pmid: "40507904"
title: "Efeitos Neuroprotetores In Vivo da Alpinetina Contra Danos Experimentais de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico Através de Mecanismos Antioxidantes e Anti-Inflamatórios."
authors: "Kongsui R, Thongrong S, Jittiwat J"
journal: "International journal of molecular sciences"
pubdate: "2025 May 26"
doi: "10.3390/ijms26115093"
source: "PMC Full Text"

Efeitos Neuroprotetores In Vivo da Alpinetina Contra Danos Experimentais de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico Através de Mecanismos Antioxidantes e Anti-Inflamatórios.

Autores

Kongsui R, Thongrong S, Jittiwat J

Periodico

International journal of molecular sciences (2025 May 26)

Conteudo

Efeitos Neuroprotetores In Vivo da Alpinetina Contra Danos por Acidente Vascular Cerebral Isquêmico Experimental Através de Mecanismos Antioxidantes e Anti-Inflamatórios

O acidente vascular cerebral isquêmico é o tipo mais comum de AVC e representa um grande desafio global de saúde devido à sua alta mortalidade e impacto incapacitante duradouro. O início e a progressão do AVC isquêmico estão amplamente ligados ao estresse oxidativo e às respostas inflamatórias. A alpinetina, um flavonoide natural encontrado na família do gengibre, exibe diversas propriedades farmacológicas, incluindo atividades antioxidantes e anti-inflamatórias. Neste estudo, o potencial neuroprotetor da alpinetina na atenuação do estresse oxidativo e da inflamação contra o AVC isquêmico cerebral foi avaliado. Noventa ratos Wistar machos foram distribuídos aleatoriamente no grupo de operação simulada, no grupo Rt.MCAO, no grupo Rt.MCAO+piracetam e nos grupos Rt.MCAO+alpinetina (25, 50 e 100 mg/kg de peso corporal). O tamanho do infarto cerebral, a densidade neuronal e as atividades antioxidantes e anti-inflamatórias foram medidos. Três dias de tratamento com alpinetina reduziram marcadamente o volume do infarto em 30% em comparação com o grupo tratado com Rt.MCAO+veículo. Além disso, os ratos tratados com alpinetina exibiram um aumento significativo na densidade neuronal no córtex, bem como nas regiões CA1 e CA3 do hipocampo. Além disso, o tratamento com alpinetina melhorou tanto o aumento induzido por Rt.MCAO na atividade da malondialdeído (MDA) quanto a diminuição induzida por Rt.MCAO nas atividades da catalase (CAT), glutationa peroxidase (GSH-Px) e superóxido dismutase (SOD) no córtex e hipocampo. Além disso, os níveis das proteínas COX-2 e IL-6 foram avaliados por western blotting. Os resultados mostraram que o tratamento com alpinetina (100 mg/kg de peso corporal) reduziu significativamente os níveis de expressão de COX-2 e IL-6 tanto no córtex quanto no hipocampo. Nossos achados sugerem que a alpinetina mitiga significativamente os efeitos do dano cerebral induzido por isquemia cerebral através de suas propriedades antioxidantes e anti-inflamatórias e poderia potencialmente ser desenvolvida como um agente terapêutico para o tratamento do AVC.

1. Introdução
   O acidente vascular cerebral isquêmico é a forma mais frequente de AVC, responsável por cerca de 87% de todos os casos. Representa uma séria preocupação global de saúde devido à sua contribuição substancial para as taxas de mortalidade e incapacidade a longo prazo. O AVC isquêmico ocorre quando uma obstrução em uma artéria cerebral interrompe o fluxo sanguíneo, privando o tecido cerebral de oxigênio e nutrientes essenciais. Esse evento agudo desencadeia uma cascata de distúrbios celulares e moleculares, incluindo excitotoxicidade, estresse oxidativo e inflamação, que podem levar a danos neuronais irreversíveis. Compreender esses mecanismos patológicos é crucial para desenvolver estratégias terapêuticas direcionadas para mitigar os efeitos deletérios do AVC e melhorar os desfechos clínicos.
   Além disso, essa deficiência energética inicia uma série de alterações bioquímicas e moleculares prejudiciais. Uma das respostas iniciais é a mudança para o metabolismo anaeróbico, que resulta na produção excessiva de espécies reativas de oxigênio (ERO). Essas moléculas contribuem para o estresse oxidativo ao danificar componentes celulares essenciais, como lipídios, proteínas e DNA, levando ao aumento da lesão neuronal e morte celular. O desequilíbrio oxidativo também pode enfraquecer a barreira hematoencefálica (BHE), desencadear processos inflamatórios e estender o dano às áreas cerebrais circundantes. Enzimas antioxidantes como catalase (CAT), glutationa peroxidase (GSH-Px) e superóxido dismutase (SOD) desempenham um papel crítico na neutralização das ERO e na proteção dos neurônios contra danos oxidativos.
   Além do estresse oxidativo, a inflamação após a isquemia envolve a ativação de micróglias e astrócitos, que liberam citocinas pró-inflamatórias, incluindo interleucina-6 (IL-6). A ciclooxigenase-2 (COX-2) também é regulada positivamente e contribui para a inflamação por meio da produção de prostaglandinas, que agravam o dano neural. O aumento dos níveis de IL-6 e COX-2 promove a infiltração de células imunes no cérebro, mantém o estado inflamatório e retarda a recuperação do tecido. Portanto, direcionar essas moléculas pode oferecer uma abordagem terapêutica para reduzir a lesão secundária e melhorar a recuperação após o AVC.
   Flavonoides, uma classe de compostos polifenólicos amplamente encontrados em frutas, vegetais e ervas medicinais, demonstraram efeitos neuroprotetores notáveis. Suas ações incluem neutralizar espécies reativas de oxigênio (EROs), modular vias de sinalização celular, reduzir respostas inflamatórias, exibir atividade anticancerígena e mitigar danos excitotóxicos. Estudos experimentais mostraram que compostos como prunina, quercetina e baicaleína podem reduzir o tamanho do infarto cerebral, melhorar os resultados comportamentais e aumentar a atividade de enzimas antioxidantes em modelos de acidente vascular cerebral isquêmico. Esses achados sugerem que os flavonoides são promissores como agentes terapêuticos para neuroproteção.

Após administração intraperitoneal (i.p.) de alpinetina na dose de 50 mg/kg, sua meia-vida de eliminação (T½) foi de aproximadamente 9 h. Essa via de administração parece aumentar a exposição sistêmica e pode favorecer uma melhor distribuição para o cérebro. A alpinetina, um flavonoide encontrado na família do gengibre, exibe diversas propriedades farmacológicas, incluindo efeitos antioxidantes, anti-inflamatórios, anticancerígenos, hepatoprotetores e reguladores do metabolismo lipídico. Estudos anteriores descobriram que a alpinetina reduziu notavelmente os marcadores de estresse oxidativo e nitrosativo no fígado, incluindo malondialdeído (MDA) e outras espécies reativas de oxigênio. Ela também aumentou as defesas antioxidantes elevando os níveis de SOD e glutationa, fortalecendo assim a capacidade do fígado de combater danos oxidativos. Além disso, este composto pode inibir a inflamação ao reduzir a regulação de citocinas pró-inflamatórias como fator de necrose tumoral-α (TNF-α), IL-1β, IL-4 e IL-6, enquanto também diminui a ativação de células imunológicas envolvidas na resposta inflamatória.

