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pmid: "40883489"
title: "Elucidação e valorização da atividade potente do extrato de resina gomosa de Commiphora myrrha: atividades antimicrobiana e de cicatrização de feridas por fibroblastos."
authors: "Khalil RM, Ghanem NB, Khairy H"
journal: "Scientific reports"
pubdate: "2025 Aug 29"
doi: "10.1038/s41598-025-17079-x"
source: "PMC Full Text"

Elucidação e valorização da atividade potente do extrato de resina gomosa de Commiphora myrrha: atividades antimicrobiana e de cicatrização de feridas por fibroblastos.

Autores

Khalil RM, Ghanem NB, Khairy H

Periodico

Scientific reports (2025 Aug 29)

Conteudo

Elucidação e valorização da atividade potente do extrato de resina gomosa de Commiphora myrrha: atividades antimicrobiana e de cicatrização de feridas em fibroblastos
Este estudo investigou as propriedades antimicrobianas, antioxidantes e de cicatrização de feridas do extrato de resina de Commiphora myrrha (C. myrrha) e suas frações de solventes. Usando etanol, metanol, hexano e água como solventes de extração, o extrato etanólico exibiu a atividade antimicrobiana mais forte, o que foi atribuído à sua capacidade de solubilizar uma ampla gama de compostos bioativos. Um fracionamento adicional revelou que a subfração de acetato de etila apresentou a maior eficácia antimicrobiana, incluindo uma zona de inibição de 23 mm contra Klebsiella pneumoniae. A análise de Microscopia Eletrônica de Varredura forneceu novos insights sobre a ruptura de células microbianas, mostrando alterações morfológicas significativas em bactérias Gram-negativas e Candida albicans, enquanto Staphylococcus aureus exibiu danos estruturais mínimos. O ensaio DPPH demonstrou atividade antioxidante potente na fração de acetato de etila (IC₅₀: 0,92 mg/mL), indicando uma forte capacidade de sequestro de radicais livres. Verificou-se que a polaridade do solvente influencia tanto a atividade antioxidante quanto a antimicrobiana, com o acetato de etila emergindo como o solvente de extração ideal. O extrato etanólico bruto mostrou citotoxicidade moderada em relação aos fibroblastos dérmicos humanos (IC₅₀: 24,53 µg/mL), mas promoveu o fechamento de feridas em 98,4% in vitro, sugerindo sua biocompatibilidade e potencial regenerativo. O perfil de GC-MS da fração de acetato de etila identificou 70 compostos, incluindo benzofurano, elemeno e sesquiterpenos relacionados a germacra, fornecendo uma base química para os efeitos biológicos observados. Este é o primeiro estudo a vincular de forma abrangente a fração de acetato de etila de C. myrrha tanto à atividade antimicrobiana quanto à de cicatrização de feridas, apoiando seu desenvolvimento como um agente terapêutico multifuncional. Os resultados validam seu uso tradicional e destacam seu potencial em aplicações farmacêuticas e nutracêuticas modernas.

Informações Suplementares
A versão online contém material suplementar disponível em 10.1038/s41598-025-17079-x.

Introdução
Commiphora myrrha (C. myrrha), um membro da família Burseraceae, é um arbusto resinoso nativo de regiões áridas da Península Arábica, África Oriental e bacia do Mediterrâneo. A resina de Commiphora myrrha (mirra) é uma goma espessa, de sabor amargo, amarelo-acastanhada e com aroma agradável. Essa goma exsuda como um fluido dos ductos resiníferos da casca da árvore quando a casca racha naturalmente ou é cortada intencionalmente (sangria). Ao ser exposta ao ar, esse fluido endurece e se transforma em pedaços irregulares castanho-avermelhados chamados lágrimas, que são então coletados da árvore. A mirra é estimada há muito tempo por suas propriedades farmacológicas multifacetadas, particularmente sua capacidade de cicatrização de feridas, capacidade antioxidante de sequestrar radicais livres e mitigar o estresse oxidativo, e atividade antimicrobiana de amplo espectro contra microrganismos patogênicos. O potencial antimicrobiano de C. myrrha foi amplamente documentado tanto na literatura tradicional quanto na científica. Estudos demonstraram sua eficácia contra uma grande variedade de microrganismos, como bactérias, fungos e protozoários. Extratos de mirra e seus óleos essenciais exibem ações inibitórias contra patógenos clinicamente significativos, incluindo Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae e Candida albicans. Essas propriedades antimicrobianas são atribuídas à presença de compostos bioativos, incluindo sesquiterpenoides e ácidos fenólicos, que desestruturam as membranas celulares microbianas, inibem a atividade enzimática e interferem na proliferação microbiana. Além de seus efeitos antimicrobianos, C. myrrha contém uma infinidade de compostos antioxidantes, como terpenoides, flavonoides e ácidos fenólicos, que sequestram radicais livres, quelam íons metálicos e aumentam a atividade de enzimas antioxidantes endógenas. Essas propriedades antioxidantes contribuem para a manutenção da homeostase celular, a prevenção de danos celulares e a modulação das respostas inflamatórias. Além de seus efeitos antimicrobianos e antioxidantes, o extrato de C. myrrha promove a proliferação de fibroblastos, aumenta a deposição de colágeno e acelera o processo de epitelização, levando a um fechamento mais rápido da ferida. Uma parte significativa dos medicamentos disponíveis para o tratamento de feridas não é apenas cara, mas também apresenta problemas como alergias e resistência a medicamentos. Em contraste, os fitomedicamentos para cicatrização de feridas não são apenas baratos e de baixo custo, mas também estão acessíveis.
Commiphora gileadensis e C. myrrha são espécies intimamente relacionadas, ambas tradicionalmente utilizadas por suas propriedades terapêuticas, incluindo atividades antimicrobiana, anti-inflamatória e cicatrizante. Enquanto C. gileadensis foi recentemente estudada usando extração assistida por micro-ondas (MAE), levando à identificação de 30 novos compostos fenólicos com forte atividade antioxidante e alta eficiência de extração, C. myrrha continua sendo mais amplamente conhecida. C. gileadensis é uma planta medicinal tradicionalmente usada para tratar feridas, inflamações e infecções bacterianas. Estudos recentes demonstraram seu rico perfil fitoquímico, particularmente em compostos fenólicos e flavonoides, que contribuem para suas propriedades antioxidantes e terapêuticas. Um estudo utilizando extração assistida por micro-ondas (MAE) otimizou a recuperação desses bioativos da casca da planta, identificando 30 constituintes fenólicos pela primeira vez e relatando forte atividade antioxidante in vitro. Essas descobertas destacam o potencial farmacêutico de C. gileadensis e apoiam a exploração mais ampla de espécies de Commiphora como fontes de agentes antimicrobianos e cicatrizantes naturais.

Dada a importância tradicional e farmacológica bem documentada de C. myrrha em aplicações antimicrobianas, antioxidantes e cicatrizantes, este estudo teve como objetivo avaliar de forma abrangente o potencial bioativo de seu extrato etanólico bruto e frações particionadas por solvente. Ênfase especial foi colocada na identificação da fração mais potente e na elucidação de seu mecanismo de ação contra micróbios patogênicos e na reparação de feridas. Diferentemente da maioria dos estudos, que se concentram apenas em extratos brutos ou de óleo essencial de C. myrrha, nosso trabalho fornece a primeira avaliação integrada de frações particionadas por solvente, particularmente a subfração de acetato de etila. Considerando a crescente demanda por alternativas terapêuticas mais seguras, à base de plantas, para lidar com a resistência a antibióticos, distúrbios relacionados ao estresse oxidativo e cicatrização retardada de feridas, este estudo oferece uma investigação oportuna e cientificamente fundamentada. Os achados não apenas validam o uso tradicional de C. myrrha, mas também fornecem novos insights sobre seus constituintes químicos bioativos, particularmente aqueles concentrados na fração de acetato de etila, apoiando seu desenvolvimento adicional como um agente multifuncional para aplicações farmacêuticas e nutracêuticas.

