pmid: "37762576"
title: "Avaliação In Vitro de Nanopartículas de Ouro na Atividade da Telomerase e no Comprimento dos Telômeros em Fibroblastos Humanos"
authors: "Han X, Hirschel A, Tsapekos M, Perez D, Vollmer D"
journal: "International journal of molecular sciences"
pubdate: "2023 Sep 19"
doi: "10.3390/ijms241814273"
source: "PMC Full Text"
Avaliação In Vitro de Nanopartículas de Ouro na Atividade da Telomerase e no Comprimento dos Telômeros em Fibroblastos Humanos
Autores
Han X, Hirschel A, Tsapekos M, Perez D, Vollmer D
Periodico
International journal of molecular sciences (2023 Sep 19)
Conteudo
Avaliação In Vitro de Nanopartículas de Ouro sobre a Atividade da Telomerase e o Comprimento dos Telômeros em Fibroblastos Humanos
A atividade da telomerase coincide com o alongamento das extremidades dos cromossomos, conhecidas como telômeros. O comprimento dos telômeros é usado como um marcador para o envelhecimento celular. Os telômeros encurtam com o tempo à medida que as células se dividem, e certos compostos bioativos, como as nanopartículas de ouro (AuNPs), podem retardar o encurtamento dos telômeros ao aumentar a atividade da telomerase. O objetivo do presente estudo é avaliar o efeito das AuNPs na atividade da telomerase e no comprimento dos telômeros em fibroblastos humanos. A atividade da telomerase foi medida usando ensaio imunoenzimático (ELISA) em fibroblastos pulmonares humanos primários (IMR90) e usando o protocolo de amplificação de repetições teloméricas baseado em PCR quantitativo (Q-TRAP) em fibroblastos dérmicos humanos primários, neonatais (HDFn). O comprimento dos telômeros foi determinado pelo ensaio de Tecnologia de Análise de Telômeros (TAT®) em HDFn. Em IMR90, todos os tratamentos com AuNPs mostraram aumentos significativos na atividade da telomerase quando comparados a passagens anteriores. HDFn tratados com AuNPs a 0 ppm, 0,05 ppm, 0,5 ppm ou 5 ppm não mostraram diferenças significativas na atividade da telomerase em comparação ao grupo controle. Diferenças significativas no comprimento dos telômeros em HDFn foram observadas em 2 semanas de AuNPs a 0,05 e 0,5 ppm sob condições de cultura oxidativa em comparação ao grupo controle. O estudo mostrou evidências preliminares de que as AuNPs podem aumentar a atividade da telomerase e desacelerar o encurtamento dos telômeros em fibroblastos humanos, sugerindo seu potencial efeito antienvelhecimento, o que justifica uma investigação mais aprofundada.
- Introdução
O envelhecimento está associado ao encurtamento dos telômeros. Os telômeros são complexos de proteína e ácido desoxirribonucleico (DNA) que protegem as extremidades dos cromossomos e estabilizam os cromossomos. Os telômeros não se replicam completamente durante a divisão celular, causando o encurtamento dos telômeros. A telomerase é uma enzima que, quando ativa, adiciona sequências de DNA às extremidades dos telômeros para ajudar a manter seu comprimento. A telomerase parece estar ativa em células germinativas e em algumas células-tronco adultas. As células param de se dividir e entram em senescência quando os telômeros se tornam criticamente curtos. Consequentemente, o comprimento dos telômeros é um marcador valioso do envelhecimento celular.
O encurtamento dos telômeros também está correlacionado com doenças relacionadas à idade, como cânceres, doenças cardiovasculares e diabetes. A inflamação e o estresse oxidativo demonstraram acelerar o encurtamento dos telômeros in vitro. Alimentos e nutracêuticos, como antioxidantes e alimentos ricos em antioxidantes, Coenzima Q10, colostro bovino e várias vitaminas e minerais essenciais, demonstraram retardar o encurtamento dos telômeros, prolongar a vida útil das células e apoiar o envelhecimento celular saudável.