O estresse oxidativo surge precocemente após o acidente vascular cerebral isquêmico e se intensifica nas primeiras 72 h. Durante esta fase, microglias ativadas e células imunológicas infiltrantes produzem grandes quantidades de EROs por meio de enzimas como mieloperoxidase e óxido nítrico sintase induzível. Esse aumento de EROs exacerba o dano na penumbra, contribuindo para a expansão do infarto e dificultando a recuperação. Visar o estresse oxidativo nesta janela é crucial para reduzir a lesão neuronal e melhorar os desfechos. Considerando o envolvimento significativo do estresse oxidativo e da inflamação na isquemia cerebral dentro de 72 h, juntamente com as propriedades terapêuticas relatadas da alpinetina, este estudo teve como objetivo determinar o efeito da alpinetina no volume do infarto cerebral, perda neuronal e atividades antioxidantes e anti-inflamatórias usando um modelo animal de isquemia cerebral focal.

2. Resultados
   2.1. A Alpinetina Aliviou o Volume de Infarto Cerebral Induzido por AVC Isquêmico
   Para investigar como a alpinetina afeta o dano cerebral induzido por acidente vascular cerebral isquêmico, o volume do infarto cerebral foi investigado. Todos os animais experimentais foram submetidos à oclusão da artéria cerebral média direita (Rt.MCAO) mediante inserção de um fio de náilon 4.0 aproximadamente 17 mm através da artéria carótida comum direita. Os tratamentos incluíram administração intraperitoneal (i.p.) do veículo, piracetam (250 mg/kg de PC) ou diferentes doses de alpinetina (25, 50 ou 100 mg/kg de PC) uma vez ao dia durante 3 dias consecutivos. Após o período de tratamento, o volume do infarto cerebral foi avaliado utilizando coloração com cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC). Conforme mostrado na Figura 1, a administração intraperitoneal de piracetam e alpinetina por 3 dias após a oclusão reduziu significativamente o volume do infarto em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo (p < 0,05). O grupo submetido à cirurgia sham não apresentou infarto detectável.

2.2. A Alpinetina Melhorou a Perda Neuronal Induzida por Acidente Vascular Cerebral Isquêmico no Córtex e no Hipocampo

Para determinar melhor o potencial neuroprotetor da alpinetina na função neural, a densidade de células neuronais no córtex e nas regiões CA1 e CA3 do hipocampo foi avaliada. Os resultados mostram que ratos tratados com piracetam a 250 mg/kg de PC ou alpinetina (a 50 ou 100 mg/kg de PC) por 3 dias consecutivos apresentaram densidades de células neuronais notavelmente aumentadas no córtex e nas regiões hipocampais CA1 e CA3 em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo (p < 0,05). Além disso, ratos tratados com alpinetina na dose de 25 mg/kg de PC por 3 dias mostraram um aumento significativo na densidade de células neuronais nas regiões CA1 e CA3 do hipocampo, mas não no córtex, em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo (Figura 2).

2.3. A Alpinetina Atenuou a Produção Excessiva de Malondialdeído (MDA) Induzida por Acidente Vascular Cerebral Isquêmico no Córtex e no Hipocampo

Para estabelecer se a alpinetina mitiga o dano cerebral reduzindo o estresse oxidativo, os níveis de MDA foram medidos no córtex e no hipocampo de ratos submetidos à Rt.MCAO. Os animais foram tratados i.p. uma vez ao dia durante 3 dias consecutivos com veículo, piracetam (250 mg/kg de PC) ou alpinetina (25, 50 ou 100 mg/kg de PC). Os resultados revelaram que o tratamento com piracetam a 250 mg/kg de PC ou alpinetina a 50 ou 100 mg/kg de PC reduziu significativamente os níveis de MDA tanto no córtex quanto no hipocampo em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo (p < 0,05). Em contraste, a alpinetina a 25 mg/kg de PC resultou em uma redução estatisticamente significativa nos níveis de MDA apenas no hipocampo e não no córtex (Figura 3).