Resultados
Extração da resina de Commiphora myrrha (C. myrrha) e atividade antimicrobiana do extrato bruto obtido usando vários solventes
A atividade antimicrobiana dos extratos obtidos com diferentes solventes foi avaliada contra um painel de cepas microbianas. Antes do teste com extratos de C. myrrha, essas cepas foram submetidas a uma triagem de suscetibilidade antimicrobiana utilizando aproximadamente 15 antibióticos e 6 agentes antifúngicos. O objetivo dessa triagem preliminar foi avaliar o perfil de resistência das cepas aos medicamentos antimicrobianos convencionais. Esses resultados, resumidos nas Figuras Suplementares S1 e S3, serviram como ponto de referência para avaliar a eficácia comparativa dos extratos vegetais. A Tabela 1 mostra que o extrato etanólico exibiu eficácia antimicrobiana superior, com uma zona de inibição de até 20,6 ± 1,24 mm contra Staphylococcus aureus ATCC 29.213, superando o extrato metanólico. Além disso, a fração etanólica apresentou uma zona de inibição de 23,6 ± 1,24 mm contra Candida albicans ATCC 10.231. Em contraste, os extratos de hexano e água destilada não mostraram atividade antimicrobiana contra nenhuma das cepas testadas.
Atividade antimicrobiana de extratos de resina de C. myrrha preparados com diferentes solventes.
Microrganismo testado Zona de inibição (mm) Metanólicobruto Etanólicobruto Frações etanólicas AcOEt DCM Hexano Camada Aquosa Staphylococcus aureusATCC 29.213 16,3 ± 0,94b 20,6 ± 1,24a 17,6 ± 2,05b 6,6 ± 0,47d 11,0 ± 0,81c 13 ± 0,00c Klebsiella pneumoniaeATCC 700.603 17,6 ± 0,47bc 18,3 ± 2,35b 23 ± 1,63a 11 ± 3,26d 10 ± 3,26d 17,6 ± 2,05bc Pseudomonas aeruginosaATCC 27.853 14,3 ± 0,94c 17,0 ± 1,63b 21,6 ± 1,69a 9,0 ± 2,16d 11 ± 0,81cd 15,3 ± 0,47bc Candida albicansATCC 10.231 19,3 ± 0,47b 23,6 ± 1,24a 20 ± 0,00b 0,0 ± 0,00c 0,0 ± 0,00c 16,3 ± 1,24b
A tabela inclui dados para os extratos metanólico e etanólico, bem como frações de solvente do extrato etanólico (acetato de etila [AcOEt], diclorometano [DCM], hexano e frações aquosas). Os valores são a média da zona de inibição (mm) ± DP (n = 3). Letras diferentes dentro de cada organismo indicam diferenças estatisticamente significativas entre os solventes de acordo com ANOVA de uma via seguida pelo teste post hoc de Tukey (p < 0,05).
Fracionamento do extrato etanólico de C. myrrha
A fração etanólica, que exibiu as maiores zonas de inibição, foi selecionada para fracionamento adicional para identificar o componente mais ativo. Isso resultou em quatro subfrações: hexano, diclorometano (DCM), acetato de etila e aquosa, todas avaliadas quanto à atividade antimicrobiana. A fração de acetato de etila demonstrou o efeito mais forte, com uma zona de inibição de 23 ± 1,63 mm contra Klebsiella pneumoniae ATCC 700.603, superando tanto o extrato etanólico bruto quanto as outras frações (Tabela 1, Figura Suplementar S2). Contra Candida albicans ATCC 10.231, a fração de acetato de etila produziu uma zona de inibição de 20 ± 0 mm, ligeiramente menor que a do extrato bruto. A fração aquosa apresentou zonas de inibição moderadas contra todas as cepas testadas. Consequentemente, o extrato bruto, a fração etanólica e a fração aquosa foram preservados para trabalhos microbiológicos posteriores.
A concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida/fungicida mínima (CBM/CFM)
A atividade antimicrobiana do extrato etanólico, da fração de acetato de etila e da fração aquosa (incluída devido ao seu efeito antimicrobiano nos testes iniciais) foi avaliada contra um painel de cepas microbianas, determinando suas CIMs e CBM/CFMs. O extrato etanólico apresentou CIMs de 200 mg/mL contra Staphylococcus aureus ATCC 29.213, Klebsiella pneumoniae ATCC 700.603 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27.853, com uma CIM ligeiramente menor de 180 mg/mL contra Candida albicans ATCC 10.231. Em comparação, a fração de acetato de etila mostrou maior eficácia contra K. pneumoniae, P. aeruginosa e C. albicans (CIMs de 180 mg/mL para cada) em comparação ao extrato etanólico bruto. No entanto, S. aureus foi menos suscetível à fração de acetato de etila, exibindo uma CIM mais alta de 230 mg/mL. As CBM do extrato etanólico contra S. aureus, K. pneumoniae, P. aeruginosa e C. albicans foram 204, 204, 232 e 202 mg/mL, respectivamente. A fração de acetato de etila apresentou CBM de 236, 202, 202 e 204 mg/mL contra os mesmos microrganismos (Tabela 2).
Concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida/fungicida mínima (CBM/CFM) de extratos de resina de C. myrrha preparados com diferentes solventes.
Micro-organismo testado CIM (mg/mL) CBM/CFM (mg/mL) Extrato etanólico AcOEt Camada aquosa Extrato etanólico AcOEt Camada aquosa Staphylococcus aureus ATCC 29.213 200 ± 0.03b 230 ± 0.03a 230 ± 0.09a 204 ± 0.0c 236 ± 0.0b 238 ± 0.0a Klebsiella pneumoniae ATCC 700.603 200 ± 0.03a 180 ± 0.05b 200 ± 0.04a 204 ± 0.0a 202 ± 0.0b 204 ± 0.0a Pseudomonas aeruginosa ATCC 27.853 200 ± 0.02a 180 ± 0.04b 200 ± 0.09a 232 ± 0.0b 202 ± 0.0c 234 ± 0.0a Candida albicans ATCC 10.231 180 ± 0.09b 180 ± 0.09b 200 ± 0.08a 202 ± 0.0c 204 ± 0.0b 232 ± 0.0a
A [etoac]abela inclui dados do extrato etanólico, bem como das frações solventes d[etoac]o extrato etanólico (acetato de etila [EtOAc] e frações aquosas). Os valores são apresentados como média ± dp (n = 3). Foram realizadas ANOVAs unidirecionais separadas [etoac] para CIM e CBM/CFM dentro de cada organismo, seguidas pelo teste post hoc de Tukey HSD [etoac]est. Letras diferentes dentro de cada parâmetro indicam diferença estatística entre os [etoac]tratamentos (p < 0,05).
Análises de morfologia celular usando microscópio eletrônico de varredura (MEV)
A microscopia eletrônica de varredura foi utilizada para examinar o efeito da potente fração de acetato de etila da resina de C. myrrha na morfologia celular de Klebsiella pneumoniae ATCC 700,603, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27,853, Staphylococcus aureus ATCC 29,213 e Candida albicans ATCC 10,231 em suas concentrações inibitórias mínimas. O tratamento induziu mudanças morfológicas perceptíveis nas células em comparação com os controles não tratados (Fig. 1, A–H).
Microscópio eletrônico de varredura de microrganismos tratados com fração de acetato de etila de C. myrrha. a: Células não tratadas de K. pneumoniae ATCC 700,603 (7000X); b: Células tratadas de K. pneumoniae ATCC 700,603 mostrando deformação das células (9000X). c: Células não tratadas de P. aeruginosa ATCC 27,853 mostraram células alongadas em forma de bastonete (9000X). d: Células tratadas de P. aeruginosa ATCC 27,853 mostraram alterações morfológicas (20000 e 9000X). e: Células não tratadas de S. aureus ATCC 29,213 eram esféricas (20000X); f: Células tratadas de Staphylococcus aureus ATCC 29,213 (20000X). g: Células não tratadas de C. albicans ATCC 10,231 exibiram morfologia oval típica (9000X). h: Células tratadas de C. albicans ATCC 10,231 com deformação e fissuras (9000X).
