do bebê. De fato, o microbioma intestinal do bebê é formado, em parte, por micróbios transmitidos verticalmente dos vários microbiomas da mãe, como os do intestino, pele, cavidade oral, vagina e leite materno.

O uso de probióticos é uma estratégia emergente para a regulação das mudanças no microbioma e a redução de complicações durante a gestação e o pós-parto. Probióticos são definidos como "microrganismos vivos que, quando administrados em quantidades adequadas, conferem um benefício à saúde do hospedeiro". Os probióticos podem influenciar positivamente a composição da microflora intestinal e exercer diversos benefícios, incluindo a melhora da função imunológica por meio de sua interação com várias células imunológicas. Em gestantes, a suplementação com probióticos demonstrou melhorar aspectos imunológicos, bem como a saúde vaginal. Vários estudos mostraram os efeitos positivos dos probióticos na prevenção do diabetes gestacional e na redução do risco de pré-eclâmpsia. O uso de probióticos também pode proporcionar uma exposição microbiana benéfica ao recém-nascido durante o parto e a amamentação, potencialmente estendendo os benefícios dos probióticos à saúde do recém-nascido. O presente ensaio clínico randomizado, duplo-cego, controlado por placebo é um dos primeiros e maiores estudos a investigar o efeito do uso perinatal de probióticos no sistema imunológico da mãe e na proteção contra infecções durante a gestação, bem como no sistema imunológico e no estado de saúde do bebê no primeiro ano de vida. O estudo também investigou os efeitos do consumo de probióticos durante a gestação e a amamentação no estabelecimento do microbioma do bebê.

Métodos

Este ensaio clínico é relatado de acordo com os princípios estabelecidos na declaração Consolidated Standards of Reporting Trials (CONSORT) 2010.

2.1. Aprovação e Registro do Estudo

O estudo foi conduzido de acordo com a diretriz do International Council for Harmonisation of Technical Requirements for Pharmaceuticals for Human Use para Boas Práticas Clínicas (ICH-GCP) e os princípios éticos da Declaração de Helsinque, e foi aprovado por um Conselho de Revisão Institucional independente, Veritas IRB (Saint-Laurent, QC, Canadá) em 21 de setembro de 2017. Este estudo foi registrado no ClinicalTrials.gov, identificador NCT03310853. Todos os participantes forneceram consentimento informado por escrito antes de sua participação no estudo.

2.2. Seleção de Participantes
Gestantes saudáveis com menos de 28 semanas de gestação e idade entre 18 e 39 anos inclusive foram recrutadas na Ovo Clinic (Montreal, Quebec, Canadá). Os critérios de inclusão incluíram gestação única, planejamento de amamentar e disposição para interromper o consumo de alimentos fermentados (por exemplo, alimentos que contêm probióticos, como Kefir, picles, etc.) e probióticos (por exemplo, iogurtes com culturas vivas ativas ou suplementos probióticos). As mulheres não podiam participar do estudo se tivessem histórico de condições médicas como HIV, Hepatite (B ou C), diabetes (gestacional, tipo 1 ou tipo 2), doenças neurológicas ou gastrointestinais e alergias a leite, soja ou fermento. Mulheres com histórico pessoal de (ou diagnosticadas com) pré-eclâmpsia, histórico materno de perda no segundo trimestre e anormalidade fetal conhecida também foram excluídas. Sintomas de depressão experimentados nos últimos dois anos, tabagismo, consumo de álcool, uso de drogas durante a gravidez ou histórico de uso de álcool ou substâncias seis meses antes da triagem também foram critérios de exclusão. Uma participante não podia ser incluída no estudo se tivesse tomado probióticos diários dentro de 2 semanas da visita ou antibióticos dentro de 1 mês da visita. No entanto, ela era elegível após um período de washout de duas semanas. Após o início do estudo, mas antes da inscrição das participantes, os seguintes critérios de exclusão foram adicionados ao protocolo para garantir a segurança das participantes e devido ao seu potencial impacto nos resultados do estudo: distúrbio sanguíneo/de coagulação conhecido, distúrbios hepáticos ou renais conhecidos e doença cardiovascular instável conhecida.
2.3. Desenho do Estudo e Intervenção
Um estudo randomizado, duplo-cego, controlado por placebo, de braços paralelos foi realizado para determinar o efeito de probióticos no risco de infecção em gestantes e seus recém-nascidos e em seus microbiomas, e 180 participantes foram aleatoriamente designadas para os dois braços em uma proporção de 1:1. No protocolo, as participantes deveriam ser estratificadas com base no tipo de parto pretendido (vaginal ou cesárea). Isso não foi implementado devido ao baixo número de cesarianas planejadas. O esquema de randomização utilizou um gerador de números aleatórios disponível no JMP® Pro 12.2 (SAS Institute, Inc., Cary, NC, EUA). A sequência de alocação aleatória foi gerada por um estatístico. Códigos associados aos números de lote dos produtos em investigação foram usados para cada grupo, caso uma reação adversa exigisse a abertura do cegamento. Cada participante que atendeu aos critérios de inclusão após triagem realizada pela equipe do estudo recebeu o kit de estudo alocado na ordem cronológica de sua inclusão no estudo; nenhum número foi omitido ou pulado. O investigador principal e a equipe do estudo foram responsáveis por dispensar o produto às participantes de acordo com o cronograma de randomização fornecido ao pessoal do local. O representante do patrocinador envolvido no estudo, os investigadores, as participantes e qualquer profissional de saúde ou pessoal do local envolvido no manejo das participantes ou na avaliação dos resultados permaneceram cegos quanto à alocação durante todo o estudo. Além disso, os estatísticos e bioestatísticos que conduziram a análise estavam cegos quanto à alocação dos grupos.

Um dos grupos randomizados recebeu um probiótico consistindo em 5 × 10⁹ UFC de Lacticaseibacillus rhamnosus Rosell®-11 e Bifidobacterium bifidum HA-132 (Prenatis™), enquanto o outro grupo recebeu um placebo. A cápsula de placebo era feita dos mesmos excipientes utilizados na cápsula probiótica e tinha aparência semelhante. Ambos os grupos foram instruídos a tomar uma cápsula por dia durante aproximadamente 18 semanas, ou seja, 12 semanas antes do parto e 4–6 semanas após o parto. O estudo consistiu em 8 visitas, incluindo uma visita de pré-triagem, recrutamento e randomização, 5 visitas intermediárias e uma visita final de fim de estudo. As visitas presenciais do estudo foram realizadas na Clínica Ovo, Montreal, Canadá. A visita de fim de estudo foi realizada por telefone. As avaliações incluíram exames de sangue, amostras de urina, glicemia capilar, sinais vitais, peso, amostras de saliva, swabs vaginais, amostras de fezes das mães e dos bebês, amostras de leite materno e medidas antropométricas, bem como o preenchimento da Escala de Depressão Pós-parto de Edimburgo (EPDS), questionários demográficos, diários diários da mãe e do bebê, questionários de acompanhamento um ano após o parto e a coleta de dados hospitalares.