2.4. A Alpinetina Aumentou a Atividade da Catalase (CAT) no Córtex e no Hipocampo
Para determinar se os efeitos neuroprotetores da alpinetina em ratos Rt.MCAO foram mediados por seus efeitos antioxidantes, os níveis de CAT no córtex e no hipocampo foram medidos. O tratamento com piracetam a 250 mg/kg de PC ou alpinetina a 100 mg/kg de PC aumentou significativamente os níveis de CAT tanto no córtex quanto no hipocampo em comparação ao grupo tratado com veículo (Rt.MCAO+veículo) (p < 0,05 para todas as comparações; Figura 4). Em contraste, não houve diferença significativa nos níveis de CAT em nenhuma das regiões cerebrais em ratos tratados com 25 ou 50 mg/kg de PC de alpinetina em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo.
2.5. A Alpinetina Aumentou os Níveis de Glutationa Peroxidase (GSH-Px) no Córtex e no Hipocampo
Após a conclusão do experimento, investigamos se a alpinetina modulava alterações nos níveis de GSH-Px cortical e hipocampal em ratos. Ratos tratados com piracetam a 250 mg/kg de PC ou alpinetina a 50 ou 100 mg/kg de PC apresentaram um aumento estatisticamente significativo nos níveis de GSH-Px tanto no córtex quanto no hipocampo em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo (p < 0,05 para todas as comparações; Figura 5). Em contraste, ratos que receberam alpinetina na dose de 25 mg/kg de PC mostraram um aumento significativo nos níveis de GSH-Px no hipocampo, mas não no córtex, em comparação ao grupo tratado com veículo (Rt.MCAO+veículo) (p < 0,05).
2.6. A Alpinetina Melhorou os Níveis de Superóxido Dismutase (SOD) no Córtex e no Hipocampo
Para confirmar o efeito antioxidante da alpinetina, as regiões do córtex e do hipocampo dos cérebros dos ratos foram analisadas quanto aos níveis de SOD. Os resultados indicaram que a administração de piracetam a 250 mg/kg de PC ou alpinetina a 100 mg/kg de PC aumentou significativamente os níveis de SOD tanto no córtex quanto no hipocampo em comparação ao grupo tratado com veículo (Rt.MCAO+veículo) (p < 0,05 para todas as comparações; Figura 6). Por outro lado, o tratamento com alpinetina nas doses de 25 e 50 mg/kg de PC não resultou em alterações notáveis no córtex ou no hipocampo em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo.
2.7. A Alpinetina Regulou a Expressão de Ciclooxigenase-2 (COX-2) e Interleucina-6 (IL-6) no Córtex e no Hipocampo
No próximo conjunto de experimentos, investigou-se o mecanismo pelo qual a alpinetina modula a expressão de COX-2 e IL-6 (via anti-inflamatória), e os resultados são mostrados na Figura 7. Ratos tratados com alpinetina na dose de 100 mg/kg de peso corporal foram selecionados para estudos posteriores, pois esta dose demonstrou os efeitos neuroprotetores mais eficazes contra a lesão cerebral isquêmica neste estudo. As regiões cortical e hipocampal do cérebro foram analisadas pela técnica de Western blot. Os tecidos cerebrais foram homogeneizados usando o reagente de extração N-PERTM (Thermo Fisher Scientific, Inc., cat. no. 87792, Waltham, MA EUA), e os níveis de expressão de COX-2 e IL-6 foram avaliados. Os resultados mostraram que o tratamento com piracetam (250 mg/kg de peso corporal) ou alpinetina (100 mg/kg de peso corporal) por 3 dias consecutivos reduziu significativamente os níveis de expressão de COX-2 e IL-6 tanto no córtex quanto no hipocampo em comparação com o grupo Rt.MCAO+veículo (p < 0,05).
3. Discussão
Em condições fisiológicas, o cérebro recebe um fluxo sanguíneo de cerca de 55 mL por 100 g de tecido a cada minuto. Durante um episódio de isquemia cerebral, no entanto, esse fluxo pode diminuir drasticamente, caindo abaixo de 10 mL/100 g/min. A causa mais comum de acidente vascular cerebral, responsável por aproximadamente 87% dos casos, é o estreitamento ou obstrução das artérias cerebrais, frequentemente devido a trombos que se originam em outro local e subsequentemente ficam presos nos vasos cerebrais. Os principais fatores de risco para essa condição incluem hipertensão, diabetes mellitus, níveis elevados de lipídios no sangue e tabagismo.
Nas primeiras 72 h após um acidente vascular cerebral, uma série complexa de processos patológicos se desenrola, culminando em lesão neuronal e reações inflamatórias. A interrupção do fluxo sanguíneo cerebral leva à morte neuronal induzida por isquemia, que então desencadeia uma cadeia de eventos bioquímicos. Entre estes está a liberação excessiva de neurotransmissores excitatórios, particularmente o glutamato, que agrava o dano neuronal ao promover o influxo de cálcio, gerar estresse oxidativo e iniciar vias inflamatórias. Além disso, após um acidente vascular cerebral isquêmico, o estresse oxidativo rapidamente se torna um contribuinte chave para a lesão cerebral e se intensifica progressivamente nos dias seguintes.
Durante a fase secundária da neuroinflamação — que ocorre após o evento isquêmico inicial — há um aumento significativo na produção de EROs. Entre aproximadamente 18 e 72 h após o início do acidente vascular cerebral, micróglias ativadas e células imunes infiltrantes, como macrófagos e neutrófilos, geram EROs por meio de sistemas enzimáticos como mieloperoxidase e óxido nítrico sintase induzível. Esse aumento, frequentemente referido como “explosão respiratória”, agrava o dano neuronal, particularmente na região da penumbra adjacente ao núcleo isquêmico, piorando assim a lesão celular e expandindo o tamanho do infarto.
Considerando o envolvimento significativo do estresse oxidativo e da inflamação na isquemia cerebral dentro de 72 h, juntamente com as propriedades terapêuticas relatadas da alpinetina, este estudo teve como objetivo determinar o efeito da alpinetina no volume do infarto cerebral, perda neuronal e atividades antioxidante e anti-inflamatória usando um modelo animal de isquemia cerebral focal induzida por oclusão permanente da ACMD (Artéria Cerebral Média Direita).
Este estudo investigou os efeitos da alpinetina no volume do infarto em ratos machos de 8 semanas de idade, pesando 250–300 g. Todos os animais experimentais foram submetidos à MCAO-D via inserção cirúrgica de um fio de nylon 4.0 de aproximadamente 17 mm na artéria carótida comum direita. Os ratos foram tratados com veículo (DMSO), piracetam na dose de 250 mg/kg PC, ou alpinetina nas doses de 25, 50 ou 100 mg/kg PC. Todos os tratamentos foram administrados i.p. uma vez ao dia durante três dias consecutivos. Após o período experimental, o volume do infarto foi avaliado usando coloração com TTC. Os resultados revelaram que tanto o piracetam quanto a alpinetina reduziram significativamente o volume do infarto em comparação com o grupo MCAO-D + veículo (p < 0,05). Além disso, este estudo examinou os efeitos da alpinetina na densidade neuronal no córtex e nas regiões CA1 e CA3 do hipocampo em ratos submetidos à MCAO-D. Verificou-se que ratos tratados com piracetam a 250 mg/kg PC ou alpinetina a 50 ou 100 mg/kg PC por 3 dias apresentaram densidades neuronais significativamente maiores no córtex e nas áreas CA1 e CA3 do hipocampo em comparação com o grupo tratado com veículo (p < 0,05, todos comparados com MCAO-D+veículo). Além disso, o tratamento com alpinetina a 25 mg/kg PC por 3 dias aumentou significativamente a densidade neuronal apenas nas regiões CA1 e CA3 do hipocampo (p < 0,05, em comparação com MCAO-D+veículo). A alpinetina demonstrou exercer efeitos vasodilatadores notáveis, sustentando seu potencial como agente terapêutico em distúrbios cardiovasculares. Pesquisas indicam que ela facilita o relaxamento da musculatura lisa vascular por meio de vias dependentes e independentes do endotélio. Uma de suas ações-chave envolve o aumento da produção de óxido nítrico (NO), um mediador vital da vasodilatação. Simultaneamente, a alpinetina suprime a entrada de cálcio e reduz a mobilização intracelular de cálcio nas células musculares lisas vasculares. Ela também interfere no acoplamento excitação-contração modulando a atividade da proteína quinase C, contribuindo ainda mais para sua função vasodilatadora. Por meio desses mecanismos, a alpinetina reduz a resistência vascular e melhora a eficiência circulatória, sugerindo benefícios potenciais para condições de acidente vascular cerebral. Em nosso estudo, a dose de 25 mg/kg de alpinetina apresentou diferenças específicas de região, mostrando eficácia limitada no hipocampo em comparação com o córtex. Essa variabilidade pode decorrer de vulnerabilidade regional diferencial à lesão isquêmica, permeabilidade da barreira hematoencefálica ou processamento metabólico da alpinetina.