A fração de acetato de etila da resina de Commiphora myrrha alterou significativamente a morfologia celular de bactérias Gram-negativas (Klebsiella pneumoniae ATCC 700603 e Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853) e do fungo Candida albicans em suas concentrações inibitórias mínimas, conforme observado por microscopia eletrônica de varredura (Fig. 1b, d e h). Essas alterações incluíram perda da camada de lipopolissacarídeo e deformação superficial em K. pneumoniae, formas celulares irregulares e protuberâncias em P. aeruginosa, e rachaduras e deformação da parede celular em C. albicans. Em contraste, a bactéria Gram-positiva Staphylococcus aureus não apresentou alterações morfológicas significativas após o tratamento (Fig. 1f), consistente com sua menor suscetibilidade ao extrato nos ensaios de zona de inibição. Esses achados sugerem que o extrato da resina de C. myrrha compromete a viabilidade microbiana ao romper a integridade da parede celular e interferir em processos celulares essenciais, particularmente em bactérias Gram-negativas e cepas de Candida. Em bactérias Gram-negativas como K. pneumoniae e P. aeruginosa, as imagens de MEV revelaram deformação da membrana externa e perda de uniformidade estrutural, provavelmente devido a danos na camada de lipopolissacarídeo. Em C. albicans, as células tratadas exibiram rachaduras e colapso superficial, indicando que o extrato pode afetar a biossíntese da parede celular fúngica e a integridade dos polissacarídeos. Essas mudanças morfológicas sugerem que compostos bioativos presentes no extrato interferem na síntese ou estabilidade de componentes estruturais como peptideoglicano, quitina ou glucanos, levando, em última análise, ao comprometimento da função da membrana, vazamento do conteúdo celular e morte microbiana.
Análise por cromatografia gasosa-espectrometria de massas (CG-EM) do extrato de acetato de etila de C. myrrha
A atividade antimicrobiana do extrato de acetato de etila de C. myrrha indica a presença de substâncias inibidoras do crescimento contra os microrganismos testados. A análise por cromatografia gasosa-espectrometria de massas (CG-EM) desta fração identificou 70 compostos, incluindo taninos, esteróis, esteroides, isoprenoides (terpenoides) e vários constituintes bioativos importantes. Entre eles, destacaram-se Benzofuran, 6-ethenyl-4,5,6,7-tetrahydro-3,6-dimethyl-5-isopropenyl, conhecido por suas propriedades antioxidantes; Elemene, um sesquiterpeno com atividade antiproliferativa; diversos terpenos com potencial antifúngico; e Germacra-1(10),7,11-trien-15-oic acid, 8,12-epoxy-6-hydroxy, reconhecido por seus efeitos antioxidantes e antibacterianos.
Compostos adicionais, como gama-lactona, germacreno B e eremofileno, também foram identificados (Tabela Suplementar S1). Notavelmente, Elemene, Germacra, germacreno B e gama-Muuroleno foram detectados exclusivamente na fração de acetato de etila de C. myrrha, enquanto estavam ausentes nas frações de DCM ou aquosa.
Impacto biológico
A atividade de sequestro de radicais DPPH do extrato etanólico bruto da resina de C. myrrha e de suas frações acetato de etila (EtOAc), diclorometano (DCM), hexano e aquosa foi avaliada. Usando o ácido ascórbico como padrão de referência (IC50 0,04 mg/mL), a fração acetato de etila exibiu o maior potencial antioxidante (IC50 0,92 mg/mL), seguida pelo hexano (IC50 1,06 mg/mL), extrato etanólico bruto (IC50 2,5 mg/mL), fração aquosa (IC50 5,63 mg/mL) e fração DCM (IC50 7,76 mg/mL). Esses resultados indicam que a fração DCM exibiu a menor atividade de sequestro, enquanto a fração acetato de etila apresentou a maior atividade de sequestro. Valores de IC50 mais altos indicam menor atividade (Tabela 3).
Atividade antioxidante (% de sequestro de radicais DPPH) do extrato etanólico bruto da resina de C. myrrha e suas frações (acetato de etila (EtOAc), diclorometano (DCM), hexano e camada aquosa).
Fração de C. myrrha % de sequestro de DPPH Extrato etanólico bruto 81,23 ± 0,72b Fração EtOAc 90,75 ± 0,76a Fração hexano 89,40 ± 0,75a Fração camada aquosa 42,48 ± 0,59c Fração DCM 22,36 ± 0,49d
Os valores são apresentados como média ± dp (n = 3). ANOVA de uma via seguida pelo teste post hoc HSD de Tukey foi usada para comparar a atividade antioxidante entre os diferentes extratos. Letras diferentes dentro de cada parâmetro indicam diferença estatística entre os tratamentos (p < 0,05).
Avaliação da citotoxicidade do extrato bruto de C. myrrha
O efeito citotóxico do extrato bruto de C. myrrha em células normais de fibroblastos dérmicos humanos (HSF) foi avaliado usando o ensaio MTT em uma ampla faixa de concentração (1,95 a 1000 µg/mL). Conforme ilustrado na Fig. 2, a viabilidade celular diminuiu de forma dose-dependente com o aumento das concentrações do extrato. Na concentração mais baixa (1,95 µg/mL), foi observada citotoxicidade mínima, com a viabilidade celular permanecendo acima de 90%, indicando boa tolerabilidade em doses baixas. Uma redução moderada na viabilidade foi detectada em concentrações intermediárias (15,6–125 µg/mL), enquanto um declínio acentuado ocorreu em doses mais altas. A concentração mais alta testada (1000 µg/mL) resultou em aproximadamente 97% de inibição da viabilidade celular, refletindo citotoxicidade acentuada. O valor de IC50 calculado foi de 24,53 µg/mL, representando a concentração na qual 50% da viabilidade celular foi inibida. Isso sugere que, embora o extrato exiba efeitos citotóxicos em concentrações mais altas, ele permanece relativamente seguro em níveis mais baixos. Esses achados apoiam o uso do extrato bruto de mirra em concentrações sub-citotóxicas — como 100 µg/mL — para ensaios biológicos adicionais, incluindo estudos de cicatrização de feridas.
Inibição celular do extrato etanólico bruto de C. myrrha que ilustra os valores de IC50 com a linhagem celular de fibroblastos dérmicos humanos.
Ensaio de cicatrização de feridas do extrato bruto de C. myrrha
O potencial de cicatrização de feridas do extrato bruto de mirra (100 µg/mL) foi avaliado por meio do ensaio de arranhão em células de fibroblastos dérmicos humanos (HDF). Após 72 h de incubação, o grupo tratado apresentou 98,4% de fechamento da ferida, significativamente maior que os 70,3% observados no controle não tratado (Fig. 3). A ANOVA de dois fatores revelou efeitos significativos do Tempo, do Tratamento e de sua interação sobre a porcentagem de fechamento da ferida (p < 0,001). O teste post hoc de Tukey confirmou um aumento dependente do tempo no fechamento da ferida em ambos os grupos, com o grupo tratado exibindo fechamento significativamente maior que o controle em 48 e 72 h (Fig. 4). Esses achados demonstram que o extrato bruto de mirra aumenta significativamente a migração de células HDF e promove a cicatrização de feridas na concentração testada.
Fechamento de ferida por arranhão em células de fibroblastos dérmicos humanos (HDF) sob tratamento controle e com extrato etanólico bruto de Commiphora myrrha. Imagens representativas em 0 h e 48 h mostrando: (a) controle em 0 h, (b) tratado em 0 h, (c) controle após 48 h e (d) tratado após 48 h. As imagens foram capturadas usando microscópio óptico com aumento de 100×.
Análise quantitativa do fechamento de ferida por arranhão em células de fibroblastos dérmicos humanos (HDF) tratadas com extrato etanólico bruto de Commiphora myrrha. O gráfico de barras mostra a porcentagem de fechamento da ferida em diferentes pontos de tempo (0 h, 24 h, 48 h, 72 h) nos grupos controle e tratado. Os dados são apresentados como médias ± desvio padrão (DP), n = 3. Os agrupamentos estatísticos são indicados por letras (HSD de Tukey, p < 0,05).
A resina de mirra tem sido usada há séculos na medicina tradicional chinesa e indiana, frequentemente em conjunto com o olíbano, para controlar a dor e a inflamação relacionadas a traumas, artrite e fraturas. Também é comumente empregada em aplicações dermatológicas, demonstrando eficácia no tratamento de úlceras e feridas na pele. As práticas tradicionais documentaram ainda seu uso no tratamento de tumores, na melhora da circulação sanguínea e na promoção da reparação tecidual.