2.4. Desfechos
O desfecho primário foi o número de infecções diagnosticadas em gestantes. Os desfechos secundários concentraram-se na saúde das mães e dos lactentes. Os desfechos secundários relacionados à saúde das mães incluíram níveis de glicose, insulina, triglicerídeos e ferritina medidos em amostras de sangue; marcadores inflamatórios em amostras de sangue, fezes e leite materno; níveis de imunoglobulina A secretora (sIgA) em amostras de saliva, fezes e leite materno; composição da microbiota e micobiota vaginal; composição da microbiota intestinal; composição da microbiota do leite materno; incidência de ruptura prematura de membranas (RPM); peso; frequência e consistência das fezes (Escala de Bristol para Forma das Fezes,); e depressão pós-parto (EPDS). Alguns desfechos secundários foram removidos do protocolo original para reduzir a sobrecarga das participantes: estresse, ansiedade, cefaleia/enxaqueca e náusea autorrelatados diariamente em diário; e coleta de swabs vaginais nas visitas 3 e 4. Os desfechos secundários relacionados à saúde dos lactentes incluíram o número de infecções; níveis de sIgA em amostras fecais; composição da microbiota intestinal; frequência e padrão das fezes (Escala de Amsterdam para Forma das Fezes Infantis); incidência de enterocolite necrosante (ECN); medidas antropométricas: comprimento vértice–calcanhar e perímetro cefálico; peso; tempo de choro e incidência de cólica; duração do sono; doenças ou condições de pele; e incidência de icterícia e hiperbilirrubinemia. A duração das infecções em mães e lactentes, transmissão vertical da microbiota em díades mãe–lactente e caracterização das redes de microbiota foram desfechos exploratórios definidos após o registro do protocolo.
2.5. Coleta de Dados
Exames de sangue, glicemia capilar, peso, amostras de saliva, swabs vaginais, amostras fecais de mães e lactentes, amostras de leite materno e medidas antropométricas (do lactente) foram realizados durante as visitas. Amostras de saliva e glicemia capilar foram coletadas apenas durante as consultas pré-natais. As participantes também preencheram o questionário EPDS, questionários demográficos e diários diários maternos/infantis. Na última visita, todos os dados hospitalares foram coletados. Por fim, foi realizado um acompanhamento de um ano após o parto por telefone.
2.6. Marcadores Inflamatórios Sanguíneos
Amostras de sangue foram coletadas por cateter venoso durante as visitas 1 e 5 para testar citocinas inflamatórias. Um kit personalizado de 7-plex (Bio-Rad, Saint-Laurent, QC, Canadá) foi utilizado para a técnica de imunoensaio multiplex que contém — IL-1B, IL-6, IL-8, IFN-γ e TNF-α (Custom Bio-Plex Pro Human Cytokine 7-plex, Bio-Rad, Hercules, CA, EUA). Os gráficos foram gerados utilizando GraphPad Prism versão 9.5.1 (GraphPad software, Inc., San Diego, CA, EUA).
2.7. Análise de sIgA
Os níveis de sIgA salivar foram medidos a partir de amostras fornecidas nas visitas 2, 3, 4 e 5. Os níveis de sIgA fecal foram medidos a partir de amostras fornecidas nas visitas 2, 5 e 7. Os níveis de sIgA no leite materno foram medidos a partir das participantes que forneceram amostras de leite materno na visita 7. As análises de sIgA foram quantificadas utilizando os kits de ELISA de IgA secretora salivar fabricados pela Salimetrics (Carlsbad, CA, EUA). Os gráficos foram gerados utilizando o GraphPad Prism versão 9.5.1.
2.8. Composição da Microbiota
Amostras de swab vaginal e fezes foram coletadas nas visitas 2, 5 e 7. Amostras de leite materno foram coletadas na visita 7. Todas as amostras foram armazenadas a −80 °C. O DNA bacteriano extraído das amostras de leite materno (usando o DNeasy PowerSoil Pro Kit, QIAGEN, Hilden, Alemanha), dos swabs vaginais (usando o MasterPure Yeast DNA Purification Kit, Biosearch Technologies, Teddington, Reino Unido) e das amostras de fezes (usando o ZymoBiomics 96 MagBead DNA Kit, Zymo Research, Irvine, CA, EUA) foi utilizado para perfilagem da microbiota por meio do sequenciamento de amplicons da região V3-V4 do RNA ribossômico 16S, seguindo o protocolo da Illumina. Resumidamente, as bibliotecas foram preparadas usando primers universais para 16S (forward 5′-CCTACGGGNGGCWGCAG-3′ e reverse 5′-GACTACHVGGGTATCTAATCC-3′) para a amplificação inicial do 16S e os conjuntos de primers Illumina Nextera XT V2 A, B, C e D (Illumina, cat. # FC-131-2001, FC-131-2002, FC-131-2003 e FC-131-2004) para a segunda PCR de multiplexação. O sequenciamento paralelo foi realizado a 8 pM em uma plataforma MiSeq usando o cartucho do kit MiSeq Reagent 600 cycles v3 (Illumina, cat. # MS-102-3003) e processado para leituras de 2 × 300 pb. Os resultados do sequenciamento de amplicons do 16S foram exportados em arquivos fastq e importados para o QIIME 2. As leituras forward foram inspecionadas quanto à qualidade e truncadas em 280 pb, e as leituras reverse foram truncadas em 260 pb (já que a qualidade permaneceu alta ao longo de todo o processo). Para a composição da microbiota vaginal e sua associação com a VB, as leituras foram filtradas por qualidade usando o módulo dedicado do QIIME™ e foram utilizadas para gerar (agrupar as sequências) e contar as variantes de sequência de amplicons (ASVs) presentes em cada amostra. Perfis taxonômicos foram gerados para cada amostra por meio da atribuição taxonômica das ASVs usando a ferramenta baseada em aprendizado de máquina QIIME™ 2 feature-classifier e o banco de dados SILVA 138. Os perfis taxonômicos para Baseline, Probiótico e Placebo foram gerados e comparados globalmente em médias de grupo e em táxons e cepas individuais. Para as proporções de vaginotipos e associação com VB e uso de antibióticos, e para o microbioma do leite materno e do intestino dos lactentes, as sequências alvo da microbiota foram analisadas usando um pipeline bioinformático baseado no software Dadaist2 v1.2.5. Resumidamente, após a demultiplexação das leituras pareadas Illumina com código de barras, as sequências de leitura única foram pareadas para cada amostra em fragmentos mais longos e limpas. Após a filtragem de qualidade e modelagem de erros de sequenciamento, ASVs foram obtidas. Uma atribuição taxonômica dessas ASVs foi realizada no banco de dados RDP versão 18 para determinar os perfis da comunidade bacteriana.
2.9. Cálculo do Tamanho Amostral
O cálculo do tamanho amostral foi realizado com base na probabilidade de recorrência de tipos específicos de infecções, como VVC, VB e resfriados/gripes autorrelatados. Hilton et al. descobriram que, em um delineamento cruzado com um número pequeno de sujeitos (n = 13) com ≥5 eventos de VVC/ano, o número médio de infecções durante seis meses com probióticos foi de 0,38 ± 0,51, em comparação com 2,54 ± 1,16 sem probióticos. Langkamp-Henken et al. relataram que o número de episódios de resfriados/gripes autorrelatados durante um estudo de seis semanas com estudantes universitários estressados (n = 150/tratamento) variou de acordo com o uso de probióticos. O número médio de resfriados/gripes foi de 0,63 ± 0,07 no placebo; 0,61 ± 0,07 em L. helveticus; 0,43 ± 0,06 em B. bifidum; e 0,48 ± 0,06 em B. longum ssp. infantis. Com base nos achados relatados por Hilton et al., estimou-se que o número médio de infecções fosse 1 para o grupo probiótico e 2 para o grupo placebo. As estimativas de variância foram de 1,5 para o grupo probiótico e 3 para o grupo placebo. Outros parâmetros utilizados para este cálculo foram uma diferença de médias de 1 evento com desvio padrão agrupado de 2,12, teste bilateral, poder desejado de 0,8 e taxa de erro tipo I de α = 0,05. O cálculo resultante forneceu um tamanho amostral por braço de 71. Para permitir uma taxa de abandono de 20%, o tamanho inicial foi de 89 por braço ou 178 no total, que foi arredondado para 180 participantes.
2.10. Análise Estatística
As análises estatísticas foram realizadas com o Sistema de Análise Estatística (SAS, v9.4) e R versão 4.3.3. O desfecho primário (número de infecções diagnosticadas nas mães) foi analisado com uma regressão binomial negativa. Outras variáveis de contagem representando eventos raros compilados ao longo da duração do estudo foram analisadas com este teste. Medidas de um único ponto temporal e diferenças entre grupos no início do estudo foram comparadas usando o teste de postos sinalizados de Wilcoxon para variáveis contínuas e o teste exato de Fisher para variáveis de presença/ausência (porcentagens). Todas as análises usaram uma taxa de erro tipo I de α = 0,05.
Os métodos para análise de transmissão vertical são ampliados a partir da abordagem descrita por Mortensen et al.. A análise univariada foi realizada para identificar quais táxons são transmitidos de um dos microbiomas da mãe para o microbioma intestinal da criança. Para cada táxon, a razão de chances (OR) e o valor de p para transmissão da microbiota das mães para a microbiota intestinal de seus filhos foram calculados. Os valores de p foram então ajustados por FDR. Para perseguir uma hipótese de enriquecimento, foi calculada uma Razão de Transferência Ponderada (WTR). A WTR é usada como uma medida geral de transferência. É baseada na OR e no valor de p para cada ASV individual e calculada como a razão ponderada de OR positiva (OR > 1) e OR negativa (OR < 1), com WTR > 1 indicando enriquecimento e WTR < 1 indicando depleção de OR positiva, definida da seguinte forma:
Para estimar a significância da WTR, foram realizadas 10.000 permutações consistindo em associar aleatoriamente uma mãe e uma criança. Para estudar o efeito de probióticos na transferência vertical, a diferença nas WTRs calculadas dentro de cada grupo foi comparada à distribuição das diferenças nas WTRs associando aleatoriamente indivíduos a um grupo.
2.11. Análise Exploratória de Redes Bacterianas
A estimativa das redes microbianas foi realizada usando o SPIEC-EASI (Estimativa de Covariância Inversa Esparsa para Inferência de Associação Ecológica, Kurtz et al.). Este método computacional é projetado para inferir de forma robusta redes de comunidades microbianas a partir de dados de microbioma de alta dimensão. Ao aproveitar a estimativa de covariância inversa esparsa e uma análise de estabilidade por bootstrap, o SPIEC-EASI identifica e estima dependências condicionais relevantes entre espécies microbianas, facilitando a construção de redes que revelam interações ecológicas subjacentes. As redes inferidas usando o SPIEC-EASI devem ser interpretadas como modelos simplificados das potenciais interações ecológicas entre espécies microbianas dentro da comunidade. Os nós representam táxons microbianos individuais, enquanto as arestas indicam dependências condicionais entre eles. A presença de uma aresta implica que a relação entre dois táxons não é impulsionada unicamente por outros táxons no conjunto de dados, fornecendo insights sobre associações diretas dentro do microbioma. Por outro lado, a ausência de uma aresta entre dois táxons indica que qualquer correlação entre esses dois táxons não é direta, mas sim totalmente impulsionada por outros componentes da microbiota. Embora o SPIEC-EASI seja projetado para minimizar falsos positivos por meio de regularização e análise de estabilidade, a presença de uma aresta não confirma uma relação causal nem o tipo de associação (ou seja, competição ou mutualismo). Além disso, a esparsidade induzida pelo método significa que apenas as associações mais fortes são retidas, potencialmente omitindo interações mais fracas, mas biologicamente significativas.
3. Resultados
3.1. Características dos Participantes
O estudo foi iniciado em 22 de dezembro de 2017 e foi concluído em 21 de julho de 2021. Durante este período, um total de 180 mulheres foram inscritas no estudo e foram randomizadas para o grupo probiótico (n = 90) ou placebo (n = 90). O processo do estudo é descrito em um fluxograma, desde a visita de triagem até a visita final do estudo (Figura 1).
O fluxo das participantes é apresentado na Figura 2. A taxa de adesão, determinada com base no produto de estudo devolvido, foi superior a 90% em ambos os grupos. Um total de 123 participantes únicos apresentaram eventos adversos (EAs) (ex.: congestão nasal, dores de cabeça, constipação, diarreia, etc.) sem diferença significativa no número médio de EAs por participante em cada grupo (probiótico: 1,41 ± 1,54; e placebo: 1,52 ± 1,38; p = 0,37). A participação foi interrompida para três participantes (uma no grupo placebo e duas no grupo probiótico) devido a diabetes gestacional. Duas participantes (uma em cada grupo) decidiram parar de participar do estudo devido a EAs que acreditavam estar relacionados aos produtos do estudo (distensão abdominal e diarreia ocasional). Oito participantes (seis no grupo placebo e duas no grupo probiótico) apresentaram eventos adversos graves, mas nenhum estava relacionado ao ensaio.
Em relação aos bebês, não houve parto pré-termo no grupo placebo e um no grupo probiótico (teste exato de Fisher, p = 0,49), e nenhuma incidência de enterocolite necrosante em qualquer um dos grupos. As características basais das gestantes e de seus bebês no momento do nascimento são relatadas na Tabela 1 e mostram que os dois grupos são comparáveis.
Outras características das mães e bebês que foram definidas como desfechos secundários são apresentadas como material suplementar (desfechos relacionados à saúde das mães: níveis de glicose, insulina, triglicerídeos e ferritina—Tabela Suplementar S1; frequência e consistência das fezes—Tabela Suplementar S2; incidência de ruptura prematura de membranas (RPM)—Tabela Suplementar S3; mudança de peso ao longo do tempo—Tabela Suplementar S4; depressão pós-parto—Tabela Suplementar S5; desfechos relacionados à saúde dos bebês: tempo de choro e cólica—Tabela Suplementar S6; incidência de icterícia e hiperbilirrubinemia—Tabela Suplementar S7; horas de sono—Tabela Suplementar S8; frequência e padrão das fezes—Tabela Suplementar S9; doenças de pele—Tabela Suplementar S10; e problemas de saúde—Tabela Suplementar S11).
3.2. Desfecho Primário: Infecções nas Mães
Para avaliar o impacto dos probióticos nas infecções, as participantes de ambos os grupos foram instruídas a relatar quaisquer infecções diagnosticadas por um médico ou confirmadas por exames laboratoriais durante o terceiro trimestre. As infecções relatadas incluíram candidíase vaginal, vaginose bacteriana (VB), sinusite, bronquite e conjuntivite. As participantes do grupo probiótico tenderam a ter um número menor de infecções do que as participantes do grupo placebo, com uma diferença que se aproximou da significância estatística (p = 0,07) (Tabela 2). Houve um número médio menor de VB por participante no grupo probiótico (0,07 ± 0,29) em comparação com aquelas no grupo placebo (0,13 ± 0,37), mas a diferença não foi significativa (p = 0,19). Não houve diferença significativa no número de dias com infecções (p = 0,76).
Observando o número de mulheres em cada grupo diagnosticadas com uma ou mais infecções durante o período do estudo, o número de participantes foi significativamente menor no grupo probiótico (n = 8, 8,9%) do que no grupo placebo (n = 18, 20,0%) (p = 0,05) (Figura 3A). Entre os vários tipos de infecções diagnosticadas, a VB foi a mais comum na população estudada, com 12 (13,3%) diagnósticos no grupo placebo e 6 (6,7%) no grupo probiótico durante o terceiro trimestre (Figura 3B).
3.3. Infecções em Lactentes
As participantes foram instruídas a relatar diariamente, desde o dia do parto até a visita 7 (4 a 6 semanas após o nascimento), se uma infecção havia sido recentemente diagnosticada (no mesmo dia) no lactente, ou se a infecção diagnosticada estava em curso e persistia por mais de 24 h. Durante esse período, 11 lactentes foram diagnosticados com uma infecção, 7 no grupo probiótico e 4 no grupo placebo (p = 0,37). As infecções diagnosticadas incluíram candidíase oral (sapinho), ITU, conjuntivite, onfalite (infecção do coto umbilical) e infecções de pele (assadura relacionada à infecção por levedura Candida). O número médio de dias com infecção nos lactentes de ambos os grupos foi analisado. Os lactentes cujas mães receberam suplementação probiótica ficaram doentes por períodos significativamente menores em comparação com aqueles cujas mães receberam placebo (média de 4,7 dias vs. 10,5 dias; p = 0,03) (Tabela 3).
3.4. Marcadores Inflamatórios e Níveis de Imunoglobulinas
Marcadores inflamatórios no sangue e imunoglobulinas na saliva, fezes e leite materno também foram medidos. Para ambos os grupos, citocinas pró-inflamatórias (IL-1β, IL-6, IL-8, Interferon γ [IFN-γ] e Fator de Necrose Tumoral α [TNF-α]) foram medidas em amostras de sangue coletadas nas visitas 1 e 5 (Figura Suplementar S1A–E). Os níveis de citocinas inflamatórias não foram significativamente diferentes entre os dois grupos (Il-1β: V1, p = 0,59; V5, p = 0,67. IL-6: V1, p = 0,41; V5, p = 0,51. IL-8: V1, p = 0,7; V5, p = 0,51. TNF-α: V1, p = 0,71; V5, p = 0,61. INF-γ: V1, p = 0,22; V5, p = 0,68). Uma análise das amostras de saliva coletadas nas visitas 2, 3, 4 e 5 não revelou diferenças significativas nos níveis de Imunoglobulina A secretora (IgA secretora) entre as mulheres que tomaram probióticos e aquelas que não tomaram probióticos (Figura Suplementar S1F) (em V2, p = 0,98; V3, p = 0,76; V4, p = 0,14; e V5, p = 0,72). Os níveis de imunoglobulinas nas fezes foram maiores no grupo probiótico, mas as diferenças não foram estatisticamente significativas (p = 0,89 em V2, 0,87 em V5 e 0,63 em V7) (Figura Suplementar S1G). Amostras de leite materno foram coletadas após o parto, na visita 7, e os níveis de IgA secretora foram medidos (Figura Suplementar S1H). Os probióticos não tiveram efeito significativo nos níveis de IgA secretora no leite materno (p = 0,22). Quanto aos níveis de IgA secretora nas amostras de fezes dos lactentes, não houve diferença significativa entre os grupos (p = 0,8) (Figura Suplementar S2).
3.5. Microbioma Vaginal e Sua Associação com Infecções
Durante a gravidez, o microbioma vaginal foi caracterizado pelo domínio de Lactobacilos (>70% de abundância relativa) tanto no grupo placebo quanto no grupo probiótico (Figura 4A). Uma variação mínima na abundância relativa de táxons foi observada entre as visitas 2 e 5.