Respostas região- e dose-específicas também foram relatadas com outros flavonoides. Por exemplo, a quercetina demonstrou exercer efeitos neuroprotetores mais fortes no córtex do que nas regiões hipocampais em doses mais baixas, provavelmente devido a diferenças na biodisponibilidade e nos perfis de estresse oxidativo entre as regiões. Da mesma forma, o resveratrol demonstrou resultados protetores variáveis dependendo da dose, do momento e da região cerebral alvo. Esses paralelos apoiam a ideia de que os efeitos da alpinetina podem ser consistentes com tendências mais amplas observadas entre os flavonoides, e estudos adicionais ajudarão a determinar a dosagem ideal para proteção região-específica.
Durante o acidente vascular cerebral isquêmico, há um aumento substancial na produção de radicais livres, o que afeta negativamente o sistema de defesa antioxidante endógeno do organismo. Isso resulta em um desequilíbrio entre radicais livres e antioxidantes. O acúmulo excessivo de radicais livres causa danos celulares e leva à morte de células neuronais. No entanto, na área circundante conhecida como penumbra—onde ainda há fluxo sanguíneo parcial—as células neuronais não são destruídas imediatamente, mas ainda são afetadas pelo aumento do estresse oxidativo. Isso se deve principalmente à redução da atividade de enzimas antioxidantes-chave, como glutationa peroxidase, catalase e superóxido dismutase. Os níveis elevados de radicais livres nessa região contribuem ainda mais para a morte neuronal, prejudicando, em última análise, a função das áreas cerebrais afetadas pela perda celular. O MDA é um subproduto da peroxidação lipídica e serve como biomarcador de estresse oxidativo. Níveis elevados de MDA indicam dano oxidativo aos lipídios nas células e tecidos. Após um acidente vascular cerebral, os níveis de MDA podem aumentar devido a uma cascata de eventos que leva ao estresse oxidativo e à oxidação lipídica no cérebro. Este estudo teve como objetivo investigar os efeitos da alpinetina nas alterações dos níveis de MDA em ratos machos (8 semanas de idade, pesando 250–300 g) submetidos à Rt.MCAO. Os animais foram tratados com veículo, piracetam na dose de 250 mg/kg de PC, ou alpinetina nas doses de 25, 50 ou 100 mg/kg de PC, via injeção i.p. uma vez ao dia durante três dias consecutivos. Após o período de tratamento, os tecidos cerebrais foram coletados para avaliar as alterações nos níveis de MDA. Os resultados mostraram que o tratamento com piracetam (250 mg/kg de PC) ou alpinetina nas doses de 50 e 100 mg/kg de PC reduziu significativamente os níveis de MDA tanto no córtex quanto no hipocampo. Em contraste, o tratamento com alpinetina a 25 mg/kg de PC resultou em uma redução estatisticamente significativa dos níveis de MDA apenas no hipocampo em comparação com o grupo Rt.MCAO+veículo (p < 0,05). Além disso, este estudo também teve como objetivo investigar os efeitos da alpinetina na atividade de enzimas antioxidantes, incluindo CAT, GSH-Px e SOD, em ratos submetidos à Rt.MCAO. Os resultados revelaram que o tratamento com piracetam na dose de 250 mg/kg de PC ou alpinetina nas doses de 50 ou 100 mg/kg de PC aumentou significativamente os níveis de GSH-Px e CAT tanto no córtex quanto no hipocampo em comparação com o grupo Rt.MCAO+veículo (p < 0,05).
Em relação às alterações nos níveis de SOD no córtex e hipocampo, verificou-se que o tratamento com piracetam na dose de 250 mg/kg de PC ou alpinetina nas doses de 50 ou 100 mg/kg de PC aumentou significativamente os níveis de SOD em ambas as regiões cerebrais quando comparado ao grupo Rt.MCAO+veículo (p < 0,05). Esses achados são consistentes com um estudo anterior que mostrou que a alpinetina possui propriedades antioxidantes, incluindo a redução dos níveis de MDA e o aumento da atividade de enzimas antioxidantes como SOD, GSH-Px e CAT em camundongos com fibrose hepática induzida experimentalmente. Além disso, a alpinetina apresenta forte atividade antioxidante, em grande parte devido à sua estrutura à base de flavonoides, que lhe permite doar átomos de hidrogênio fenólicos e sequestrar radicais livres reativos de forma eficaz. Adicionalmente, foi demonstrado que a alpinetina regula positivamente a superóxido dismutase 1 (SOD1), a heme oxigenase-1 (HO-1) e a atividade do fator de transcrição fator nuclear eritroide 2–relacionado ao fator 2 (Nrf2), o que contribui para reduzir a gravidade da doença na doença hepática gordurosa associada à disfunção metabólica (MASLD). A via Nrf2 é essencial na proteção das células contra o estresse oxidativo, regulando a expressão de enzimas antioxidantes, incluindo SOD, CAT e GSH-Px. Sob condições de estresse oxidativo, como as induzidas por Rt.MCAO, a interação Nrf2–Keap1 é interrompida, permitindo que o Nrf2 se transloca para o núcleo e ative a transcrição de genes antioxidantes por meio do elemento de resposta antioxidante (ARE). Neste estudo, a Rt.MCAO levou a uma redução acentuada nos níveis hipocampais de SOD, CAT e GSH-Px, refletindo um sistema de defesa antioxidante comprometido, o que está alinhado com achados anteriores que destacam a superprodução de ERO durante a isquemia cerebral. O tratamento com alpinetina e piracetam reverteu efetivamente essas reduções, indicando que ambos os agentes podem potencializar a resposta antioxidante ao modular a atividade do Nrf2. A alpinetina, um flavonoide natural, tem sido relatada como facilitadora da translocação nuclear do Nrf2 e estimuladora da expressão de genes antioxidantes. Enquanto isso, o piracetam — conhecido principalmente por seus efeitos neuroprotetores — pode contribuir para a regulação do Nrf2 indiretamente, estabilizando a função mitocondrial e reduzindo a carga oxidativa. Em conjunto, esses achados sugerem que os efeitos neuroprotetores da alpinetina e do piracetam podem ser mediados, pelo menos em parte, pelo aumento das defesas antioxidantes mediadas pelo Nrf2.
O efeito região-específico da alpinetina nos níveis de MDA pode ser atribuído a diferenças no estresse oxidativo basal, na atividade metabólica ou nos mecanismos de defesa antioxidante entre o hipocampo e o córtex. O hipocampo é particularmente suscetível a danos oxidativos durante a isquemia, o que pode torná-lo mais responsivo à intervenção antioxidante em doses mais baixas. Além disso, a ativação da SOD pode exigir um limiar mais alto de concentração de alpinetina devido a variações na regulação enzimática, localização celular ou sensibilidade ao estresse oxidativo em comparação com GSH-Px e CAT. Esta observação também pode refletir diferenças na afinidade da alpinetina ou de seus metabólitos pelas vias moleculares que regulam cada enzima. São necessárias mais investigações para esclarecer os mecanismos subjacentes dessa resposta diferencial.
Piracetam, um conhecido agente nootrópico, tem sido relatado por melhorar o fluxo sanguíneo cerebral tanto em regiões infartadas quanto nas áreas de penumbra circundantes. Embora seu(s) mecanismo(s) neuroprotetor(es) ainda não tenham sido definitivamente elucidados, hipotetiza-se que o piracetam interaja com os grupos polares das cabeças dos fosfolipídios na membrana celular, melhorando assim a fluidez da membrana. Essa melhora pode sustentar funções essenciais associadas à membrana, como a síntese de ATP, contribuindo, em última análise, para a preservação da viabilidade neuronal.