Vitaminas e minerais são essenciais para a saúde humana. Minerais iônicos e quelatados geralmente são absorvidos de forma mais eficiente pelo corpo humano do que minerais elementares. Recentemente, cresceu o interesse nos benefícios adicionais de elementos e minerais iônicos. Produtos líquidos contendo formas ionizadas de metais afirmam apoiar a função celular, uma vez que muitos desses metais são componentes-chave em reações essenciais à vida que ocorrem no corpo humano. Nanopartículas de ouro (AuNPs) e ouro iônico apresentam evidências conflitantes sobre potenciais benefícios humanos, embora muitos estudos foquem no impacto antimicrobiano. No entanto, alguns estudos focam nos potenciais efeitos antienvelhecimento e antioxidantes das AuNPs.
O objetivo deste estudo foi determinar se AuNPs influenciam o crescimento celular, a atividade da telomerase e retardam o encurtamento dos telômeros em dois tipos diferentes de fibroblastos humanos in vitro. Como o estresse oxidativo é conhecido por acelerar o encurtamento dos telômeros, os experimentos foram conduzidos sob condições padrão e oxidativas em ambos os tipos de fibroblastos humanos. - Resultados
2.1. Toxicidade
Em IMR90 (fibroblastos pulmonares humanos primários), um ensaio de lactato desidrogenase (LDH) foi utilizado para examinar a toxicidade dos tratamentos com AuNPs. Determinou-se que AuNPs em concentrações de até 12,5 partes por milhão (ppm) não apresentaram toxicidade, enquanto doses em ppm mais altos mostraram sinais de toxicidade.
A viabilidade de HDFn (fibroblastos dérmicos humanos primários, neonatais) foi determinada via ensaio de toxicidade com brometo de 3-(4,5-dimetiltiazol-2-il)-2,5-difeniltetrazólio (MTT). Nos pontos de tempo de 72 horas e 1 semana, as placas foram analisadas quanto à viabilidade celular na presença de todas as concentrações de tratamento (até 5 ppm de AuNPs) e condições de crescimento, e nenhuma das células tratadas ultrapassou 20% de mortalidade durante os períodos de inoculação (Tabelas S1–S4 das Informações Suplementares).
Resultados do ensaio de análise proliferativa de 8 semanas mostraram que células tratadas com 5 ppm e 0,5 ppm de AuNPs não apresentaram diminuição significativa na capacidade proliferativa em comparação ao grupo controle sob condições padrão, e continuaram da semana 3 à semana 8. Sob condições oxidativas, células tratadas com 0,5 ppm de AuNPs não apresentaram diminuição significativa na capacidade proliferativa em comparação ao grupo controle da semana 3 à semana 8.
Todas as concentrações de AuNPs usadas subsequentemente no estudo estavam abaixo das concentrações que mostraram sinais de toxicidade e, portanto, foram não tóxicas para IMR90 (até 12,5 ppm de AuNPs) ou HDFn (até 5 ppm de AuNPs).
2.2. Telomerase
No ensaio Telo TAGGG de reação em cadeia da polimerase (PCR) da telomerase acoplado ao ensaio imunoenzimático (ELISA), passagens representativas de 2, 5, 9, 11, 13 e 15 foram selecionadas para comparar o perfil da atividade da telomerase. Nas células de controle, a atividade da telomerase foi reduzida ao longo do tempo conforme esperado, pois as células IMR90 têm uma vida útil finita. Comparando a Passagem 2 (P2) com a Passagem 11 (P11), Passagem 13 (P13) e Passagem 15 (P15) nas células controle, houve uma redução significativa na atividade da telomerase em cada passagem (p < 0,01) (Figura 1). O controle com 0 ppm de AuNP mostrou manutenção da atividade da telomerase para cada número de passagem em comparação com a P2 (Figura 1).
Nas células IMR90 tratadas com 0,125 ppm ou 1,25 ppm de AuNPs, a atividade da telomerase aumentou com cada passagem, atingindo significância estatística na P13 (p < 0,001) e na P15 (p < 0,0001) quando comparadas à P2 (Figura 1). Quando tratadas com 12,5 ppm de AuNPs, a atividade da telomerase aumentou com cada passagem, atingindo significância estatística na P9 (p < 0,001) e continuando até a P15 (P11, P13 e P15, p < 0,0001) (Figura 1).