O microbioma vaginal das participantes foi categorizado de acordo com os tipos de estado comunitário (CSTs), também referidos como vaginotipos. Os CSTs representam cinco configurações comuns da composição taxonômica da microbiota vaginal em mulheres em idade reprodutiva. Quatro delas são dominadas por uma única espécie de Lactobacillus: CST I-L. crispatus, CST II-L. gasseri, CST III-L. iners e CST V-L. jensenii. A última, CST IV, é caracterizada pela baixa abundância de espécies de Lactobacillus e pela presença de vários anaeróbios facultativos e obrigatórios (Gardnerella, Atopobium/Fannyhessea, Prevotella, Sneathia, Peptoniphilus, Finegoldia e Megasphaera). Enquanto os CSTs dominados por espécies de Lactobacillus estão associados à homeostase vaginal, menores riscos de infecções urogenitais e melhor saúde reprodutiva, L. iners é considerada aquela que fornece o nível de proteção menos eficaz e é por vezes considerada neutra em termos de sua associação com desfechos de saúde. O CST IV pode ser visto como um estado de perturbação da flora vaginal, mas é importante notar que muitas mulheres com esse vaginotipo não apresentam quaisquer sintomas vaginais adversos. Embora o microbioma vaginal de mulheres com CST IV possa ser considerado um ecossistema disbiótico, isso pode não levá-las automaticamente a experimentar corrimento vaginal anormal, coceira ou sensações de queimação, que estão associados à VB. No entanto, o CST IV tem sido associado a maiores riscos de VB, infecções sexualmente transmissíveis e parto prematuro espontâneo.
No presente estudo, as distribuições de CST nas visitas 2 e 5 mostraram uma abundância relativa maior de CST I-L. crispatus (protetor) e CST III-L. iners (neutro), e uma abundância relativa menor de CST IV (maiores riscos de infecções), CST II-L. gasseri (protetor) e CST V-L. jensenii (protetor) em ambos os grupos (Figura 5A). Embora as diferenças entre os grupos não tenham sido estatisticamente significativas, o grupo de probióticos apresentou proporções menores de CST IV, que tem sido associada a um maior risco de infecção, e CST III-L. iners, que oferece a proteção menos eficaz de todos os quatro CSTs caracterizados por Lactobacillus (Figura 5A). Analisando mais especificamente o microbioma vaginal das participantes de acordo com a incidência de VB, uma abundância relativa marcadamente menor de Lactobacilos foi observada nas participantes que relataram um diagnóstico de VB nas visitas 2 ou 5 (<40% de abundância relativa) em comparação com as participantes que não relataram (>80% de abundância relativa) (Figura 4B). A redução nos Lactobacilos favoreceu táxons patogênicos ou oportunistas, como Gardnerella e Atopobium, que são característicos de CST IV. A proporção de participantes que relataram VB na visita 5 foi menor no grupo de probióticos (3,9%) do que no grupo placebo (6,2%), mas essa diferença não foi estatisticamente significativa (Figura 3C). A prevalência de CST IV na população do estudo foi significativamente associada à incidência de VB na visita 2 e pode ser considerada como uma tendência estatística na visita 5 (Figura 5B,C).
Foi solicitado às participantes que relatassem o uso de antibióticos durante o terceiro trimestre de gestação nas visitas 2, 5 e 7. A medição realizada na visita 7 considerou o uso de antibióticos entre a visita 5 e o parto. Em relação à distribuição de CST em relação ao uso de antibióticos, maiores proporções de CST IV (nas visitas 2, 5 e 7) e CST III-L. iners (nas visitas 2 e 5) foram observadas nas participantes que relataram uso de antibióticos durante a gestação em comparação com aquelas que não relataram (Figura 6A). CST III e IV foram associados a um risco aumentado de infecção que exigiu o uso de antibióticos na visita 2 (valor de p ajustado = 0,046; estimativa do tamanho do efeito = 1,41, IC 95%: 0,05–9,73) (Figura 6B).
Após o parto (visita 7), o perfil do microbioma vaginal apresentou uma perda na dominância de Lactobacilos (<30% de abundância relativa) associada a um aumento de táxons que caracterizam o CST IV, incluindo Gardnerella, Atopobium e Anaerococcus (Figura 4A). As mudanças na abundância relativa dos táxons refletiram-se na distribuição dos vaginotipos. Na visita 7, o CST IV foi o mais prevalente em ambos os grupos. Embora tenha havido uma proporção maior de CST II-L. gasseri no grupo placebo nas visitas 2 e 5, esse vaginotipo não estava mais presente neste grupo após o parto. No entanto, ele ainda foi identificado no grupo probiótico (Figura 5A). Não houve diferença entre os dois grupos em nenhuma das visitas, mas a distribuição dos CSTs foi significativamente diferente antes (visitas 2–5) e após o parto (visita 7) em ambos os grupos (todos os valores de p < 0,001). Para avaliar se os probióticos tiveram um efeito benéfico na proteção contra infecções após o parto, foi solicitado às participantes na visita 7 que relatassem quaisquer diagnósticos de VB ocorridos desde o parto. Os diagnósticos foram confirmados pela análise de culturas bacterianas de swabs vaginais. Os resultados revelaram uma tendência a uma menor prevalência de VB diagnosticada no grupo probiótico (3,0%) em comparação com o grupo placebo (10,1%) (p = 0,16) (Figura 3C). Não houve associação entre os vaginotipos observados na visita 7 e o uso de antibióticos após o parto (p = 0,97) (Figura 6C).
Por fim, foi realizada a quantificação absoluta de DNA fúngico em swabs vaginais, mas a maioria das amostras apresentou níveis inferiores ao limiar de detecção. Portanto, a análise de sequenciamento planejada para caracterizar a micobiota vaginal não foi realizada.
3.6. Microbiota Intestinal da Mãe e do Bebê
A recuperação de cepas probióticas nas amostras de fezes das mães e dos bebês é relatada na Figura Suplementar S3. Ambas as cepas foram detectadas em mais amostras de mães do grupo probiótico e de seus bebês do que de mães do grupo placebo e de seus bebês. A composição da microbiota intestinal das mães não apresentou particularidades entre os grupos, tanto antes (visitas 2 e 5) quanto após o parto (visita 7) (Figura Suplementar S4). Em relação ao leite materno, a composição da microbiota apresentou uma maior abundância de Streptococcus e Bacillus, e uma menor abundância de Staphylococcus e Pseudomonas no grupo probiótico em comparação com o grupo placebo (Figura Suplementar S5).
A abundância relativa de táxons na microbiota intestinal de lactentes exclusivamente amamentados mostrou diferenças significativas entre lactentes cujas mães tomaram suplementação probiótica e lactentes cujas mães tomaram o placebo (daqui em diante, lactentes no grupo probiótico e no grupo placebo) (Figura 7). Algumas dessas diferenças, mas não todas, foram impulsionadas pela prevalência, ou seja, pela presença ou ausência de táxons. Notavelmente, os lactentes do grupo probiótico apresentaram maiores abundâncias de Bifidobacteria, Streptococcus, Bacteroides e Staphylococcus, e menores abundâncias de Escherichia/Shigella, Klebsiella, Enterococcus, Corynebacterium, Veillonella e Prevotella. Em conjunto, as diferenças na abundância de Bifidobacteria (considerada benéfica) e Escherichia/Shigella e Klebsiella (patógenos oportunistas) indicaram um perfil mais favorável no grupo probiótico.