Pesquisas anteriores indicaram que a administração intraperitoneal de piracetam em doses de 250 ou 500 mg/kg de peso corporal às 6, 9 e 22 horas após o início da oclusão da artéria cerebral pode reduzir significativamente o volume do infarto no tecido cerebral isquêmico. Esses resultados estão alinhados com observações de nossas investigações anteriores. Além disso, nossos relatos anteriores mostraram que o piracetam oferece proteção contra o estresse oxidativo ao aumentar a atividade das enzimas antioxidantes. Devido à sua capacidade demonstrada de reduzir o volume do infarto cerebral e aumentar a atividade das enzimas antioxidantes após a oclusão da artéria cerebral, o piracetam foi selecionado como controle positivo neste estudo.
Estudos anteriores demonstraram que citocinas anti-inflamatórias, como a interleucina-10 (IL-10), podem ajudar a proteger contra a morte neuronal induzida por isquemia ao inibir a ação de citocinas pró-inflamatórias, particularmente o fator de necrose tumoral α (TNF-α), reduzindo assim o volume do infarto cerebral. Além disso, a via de sinalização do fator nuclear kappa B (NF-κB) é um mediador-chave da cascata inflamatória desencadeada pela isquemia cerebral. Durante o acidente vascular cerebral isquêmico, o NF-κB é rapidamente ativado em vários tipos celulares, incluindo neurônios, células gliais e células endoteliais. Essa ativação promove a expressão de mediadores pró-inflamatórios, como citocinas, quimiocinas, moléculas de adesão e enzimas inflamatórias como iNOS e COX-2. Essas alterações contribuem para a ruptura da barreira hematoencefálica, infiltração de células imunes e subsequente dano neuronal, todos os quais agravam os desfechos isquêmicos. Estudos experimentais demonstraram que suprimir a atividade do NF-κB pode reduzir o tamanho do infarto e melhorar a recuperação neurológica, destacando seu potencial terapêutico. Portanto, a modulação da via do NF-κB representa uma abordagem promissora para limitar a neuroinflamação e preservar o tecido cerebral após o acidente vascular cerebral. Além disso, níveis de citocinas pró-inflamatórias como TNF-α, interleucina-1 (IL-1) e interleucina-6 (IL-6) detectados no sangue foram correlacionados com a função motora e o volume do infarto. Este estudo investigou o efeito da alpinetina na expressão de COX-2 e IL-6 (como parte da via anti-inflamatória) no córtex e hipocampo utilizando análise de western blot. Os resultados mostraram que ratos tratados com alpinetina na dose de 100 mg/kg de peso corporal uma vez ao dia durante três dias consecutivos após a oclusão da artéria cerebral média direita (Rt.MCAO) apresentaram uma redução estatisticamente significativa na expressão de COX-2 e IL-6 em comparação com o grupo Rt.MCAO+veículo (p < 0,05). Notavelmente, a alpinetina demonstrou suprimir a neuroinflamação ao modular a ativação microglial e regular negativamente a via de sinalização JAK2/STAT3. Ela também pode neutralizar a produção de ROS induzida por microglia e a redução do potencial de membrana mitocondrial (MMP) em células neuronais PC12. Além disso, um estudo in vivo indica que a alpinetina reduz efetivamente a inflamação e a morte celular neuronal, enquanto promove a reparação axonal e melhora a recuperação da função motora.
Flavonoides são metabólitos secundários pertencentes ao grupo dos polifenóis, comumente encontrados em vegetais, frutas e certas bebidas. Sua principal propriedade farmacológica é a atividade antioxidante, pois ajudam a reduzir o estresse oxidativo. Pesquisas anteriores mostraram que distúrbios neurodegenerativos, incluindo o acidente vascular cerebral (AVC), estão ligados ao aumento da produção de radicais livres e à neuroinflamação.. Esses radicais livres elevados podem estimular a liberação de citocinas pró-inflamatórias, levando à neuroinflamação e subsequente morte neuronal. Portanto, os flavonoides ajudam a mitigar esses processos patológicos, reduzindo a formação de EROs. A alpinetina é um composto flavonoide que possui uma ampla gama de propriedades farmacológicas, incluindo efeitos antioxidantes, anti-inflamatórios e antiapoptóticos. Também oferece proteção às células musculares lisas vasculares (VSMCs), exibe atividade anticancerígena ao inibir a angiogênese tumoral e ajuda a prevenir a doença pulmonar obstrutiva crônica (DPOC). Além disso, a alpinetina tem efeitos protetores nos condrócitos na osteoartrite e demonstra atividade anti-inflamatória na inflamação intestinal. Um estudo de He et al. (2016) investigou os efeitos da alpinetina na colite aguda em camundongos induzida por sulfato de dextrano sódico (DSS). O estudo utilizou alpinetina nas doses de 25, 50 e 100 mg/kg de peso corporal (PC) e constatou que a alpinetina poderia reduzir a inflamação ao inibir as vias de sinalização TLR4 e NLRP3. Além disso, Wu et al. (2020) investigaram o potencial anti-inflamatório da alpinetina em um modelo murino de asma. Seus resultados indicaram que a alpinetina, administrada nas doses de 25, 50 e 100 mg/kg de peso corporal (PC), produziu efeitos anti-inflamatórios notáveis, com a maior dose (100 mg/kg) apresentando a maior eficácia. Isso é consistente com nossos achados atuais.