No presente estudo, a atividade antimicrobiana de extratos de Commiphora myrrha foi avaliada utilizando diversos solventes: metanol, etanol, hexano e água destilada. Entre estes, o extrato etanólico apresentou a atividade antimicrobiana mais potente. Esta observação está alinhada com descobertas anteriores que destacam o etanol como um solvente particularmente eficaz para extrair compostos antimicrobianos bioativos de C. myrrha. Extratos à base de etanol demonstraram fortes efeitos antimicrobianos contra patógenos como Klebsiella pneumoniae ATCC 700.603, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27.853, Staphylococcus aureus ATCC 29.213 e Candida albicans 10231.

A maior eficácia do extrato etanólico pode ser atribuída à capacidade do etanol de dissolver tanto compostos polares quanto apolares, permitindo a extração de um espectro mais amplo de constituintes bioativos. Está documentado que soluções hidroetanólicas (85% de etanol) melhoram a solubilização de compostos bioativos como flavonoides, fenóis e terpenoides em comparação com o etanol absoluto, que pode reduzir a solubilidade de certos compostos hidrofílicos.

Em contraste, os extratos metanólico, hexânico e aquoso apresentaram menor atividade antimicrobiana, provavelmente devido à solubilidade limitada dos compostos ativos. O hexano, sendo apolar, extrai seletivamente substâncias apolares, que podem não incluir toda a gama de agentes antimicrobianos presentes em C. myrrha. A água destilada, um solvente altamente polar, é similarmente restrita em sua capacidade de extrair compostos apolares, resultando em efeitos antimicrobianos comparativamente mais fracos.

Estes resultados destacam o papel crítico da seleção do solvente na otimização da extração de compostos terapêuticos de plantas medicinais.