Embora as diferenças entre grupos na composição da microbiota intestinal de lactentes nascidos por cesariana envolvessem táxons semelhantes, as variações foram mais pronunciadas, especialmente em relação à prevalência (Figura 8). Por exemplo, a diferença significativa na abundância de Bifidobacteria refletiu-se em uma prevalência de 64% no grupo placebo, em comparação com 85% no grupo probiótico. No subconjunto maior de lactentes exclusivamente amamentados, a abundância de Bifidobacteria também foi significativamente diferente entre os grupos, mas a prevalência foi de 81% no grupo placebo, em comparação com 86% no grupo probiótico. As diferenças na abundância de Escherichia/Shigella, Klebsiella, Enterococcus e Veillonella são indicadores adicionais de um perfil mais favorável no grupo probiótico. No geral, os benefícios dos probióticos foram mais pronunciados em lactentes nascidos por cesariana.

3.7. Transmissão Vertical

A análise da transmissão vertical da microbiota entre o leite materno e o intestino do lactente revelou a transmissão de vários táxons e diferentes perfis entre os grupos (Figura 9). Após ajuste estatístico, a transmissão vertical foi significativa para oito espécies no grupo placebo (Streptococcus parasanguinis, Lancefieldella parvula, Veillonella dispar, Streptococcus oralis, Bifidobacterium breve, Rothia mucilaginosa, Streptococcus oralis e Haemophilus parainfluenzae) e cinco espécies no grupo probiótico (Lactobacillus gasseri, Bifidobacterium breve, Streptococcus oralis, Lachnoanaerobaculum orale e Klebsiella pneumoniae). Entre elas, apenas Bifidobacterium breve (observada nos grupos probiótico e placebo) e Lactobacillus gasseri (observada apenas no grupo probiótico) são consideradas benéficas, com várias cepas probióticas dessas espécies associadas a diversos benefícios à saúde. Outras espécies são bactérias comensais de outros ecossistemas (pele, cavidade oral e trato respiratório superior) e podem ser consideradas patógenos oportunistas.
Para entender melhor a influência do microbioma materno na indução e desenvolvimento do microbioma em lactentes, foram realizadas análises de rede da microbiota intestinal dos lactentes e da microbiota do leite materno. Ao analisar a composição da microbiota em nível de gênero, considerando co-ocorrências em vez de bactérias individualmente, as redes bacterianas da microbiota intestinal dos lactentes e da microbiota do leite materno mostraram uma densidade mais forte de conexões no grupo probiótico do que no grupo placebo (Figura 10). Além disso, no grupo probiótico, as conexões foram organizadas em torno de bactérias-chave em cada microbiota: Bifidobacterium na microbiota intestinal dos lactentes e Streptococcus na microbiota do leite materno. Apenas três gêneros bacterianos não foram incluídos na rede, e estes são encontrados principalmente em outros ecossistemas: a cavidade oral (Gemella, Haemophilus) e a pele (Cutibacterium). No grupo placebo, foi observada uma rede rudimentar com baixa densidade de conexões, e vinte e cinco gêneros foram deixados de fora da rede. Em conjunto, esses resultados sugerem que os probióticos favorecem a indução de uma microbiota estruturada, em vez da transmissão de bactérias isoladas. Um exemplo ilustrativo que apoia a interpretação da análise de rede está incluído no material suplementar (Figura Suplementar S6).
4. Discussão
Gestantes podem ser mais suscetíveis a certas infecções virais, bacterianas e fúngicas, e a gravidez pode agravar essas infecções. O principal objetivo deste estudo foi avaliar se a suplementação probiótica durante a gravidez poderia conferir benefícios protetores contra infecções tanto para as gestantes quanto para seus lactentes, reduzindo potencialmente os riscos associados a essas infecções. Outro objetivo do estudo foi avaliar os potenciais efeitos benéficos do consumo de probióticos durante a gravidez e amamentação no estabelecimento do microbioma do lactente.
Os resultados indicaram que a suplementação com probióticos durante a gestação reduziu a incidência de infecções bacterianas e fúngicas, e houve um número significativamente menor de mulheres diagnosticadas com infecções durante o estudo no grupo dos probióticos. Embora tenha havido uma tendência de redução no número de infecções no grupo dos probióticos, a redução significativa na proporção de mulheres que apresentaram infecções ao longo do estudo apoia a ideia de que os probióticos foram amplamente eficazes e que seus benefícios não foram experimentados apenas por um subconjunto de respondedoras à intervenção. Essa é uma descoberta interessante do ponto de vista clínico, considerando o objetivo principal do estudo de testar um suplemento que confere proteção contra infecções durante o último trimestre da gestação. As mulheres que receberam probióticos tenderam a ser menos suscetíveis à vaginose bacteriana (VB), a infecção mais comumente observada, em comparação com aquelas do grupo placebo. Embora não tenha sido significativa, essa tendência persistiu no pós-parto, com uma menor prevalência de VB diagnosticada no grupo dos probióticos em relação ao grupo placebo. Esses achados sugerem um benefício potencial dos probióticos na redução da incidência de VB não apenas durante a gestação, mas também após o parto. A literatura fornece evidências substanciais que apoiam os efeitos benéficos dos probióticos na proteção e prevenção de diferentes tipos de infecções. Em gestantes, estudos mostraram que os probióticos reduzem a colonização de certas bactérias, como os estreptococos do Grupo B, diminuindo assim o risco de infecção associado a essas bactérias. Ang et al. demonstraram que os probióticos tiveram um efeito benéfico contra a candidíase vaginal em gestantes por meio da modulação da microbiota vaginal.
A presença de um microbioma vaginal fortemente dominado por Lactobacilos durante a gravidez é coerente com as observações de outros estudos realizados em mulheres grávidas. Esse domínio se estabeleceria durante o primeiro trimestre e continuaria ao longo da gestação. Embora os mecanismos por trás do domínio dos Lactobacilos durante a gravidez não sejam totalmente compreendidos, alguns pesquisadores sugeriram uma ligação com níveis elevados de estrogênio. As mudanças marcantes na composição e diversidade observadas após o parto estão alinhadas com os achados relatados na literatura. A diminuição acentuada na abundância relativa de Lactobacilos e o aumento de diversos anaeróbios que caracterizam o CST IV, como Peptoniphilus, Prevotella, Atopobium e Megasphaera, são típicos das alterações no microbioma vaginal observadas no pós-parto. Conforme relatado por outros, o vaginotipo mais comum observado após o parto foi o CST IV. Curiosamente, embora o CST II tenha sido observado em proporções ligeiramente maiores, embora não significativamente diferentes, no grupo placebo em comparação ao grupo probiótico durante a gravidez, esse vaginotipo não estava mais presente no grupo placebo, mas ainda era observado no grupo probiótico após o parto. O CST II é caracterizado pelo domínio de Lactobacillus gasseri, uma espécie com cepas que foram recentemente identificadas como probióticos potenciais para mulheres. Bae et al. sugeriram indicações probióticas para L. gasseri LM1065 devido à sua capacidade de inibir a candidíase ao suprimir o ciclo do ácido tricarboxílico em Candida albicans e bloquear sua transição para hifas. Zhang et al. triaram secreção vaginal e identificaram uma cepa de L. gasseri (L. gasseri VHProbi E09) capaz de inibir Gardnerella vaginalis e Candida albicans, que estão associadas à VB. Sob condições de cocultura, L. gasseri VHProbi E09 poderia inibir o crescimento de G. vaginalis e C. albicans, e inibir significativamente a adesão desses patógenos às células epiteliais vaginais. Demonstrou ainda a capacidade de inibir as bactérias enteropatogênicas Escherichia coli e Salmonella enteritidis. Em resumo, o L. gasseri, que está naturalmente presente no leite materno humano, conferiria vários benefícios à saúde do hospedeiro. No presente estudo, descobrimos que a transmissão vertical significativa de L. gasseri foi observada apenas em bebês do grupo probiótico. Esses resultados serão discutidos mais adiante.
Um dos mecanismos pelos quais os probióticos podem proteger contra infecções é sua capacidade de modular o sistema imunológico, comunicando-se e interagindo com vários tipos de células imunológicas, e participando do metabolismo dos ácidos biliares. Os efeitos imunomoduladores dos probióticos se deveriam principalmente à sua capacidade de estimular a produção de citocinas, como interleucinas, fator de transformação do crescimento (TGF), fatores de necrose tumoral (TNFs) e interferons, além de quimiocinas pelas células imunológicas. Nosso estudo não encontrou diferenças nos níveis de marcadores inflamatórios sanguíneos (como IL-1β, IL-6, IL-8, TNF-α e IFN-γ) e de sIgA na saliva, fezes e leite materno entre mulheres que receberam probióticos e aquelas do grupo placebo. A metanálise conduzida por Maia et al. demonstra que, embora alguns estudos tenham mostrado a modulação dos níveis de marcadores inflamatórios sanguíneos pelos probióticos, os resultados de outros estudos se alinham às nossas observações quanto à ausência de efeito dos probióticos sobre essas citocinas pró-inflamatórias sanguíneas. A modulação do sistema imunológico pelos probióticos também envolve sua interação com os linfócitos B, que podem subsequentemente induzir um aumento na produção de sIgA. No entanto, nossos resultados são consistentes com parte da literatura que indica que não há efeito significativo dos probióticos na produção de sIgA salivar. Em um estudo conduzido por Prescott et al., a ingestão de probióticos por mulheres grávidas por 2 a 5 semanas antes do parto, e por um período de 6 meses, levou a um aumento no nível de sIgA no leite materno. Em contraste, de acordo com nossos achados, outros estudos não relataram diferenças significativas nos níveis de sIgA no leite materno entre indivíduos que tomaram probióticos e aqueles que não tomaram. As diferenças nos resultados podem ser devidas às diversas cepas probióticas utilizadas, às categorias de participantes, bem como às doses e à duração da suplementação.