No ensaio de protocolo de amplificação de repetição telomérica baseado em PCR quantitativo (Q-TRAP), HDFn foram tratadas com várias concentrações de AuNPs por 6, 12, 24 e 72 h sob condições padrão de cultura. Não houve diferença estatisticamente significativa ao comparar qualquer condição de tratamento com a condição controle (Figura 2).
2.3. Comprimento dos Telômeros
Como a replicação celular é uma das principais causas do encurtamento dos telômeros, as medições do comprimento dos telômeros realizadas foram normalizadas pelos níveis de duplicação populacional (replicação celular) em cada condição e ponto no tempo. Sob condições padrão de cultura nas células HDFn, não foram identificadas diferenças significativas no comprimento mediano dos telômeros, no comprimento do percentil 20 ou na porcentagem de telômeros < 3 quilopares de bases (Kbp) entre o grupo controle e os grupos tratados (Figura 3A–C). Após normalizar os dados pela duplicação populacional, não foram identificadas diferenças consistentes na taxa de encurtamento dos telômeros para qualquer tratamento durante as 8 semanas completas (Figura 3A–C).
O tratamento com AuNPs sob condições de cultura celular oxidativa resultou em aumentos consistentemente significativos no comprimento mediano dos telômeros e no percentil 20, além de uma diminuição na porcentagem de telômeros < 3 Kbp entre os grupos de 0,05 ppm e 0,5 ppm de AuNPs em comparação ao grupo controle em 2 semanas (Figura 5A–C). Diminuições significativas no comprimento dos telômeros foram observadas em vários pontos de tempo e tratamentos com AuNPs (Figura 5A–C). Após normalizar os dados pela duplicação populacional, observa-se que o tratamento com 0,5 ppm de AuNPs reduz a taxa de encurtamento dos telômeros de forma consistente ao longo de toda a expansão. Embora essas diferenças tenham sido consideradas significativas apenas em 2 semanas, uma tendência pode ser observada para essa concentração. Nenhuma outra diferença consistente foi identificada na taxa de encurtamento dos telômeros em condições oxidativas para qualquer tratamento durante as 8 semanas completas, embora 5 ppm de AuNPs na semana 8 tenha mostrado uma taxa de encurtamento dos telômeros significativamente maior (Figura 6). - Discussão
No presente estudo, o tratamento com AuNPs aumentou significativamente a atividade da telomerase nas células IMR90, mas não demonstrou um efeito consistente nas células HDFn. O comprimento dos telômeros também não foi alterado com o tratamento com AuNPs nas células HDFn.
Todos os tratamentos com AuNPs testados nas células IMR90 apresentaram aumentos significativos na atividade da telomerase em passagens posteriores de cada concentração de tratamento, quando comparados ao respectivo P2. Vários estudos utilizaram nanopartículas de ouro como substrato ou componente de uma técnica para medir a atividade da telomerase em determinados modelos. Um estudo analisando os efeitos de diferentes fórmulas nutracêuticas seguiu um protocolo de PCR-ELISA semelhante para medir a atividade da telomerase. Os resultados deste estudo demonstraram que várias dessas fórmulas aumentaram a ativação da telomerase, embora o aumento tenha sido maior do que o do tratamento com AuNPs no presente estudo. Outro estudo utilizou zinco, cádmio e cobre para mostrar que os metais têm o potencial de modular a atividade da telomerase. Estudos recentes mostraram, por outro lado, que metais pesados como arsênio, cádmio e chumbo impactam negativamente o comprimento dos telômeros ou podem ter efeitos prejudiciais nas células. A exposição telomérica a diferentes metais pode ter efeitos variados; um aumento extremo na atividade da telomerase seria considerado potencialmente prejudicial, enquanto um aumento moderado e controlado na atividade da telomerase poderia potencialmente beneficiar a longevidade celular.
A atividade da telomerase em culturas primárias de fibroblastos humanos neonatais (HDFn) medida por Q-TRAP não mostrou diferenças significativas em comparação às células tratadas com a condição controle. A falta de significância em pontos de tempo subsequentes sugere que o efeito telomérico protetor fornecido é limitado. O Q-TRAP é uma técnica amplamente utilizada, e estudos recentes mostraram que a atividade da telomerase coincide bem com a manutenção telomérica em vários sistemas celulares.