Uma limitação deste estudo é a curta duração da avaliação dos resultados, que foi limitada a apenas 3 dias após o tratamento e pode não capturar completamente os efeitos neuroprotetores de longo prazo e a recuperação funcional após a administração de alpinetina no modelo de Rt.MCAO. Além disso, o uso exclusivo de ratos machos pode restringir a aplicabilidade dos achados, uma vez que diferenças relacionadas ao sexo na patologia do AVC e na resposta ao tratamento são cada vez mais reconhecidas na pesquisa pré-clínica. Ademais, este estudo não incluiu avaliações comportamentais para avaliar déficits motores, sensoriais ou cognitivos após o AVC. A ausência de tais medidas de desfecho funcional limita a capacidade de caracterizar completamente a extensão do dano neurológico e da recuperação ao longo do tempo. Pesquisas futuras devem estender os períodos de acompanhamento, incluir ambos os sexos e incorporar avaliações comportamentais abrangentes para aumentar a relevância translacional e melhorar a compreensão do potencial terapêutico da alpinetina.

4. Materiais e Métodos
   4.1. Substâncias de Tratamento
   Alpinetina (PubChem ID: 154279), com pureza confirmada de 98% determinada por cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE), foi obtida da Chengdu Biopurify Phytochemicals Ltd. (Sichuan, China) (Figura S1). A estrutura química da alpinetina (C16H14O4) é apresentada na Figura 8. O Piracetam, utilizado como controle positivo neste estudo, foi fornecido pela GlaxoSmithKline (Bangkok, Tailândia) Ltda. O dimetilsulfóxido (DMSO), utilizado como veículo, foi adquirido da Thermo Fisher Scientific (número de catálogo: D/4121/PB15).

4.2. Animais

Ratos Wistar machos, com oito semanas de idade e pesando 250–300 g, serviram como animais experimentais. Esses animais foram provenientes do Centro de Animais de Laboratório do Nordeste da Universidade de Khon Kaen (Khon Kaen, Tailândia). Após a chegada, todos os ratos foram aclimatados por uma semana e alojados em grupos de cinco em gaiolas metálicas padrão medindo 37,5 × 48 × 21 cm³. Eles foram mantidos sob condições laboratoriais controladas, que incluíam um ciclo claro-escuro consistente de 12 horas, uma faixa de umidade relativa de aproximadamente 30–60% e uma temperatura estável de 23 ± 2 °C. Durante todo o estudo, os ratos tiveram acesso irrestrito a água potável e ração peletizada comercial, disponíveis continuamente. Todos os protocolos e procedimentos envolvendo o uso desses animais foram revisados e aprovados pelo Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais da Universidade de Khon Kaen, Tailândia (número de aprovação: IACUC-KKU-95/64).

4.3. Modelo de Oclusão da Artéria Cerebral Média Direita (Rt.MACO)

Antes da cirurgia, todos os ratos foram submetidos a jejum noturno com acesso irrestrito à água. A anestesia foi iniciada com 5% de isoflurano e mantida com 1–3% de isoflurano em oxigênio a 100%. A isquemia cerebral focal permanente foi produzida ocluindo a artéria cerebral média direita usando um método intraluminal de acordo com os procedimentos padrão. Um monofilamento 4-0 revestido de silicone (USS DGTM, United States Surgical; Tyco Healthcare Group LP, Norwalk, CT, EUA) foi inserido na artéria carótida interna até uma profundidade de aproximadamente 17 mm ou até que uma leve resistência fosse sentida. Após o procedimento, a incisão cirúrgica foi fechada com suturas e desinfetada com iodopovidona a 10%. No grupo sham, as artérias foram expostas da mesma forma, mas nenhum filamento foi inserido. Os pontos finais humanitários incluíram sinais como imobilidade, infecção da ferida cirúrgica, perda de peso superior a 20%, desidratação, desconforto respiratório, dor contínua, falta de resposta a estímulos externos ou sangramento por qualquer orifício. Nenhum animal atingiu os critérios de ponto final humanitário, e todos sobreviveram durante o período de observação de 4 dias.