Sabe-se que a ingestão de probióticos durante a gravidez tem efeitos sobre os lactentes, com evidências mostrando que o consumo materno de probióticos desempenha um papel na colonização e modulação do microbioma do lactente. Para avaliar os potenciais efeitos benéficos da ingestão de probióticos por mulheres durante a gravidez e amamentação sobre os lactentes, avaliamos as infecções nos lactentes e analisamos seus microbiomas. Não observamos diferença no número de infecções entre os dois grupos de lactentes, mas o número de dias com infecções foi significativamente menor no grupo dos probióticos, com uma média de 4,7 dias de infecção em comparação com 10,5 dias em média no grupo placebo. Isso corrobora uma extensão dos benefícios observados nas mães para seus lactentes.
A análise da composição da microbiota intestinal de lactentes em aleitamento materno exclusivo revelou diferenças interessantes entre os grupos. Especificamente, os lactentes do grupo probiótico apresentaram maiores abundâncias de Bifidobactérias, Streptococcus, Bacteroides e Staphylococcus, e menores abundâncias de Escherichia/Shigella, Klebsiella, Enterococcus, Corynebacterium, Veillonella e Prevotella em comparação com os lactentes do grupo placebo. A maior abundância de bactérias benéficas (por exemplo, Bifidobactérias), a menor abundância de patógenos ou patógenos oportunistas (por exemplo, Escherichia/Shigella) e os padrões envolvendo bactérias antagônicas (por exemplo, maior abundância de Bacteroides com menor abundância de Prevotella) sugerem um perfil mais favorável no grupo probiótico. As Bifidobactérias estão entre os primeiros colonizadores do intestino infantil e dominam a composição da microbiota intestinal inicial, especialmente em lactentes em aleitamento materno exclusivo. Vários eventos perinatais, notadamente o parto por cesariana, podem afetar a colonização intestinal por Bifidobactérias. Em lactentes nascidos por cesariana, a falta de exposição às bactérias presentes no canal de parto altera o desenvolvimento do microbioma intestinal. No presente estudo, observamos diferenças mais acentuadas na microbiota intestinal dos lactentes do grupo probiótico em comparação com aqueles do grupo placebo entre os lactentes nascidos por cesariana. Semelhante aos nossos achados em lactentes em aleitamento materno exclusivo, notamos uma maior abundância de Bifidobactérias no grupo probiótico. No entanto, a diferença na prevalência de Bifidobactérias foi muito maior ao focar no subconjunto de lactentes nascidos por cesariana (probiótico: 85%; placebo: 64%; diferença de 21%) do que ao analisar o subconjunto maior de dados de lactentes em aleitamento materno exclusivo (probiótico: 86%; placebo: 81%; diferença de 5%). Promover a colonização intestinal por Bifidobactérias em lactentes nascidos por cesariana é uma indicação clínica importante com várias implicações para os desfechos de saúde na primeira infância e mais tarde na vida. Acredita-se que isso atue preventivamente sobre desfechos associados ao parto por cesariana, incluindo um risco aumentado de obesidade, doenças metabólicas e desenvolvimento imunológico alterado. A semeadura vaginal tem sido utilizada para restaurar o desenvolvimento do microbioma intestinal em lactentes nascidos por cesariana.
Este procedimento consiste em incubar uma gaze estéril na vagina da mãe por uma hora antes da cesariana e passar a gaze na boca, rosto e resto do corpo do recém-nascido nos primeiros minutos após o nascimento. A semeadura vaginal pode ajudar a iniciar o desenvolvimento de um microbioma semelhante ao observado em bebês nascidos por parto vaginal em bebês nascidos por cesariana. No entanto, esse procedimento apresenta riscos inerentes de transmissão de patógenos e, portanto, sugeriu-se o fornecimento de suplementos probióticos às mães durante a lactação como uma alternativa mais segura. No presente estudo, probióticos tomados pela mãe no terceiro trimestre da gravidez e durante a lactação promoveram a colonização intestinal por Bifidobactérias em bebês nascidos por cesariana, conforme apoiado pelas diferenças significativas entre os grupos em termos de abundância relativa e prevalência desse táxon. Nossos resultados estão de acordo com uma revisão que concluiu que os bebês nascidos por cesariana que recebem probióticos experimentam um benefício maior da intervenção em comparação com aqueles que nascem por via vaginal, uma vez que os probióticos ajudam a compensar a falta de exposição à microbiota da mãe durante a passagem pelo canal de parto. Essa descoberta tem importantes implicações clínicas tendo em vista o aumento da incidência de partos por cesariana observado em todo o mundo.
A transmissão vertical envolveu mais espécies no grupo placebo do que no grupo probiótico, mas apenas uma das espécies com transmissão significativa no grupo placebo (Bifidobacterium breve) pode ser considerada benéfica, enquanto as demais são, em sua maioria, patógenos oportunistas. No grupo probiótico, foi observada a transmissão significativa tanto de Bifidobacterium breve quanto de Lactobacillus gasseri. Conforme discutido anteriormente, L. gasseri é encontrado no leite materno e possui diversas propriedades probióticas que podem ser benéficas tanto para as mães quanto para os lactentes. Além da transmissão de espécies bacterianas isoladas, este estudo destacou a transmissão de uma rede estruturada e mais densamente conectada de bactérias no grupo probiótico em comparação ao grupo placebo. De forma importante, no grupo probiótico, as redes foram estruturadas em torno de bactérias-chave em cada microbioma: Bifidobacterium na microbiota intestinal dos lactentes e Streptococcus na microbiota do leite materno. Um estudo recente focado no desenvolvimento da microbiota intestinal em lactentes nascidos prematuramente descobriu que o microbioma de lactentes que receberam probiótico transitou mais rapidamente para um estado semelhante ao de lactentes nascidos a termo, caracterizado por maior estabilidade e interconectividade entre espécies. A alta interconectividade é uma característica desejável do microbioma intestinal infantil, uma vez que os microbiomas humanos são redes que apresentam uma forte organização, com alguns táxons "centrais" (hubs) direcionando a composição de cada ecossistema. Embora seja fortemente dominado por Bifidobactérias e, portanto, muito menos diverso do que o microbioma intestinal adulto, o microbioma intestinal infantil pode desempenhar suas funções necessárias ao depender de uma rede altamente interconectada de espécies com forte especialização metabólica. Com base em nossos resultados, parece que a administração de suplementos probióticos às mães no último trimestre da gravidez e durante a lactação promoveria a indução de uma rede mais interconectada de bactérias intestinais nos lactentes.
Embora este estudo tenha pontos fortes, incluindo a análise do leite materno e da microbiota intestinal dos bebês, bem como a análise da transmissão vertical em díades mãe-bebê, ele também apresenta algumas limitações. O número total de infecções relatadas pelas mães foi pequeno. Participantes saudáveis foram recrutadas para este estudo, mas pode ter sido relevante recrutar participantes com histórico recente de infecções ou infecções recorrentes para avaliar melhor o efeito do probiótico. Por razões de segurança, participantes com diabetes (gestacional, tipo 1 e tipo 2) foram excluídas do presente estudo. No entanto, outros estudos mostraram que probióticos podem prevenir ou ajudar a controlar o diabetes gestacional. Agora que existem evidências sobre a segurança e eficácia do suplemento probiótico Prenatis™, estudos futuros poderiam recrutar especificamente participantes com diabetes gestacional ou permitir que participantes com essa condição participassem do estudo. Isso seria uma contribuição relevante para o conhecimento, considerando que mulheres com diabetes gestacional são mais suscetíveis a algumas infecções e podem, portanto, se beneficiar do uso de suplemento probiótico. Outras análises complementares poderiam ter fornecido informações relevantes para entender melhor a modulação da composição da microbiota por probióticos, como medidas de pH de swabs vaginais e a composição de oligossacarídeos do leite humano (HMO) do leite materno. Além da coleta de uma amostra de fezes um mês após o nascimento, a coleta de amostras mais cedo e mais tarde na vida dos bebês nos permitiria rastrear mudanças na composição da microbiota intestinal dos bebês com mais precisão e avaliar se as diferenças entre os grupos se mantinham ao longo do tempo. Da mesma forma, a coleta de swabs vaginais durante os primeiros meses ou ano após o parto nos permitiria rastrear a restauração da microbiota vaginal ao longo do tempo.
5. Conclusões
Em conclusão, o consumo do suplemento probiótico Prenatis™ durante o terceiro trimestre de gravidez contribui para reduzir a taxa de infecções em gestantes. Os benefícios se estendem a seus bebês e incluem uma duração mais curta das infecções, maior colonização intestinal por bactérias benéficas (especialmente Bifidobactérias) e a indução de uma microbiota altamente interconectada, estruturada em torno de espécies-chave, o que pode conferir benefícios à saúde na primeira infância e ao longo da vida. Como não são expostos à microbiota vaginal da mãe e podem precisar de suporte adicional para iniciar o estabelecimento saudável do microbioma, bebês nascidos por cesariana podem se beneficiar da ingestão de probióticos pelas mães durante a gravidez e lactação em maior medida do que bebês nascidos por via vaginal.
Nota do Editor/Editora: As declarações, opiniões e dados contidos em todas as publicações são de responsabilidade exclusiva do(s) autor(es) e colaborador(es) e não do MDPI e/ou do(s) editor(es). O MDPI e/ou o(s) editor(es) se isentam de responsabilidade por qualquer dano a pessoas ou propriedades resultante de quaisquer ideias, métodos, instruções ou produtos mencionados no conteúdo.