Além disso, a CIM e a CBM relatadas neste estudo foram relativamente altas em comparação com antibióticos sintéticos padrão. Foi relatado na literatura que extratos vegetais brutos e semipurificados frequentemente exibem valores de CIM mais elevados devido à sua mistura complexa de constituintes bioativos e inativos.
Ao avaliar a eficácia antimicrobiana dos extratos de Commiphora myrrha, é importante contextualizar os valores de concentração inibitória mínima (CIM) observados em relação a parâmetros padronizados. Em nosso estudo, os valores de CIM para o extrato etanólico bruto e sua fração de acetato de etila variaram de 180 a 230 mg/mL, dependendo da cepa microbiana. Embora esses resultados demonstrem atividade antimicrobiana mensurável, eles estão fora das classificações convencionais de eficácia antimicrobiana "alta" (CIM ≤ 10 µg/mL) e "boa" (CIM ≤ 100 µg/mL), conforme definido em uma metanálise recente de triagem antimicrobiana de produtos naturais. Por exemplo, conforme relatado por Qian et al. (2023), 48 dos 120 compostos testados com CIM ≤ 10 µg/mL foram considerados altamente ativos, e os demais com CIM de até 100 µg/mL foram classificados como bons candidatos. Em contraste, os CIMs mais elevados observados para os extratos de C. myrrha podem ser atribuídos ao uso de frações brutas ou semipurificadas, que contêm uma mistura complexa de constituintes ativos e inativos, diluindo o efeito de compostos bioativos individuais. Apesar desses valores de CIM comparativamente altos, o extrato ainda apresentou atividade notável de zona de inibição em ensaios de difusão em disco, sugerindo que certos componentes podem exercer efeitos antimicrobianos superficiais ou que ações sinérgicas contribuem para a atividade observada. Esses achados destacam o potencial das frações de C. myrrha como fonte de agentes bioativos, que podem exigir fracionamento e purificação bioorientados adicionais para isolar compostos individuais com relevância clínica.
Um estudo comparativo foi conduzido sobre a atividade antimicrobiana de extratos aquosos e etanólicos de folhas de Commiphora wightii e Commiphora mukul, preparados por extração Soxhlet. Os extratos foram testados em diferentes concentrações contra Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae. Concentrações mais baixas de ambos os extratos não produziram zonas de inibição significativas; no entanto, em concentrações mais altas, ambas as espécies apresentaram atividade antibacteriana mensurável. O extrato etanólico de C. wightii demonstrou a maior eficácia, com zonas de inibição de 18 mm contra E. coli e 20 mm contra K. pneumoniae. Em contraste, os extratos de C. mukul apresentaram zonas máximas de 6 mm e 15 mm, respectivamente. Esses achados sugerem que C. wightii exibe maior potencial antimicrobiano do que C. mukul, particularmente em sua forma etanólica, e destacam a variabilidade interespecífica dentro do gênero Commiphora.
Interessantemente, os extratos de C. myrrha foram mais eficazes contra bactérias Gram-negativas do que contra cepas Gram-positivas. Essa suscetibilidade reduzida pode ser atribuída às características estruturais únicas do Staphylococcus aureus. Como bactéria Gram-positiva, S. aureus possui uma camada mais espessa de peptidoglicano, que confere proteção mecânica robusta e rigidez estrutural. Diferentemente das bactérias Gram-negativas, ela não possui uma membrana externa, que em muitos casos atua como uma barreira seletiva de permeabilidade — particularmente a compostos antimicrobianos hidrofóbicos ou anfipáticos. No entanto, a matriz espessa e altamente reticulada de peptidoglicano nas bactérias Gram-positivas também pode atuar como uma barreira física, reduzindo a difusão e a penetração de certas moléculas bioativas derivadas de plantas. Além disso, as paredes celulares de Gram-positivas geralmente contêm ácidos teicoicos e outros polímeros de superfície que podem se ligar ou sequestrar agentes antimicrobianos, limitando ainda mais seu acesso a alvos intracelulares. Essas características podem explicar por que S. aureus apresentou perturbação morfológica menos pronunciada e valores de CIM mais elevados em comparação com as cepas Gram-negativas testadas neste estudo. Isso está alinhado com o fato de que o envelope celular bacteriano, juntamente com seus componentes estruturais, representa um alvo pouco explorado para o desenvolvimento de novos agentes antibacterianos. Visar o envelope celular oferece uma vantagem estratégica, pois pode contornar ou minimizar o impacto de mecanismos de resistência antimicrobiana (RAM) bem caracterizados, como bombas de efluxo, degradação enzimática ou modificação de alvo. Ao romper estruturas essenciais do envelope — como a camada de peptidoglicano, a integridade da membrana ou as vias de biossíntese — novos terapêuticos podem exercer efeitos bactericidas por meio de modos de ação menos suscetíveis às vias de resistência existentes. As infecções fúngicas mais graves são causadas por Candida albicans, responsável por aproximadamente 90% dos casos documentados. As propriedades antifúngicas apresentadas pelos extratos de C. myrrha estão de acordo com pesquisas anteriores, que associam sua eficácia antimicrobiana à presença de óleos voláteis, terpenoides, compostos fenólicos, flavonoides e saponinas. Sabe-se que essas substâncias comprometem a estrutura da parede celular fúngica e a integridade mitocondrial, interrompendo em última instância o metabolismo energético. Para isolar ainda mais os compostos ativos, o extrato etanólico foi submetido a fracionamento utilizando hexano, diclorometano (DCM) e acetato de etila. Entre estes, a fração de acetato de etila apresentou maior atividade antimicrobiana contra K. pneumoniae e P. aeruginosa do que o extrato etanólico bruto. Esse achado sugere a presença de compostos bioativos específicos na fração de acetato de etila, particularmente eficazes contra bactérias Gram-negativas. Sabe-se que o acetato de etila extrai diversos compostos bioativos, como glicosídeos, ácidos fenólicos, flavonoides, aminoácidos, taninos e compostos semipolares, como sesquiterpenoides (ex.: furanodieno, curzereno) e triterpenoides.
Por outro lado, o extrato etanólico foi mais eficaz contra S. aureus e C. albicans em comparação com a fração de acetato de etila. Isso pode ser devido à gama mais ampla de compostos antimicrobianos no extrato etanólico, incluindo terpenoides, ácidos fenólicos, flavonoides, glicosídeos, ácidos graxos e taninos. Os terpenoides são particularmente notáveis devido às suas propriedades antibacterianas, antifúngicas e antivirais de amplo espectro. Eles rompem as membranas microbianas, causando vazamento celular e morte, além de apresentar efeitos antioxidantes que mitigam a inflamação e o estresse oxidativo. Os ácidos fenólicos inibem o crescimento microbiano ao interferir na atividade enzimática, na replicação do DNA e na função da membrana. Os flavonoides prejudicam os sistemas enzimáticos microbianos, previnem a formação de biofilmes e comprometem a integridade da membrana, ao mesmo tempo que protegem os tecidos do hospedeiro por meio de sua atividade antioxidante. Os taninos exercem efeitos antimicrobianos ao se ligarem a proteínas e enzimas microbianas, inibindo a formação de biofilmes e reduzindo o estresse oxidativo.
O potencial antioxidante dos extratos de C. myrrha e suas frações foi avaliado utilizando o ensaio DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazil). A fração DCM apresentou o maior valor de DPPH, indicando a menor atividade de sequestro de radicais, enquanto a fração de acetato de etila mostrou um valor de DPPH significativamente menor, refletindo uma atividade antioxidante mais forte. Esse padrão está alinhado com pesquisas anteriores, que sugerem que solventes menos polares, como o DCM, extraem menos compostos antioxidantes, enquanto o acetato de etila extrai eficazmente ácidos fenólicos e flavonoides conhecidos por suas robustas propriedades antioxidantes. A atividade antioxidante elevada na fração de acetato de etila provavelmente se deve à presença de sesquiterpenoides, diterpenos, triterpenos e esteróis. Esses compostos atuam como doadores de elétrons, neutralizando radicais livres e interrompendo as reações em cadeia dos radicais, desempenhando assim um papel vital na proteção das células contra danos oxidativos.
A análise por cromatografia gasosa-espectrometria de massas (CG-EM) confirmou ainda a diversidade química do extrato etanólico e de suas frações. A fração de acetato de etila, em particular, era rica em sesquiterpenos e flavonoides, compostos que são fundamentais na atividade antimicrobiana do extrato. Esses compostos bioativos interferem na integridade da membrana microbiana, na função enzimática, no desenvolvimento de biofilmes e na replicação genética, contribuindo para a eficácia antimicrobiana de amplo espectro de C. myrrha. Essas descobertas são consistentes com estudos anteriores que identificam sesquiterpenos e compostos fenólicos como componentes bioativos chave em espécies de Commiphora. A análise de CG fornece, portanto, insights valiosos sobre a base química subjacente à atividade biológica das várias frações.
Entre os compostos identificados na fração de acetato de etila de Commiphora myrrha, vários sesquiterpenos bioativos — incluindo Elemento, Germacreno B e γ-Muuroleno — destacam-se por suas atividades farmacológicas bem documentadas. O Elemento, um sesquiterpeno bicíclico, foi extensivamente estudado por suas propriedades anticancerígenas de amplo espectro, antimicrobianas e anti-inflamatórias, sendo até mesmo usado clinicamente em alguns países como parte da terapia adjuvante contra o câncer. O Germacreno B apresenta forte atividade antibacteriana e antifúngica, e sua estrutura lipofílica permite que penetre nas membranas microbianas, contribuindo para a ruptura da parede celular. O γ-Muuroleno, outro hidrocarboneto sesquiterpênico abundante, tem sido relatado por possuir propriedades anti-inflamatórias e antimicrobianas, potencialmente melhorando tanto o controle de infecções quanto a reparação tecidual. A presença desses compostos sustenta as atividades antimicrobiana, antioxidante e cicatrizante observadas no extrato de C. myrrha e ressalta seu potencial como um agente terapêutico natural multifuncional.
Além dos efeitos antimicrobianos e antioxidantes, a citotoxicidade e o potencial de cicatrização de feridas dos extratos de C. myrrha foram avaliados. O extrato etanólico demonstrou propriedades não citotóxicas. Para avaliar seu potencial de cicatrização de feridas, um ensaio de arranhão celular foi realizado em culturas de fibroblastos. Os resultados mostraram que o extrato promove a migração de fibroblastos, uma etapa crítica na cicatrização de feridas. O valor de IC50 de 24,53 µg/mL reflete a concentração na qual ocorre 50% de inibição da viabilidade celular, o ensaio de cicatrização de feridas foi conduzido em uma concentração sub-citotóxica (10 µg/mL, ou seja, 1/10 do IC50). Nesse nível, o extrato promoveu a migração de fibroblastos e o fechamento da ferida sem citotoxicidade significativa, indicando um efeito de dose-resposta bifásico (hormético) comumente observado em produtos naturais. Essa atividade dupla sugere que o extrato pode apoiar a regeneração tecidual em doses otimizadas e seguras. Esse efeito é corroborado por estudos anteriores que indicam que C. myrrha aumenta a proliferação de queratinócitos e fibroblastos, a síntese de colágeno, a angiogênese e a regeneração tecidual. Essas propriedades de cicatrização de feridas são amplamente atribuídas a terpenoides bioativos e ácidos fenólicos, que modulam citocinas inflamatórias e fatores de crescimento enquanto reduzem o estresse oxidativo.

Esses resultados são altamente relevantes para a atividade DPPH dos extratos de mirra, a capacidade antioxidante é altamente relevante para a cicatrização de feridas, uma vez que o estresse oxidativo prejudica o reparo tecidual e promove inflamação. A forte atividade de sequestro de radicais observada na fração de acetato de etila apoia seu potencial para mitigar danos oxidativos nos locais das feridas, complementando assim seu efeito regenerativo. O ensaio DPPH fornece, portanto, uma base mecanicista para o potencial de cicatrização de feridas do extrato.