4.4. Tratamento dos Animais

Grupo de operação simulada (sham): Este grupo foi submetido à cirurgia simulada sem inserção do fio de nylon e não recebeu nenhum tratamento.
Grupo tratado com Rt.MCAO + veículo: Neste grupo, todos os animais foram submetidos à Rt.MCAO utilizando o mesmo procedimento descrito acima. Eles receberam apenas o veículo, que neste estudo foi o dimetilsulfóxido (DMSO), administrado por via intraperitoneal (i.p.) em um volume de 0,5 mL uma vez ao dia durante três dias consecutivos. Este grupo serviu como controle veículo para avaliar os efeitos do solvente.
Grupo tratado com Rt.MCAO + piracetam 250 mg/kg PC: Todos os animais deste grupo foram submetidos à Rt.MCAO e tratados com piracetam na dose de 250 mg/kg de peso corporal (PC), administrado por via i.p. uma vez ao dia durante três dias consecutivos. Este grupo serviu como controle positivo.
Grupo tratado com Rt.MCAO + ALP 25 mg/kg PC: Todos os animais deste grupo foram submetidos à Rt.MCAO e tratados com alpinetina na dose de 25 mg/kg PC. O tratamento foi administrado por via i.p. uma vez ao dia durante três dias consecutivos.
Grupo tratado com Rt.MCAO + ALP 50 mg/kg PC: Todos os animais deste grupo foram submetidos à Rt.MCAO e tratados com alpinetina na dose de 50 mg/kg PC. O tratamento foi administrado por via i.p. uma vez ao dia durante três dias consecutivos.
Grupo tratado com Rt.MCAO + ALP 100 mg/kg PC: Todos os animais deste grupo foram submetidos à Rt.MCAO e tratados com alpinetina na dose de 100 mg/kg PC. O tratamento foi administrado por via i.p. uma vez ao dia durante três dias consecutivos.
Noventa ratos Wistar machos saudáveis, conforme mencionado na seção acima, foram divididos aleatoriamente em seis grupos experimentais, com quinze ratos designados para cada grupo (n = 15), da seguinte forma (Tabela 1):
Após completar o período experimental de 3 dias, os volumes de infarto foram avaliados em 5 ratos por grupo usando coloração com TTC. Outro conjunto de 5 ratos por grupo foi utilizado para avaliar a densidade neuronal através da coloração com violeta de cresila do córtex cerebral e hipocampo. Os 5 ratos restantes em cada grupo foram submetidos a ensaios bioquímicos para medir os níveis de MDA e as atividades de CAT, GSH-Px e SOD no córtex cerebral e hipocampo. Além disso, os níveis de expressão de IL-6 e COX-2 foram quantificados no córtex e hipocampo dos ratos que receberam as doses mais eficazes de alpinetina, que apresentaram o maior impacto no volume de infarto, densidade neuronal e indicadores de estresse oxidativo.
4.5. Avaliação do Volume de Infarto Cerebral
Ao final do estudo, os ratos foram perfundidos com solução salina normal gelada. Os cérebros foram cuidadosamente extraídos dos crânios, e o volume de infarto foi avaliado seguindo o método descrito em nosso trabalho anterior. Resumidamente, cada cérebro foi seccionado em fatias coronais de 2 mm de espessura usando uma matriz cerebral e, em seguida, corado com cloreto de 2,3,5-trifeniltetrazólio (TTC) a 2% em solução salina normal a 37 °C por 30 min. Imagens das seções coradas com TTC foram capturadas, e as áreas infartadas foram quantificadas usando o software ImageJ® (versão 1.53e, National Institutes of Health) com base na fórmula especificada.
4.6. Avaliação da Densidade Neuronal
Secções coronais seriadas (30 µm de espessura) do córtex e hipocampo foram coradas com violeta de cresila para avaliar a densidade neuronal. Regiões específicas do córtex e hipocampo (CA1 e CA3) foram examinadas utilizando um microscópio óptico Olympus CX23 (M/S. Magnus Opto Systems India Pvt. Ltd., Nova Deli, Índia). Quatro secções coronais contendo tanto o córtex quanto o hipocampo foram selecionadas com base em coordenadas estereotáxicas, seguindo o método descrito em nosso estudo anterior. Um investigador cego para os grupos de tratamento examinou a densidade neuronal sob ampliação de 40×. Os resultados foram expressos como porcentagem relativa ao grupo controle.
4.7. Quantificação de Proteínas
Os níveis de proteínas no córtex e hipocampo foram quantificados utilizando o ensaio de Lowry, seguindo protocolos estabelecidos. Curvas de calibração foram geradas usando albumina sérica bovina (MilliporeSigma, Burlington, MA, EUA) como padrão. A absorbância foi medida a 650 nm utilizando um leitor de microplacas.
4.8. Determinação do Nível de MDA
O ensaio de MDA baseia-se na formação de um aduto colorido entre o malondialdeído, um marcador de peroxidação lipídica, e o ácido tiobarbitúrico (TBA) quando submetido a temperatura elevada e condições ácidas. As concentrações de MDA em amostras de tecido cerebral foram medidas utilizando o ensaio do ácido tiobarbitúrico (TBA), baseado no método descrito por Ohkawa et al. Resumidamente, os homogenatos de tecido foram combinados com dodecil sulfato de sódio (SDS), ácido acético e TBA, e então incubados a 95 °C por uma hora para permitir a formação do aduto MDA-TBA. Após resfriamento, a mistura reacional foi extraída com uma solução de n-butanol/piridina e centrifugada. A absorbância da fase orgânica resultante foi lida a 532 nm utilizando um espectrofotômetro. Os níveis de MDA foram quantificados por comparação com uma curva padrão gerada usando 1,1,3,3-tetrametoxipropano (TMP), e os resultados foram normalizados para o conteúdo total de proteínas e expressos como nmol/mg de proteína.
4.9. Determinação da Atividade de CAT
O ensaio de CAT mede a capacidade da enzima de decompor o peróxido de hidrogênio (H2O2) em água e oxigênio. O declínio na concentração de H2O2 ao longo do tempo serve como um indicador da atividade de CAT. A atividade de CAT foi medida primeiro homogeneizando o tecido cerebral em tampão fosfato, mantendo as amostras no gelo para evitar a degradação enzimática. Os homogenatos foram então centrifugados, e o sobrenadante contendo catalase foi coletado. Uma mistura reacional foi preparada combinando o sobrenadante com tampão fosfato e H2O2. A mudança na absorbância a 240 nanômetros foi imediatamente registrada utilizando um espectrofotômetro, de acordo com o método descrito por Goldblith e Proctor. A atividade da catalase foi expressa como unidades por miligrama de proteína (unidades/mg de proteína).
4.10. Determinação da Atividade de GSH-Px
A atividade da GSH-Px foi determinada utilizando um kit de ensaio comercial da MilliporeSigma (número de catálogo: MAK437-1KT). Este ensaio mede a função da enzima em catalisar a redução de H2O2 ou hidroperóxidos orgânicos em água ou álcoois correspondentes, utilizando glutationa reduzida (GSH) como substrato. Durante a reação, a GSH é convertida em sua forma oxidada, dissulfeto de glutationa (GSSG), que é então reciclada de volta para GSH pela glutationa redutase na presença de nicotinamida adenina dinucleotídeo fosfato (NADPH). O consumo de NADPH é monitorado pela diminuição da absorbância a 340 nm usando um espectrofotômetro. Tecidos cerebrais de ratos foram homogeneizados e centrifugados a 10.000× g por 10 min a 4 °C para isolar o sobrenadante contendo a enzima. Este sobrenadante foi combinado com tampão fosfato, glutationa redutase, NADPH e peróxido de hidrogênio para iniciar a reação. A taxa de oxidação do NADPH, refletida pelo declínio na absorbância, foi usada para calcular a atividade da GSH-Px, expressa em unidades/mg de proteína.

4.11. Determinação da Atividade da SOD
O princípio do ensaio de SOD baseia-se na capacidade da enzima de catalisar a dismutação dos radicais superóxido (O2−) em oxigênio e peróxido de hidrogênio, reduzindo assim a concentração de superóxido na mistura reacional. Neste ensaio colorimétrico, a atividade da SOD no córtex e hipocampo foi avaliada utilizando o kit Sigma-Aldrich (19160-1K-F) (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO, EUA), seguindo o protocolo do fabricante para preparação dos reagentes. As amostras foram diluídas adequadamente e os controles foram preparados conforme necessário. Em uma placa de 96 poços, volumes especificados do substrato fornecido foram dispensados, seguidos pela adição do tampão de reação, depois das amostras teste, padrões ou controles. A reação foi iniciada adicionando o reagente de detecção, misturando suavemente e incubando a placa a 37 °C por 20 min. A absorbância foi então registrada a 450 nm usando um leitor de microplacas. Cada medição foi realizada em duplicata e os resultados foram relatados como unidades/mg de proteína.