Materiais Suplementares
As seguintes informações de apoio podem ser baixadas em: , Tabelas suplementares: Tabela S1. Níveis de glicemia de jejum, insulina, triglicerídeos e ferritina em gestantes recebendo placebo ou probiótico; Tabela S2. Frequência e consistência das fezes em gestantes recebendo placebo ou probiótico; Tabela S3. Incidência de ruptura prematura de membranas (RPM) em gestantes recebendo placebo ou probiótico; Tabela S4. Peso da participante em quilogramas antes e após o parto; Tabela S5. Depressão pós-parto em mulheres recebendo placebo ou probiótico; Tabela S6. Número de lactentes com cólica; Tabela S7. Frequência de icterícia e hiperbilirrubinemia relatadas; Tabela S8. Proporção de horas diárias de sono em lactentes; Tabela S9. Frequência, consistência e cor das fezes dos lactentes; Tabela S10. Doenças de pele no primeiro ano de vida em lactentes de ambos os grupos; Tabela S11. Número de problemas de saúde em lactentes durante o primeiro ano de vida. Figuras suplementares: Figura S1. Níveis de marcadores inflamatórios circulantes e imunoglobulinas em diferentes tipos de amostras em mulheres; Figura S2. sIgA fecal de lactentes; Figura S3. Recuperação de cepas em mães e lactentes; Figura S4. Composição da microbiota em amostras de fezes de mães; Figura S5. Composição da microbiota em amostras de leite materno; Figura S6. Exemplo ilustrativo para a interpretação da análise de redes.

Contribuições dos Autores
Conceptualização, S.B., R.H. e I.-J.K.; metodologia, S.B., M.-L.O., T.C., S.L., D.T., R.H. e I.-J.K.; validação, T.C., S.L. e D.T.; análise formal, T.C., S.L. e D.T.; investigação, R.H. e I.-J.K.; recursos, S.B., R.H. e I.-J.K.; curadoria de dados, M.C.-S.-Y., S.E.S., T.C., S.L. e D.T.; redação—preparação do rascunho original, M.C.-S.-Y., S.E.S. e N.A.-O.; redação—revisão e edição, S.B., M.C.-S.-Y., S.E.S., N.A.-O., M.-L.O., T.C., S.L., D.T., R.H. e I.-J.K.; visualização, M.C.-S.-Y., S.E.S., T.C., S.L. e D.T.; supervisão, S.B., M.-L.O., R.H. e I.-J.K.; administração do projeto, M.-L.O. e S.E.S. Todos os autores leram e concordaram com a versão publicada do manuscrito.

Declaração do Comitê de Revisão Institucional
O estudo foi conduzido de acordo com as diretrizes da Declaração de Helsinque e aprovado por um Comitê de Revisão Institucional independente, Veritas IRB NCT03310853 (Saint-Laurent, QC, Canadá) em 21 de setembro de 2017.

Declaração de Consentimento Informado
O consentimento informado foi obtido de todos os participantes envolvidos no estudo.

Declaração de Disponibilidade de Dados
Os dados descritos no manuscrito, no livro de códigos e no código analítico serão disponibilizados mediante solicitação, sujeita a aplicação e aprovação. A Lallemand Health Solutions Inc. está disposta a compartilhar, mediante recebimento de uma solicitação por escrito de pesquisadores científicos e médicos qualificados, dados de ensaios clínicos em nível de participante e de estudo, bem como protocolos. Para solicitar acesso a essas informações, os pesquisadores devem enviar uma descrição detalhada do uso pretendido do material, incluindo seu objetivo, histórico, métodos, plano de análise estatística e planos de publicação. A submissão deve incluir um currículo de todos os pesquisadores que acessarão os dados, com uma descrição clara de suas respectivas funções. O acesso aos dados será concedido aos dados anonimizados do estudo após aprovação por um painel de revisão científica nomeado pela Lallemand Health Solutions Inc. e consulta ao Conselho de Revisão Institucional que aprovou o ensaio clínico. Nossa maior preocupação é garantir a privacidade dos participantes. Todos os manuscritos decorrentes do acesso aos dados devem ser fornecidos à Lallemand Health Solutions Inc. para revisão pelo menos 15 dias úteis antes da submissão, para garantir conformidade com nossa política e segurança dos participantes.
Conflitos de Interesse
S.B., S.E.S., N.A.O. e M.L.O. são empregados da Lallemand Health Solutions Inc., uma empresa que pesquisa, desenvolve, fabrica, comercializa e vende probióticos para clientes empresariais, mas não diretamente para consumidores. T.C., S.L. e D.T. receberam remuneração da Lallemand Health Solutions Inc. como consultores. I.J.K. recebeu honorários de consultoria e palestras da Ferring Pharmaceuticals Inc. e da EMD Serono Inc. Ele possui participações ou ações da The Fertility Partners e da YAD Tech.
Referências
Mudanças no Microbioma em Distúrbios da Gravidez
O microbioma intestinal materno durante a gravidez e seu papel na saúde materna e infantil
Mudanças fisiológicas e interações entre o microbioma e o hospedeiro durante a gravidez
Probióticos e gravidez
O microbioma em evolução da gravidez à primeira infância: uma revisão abrangente
O sistema imunológico e o microbioma na gravidez
Gravidez e suscetibilidade a doenças infecciosas
Candidíase vulvovaginal na gravidez
Etiologia do trabalho de parto prematuro: Vaginose bacteriana
Prevalência e fatores de risco da candidíase vulvovaginal durante a gravidez: Uma revisão
Infecção do trato urinário: Uma visão geral da infecção e dos fatores de risco associados
Uso de antibióticos durante a gravidez: Quão ruim é?
Efeito da exposição a antibióticos no microbioma intestinal e nos índices bioquímicos de mulheres grávidas
Efeitos combinados do uso de medicamentos pré-natais e do tipo de parto estão associados ao eczema aos 2 anos de idade
O papel dos microbiomas em mulheres grávidas e na prole: Progresso da pesquisa nos últimos anos
Fatores que afetam o estabelecimento precoce da flora intestinal neonatal e suas medidas de intervenção
Declaração de consenso da Associação Científica Internacional de Probióticos e Prebióticos (ISAPP) sobre a definição e o escopo dos simbióticos
Documento de consenso de especialistas: Declaração de consenso da Associação Científica Internacional de Probióticos e Prebióticos sobre o escopo e o uso apropriado do termo probiótico