Estudos recentes sobre Commiphora gileadensis demonstraram seu rico perfil fitoquímico, particularmente em compostos fenólicos e flavonoides, que contribuem para suas propriedades antioxidantes e terapêuticas. Um estudo utilizando extração assistida por micro-ondas (MAE) otimizou a recuperação desses bioativos da casca da planta, identificando 30 constituintes fenólicos pela primeira vez e relatando forte atividade antioxidante in vitro. Essas descobertas destacam o potencial farmacêutico de C. gileadensis e apoiam a exploração mais ampla de espécies de Commiphora como fontes de agentes antimicrobianos e cicatrizantes naturais.
O processo de cicatrização de feridas é um complexo mecanismo biológico que pode ser severamente comprometido pela colonização microbiana e infecção. Os organismos selecionados em nosso estudo — Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae e Candida albicans — são patógenos clinicamente relevantes frequentemente isolados de feridas crônicas, queimaduras, úlceras diabéticas e infecções de sítio cirúrgico. Sabe-se que esses microrganismos retardam a cicatrização por meio da formação de biofilme, inflamação prolongada e degradação tecidual. Por exemplo, S. aureus é uma das principais causas de infecções de pele e tecidos moles, produzindo toxinas que danificam o tecido hospedeiro e evitam a eliminação imunológica. Já P. aeruginosa é comumente associada a feridas de queimadura e apresenta forte capacidade de formação de biofilme, o que contribui para infecção crônica e resistência a antibióticos. K. pneumoniae é cada vez mais relatada em infecções de feridas nosocomiais, especialmente em pacientes imunocomprometidos, e frequentemente apresenta resistência a múltiplos medicamentos. Além disso, C. albicans, um patógeno fúngico, coloniza frequentemente ambientes úmidos de feridas e pode prejudicar a re-epitelização, especialmente em pacientes diabéticos e imunocomprometidos. Portanto, a justificativa deste estudo, dado o aumento da incidência de infecções de feridas polimicrobianas e resistentes a medicamentos, há uma necessidade crescente de agentes tópicos com propriedades antimicrobianas e cicatrizantes de amplo espectro. Nossos achados sugerem que o extrato de C. myrrha, particularmente sua fração acetato de etila, exibe atividade contra patógenos bacterianos e fúngicos de feridas e demonstra efeitos antioxidantes e pró-regenerativos adicionais, apoiando seu uso potencial como um agente natural para cuidados com feridas. Esse contexto mais amplo reforça a justificativa para a seleção desses patógenos e apoia uma investigação mais aprofundada do extrato de C. myrrha no desenvolvimento de formulações tópicas para feridas infectadas ou de alto risco.

Em conclusão, Commiphora myrrha exibe notáveis propriedades antimicrobianas, antioxidantes e cicatrizantes, atribuídas a uma diversificada gama de compostos bioativos. Etanol e acetato de etila são solventes particularmente eficazes para a extração desses constituintes, destacando a importância dos métodos de extração na maximização do potencial terapêutico. As frações obtidas foram analisadas por GC-MS e avaliadas quanto às atividades antimicrobiana, antioxidante e cicatrizante. Até onde sabemos, este é o primeiro estudo a associar a fração acetato de etila de C. myrrha tanto à eficácia antimicrobiana quanto ao fechamento de feridas mediado por fibroblastos, apoiado por imagens de MEV e avaliação de citotoxicidade. Esses achados reforçam os usos tradicionais de C. myrrha e apoiam sua potencial integração em aplicações médicas e farmacêuticas modernas. Esses resultados promissores destacam o potencial da resina de C. myrrha para aplicações além do uso tradicional, apoiando seu desenvolvimento em alimentos funcionais, como cápsulas ou comprimidos, e outras aplicações nutracêuticas.
Coleta de Commiphora myrrha e preparação do extrato bruto
Amostras de mirra foram obtidas de mercados tradicionais de ervas em Alexandria, Egito. Pesquisas experimentais e estudos de campo em plantas (incluindo o uso de material vegetal) neste estudo cumpriram as diretrizes e legislações institucionais, nacionais e internacionais relevantes. Nenhuma coleta selvagem foi realizada e nenhuma espécie ameaçada ou protegida foi utilizada. Como o material foi obtido comercialmente, não foi necessária aprovação ética formal. A resina de Commiphora myrrha (100 g) foi lavada com água destilada e seca ao ar a 60 °C durante a noite antes da extração com etanol 85%, metanol 100%, hexano 100% ou água destilada. O pó dessecado foi imerso em cada solvente (etanol, metanol, hexano ou água destilada) a 24 °C por 48 h. Os filtrados foram concentrados por evaporação rotativa e secos a 24 °C após filtração em papel Whatman nº 1. Os extratos foram dissolvidos em dimetilsulfóxido (DMSO) a 2% para estudos posteriores.
Atividade antimicrobiana
Cepas microbianas
Isolados microbianos foram fornecidos por hospitais clínicos em Alexandria, e sua suscetibilidade antimicrobiana a um painel de antibióticos e compostos antifúngicos foi determinada usando o sistema VITEK 2 em Mabaret Alasafra, Alexandria, conforme relatado na Figura Suplementar (S3). Com base em seus perfis de resistência a antibióticos, foram selecionadas referências ATCC padrão para estudos posteriores: Staphylococcus aureus ATCC 29.213, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27.853, Klebsiella pneumoniae ATCC 700.603 e Candida albicans ATCC 10.231.
Atividade antimicrobiana do extrato obtido com diferentes solventes
A atividade antimicrobiana de vários extratos de resina de Commiphora myrrha (etanólico, metanólico, hexânico e aquoso) foi avaliada usando o ensaio de difusão em disco de Kirby-Bauer, de acordo com protocolos padrão. Esse método foi empregado para avaliar o potencial inibitório do crescimento dos extratos contra cepas bacterianas e fúngicas selecionadas. As cepas bacterianas utilizadas no ensaio incluíram Staphylococcus aureus ATCC 29.213, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27.853 e Klebsiella pneumoniae ATCC 700.603, enquanto a cepa fúngica foi Candida albicans ATCC 10.231. Todas as cepas foram obtidas de culturas previamente preservadas e repicadas em placas de ágar nutriente apropriadas (Ágar Mueller Hinton para bactérias, Ágar Sabouraud Dextrose para C. albicans) e incubadas por 18–24 h antes do teste. Colônias de culturas frescas foram suspensas em solução salina estéril a 0,85% e ajustadas para o padrão de turbidez 0,5 McFarland, equivalente a aproximadamente 1,5 × 10⁸ UFC/mL para cepas bacterianas e 1,0 × 10⁶ UFC/mL para leveduras.
Discos de papel filtro estéreis foram impregnados com 100 µL de cada solução de extrato a uma concentração de 250 mg/mL, e então secos à temperatura ambiente em ambiente estéril para garantir absorção uniforme. Dimetilsulfóxido (2% DMSO) foi usado para dissolver os extratos e serviu como controle negativo. Em um experimento separado, discos de antibiótico padrão foram usados como controles positivos para fins de referência (resultados complementares). As placas foram incubadas a 30–37 °C por 18–24 h para bactérias, e a 30 °C por 24–48 h para Candida albicans. Após a incubação, o diâmetro das zonas de inibição ao redor de cada disco foi medido em milímetros (mm) usando um paquímetro digital. A atividade antimicrobiana de cada extrato foi determinada pelo tamanho da zona de inibição. Todos os experimentos foram conduzidos em triplicata, e os resultados foram relatados como média ± desvio padrão (DP).

Com base nos dados da zona de inibição, os extratos mais ativos (particularmente o extrato etanólico) foram posteriormente selecionados para avaliação microbiológica detalhada, incluindo fracionamento, determinação da CIM/CBM/CFM e análise de morfologia celular. O uso de cepas ATCC com relevância clínica garantiu reprodutibilidade e comparabilidade com a literatura existente.

Fracionamento e partição do extrato etanólico bruto de C. myrrha

O extrato etanólico com a maior atividade antimicrobiana foi submetido a fracionamento adicional pela adição de acetona, um solvente polar, misturando e deixando em repouso por uma hora, seguido de filtração em papel filtro, processo repetido duas vezes. O precipitado resultante foi coletado, e o filtrado foi evaporado sob pressão reduzida a 40 °C. O resíduo foi então redissolvido em metanol a 10% e particionado com hexano (solvente apolar) usando um funil de separação, resultando na formação de duas camadas distintas, uma fração hexânica (A) e uma fase aquosa (B). A fração hexânica foi separada, lavada com água destilada e evaporada sob pressão reduzida a 40 °C. A fase aquosa foi então particionada com diclorometano (DCM, solvente ligeiramente polar) para produzir uma fração DCM (A) e uma fase aquosa (B). A fração DCM foi coletada, lavada com água destilada e evaporada sob pressão reduzida a 40 °C. A fase aquosa foi ainda particionada com acetato de etila, um solvente moderadamente polar, produzindo duas camadas: (A) a fração de acetato de etila e (B) uma fase aquosa. A fração de acetato de etila foi separada, lavada com água destilada e evaporada sob pressão reduzida. Finalmente, a fase aquosa restante foi evaporada a 40 °C para remover solventes residuais e concentrar o extrato.