Medições do comprimento dos telômeros pela Tecnologia de Análise de Telômeros (TAT®) mostraram diferenças significativas consistentes em HDFn sob condições oxidativas após duas semanas em comparação com o grupo controle para duas concentrações diferentes de tratamento com AuNP: 0,5 ppm e 0,05 ppm, enquanto não mostraram diferença em condições padrão e não oxidativas.
Isso é amplamente consistente com a forte atividade antioxidante das AuNPs e sugere que as AuNPs podem proteger os telômeros e os comprimentos dos telômeros do estresse oxidativo durante o processo de envelhecimento.
Essa proteção pode ser exercida através das vias de antioxidação nas células.
No entanto, também vale notar que concentrações mais altas de AuNPs sob condições oxidativas prolongadas (5 ppm na semana 8) parecem aumentar a taxa de encurtamento dos telômeros (Figura 6).
Isso sugere que o efeito das AuNPs na atividade da telomerase e nos comprimentos dos telômeros pode depender de condições oxidativas específicas e estágios do crescimento celular.
Diferenças foram observadas no comprimento mediano dos telômeros, no comprimento do 20º percentil e na porcentagem de telômeros < 3 Kbp.
Esses são marcadores metodológicos padrão para análise Q-FISH do comprimento dos telômeros.
Um estudo semelhante medindo os efeitos da ergotioneína no comprimento dos telômeros usou o comprimento mediano dos telômeros, a porcentagem de telômeros < 3 Kbp e o comprimento do 20º percentil para concluir que o aminoácido atua como antioxidante e suporte para o envelhecimento saudável.
Uma metanálise que compila especificamente dados sobre o papel da vitamina D no envelhecimento celular discute resultados conflitantes; embora a vitamina D pareça regular a proliferação e a senescência, parcialmente através da preservação dos telômeros, todos os estudos publicados têm limitações sérias e os resultados geralmente não coincidem.
Os resultados dos múltiplos ensaios dentro do presente estudo reconhecem evidências conflitantes semelhantes para a capacidade da solução de nanopartículas de ouro de impactar significativamente o comprimento e a função dos telômeros, embora os resultados atuais mereçam consideração pelo potencial de beneficiar o envelhecimento celular.
Há evidências suficientes de que as AuNPs são seguras e não tóxicas, mas o mecanismo pelo qual as AuNPs poderiam potencialmente ativar a telomerase não foi investigado minuciosamente.
Nanopartículas de ouro demonstraram catalisar a conversão de nicotinamida adenina dinucleotídeo (NADH) em NAD+.
Um estudo recente sugere que o aumento da presença de NAD+ pode ajudar a estabilizar os telômeros e melhorar a função das células imunológicas.
A suplementação com nicotinamida ribose, um precursor do NAD+, também pode ajudar a prevenir danos aos telômeros, pois o NAD+ não é bem regulado quando os telômeros são curtos.
A concentração de NAD+ também desempenha um papel na atividade da enzima tanquirase, que auxilia na proteção dos telômeros ao aumentar a atividade da telomerase.
Nanopartículas de ouro podem, portanto, ter um efeito a montante na produção de NAD+, que é utilizado por essas enzimas para fornecer suporte telomérico e justifica uma investigação mais aprofundada.
4.1. Artigos de Teste e Cultura Celular
O tratamento com AuNP foi administrado como um suplemento líquido: 4Life Elements® Gold Factor™ (4Life Research, Sandy, UT, EUA) em concentrações variadas. AuNPs são estruturas cristalinas suspensas, relativamente homogêneas, com superfícies cataliticamente ativas. Cada nanocristal possui aproximadamente 68.000 átomos de Au por nanocristal, com diâmetro mediano de 13 nm (8–28 nm) e uma massa molar correspondente de ~1,3 × 10^4 kDa. Os AuNPs estão suspensos em uma solução tampão (estabilizador) de 0,04 mg/mL de bicarbonato de potássio. Informações mais específicas sobre os AuNPs utilizados no estudo podem ser encontradas nesta publicação.