Mecanismo de ação dos probióticos em células imunes e efeitos benéficos na saúde humana

Efeitos imunomoduladores da ingestão de leite fermentado com Lactobacillus casei DN114001 em mães lactantes e seus filhos

Eficácia do uso direto ou indireto de probióticos para a melhora da depressão materna durante a gestação e no período pós-natal: Uma revisão sistemática e meta-análise

A ingestão oral de lactobacilos pode ser útil na vaginose bacteriana sintomática: Um estudo clínico randomizado

Prevenção do diabetes mellitus gestacional (DMG) e probióticos: Mecanismo de ação: Uma revisão

Impacto do aconselhamento dietético suplementado com probióticos maternos no resultado da gravidez e no crescimento pré-natal e pós-natal: Um estudo duplo-cego, controlado por placebo

Ingestão de alimentos probióticos e risco de pré-eclâmpsia em mulheres primíparas: O Estudo de Coorte Norueguês de Mães e Filhos

Momento do consumo de leite probiótico durante a gravidez e efeitos na incidência de pré-eclâmpsia e parto prematuro: Um estudo de coorte observacional prospectivo na Noruega

Transmissão, colonização e sucessão microbiana: Da gravidez à infância

Papel dos probióticos na redução do risco de diabetes gestacional

O caso a favor dos probióticos antes, durante e após a gravidez: Insights dos primeiros 1.500 dias

Impacto da Suplementação Nutricional Materna durante a Gravidez e Lactação na Microbiota Intestinal Infantil ou do Leite Materno: Uma Revisão Sistemática

Suplementação de Probióticos durante o Período Perinatal e Infantil: Efeitos na Disbiose Intestinal e Doença

Ingestão materna de probióticos para programar a saúde da prole

Suplementação de probióticos durante a gravidez ou infância em alergias alimentares múltiplas e microbiota intestinal: Uma revisão sistemática e meta-análise

Declaração CONSORT 2010: Diretrizes atualizadas para relatar ensaios clínicos randomizados de grupos paralelos

Escala de Forma das Fezes como um Guia Útil para o Tempo de Trânsito Intestinal

Detecção de depressão pós-natal. Desenvolvimento da Escala de Depressão Pós-Natal de Edimburgo de 10 itens

Escala de Forma das Fezes Infantis: Desenvolvimento e Resultados

Ciência de dados de microbioma reprodutível, interativa, escalável e extensível usando QIIME 2

Dadaist2: Um Kit de Ferramentas para Automatizar e Simplificar a Análise Estatística e a Plotagem de Experimentos de Metacodificação de Código de Barras

Identificação e Produção de H2O2 de Lactobacilos Vaginais de Gestantes com Alto Risco de Parto Prematuro e Relação com o Resultado

Bifidobacterium bifidum R0071 resulta em uma maior proporção de dias saudáveis e uma menor porcentagem de estudantes academicamente estressados relatando um dia de resfriado/gripe: Um estudo randomizado, duplo-cego, controlado por placebo

Estudo clínico comparando probiótico Lactobacillus GR-1 e RC-14 com gel vaginal de metronidazol para tratar vaginose bacteriana sintomática

Efeitos dos probióticos na recorrência da vaginose bacteriana: Uma revisão
Ingestão de iogurte contendo Lactobacillus acidophilus como profilaxia para vaginite por cândida
Modelagem da transferência da microbiota vaginal da mãe para o bebê no início da vida
Inferência esparsa e composicionalmente robusta de redes ecológicas microbianas
Microbioma vaginal de mulheres em idade reprodutiva
Rumo a uma compreensão mais profunda da microbiota vaginal
Microbiologia Terapêutica: O Papel do Bifidobacterium breve como Suplemento Alimentar na Prevenção/Tratamento de Doenças Pediátricas
Sequência do genoma de referência e análise de propriedades funcionais probióticas do Lactobacillus gasseri LM1065 para aplicações na indústria alimentícia
Uso de probióticos Lactobacillus para infecções geniturinárias bacterianas em mulheres: Uma revisão
Epidemiologia das infecções do trato urinário: Incidência, morbidade e custos econômicos
Efeitos Probióticos contra Infecções Virais: Novas Armas para uma Guerra Antiga
Efeitos Benéficos do Consumo de Probióticos no Sistema Imunológico
Prevenção de infecções por probióticos
Lactobacillus rhamnosus GR-1 e Lactobacillus reuteri RC-14 orais para reduzir a colonização por Streptococcus do Grupo B em gestantes: Um ensaio clínico randomizado
Erradicação retal e vaginal de Streptococcus agalactiae (GBS) em gestantes pelo uso de Lactobacillus salivarius CECT 9145, uma cepa probiótica alvo-específica
Probióticos reduzem a candidíase vaginal em gestantes através da modulação da abundância de Candida e Lactobacillus nas regiões vaginal e cervicovaginal
O microbioma vaginal de gestantes é menos rico e diverso, com menor prevalência de Mollicutes, em comparação com mulheres não grávidas
A composição e estabilidade da microbiota vaginal de gestantes normais é diferente da de mulheres não grávidas
Uma Abordagem Metagenômica para a Caracterização da Assinatura do Microbioma Vaginal na Gravidez
O microbioma vaginal durante a gestação e o período pós-parto em uma população europeia
Variação temporal e espacial da microbiota humana durante a gestação
Caracterização de uma cepa de Lactobacillus gasseri como probiótico para vaginite feminina
Efeitos moduladores dos probióticos durante infecções patogênicas com ênfase na regulação imunológica
Probióticos: Papel na imunomodulação e efeitos consequentes: Probióticos e imunidade
Ácidos biliares na imunidade: Mediadores bidirecionais entre o hospedeiro e a microbiota
Efeitos da terapia probiótica nos marcadores inflamatórios séricos: Uma revisão sistemática e meta-análise
Importância dos probióticos e suas propriedades imunomoduladoras
O efeito de probióticos, parabióticos, simbióticos, alimentos fermentados e outras formas microbianas na produção de imunoglobulinas: Uma revisão sistemática e meta-análise de ensaios clínicos
A suplementação com probióticos Lactobacillus rhamnosus ou Bifidobacterium lactis na gestação aumenta a detecção de interferon-γ no sangue do cordão umbilical e do fator de crescimento transformador-β e imunoglobulina A no leite materno
Administração de um produto probiótico multicepas a mulheres no período perinatal afeta diferencialmente o perfil de citocinas do leite materno e pode ter efeitos benéficos nos sintomas funcionais gastrointestinais neonatais. Um ensaio clínico randomizado
Baixos níveis de TGF-β2 no leite materno são induzidos pela suplementação com Lactobacillus reuteri e associam-se a um risco reduzido de sensibilização durante a infância
A administração de bactérias probióticas orais a mulheres grávidas causa colonização infantil temporária
Efeito do consumo materno de Lactobacillus GG na transferência e estabelecimento da microbiota fecal de bifidobactérias em neonatos
Diversidade de Prevotella, nichos e interações com o hospedeiro humano
Uso de probióticos e prebióticos na alimentação infantil
Construindo conjuntos robustos de bactérias no intestino humano no início da vida
Composição do microbioma em populações pediátricas do nascimento à adolescência: Impacto da dieta e das intervenções com prebióticos e probióticos
Papel das Bifidobactérias na Saúde Infantil
Efeitos a curto e longo prazo da cesariana na saúde de mulheres e crianças
Microbiota atrofiada e colonização por patógenos oportunistas no parto por cesariana
Restauração parcial da microbiota de bebês nascidos de cesariana por meio da transferência microbiana vaginal
Aumento global das taxas de cesariana e implicações para a saúde pública: Um chamado à ação
A suplementação com uma mistura probiótica acelera a maturação do microbioma intestinal e reduz a inflamação intestinal em bebês extremamente prematuros
Relações de Co-ocorrência Microbiana no Microbioma Humano
A Associação entre Diabetes Mellitus Gestacional e Infecções na Gravidez—Revisão Sistemática e Meta-Análise
Desenho do estudo. O estudo foi um ensaio randomizado, duplo-cego, controlado por placebo, de braços paralelos, com duração de 18 semanas. O tamanho da amostra para este estudo foi de 201 participantes inscritos, com 180 participantes randomizados em uma proporção de 1:1 em cada um dos 2 braços. Este estudo consistiu em 8 visitas, incluindo visitas de pré-triagem, recrutamento e randomização, 5 visitas intermediárias e uma visita final de conclusão do estudo. Para avaliar os desfechos primários e secundários, as avaliações do estudo foram realizadas em 8 visitas.
Diagrama de fluxo dos participantes do estudo. Os participantes foram recrutados usando vários métodos. Um total de 1.968 indivíduos foram triados, e 180 foram considerados elegíveis e randomizados. Dos 180 participantes randomizados, 90 participantes foram alocados ao grupo placebo, e 90 participantes foram alocados ao grupo de estudo para receber uma cápsula de suplemento probiótico diariamente contendo 5 × 10⁹ UFC de Lacticaseibacillus rhamnosus Rosell®-11 e Bifidobacterium bifidum HA-132 (Prenatis™). Um total de 140 participantes completou a duração de 18 semanas do estudo (71 no grupo placebo e 69 no grupo probiótico), e 133 participantes completaram o acompanhamento um ano após o nascimento (67 no grupo placebo e 66 no grupo probiótico). EA: evento adverso; PI: produto de investigação.
Proporção de participantes com infecções diagnosticadas. (A) Proporção de participantes com infecções bacterianas e fúngicas diagnosticadas nos dois grupos durante o terceiro trimestre. Tamanho do efeito (diferença de risco): −0,385; risco relativo: −0,556. (B) Proporção de participantes com vaginoses bacterianas, diagnosticadas nos dois grupos durante o terceiro trimestre. Tamanho do efeito (diferença de risco): −0,333; risco relativo: −0,5. (C) Proporção de participantes com vaginose bacteriana diagnosticada nos dois grupos antes (V5) e depois (V7) do parto. O teste exato de Fisher foi realizado para determinar as diferenças estatísticas entre o grupo placebo (n = 90) e o grupo probiótico (n = 90). Tamanho do efeito V5 (diferença de risco): 0,0235; risco relativo: −0,423. Tamanho do efeito V7 (diferença de risco): 0,0716; risco relativo: −0,723. BV: vaginose bacteriana; V: visita.