Ensaio de atividade antimicrobiana das frações do extrato etanólico
A técnica de difusão em disco foi utilizada para determinar a eficácia antimicrobiana das frações resultantes do fracionamento do extrato de resina de C. myrrha. Placas de ágar Muller Hinton/Sabouraud Dextrose foram estriadas com cada cepa bacteriana e de Candida, discos de papel filtro estéreis foram impregnados com 100 µl da solução estoque a 250 mg/mL de cada um dos seguintes: resina bruta de mirra, fração de acetato de etila, fração de diclorometano (DCM), fração de hexano e fração da camada aquosa. Água destilada foi usada como controle negativo. As placas foram incubadas a 30–37 °C por 18–24 h de acordo com os fatores de crescimento de cada cepa e a 30 °C por 24–48 h para Candida albicans. Os diâmetros dos halos de inibição foram medidos, e todos os testes foram realizados em triplicata. Os desvios padrão foram calculados, e a fração mais potente foi utilizada para experimentos posteriores.

Avaliação da concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida/fungicida mínima (CBM/CFM) do composto ativo nos extratos de mirra

A concentração inibitória mínima (CIM) do composto ativo nos extratos foi determinada usando a técnica de microdiluição em caldo. Resumidamente, soluções estoque do extrato bruto de mirra, da fração de acetato de etila e da fração aquosa foram preparadas em várias concentrações (250, 230, 200 e 180 mg/mL) e adicionadas a 100 µL de inóculo microbiano (10⁸ UFC/mL). As misturas foram incubadas por 24 h a 37 °C. A concentração bactericida/fungicida mínima (CBM/CFM) foi determinada transferindo 100 µL de caldo dos tubos da CIM que apresentaram absorbância zero ou próxima de zero para placas de ágar fresco. A CBM/CFM foi confirmada por subcultura das diluições testadas em meio sólido fresco e incubadas por 24–48 h. A menor diluição que não apresentou crescimento bacteriano/fúngico em meio sólido foi registrada como CBM/CFM.

Análises de morfologia celular usando microscópio eletrônico de varredura (MEV)

A morfologia celular dos microrganismos tratados com a fração potente de C. myrrha foi examinada usando MEV. Após 24 horas de incubação na CIM da fração de acetato de etila, os tubos foram centrifugados para remover o sobrenadante. Os pellets celulares foram então fixados, e as amostras foram subsequentemente desidratadas usando álcool. As amostras foram metalizadas com ouro e examinadas com microscopia eletrônica de varredura (JEOL JSM-IT200). Todos os procedimentos foram realizados na Unidade de Microscópio Eletrônico de Varredura, Faculdade de Ciências, Universidade de Alexandria, Egito.

Cromatografia gasosa-espectrometria de massas (CG/EM)

A CG/EM do extrato de resina de Commiphora myrrha (fração de acetato de etila e fração de DCM) foi realizada utilizando um Shimadzu GCMS QP 2010 Ultra equipado com coluna TRB-WAX e colunas TRB-5MS.

Impacto biológico
O ensaio de sequestro do radical 1,1-difenil-2-picril-hidrazil (DPPH) é comumente utilizado para a quantificação precisa da atividade antioxidante dos compostos. Esta técnica baseia-se na capacidade do DPPH de descolorir na presença de antioxidantes. O ensaio com o radical livre DPPH foi realizado utilizando um método previamente estabelecido. Em seguida, 100 µL dos compostos teste em concentrações que variam de 0,2 a 25,6 mg/mL foram misturados com 0,1 mL da solução de DPPH (0,2 mg/mL em etanol). A absorbância foi medida a 515 nm após incubação por 30 minutos à temperatura ambiente. O ácido ascórbico (Vitamina C), um padrão bem conhecido com forte atividade antioxidante, foi utilizado como controle positivo. A porcentagem da atividade de sequestro do radical DPPH foi calculada de acordo com a seguinte fórmula:
onde: Ac = absorbância do controle (sem amostra), As = valor da absorbância do padrão ou composto testado. A capacidade antioxidante da amostra foi expressa como valor de IC50.
A citotoxicidade (MTT) do extrato bruto de C. myrrha
A viabilidade celular foi avaliada utilizando o ensaio de brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT). A linhagem celular de fibroblastos dérmicos humanos (HDF) foi obtida da City of Scientific Research and Technological Applications (Alexandria, Egito). 200 µL de suspensão de células HDF contendo 3000 células/poço foram plaqueados em placas de 96 poços e incubados por 24 h. Após a incubação, 100 µL de diferentes concentrações do extrato bruto de C. myrrha em meio RPMI sem soro fetal bovino foram adicionados aos poços, e as placas foram re-incubadas por mais 24 h em incubadora de CO2 (37 °C, 5% CO2 e 90% de umidade relativa). Após 24 h de incubação, 20 µL de solução de MTT foram adicionados a cada poço, e as placas foram incubadas por 3 h na incubadora de CO2 para permitir a reação do MTT. Em seguida, as placas foram centrifugadas a 1650 rpm por 10 min, e o meio foi cuidadosamente removido. Os cristais de formazan resultantes (subproduto do MTT) foram ressuspensos em 100 µL de DMSO, e a absorbância foi medida a 570 nm utilizando um espectrofotômetro Optima para determinar as doses seguras que apresentam 100% de viabilidade celular.
AT = absorbância das células tratadas com diferentes concentrações do extrato bruto de C. myrrha. AC = absorbância do controle de células não tratadas apenas com meio de cultura. Ab = absorbância das células tratadas com o veículo do extrato bruto de C. myrrha (RPMI sem soro fetal bovino).
O ensaio de citotoxicidade do composto foi expresso como IC50 e foi calculado pelo software Graphpad Instat utilizando a porcentagem de viabilidade calculada a partir das diluições seriadas de cada extrato bruto de C. myrrha.
Cicatrização de feridas do extrato bruto de C. myrrha
O ensaio de cicatrização de feridas foi realizado na linhagem celular de fibroblastos dérmicos humanos (HDF), obtida da City of Scientific Research and Technological Applications (Alexandria, Egito). As células HDF foram plaqueadas e incubadas por 24 h em uma incubadora de CO2 (37 °C, 5% CO2 e 90% de umidade relativa). No dia seguinte, o meio de cultura foi substituído por MEM sem soro para lavar a monocamada celular, e então arranhões horizontais foram introduzidos na monocamada confluente. A placa foi lavada completamente com solução salina tamponada com fosfato (PBS). Os poços de controle receberam meio fresco, enquanto os poços de teste foram tratados com meio fresco contendo extrato bruto de C. myrrha a 1/10 do valor de IC50. A placa foi então incubada por mais 72 h. As células em migração para a zona desnudada foram monitoradas e fotografadas usando microscopia de contraste de fase. O tamanho relativo da ferida foi quantificado usando o software ImageJ versão 1.49o.

Análise estatística
Uma análise de variância (ANOVA) unidirecional foi realizada para avaliar diferenças significativas nos valores médios da zona de inibição, concentração inibitória mínima (CIM) e concentração bactericida/fungicida mínima (CBM/CFM) entre diferentes extratos de solventes. A análise foi realizada separadamente para cada microrganismo testado e para cada parâmetro (zona de inibição, CIM e CBM/CFM) para avaliar os efeitos dos solventes: bruto metanólico, bruto etanólico, frações etanólicas (acetato de etila [AcOEt], diclorometano [DCM], hexano e camada aquosa).

ANOVA unidirecional também foi utilizada para avaliar diferenças na atividade de sequestro de radicais DPPH (% de inibição) no mesmo conjunto de extratos.