Dois tipos diferentes de células, fibroblastos humanos primários isolados do pulmão (IMR90) e fibroblastos humanos neonatais (HDFn), foram utilizados para ajudar a elucidar os efeitos dos AuNPs na atividade da telomerase. IMR90 (ATCC CCL 186) foi escolhida porque essas células têm uma vida útil finita. Sua senescência replicativa é induzida pelo encurtamento crítico dos telômeros e limita a proliferação dessas células. As células foram cultivadas conforme descrito anteriormente. Resumidamente, IMR90 foi cultivada por 15 passagens. As células em P1 foram subcultivadas em vários frascos, deixadas aderir durante a noite e, em seguida, tratadas por 72 h com o composto de teste AuNP em várias concentrações (Tabela 1). Após 72 h de tratamento, as células foram destacadas dos frascos de cultura celular usando TrypLE™ Select (Invitrogen, Waltham, MA, EUA). Metade das células foi lavada e congelada a −80 °C, enquanto a outra metade foi semeada em um frasco novo e tratada com o mesmo composto por mais 72–96 h. As células foram cultivadas e armazenadas dessa maneira e tratadas com cada composto por 15 passagens. Ao final de 15 passagens, as células foram coletadas e processadas para análise.
Fibroblastos dérmicos neonatais humanos primários (HDFn, ATCC PCS-201-010™) também foram utilizados neste estudo. As células foram semeadas a 3 × 10^3 células/cm² em um kit de meio para fibroblastos (Innoprot, Bizkaia, Espanha). O meio é tampão HEPES e bicarbonato e tem pH 7,4 quando equilibrado em uma incubadora com atmosfera de 5% CO2/95% ar. Os compostos de tratamento sob condições de cultura padrão ou condições de cultura oxidativa (10 µM H2O2) e controle veicular foram adicionados às células em cultura (Tabela 2). Condições oxidativas foram usadas como condição de cultura, pois demonstrou ser um modelo eficaz de envelhecimento celular. Os meios foram renovados a cada 2–3 dias, e as células foram subcultivadas em subconfluência (70–80%) a cada 7 dias durante 8 semanas. O crescimento celular foi monitorado para cada condição contando o número de células a cada passagem usando um contador de células Countess™ (Invitrogen). A duplicação populacional foi calculada conforme descrito anteriormente. Todos os tratamentos e expansões são realizados em triplicata para garantir que três réplicas físicas sejam analisadas por condição e para cada ponto no tempo.
4.2. Ensaios de Toxicidade
Para examinar a toxicidade e determinar a dose de tratamento apropriada para cada composto em IMR90, a atividade da LDH foi medida. A lactato desidrogenase é uma enzima citosólica estável que é liberada na lise celular. Para investigar a toxicidade e morte celular, as células foram plaqueadas em placas de 96 poços e cultivadas durante a noite, em seguida tratadas em várias doses (Tabela 1) por 24 h e 72 h. A LDH extracelular liberada no meio de cultura foi medida usando uma reação enzimática, conforme descrito anteriormente. Resumidamente, após o tratamento com o composto teste, 50 µL do meio de cultura celular foi transferido para uma nova placa de 96 poços, e 50 µL da mistura de reação foi adicionada e incubada à temperatura ambiente (TA) por 30 min. Em seguida, 50 µL de solução de parada foram adicionados, e a placa foi lida a A450 nm. Para todos os compostos, a dose subsequente usada para o estudo foi aproximadamente a maior dose sem qualquer evidência de toxicidade.
O teste de toxicidade MTT é um ensaio colorimétrico para medir a atividade metabólica das células e serve como um marcador substituto da viabilidade celular em fibroblastos cultivados. Resumidamente, células HDFn previamente expandidas foram plaqueadas em placas de 96 poços (Nunc) a 0,5 × 10⁴ células/placa para 72 h de tratamento e 0,35 × 10⁴ células/placa para uma semana de tratamento. Vinte e quatro horas após o plaqueamento, as células foram lavadas uma vez com solução salina tamponada com fosfato (PBS) e tratadas com os respectivos compostos (Tabela 2) em condições de cultura padrão ou condições de cultura oxidativa. Após o tratamento, as placas foram incubadas por 72 h e uma semana, com o meio de tratamento trocado a cada dois dias. Após o período de tratamento, as células foram lavadas duas vezes com PBS, e o meio foi substituído pelo reagente MTT a 0,5 mg/mL em meio Eagle modificado por Dulbecco sem vermelho de fenol. As placas foram agitadas suavemente e incubadas por 4 h. Após a incubação, o meio foi removido e substituído por dimetilsulfóxido. As placas foram agitadas suavemente para solubilizar os cristais de formazan. A absorbância foi medida usando um leitor de placas múltiplas Envision no comprimento de onda de 570 nm.