Microbioma vaginal e associação com vaginose bacteriana. (A) Composição do microbioma vaginal em nível de gênero das participantes nos grupos placebo e probiótico em V2, V5 e V7. (B) Comparação do microbioma vaginal de participantes diagnosticadas com vaginose bacteriana durante o terceiro trimestre. Os gráficos de barras representam a abundância relativa em nível de gênero do microbioma vaginal comparado em V2 entre todas as participantes com BV durante a gravidez (BV) e participantes não infectadas (Sem BV). BV: vaginose bacteriana; V: visita.

Proporções de vaginotipos e associação com vaginose bacteriana. (A) Proporções de vaginotipos nos dois grupos em V2, V5 e V7. (B) Associação do CST IV com vaginose bacteriana em V2, V5 e V7. Os valores de p relatados correspondem aos testes exatos de Fisher e valores de p ajustados para testes simultâneos usando o procedimento de Benjamini–Hochberg. (C) Distribuição de vaginotipos em participantes com e sem infecções em V2, V5 e V7. BV: vaginose bacteriana; Inf: infecções; No-inf: sem infecções; V: visita; CST: tipos de estado da comunidade; CST I: Lactobacillus crispatus; CST-II: Lactobacillus gasseri; CST-III: Lactobacillus iners; CST-IV: não abundante em lactobacilos; e CST-V: Lactobacillus jensenii.

Proporções de vaginotipos e associação com uso de antibióticos. (A) Proporções de vaginotipos nas participantes que tomam antibióticos ou não em V2, V5 e V7. (B) Associação dos vaginotipos com o uso de antibióticos durante a gravidez. (C) Associação dos vaginotipos com o uso de antibióticos no pós-parto. Os valores de p relatados correspondem aos testes exatos de Fisher e valores de p ajustados para testes simultâneos usando o procedimento de Benjamini–Hochberg. O tamanho do efeito e o IC são estimados com células nulas removidas das tabelas de contingência. V: visita; CST: tipos de estado da comunidade; CST I: Lactobacillus crispatus; CST-II: Lactobacillus gasseri; CST-III: Lactobacillus iners; CST-IV: não abundante em lactobacilos; CST-V: Lactobacillus jensenii; e ATB: antibiótico.
Microbioma intestinal de lactentes exclusivamente amamentados. Comparação da abundância e prevalência dos táxons mais abundantes em lactentes exclusivamente amamentados nas primeiras 4 a 6 semanas de vida. A análise de abundância diferencial utilizando o método ANCOM-BC foi realizada para determinar as diferenças estatísticas entre o grupo placebo (n = 32) e o grupo probiótico (n = 28). Os táxons apresentados em azul ou vermelho estão aumentados ou diminuídos no grupo probiótico, respectivamente. A intensidade das cores laranja e azul na figura é proporcional à abundância relativa e à prevalência, respectivamente. Log2FC: log2 da diferença média de abundância entre os grupos comparados. O valor absoluto do Log2FC foi limitado a um máximo de 5 para melhorar a legibilidade.

Microbioma intestinal de lactentes nascidos por cesariana. Comparação da abundância e prevalência dos táxons mais abundantes em lactentes nascidos por cesariana nas primeiras 4 a 6 semanas de vida. A análise de abundância diferencial utilizando o método ANCOM-BC foi realizada para determinar as diferenças estatísticas entre o grupo placebo (n = 14) e o grupo probiótico (n = 13). Os táxons apresentados em azul ou vermelho estão aumentados ou diminuídos no grupo probiótico, respectivamente. A intensidade das cores laranja e azul na figura é proporcional à abundância relativa e à prevalência, respectivamente. Log2FC: log2 da diferença média de abundância entre os grupos comparados. O valor absoluto do Log2FC foi limitado a um máximo de 5 para melhorar a legibilidade.

Transferência vertical através do leite materno. Efeito dos probióticos (B) na transferência vertical através do leite materno em comparação ao placebo (A). Os táxons rotulados são aqueles que são significativamente transferidos após ajuste estatístico. A Razão de Transferência Ponderada (WTR) foi calculada (com base no OR e no valor-p para cada ASV individual e calculada como a razão ponderada dos OR positivos (OR > 1) e OR negativos (OR < 1)). Para estimar a significância da WTR, foram realizadas 10.000 permutações consistindo em associar aleatoriamente mãe/filho. Os painéis inferiores mostram a distribuição de permutação da estatística WTR, com o valor observado como uma haste laranja.
Redes bacterianas do leite materno e da microbiota intestinal dos lactentes. Rede conjunta inferida no nível de gênero da microbiota do leite materno e da microbiota intestinal do lactente nos dois grupos na V7. Redes composicionais foram inferidas usando modelos gráficos esparsos. V: visita. Microbiota intestinal do lactente: (1) Schaalia, (2) Bifidobacterium, (3) Rothia, (4) Corynebacterium, (5) Cutibacterium, (6) Lancefieldella, (7) Collinsella, (8) Eggerthella, (9) Bacteroides, (10) Phocaeicola, (11) Parabacteroides, (12) Gemella, (13) Staphylococcus, (14) Dolosigranulum, (15) Enterococcus, (16) Lactiseibacillus, (17) Streptococcus, (18) Clostridiumsensustricto, (19) Lachnospiracea, (20) Finegoldia, (21) Veillonella, (22) Enterobacter, (23) Escherichia/Shigella, (24) Klebsiella, (25) Haemophilus. Microbiota do leite materno: (26) Bifidobacterium, (27) Intrasporangium, (28) Kocuria, (29) Micrococcus, (30) Rothia, (31) Corynebacterium, (32) Cutibacterium, (33) Prevotella, (34) Chryseobacterium, (35) Gemella, (36) Staphylococcus, (37) Streptococcus, (38) Anaerococcus, (39) Finegoldia, (40) Peptoniphilus, (41) Veillonella, (42) Brevundimonas, (43) Haemophilus, e (44) Acinetobacter.

Características basais das mulheres que receberam probióticos ou placebo e de seus lactentes.
Placebo Probióticos p-valor Mulheres (n) 90 90 Idade em anos (Média ± DP) 30,4 ± 4,0 31,2 ± 4,0 0,26 Altura em cm (Média ± DP) 163,9 ± 6,0 163,5 ± 7,0 0,63 Peso em kg (Média ± DP) 78,1 ± 15,0 78,3 ± 13,0 0,62 Lactentes (n) 71 69 Idade gestacional ao nascer em semanas (Média ± DP) 39,8 ± 1,3 39,7 ± 1,2 0,78 Peso ao nascer em kg (Média ± DP) 3,4 ± 0,4 3,4 ± 0,5 0,93 Comprimento ao nascer em cm (Média ± DP) a 50,3 ± 2,4 50,2 ± 2,4 0,88 Perímetro cefálico ao nascer em cm (Média ± DP) b 34,5 ± 1,4 34,7 ± 1,5 0,92 Nascidos por cesariana 17 15 0,84
a: placebo n = 71, probiótico n = 68; b: placebo n = 67, probiótico n = 63. Nascidos por cesariana: teste exato de Fisher. Todas as outras comparações: teste de postos sinalizados de Wilcoxon.

Infecções no terceiro trimestre da gravidez.
Placebo Probióticos p-valor Tamanho do Efeito Intervalo de Confiança de 95% n = 90 n = 90 Inferior Superior Todas as Infecções Diagnosticadas (Média ± DP) 0,20 ± 0,45 0,09 ± 0,32 0,07 0,278 −0,052 1,673 VB Diagnosticada (Média ± DP) 0,13 ± 0,37 0,07 ± 0,29 0,19 0,226 −0,344 1,731 Dias com Infecções (Média ± DP) 14,83 ± 7,93 13,75 ± 9,07 0,76 0,14 −0,428 0,58
A regressão binomial negativa foi realizada para determinar as diferenças estatísticas entre o grupo placebo e o grupo probiótico. DP: desvio padrão; VB: vaginose bacteriana. O tamanho do efeito é baseado no teste F de diferenças entre grupos do modelo.

Número de dias com infecções durante as primeiras quatro a seis semanas de vida dos lactentes.
Placebo Probióticos p-valor Tamanho do Efeito Intervalo de Confiança de 95% n = 71 n = 69 Inferior Superior Dias com Infecções (Média ± DP) 10,5 ± 5,57 4,7 ± 2,43 0,03 1,8 0,12 1,65
A regressão binomial negativa foi realizada para determinar as diferenças estatísticas entre os grupos placebo e probióticos. DP: desvio padrão. O tamanho do efeito é baseado no teste F das diferenças entre grupos do modelo.

O Efeito dos Probióticos na Saúde durante a Gravidez e em Lactentes: Um Ensaio Randomizado, Duplo-Cego, Controlado por Placebo.

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