Para o ensaio de cicatrização de feridas, uma ANOVA bidirecional foi aplicada para analisar os efeitos do tratamento (controle vs. extrato etanólico bruto de Commiphora myrrha) e do tempo (24 h, 48 h, 72 h) no percentual de fechamento da ferida em células de fibroblastos dérmicos humanos (HDF). O ponto de tempo de 0 h foi usado como referência para imagens, mas foi excluído das comparações estatísticas. Quando diferenças significativas foram detectadas (p < 0,05), o teste post hoc de Tukey's Honestly Significant Difference (HSD) foi usado para comparações pareadas. Grupos com médias significativamente diferentes foram rotulados com letras distintas nos gráficos.

Todos os dados são apresentados como média ± desvio padrão (DP) de três réplicas biológicas independentes (n = 3). As análises estatísticas foram conduzidas no software R (versão 2025.05.0 Build 496) com um nível de significância de α = 0,05.

Informações Suplementares
Abaixo está o link para o material suplementar eletrônico.

Nota do editor
A Springer Nature permanece neutra em relação a reivindicações jurisdicionais em mapas publicados e afiliações institucionais.

Contribuições dos autores
“Nevine Ghanem: Conceituação, Metodologia, Supervisão, redação do rascunho original, análise de dados e Revisão. Heba Khairy: Conceituação, Metodologia, Investigação, Supervisão, redação do rascunho original, análise de dados, Revisão. Rowena Mohamed Khalil: Conceituação, Metodologia, redação do rascunho original”.
Financiamento
Financiamento de acesso aberto fornecido pela Autoridade de Financiamento de Ciência, Tecnologia e Inovação (STDF) em cooperação com o Banco de Conhecimento Egípcio (EKB). “Os autores declaram que nenhum fundo, bolsa ou outro apoio foi recebido durante a preparação deste manuscrito”.
Disponibilidade de dados
Nenhum conjunto de dados foi gerado ou analisado durante o presente estudo.
Interesses concorrentes
Os autores declaram não ter interesses concorrentes.
Referências
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Biossíntese verde de nanopartícula de prata usando extrato de Commiphora myrrha e avaliação de sua atividade antimicrobiana e viabilidade de células de câncer de cólon
Avaliação das propriedades antimicrobianas e anticancerígenas do extrato de resina de mirra e sua aplicação em bebidas de cacau
Uma avaliação da atividade antimicrobiana das resinas de oleo-goma de Commiphora myrrha Nees (Engl.) da Arábia Saudita
Composição química do óleo essencial e atividades antioxidante e antimicrobiana in vitro de extratos brutos da resina de Commiphora myrrha
Commiphora myrrha: uma atualização fitoquímica e farmacológica
Efeitos citotóxicos e anti-inflamatórios in vitro do óleo de mirra em fibroblastos gengivais humanos e células epiteliais
Efeitos da resina e do óleo essencial de Commiphora myrrha engl. na cicatrização de feridas
Potencial de cicatrização de feridas por excisão e incisão do extrato de folhas de Saba Florida (Benth) em rattus novergicus
Extração ecológica e eficiente de compostos fenólicos da casca de Commiphora gileadensis usando extração assistida por micro-ondas
X. O gênero Commiphora: uma revisão de seus usos tradicionais, fitoquímica e farmacologia
Biggs, I., Sirdaarta, J., White, A. & Cock, I. E. Análise GC-MS de extratos de Oleo-Resina de Commiphora molmol que inibem o crescimento de gatilhos bacterianos de doenças autoimunes selecionadas. Pharmacogn. J.8, 3 (2016).
Extração assistida por ultrassom para melhorar a recuperação de compostos fenólicos bioativos de folhas de Commiphora gileadensis
Desenvolvimentos na extração de óleo de microalgas
Inibição do crescimento de patógenos bacterianos e fúngicos altamente resistentes por um produto natural
Mecanismos inibitórios de antimicrobianos promissores de subprodutos vegetais: uma revisão
Atividade antibacteriana comparativa de extratos aquosos e etanólicos de commiphora Wightii e commiphora mukul
Pasquina-Lemonche, L. et al. A arquitetura da parede celular bacteriana Gram-positiva. Nature582 (7811), 294–297 (2020).
Suscetibilidade de Candida albicans resistente ao fluconazol ao óleo essencial de tomilho
Valor nutritivo, constituintes polifenólicos e prevenção de microrganismos patogênicos por diferentes extratos de resina de Commiphora myrrha
Nutracêuticos vegetais como agentes antimicrobianos na conservação de alimentos: terpenoides, polifenóis e tióis
Avaliação da variabilidade do conteúdo fenólico juntamente com o potencial antioxidante, antimicrobiano e citotóxico de plantas medicinais tradicionais selecionadas da Índia
Evans, S. M. & Cowan, M. M. Produtos vegetais como agentes antimicrobianos. In Cosmetic and Drug Microbiology 227–254 (CRC, 2016).
Aplicações tradicionais de extratos ricos em taninos apoiadas por dados científicos: composição química, biodisponibilidade e bioacessibilidade
Atividade antioxidante de resinas naturais e triterpenos bioativos em substratos oleosos
Extratos de Commiphora myrrha (Nees) engl.: avaliação da atividade antioxidante e antiproliferativa e sua capacidade de reduzir o crescimento microbiano em salada fresca cortada
Potencial terapêutico multifuncional de fitocomplexos e extratos naturais para propriedades antimicrobianas
Vendo o invisível da combinação de duas resinas naturais, olíbano e mirra: mudanças nos constituintes químicos e atividades farmacológicas
Análise dos constituintes inorgânicos e orgânicos da resina de mirra por GC-MS e ICP-MS: ênfase nos benefícios medicinais
Isolamento e caracterização de vários sesquiterpenos aromáticos de Commiphora myrrha
Perfil químico por cromatografia gasosa-espectrometria de massas de extratos de resina de Commiphora myrrha e avaliação das atividades larvicida, antioxidante e citotóxica
O papel dos metabólitos da mirra no câncer, inflamação e cicatrização de feridas: perspectivas para uma terapia medicamentosa multi-alvo
Avaliação dos efeitos da aplicação exógena local de uma mistura de óleo de mirra e sálvia na cicatrização de feridas incisionais na pele da face (estudo histológico, histoquímico e histomorfométrico em coelhos)
Cicatrização de ferida de episiotomia por Commiphora myrrha (Nees) engl. e Boswellia carteri birdw. em mulheres primíparas: um ensaio clínico randomizado controlado
Fabricação e caracterização de um curativo hidrocoloide de mirra para cicatrização de feridas dérmicas
Furanosesquiterpenoides anti-inflamatórios, antioxidantes e antifúngicos isolados da resina de Commiphora erythraea (Ehrenb.) engl.
Estudo do extrato de Commiphora myrrha (Nees) engl. var. molmol e seu antibiograma contra alguns patógenos microbianos
Investigação teórica sobre métodos de teste de suscetibilidade antimicrobiana
Fracionamentos solvente-solvente do extrato de folhas de Combretum erythrophyllum (Burch.): estudos de seus potenciais antibacteriano, antifúngico, antioxidante e citotóxico
Alvo terapêutico duplo de infecção pulmonar e carcinoma usando nanomedicina verde à base de lactoferrina
Avaliação da sensibilidade do 'Wiley Registry of Tandem Mass Spectral Data, MSforID' com dados de MS/MS da 'NIST/NIH/EPA Mass Spectral Library'
NIST Chemistry WebBook, NIST Standard Reference Database Number 69
Uma avaliação comparativa das propriedades antioxidantes, teor de fenóis totais de einkorn, trigo, cevada e seus maltes
Atividades anticancerígenas, antioxidantes e antibacterianas de subfrações bioativas de baixo peso molecular isoladas de culturas do fungo degradador de madeira Cerrena unicolor
Ensaio MTT para avaliar o potencial citotóxico de um fármaco
Guan, J. L. Cell Migration: Developmental Methods and Protocols (Vol. 294) (Springer Science & Business Media, 2008).