4.3. Atividade da Telomerase
Para testar os efeitos dos compostos de tratamento com AuNP na atividade da telomerase em IMR90, as células foram tratadas com cada composto teste por 15 passagens, conforme descrito acima. O Telo TAGGG Telomerase PCR–ELISA (Roche Applied Science, Penzberg, Alemanha) foi realizado nas amostras coletadas em P2, P5, P9, P11, P13 e P15 para investigar o perfil de atividade da telomerase ao longo do tempo. A atividade da telomerase em células IMR90 foi medida em um procedimento de duas partes; a primeira parte é um método baseado em PCR, e a segunda parte é um ELISA conforme as instruções do kit PCR–ELISA, conforme descrito anteriormente.
Para determinar os efeitos dos compostos de tratamento com AuNP na atividade da telomerase em HDFn, as células foram plaqueadas conforme descrito, e a atividade da telomerase foi medida por Q-TRAP. A atividade da telomerase foi determinada em lisados celulares totais por Q-TRAP em HDFn conforme descrito por Samuel, et al., 2022. As células foram coletadas após 6, 12, 24 e 72 horas de tratamento nas concentrações indicadas na Tabela 2, sob condições padrão de cultura. Todas as amostras foram processadas em triplicata.
4.4. Comprimento dos Telômeros
As medições do comprimento dos telômeros foram realizadas utilizando a tecnologia proprietária de ensaio de telômeros da Life Length, TAT®. O TAT® mediu o comprimento dos telômeros usando uma técnica de Q-FISH de alto rendimento, conforme descrito anteriormente. O método é baseado em um método de hibridização in situ por fluorescência quantitativa modificado para medir telômeros individuais em células durante a interfase. O TAT® mediu o comprimento dos telômeros em unidades absolutas de pares de bases e forneceu uma avaliação da distribuição do comprimento dos telômeros através das três variáveis seguintes por amostra: o comprimento mediano dos telômeros (percentil 50), o comprimento dos telômeros no percentil 20 (uma segunda medição do comprimento dos telômeros voltada para os telômeros mais curtos) e a porcentagem de telômeros < 3 Kbp, que é indicativa da quantidade de telômeros criticamente curtos na amostra. Telômeros mais curtos estão intimamente associados à senescência celular, razão pela qual as duas últimas variáveis são relevantes. Todas as amostras foram processadas em quintuplicata. Células HDFn foram semeadas em placas de 384 poços com fundo transparente e paredes pretas, na densidade de 15.000 células por poço para cada composto e condição (Tabela 2). As células foram coletadas em 2, 4, 6 e 8 semanas para análise por TAT®.
4.5. Análise de Dados
Uma ANOVA bidirecional foi realizada para comparações múltiplas. Diferenças estatisticamente significativas foram definidas como um valor-p < 0,01.
5. Conclusões
O presente estudo focou especificamente na alteração da atividade da telomerase e de vários marcadores de comprimento dos telômeros em fibroblastos humanos pelo tratamento com concentrações variadas de soluções de AuNP. Resultados por PCR–ELISA em IMR90 mostraram aumentos significativos na atividade da telomerase em células tratadas com AuNP ao longo de 15 passagens celulares. A proliferação in vitro e a análise do comprimento dos telômeros por Q-FISH de alto rendimento em HDFn mostraram que um efeito protetor potencial significativo foi observado apenas após 2 semanas de tratamento com soluções de nanopartículas de ouro nas concentrações de 0,5 e 0,05 ppm de AuNP sob condições de cultura oxidativas em células HDFn. Há evidências de que soluções de nanopartículas de ouro podem aumentar a atividade da telomerase in vitro; no entanto, o impacto direto da ativação da telomerase nas medições reais do comprimento dos telômeros pode exigir pesquisas adicionais.
Aviso de Isenção de Responsabilidade/Nota do Editor: As declarações, opiniões e dados contidos em todas as publicações são exclusivamente dos autores e colaboradores individuais e não do MDPI e/ou dos editores. O MDPI e/ou os editores se isentam de responsabilidade por qualquer dano a pessoas ou propriedades resultante de quaisquer ideias, métodos, instruções ou produtos mencionados no conteúdo.
Materiais Suplementares
As seguintes informações de apoio podem ser baixadas em: .
Contribuições dos Autores
Conceitualização e design do estudo, X.H., D.V., M.T. e D.P.; métodos e implementação do estudo: M.T. e D.P.; análise formal e preparação do manuscrito, X.H., M.T., A.H. e D.V. Todos os autores leram e concordaram com a versão publicada do manuscrito.
Conflitos de Interesse
X.H., A.H. e D.V. eram funcionários da 4Life Research, LLC, patrocinadora do estudo. Os outros autores declaram não haver conflito de interesse.
Referências
Telômeros e telomerase
Associação específica da atividade da telomerase humana com células imortais e câncer
Telomerase humana e sua regulação
Telômeros e senescência celular—O tamanho não importa
Associação do comprimento dos telômeros com diabetes tipo 2, estresse oxidativo e variação do gene UCP2
Comprimento dos telômeros e risco de câncer incidente e mortalidade por câncer
A associação entre comprimento dos telômeros e câncer: Uma meta-análise
O comprimento dos telômeros leucocitários está associado a doenças relacionadas à idade medidas de forma não invasiva: O Estudo de Saúde Cardiovascular
Associação entre comprimento dos telômeros e diabetes mellitus tipo 2: Uma meta-análise
Hiperóxia leve encurta os telômeros e inibe a proliferação de fibroblastos: Um modelo para senescência?
Estresse oxidativo encurta os telômeros
O acúmulo de quebras de fita simples é a principal causa do encurtamento dos telômeros em fibroblastos humanos
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Detecção não radioativa da atividade da telomerase usando o protocolo de amplificação repetitiva telomérica
Validação analítica da tecnologia de análise de telômeros® para a análise de alto rendimento de m últiplas variáveis associadas aos telômeros
Atividade Relativa da Telomerase em Células IMR90 nas Passagens 2, 5, 9, 11, 13 e 15. Os dados são apresentados como Média ± DP e comparados à P2, respectivamente, para significância estatística, definida como * p < 0,01.
Atividade Relativa da Telomerase em Células HDFn em 6, 12, 24 e 72 h. Os dados são apresentados como Média ± DP e comparados ao tratamento controle, respectivamente.
Comprimento dos telômeros em HDFn cultivadas em condições padrão de cultura. Os dados são apresentados como Média ± DP e comparados ao tratamento controle, respectivamente. (A) comprimento mediano (pares de bases); (B) comprimento do 20º percentil (pares de bases) e (C) porcentagem de telômeros < 3000 pares de bases.
Taxa de encurtamento dos telômeros em HDFn sob condições padrão de cultura não oxidativa. * p < 0,01 comparado ao controle.
Comprimento dos telômeros em HDFn cultivados em condições de cultura oxidativas. Os dados são apresentados como Média ± DP e comparados ao tratamento controle, respectivamente, para significância estatística, definida como *p < 0,01. (A) comprimento mediano (pares de base), (B) comprimento do 20º percentil (pares de base) e (C) porcentagem de telômeros < 3000 pares de base.
Taxa de encurtamento dos telômeros em HDFn sob condições de cultura oxidativas. * p < 0,01 comparado ao tratamento controle.
Compostos e doses dos tratamentos utilizados nos experimentos com IMR90.
Dose do Tratamento Composto 0 ppm Controle 0 ppm Controle, com tampão de AuNP 0,125 ppm AuNPs 1,25 ppm AuNPs 12,5 ppm AuNPs
Compostos e doses dos tratamentos utilizados nos experimentos de cultura de HDFn. As células foram tratadas sob condições de cultura padrão e condições de cultura oxidativas (10 µM de H2O2).
Dose do Tratamento Composto 0 ppm Controle, sem tratamento 0 ppm Controle, com tampão de AuNP 0,05 ppm AuNP 0,5 ppm AuNP 5,0 ppm AuNP