4.12. Análise de Western Blot
Ao final do estudo, os níveis proteicos de COX-2 e IL-6 no córtex e hipocampo foram avaliados por western blotting, seguindo o método previamente descrito em nosso trabalho anterior. Resumidamente, quantidades iguais de proteína foram separadas em géis de SDS-poliacrilamida a 10% e transferidas para membranas de PVDF (Hybond-P; GE Healthcare Limited, Amersham Place, Little Chalfont, Buckinghamshire, Reino Unido). Para bloquear ligações inespecíficas, as membranas foram incubadas com leite desnatado a 5% em TBS-T (Tween-20 a 0,1% em solução salina tamponada com Tris, pH 7,4) por 1 h à temperatura ambiente. Após o bloqueio, as membranas foram incubadas durante a noite a 4 °C com anticorpos primários monoclonais de coelho anti-COX-2 (1:1000), de camundongo anti-IL-6 (1:2000) e de coelho anti-β-actina (1:5000). Após três lavagens de 5 min com TBS-T, as membranas foram incubadas por 1 h à temperatura ambiente com anticorpos secundários anti-IgG de coelho ou de camundongo conjugados à peroxidase (1:2000). As bandas proteicas foram visualizadas usando um substrato de detecção quimioluminescente (Supersignal West Pico, Pierce, Rockford, IL, EUA). As intensidades das bandas para COX-2 e IL-6 foram normalizadas em relação à β-actina, e os níveis de expressão proteica foram quantificados usando o sistema de imageamento ChemiDoc™ MP com o software Image Lab (versão 6.0.0 build 25, Bio-Rad Laboratories Inc., Hercules, CA, EUA).
4.13. Análise Estatística
Os resultados são apresentados como média ± erro padrão da média (EPM). Antes de realizar os testes estatísticos, a normalidade dos dados foi avaliada pelo teste de Shapiro–Wilk. Dado que os dados se conformaram a uma distribuição normal, as diferenças entre os grupos foram analisadas por análise de variância de uma via (ANOVA), que é adequada para comparar múltiplos grupos independentes com dados normalmente distribuídos. Quando a ANOVA revelou diferenças significativas, o teste post hoc de Tukey foi aplicado para realizar comparações pareadas. Todas as análises estatísticas foram realizadas usando o software SPSS® versão 25 (IBM Inc., Chicago, IL, EUA), com significância estabelecida em p < 0,05.
5. Conclusões
Em conclusão, a alpinetina demonstrou efeitos neuroprotetores significativos em um modelo de isquemia cerebral em ratos, reduzindo o tamanho do infarto, preservando a densidade neuronal e restaurando as atividades das enzimas antioxidantes. Além disso, a alpinetina suprimiu efetivamente a expressão dos marcadores pró-inflamatórios COX-2 e IL-6. Esses achados indicam que a alpinetina exerce seus efeitos protetores por meio de mecanismos antioxidantes e anti-inflamatórios e apresenta potencial como agente terapêutico para o tratamento do acidente vascular cerebral isquêmico. Estudos adicionais são necessários para elucidar as vias moleculares precisas subjacentes a esses efeitos farmacológicos.
Isenção de responsabilidade/Nota do Editor: As declarações, opiniões e dados contidos em todas as publicações são de responsabilidade exclusiva do(s) autor(es) e colaborador(es) individual(is) e não do MDPI e/ou do(s) editor(es). O MDPI e/ou o(s) editor(es) se isentam de responsabilidade por qualquer dano a pessoas ou propriedades decorrente de quaisquer ideias, métodos, instruções ou produtos mencionados no conteúdo.
Materiais Suplementares
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Contribuições dos Autores
Conceituação, R.K. e J.J.; metodologia, R.K., S.T. e J.J.; validação, R.K. e J.J.; análise formal, R.K. e J.J.; investigação, R.K., S.T. e J.J.; recursos, J.J.; curadoria de dados, J.J.; redação—preparação do rascunho original, R.K., S.T. e J.J.; redação—revisão e edição, R.K., S.T. e J.J.; visualização, R.K. e J.J.; supervisão, J.J.; administração do projeto, J.J.; aquisição de financiamento, J.J. Todos os autores leram e concordaram com a versão publicada do manuscrito.
Declaração do Comitê de Ética em Pesquisa Institucional
Esta pesquisa foi aprovada pelo Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais da Universidade de Khon Kaen, Khon Kaen, Tailândia (Registro nº IACUC-KKU-95/64).
Declaração de Consentimento Informado
Não aplicável.
Declaração de Disponibilidade de Dados
Os dados apresentados neste estudo estão disponíveis mediante solicitação razoável ao autor correspondente.
Conflitos de Interesse
Os autores declaram não haver conflitos de interesse.
Referências
Epidemiologia, Fisiopatologia e Estratégias Atuais de Tratamento no Acidente Vascular Cerebral
Epidemiologia, organização, diagnóstico e tratamento do acidente vascular cerebral isquêmico agudo
Fisiopatologia do acidente vascular cerebral isquêmico e sua modulação com memantina: Evidências de estudos pré-clínicos
Direcionamento da expressão de enzimas antioxidantes como estratégia terapêutica para o acidente vascular cerebral isquêmico
Papel do Estresse Oxidativo na Disrupção da Barreira Hematoencefálica e Doenças Neurodegenerativas
O papel do estresse oxidativo na disrupção da barreira hematoencefálica durante o acidente vascular cerebral isquêmico: Antioxidantes em ensaios clínicos
Estresse oxidativo e inflamação na patogênese de distúrbios neurológicos: Mecanismos e implicações
A Influência dos Marcadores de Estresse Oxidativo em Pacientes com Acidente Vascular Cerebral Isquêmico
O Papel de Potenciais Biomarcadores Oxidativos no Prognóstico do Acidente Vascular Cerebral Isquêmico Agudo e a Exploração de Antioxidantes como Possíveis Opções Preventivas e Terapêuticas
O Papel dos Biomarcadores IL-6 e TNF-Alfa na Predição de Desfechos de Incapacidade em Pacientes com Acidente Vascular Cerebral Isquêmico Agudo
O Papel da IL-6 no Acidente Vascular Cerebral Isquêmico
Inflamação e Risco de Acidente Vascular Cerebral: Um Novo Alvo para Prevenção
Inflamação no acidente vascular cerebral isquêmico: Mecanismos, consequências e possíveis alvos medicamentosos
Papel Neuroprotetor da Galangina: Direcionamento do Estresse Oxidativo, Inflamação e Apoptose no Acidente Vascular Cerebral Isquêmico em um Modelo de Rato com Oclusão Permanente da Artéria Cerebral Média
Efeitos ameliorativos do 6-gingerol na isquemia cerebral são mediados pela ativação de vias antioxidantes e anti-inflamatórias
Flavonoides Derivados da Medicina Chinesa: Potenciais Agentes Neuroprotetores
Flavonoides e seu papel no estresse oxidativo, inflamação e doenças humanas
O potencial neuroprotetor dos flavonoides: Uma multiplicidade de efeitos
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Prunina: Um flavonoide anticancerígeno emergente
Quercetina atenua a lesão de isquemia-reperfusão protegendo a barreira hematoencefálica via Sirt1 em ratos MCAO
Quercetina atenua a expressão de COX-2 e MPO induzida por isquemia-reperfusão na mucosa do intestino delgado
Baicaleína exerce efeito neuroprotetor contra lesão isquêmica/reperfusão via alteração das vias NF-kB e LOX e AMPK/Nrf2
Alpinetina: Uma revisão de sua farmacologia e farmacocinética
Alpinetina exibe efeitos antioxidantes e anti-inflamatórios em camundongos C57BL/6 com doença hepática alcoólica induzida pela dieta líquida de etanol Lieber-DeCarli
Alpinetina protege condrócitos e exibe efeitos anti-inflamatórios via via NF-kappaB/ERK para aliviar a osteoartrite
Alpinetina previne respostas inflamatórias na asma alérgica induzida por OVA através da modulação das vias de sinalização PI3K/AKT/NF-kappaB e HO-1 em camundongos
Alpinetina: Um flavonoide dietético com diversos efeitos anticancerígenos
Neuroinflamação: Amiga e inimiga do acidente vascular cerebral isquêmico
Avanços na terapia do AVC
Prevenção do AVC
Desfecho e função do membro superior dentro de 72 horas após a primeira ocorrência de AVC em uma população não selecionada em uma unidade de AVC. Uma parte do estudo SALGOT
A ausência do fator inibitório da migração de macrófagos em camundongos não afeta os marcos da resposta inflamatória/imune durante a primeira semana após o AVC
Indicadores sanguíneos periféricos da resposta inflamatória durante as primeiras vinte e quatro horas do AVC isquêmico
Triângulo neuroinflamatório apresentando novos alvos farmacológicos para lesão cerebral isquêmica
Os efeitos dos flavonoides nas doenças cardiovasculares
Efeitos vasorrelaxantes da cardamonina e alpinetina de Alpinia henryi K. Schum
Compreendendo a fisiopatologia do AVC isquêmico: A base das terapias atuais e oportunidade para novas
Vida ou morte: Efeitos neuroprotetores e anticancerígenos da quercetina
Resveratrol protege astrócitos contra lesão cerebral traumática através da inibição da morte celular apoptótica e autofágica
Resveratrol protege contra lesão cerebral isquêmica global em gerbos
Efeito da galangina no estresse oxidativo, defesas antioxidantes e dinâmica mitocondrial em um modelo de isquemia cerebral focal em ratos
Dieta, estresse oxidativo e MAFLD: Uma mini revisão
Nrf2 e estresse oxidativo: Uma visão geral dos mecanismos e implicações nas doenças humanas
Papel do Nrf2 no estresse oxidativo e toxicidade
Estresse oxidativo e fisiopatologia do AVC isquêmico: Novas oportunidades terapêuticas
Estresse oxidativo no dano cerebral isquêmico: Mecanismos de morte celular e potenciais alvos moleculares para neuroproteção
A alpinetina exerce efeitos anti-inflamatórios, antioxidantes e antiangiogênicos através da ativação da via Nrf2 e inibição da via NLRP3 na fibrose hepática induzida por tetracloreto de carbono
O piracetam mitiga a nefrotoxicidade induzida pela cisplatina através das vias de sinalização PI3K/Akt e MAPK/JNK/ERK mediadas por AMPK
Uma revisão sistemática e meta-análise da eficácia do piracetam e compostos similares ao piracetam no acidente vascular cerebral experimental
O 2-oxopirrolidinacetamida piracetam reduz o volume do infarto cerebral induzido pela oclusão permanente da artéria cerebral média em ratos machos
A dihidrocapsaicina mitiga eficazmente as alterações patológicas induzidas pela isquemia cerebral in vivo, em parte através de vias antioxidantes e antiapoptóticas
O impacto das citocinas no acidente vascular cerebral mediado por neuroinflamação
Efeito protetor dos comprimidos Liujing Toutong em ratos com isquemia cerebral permanente através da via de sinalização NF-kappaB
O fator de transcrição nuclear kappa B é ativado em neurônios após isquemia cerebral focal
O Efeito da Sinvastatina na Dinâmica dos Processos Neurodegenerativos e Neuroprotetores Regulados por NF-kappaB na Fase Aguda do Acidente Vascular Cerebral Isquêmico
O fator nuclear kappaB contribui para o infarto após isquemia focal permanente
Biomarcadores inflamatórios no sangue de pacientes com isquemia cerebral aguda
A alpinetina inibe a neuroinflamação e a apoptose neuronal através do direcionamento da via de sinalização JAK2/STAT3 na lesão da medula espinhal
Papel dos flavonoides no estresse oxidativo
Papel das citocinas e espécies reativas de oxigênio no envelhecimento cerebral
Papel da neuroinflamação no desenvolvimento da neurodegeneração
Efeitos da alpinetina nas células musculares lisas vasculares de ratos
Efeito protetor da Alpinetina em ratos com doença pulmonar obstrutiva crônica
A alpinetina exerce eficácia anticolite ativando AhR, regulando os sinais miR-302/DNMT-1/CREB e, portanto, promovendo a diferenciação de Treg
A alpinetina atenua as respostas inflamatórias suprimindo as vias de sinalização TLR4 e NLRP3 na colite aguda induzida por DSS
A Acupuntura a Laser no Ponto Baihui Melhora o Comprometimento Cognitivo, o Déficit Motor e a Perda Neuronal em Parte por Efeitos Antioxidantes e Anti-Inflamatórios em um Modelo Animal de Acidente Vascular Cerebral Isquêmico Focal
Zingiber officinale Mitiga o Dano Cerebral e Melhora o Comprometimento da Memória em Rato com Isquemia Cerebral Focal
Medição de proteínas com o reagente de Folin-fenol
Ensaio de peróxido lipídico em tecidos animais pela reação do ácido tiobarbitúrico
Determinação fotométrica da atividade da catalase
Efeito da alpinetina no volume do infarto cerebral. (A) Efeito da alpinetina no volume do infarto em ratos com isquemia cerebral. Os dados são apresentados como média ± E.P.M. (n = 5). * p < 0,05 em comparação ao grupo de operação simulada; # p < 0,05 em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo. (B) Imagens representativas de secções cerebrais coradas com cloreto de trifeniltetrazólio (TTC) de cada grupo de tratamento. A coloração escura indica tecido viável, enquanto a ausência de coloração denota áreas infartadas. Rt.MCAO, oclusão da artéria cerebral média direita; PC, peso corporal; ALP, alpinetina.
Efeito da alpinetina na densidade neuronal no córtex e hipocampo. (A) Gráfico representando a densidade neuronal no córtex e nas regiões CA1 e CA3 do hipocampo. (B) Imagens representativas de secções coronais coradas com Nissl da região CA3 de cérebros de ratos, obtidas com aumento de 40×. Os dados são apresentados como média ± E.P.M. (n = 5). * p < 0,05 em comparação ao grupo de operação simulada; # p < 0,05 em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo. Rt.MCAO, oclusão da artéria cerebral média direita; PC, peso corporal; ALP, alpinetina.
Efeito da alpinetina nos níveis de MDA no córtex e hipocampo. Os dados são apresentados como média ± E.P.M. (n = 5). * p < 0,05 em comparação ao grupo de operação simulada; # p < 0,05 em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo. MDA, malondialdeído; Rt.MCAO, oclusão da artéria cerebral média direita; PC, peso corporal; ALP, alpinetina.
Efeito da alpinetina na atividade da CAT no córtex e hipocampo. Os resultados são apresentados como média ± E.P.M. (n = 5). * p < 0,05 em comparação ao grupo de operação simulada; # p < 0,05 em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo. CAT, catalase; Rt.MCAO, oclusão da artéria cerebral média direita; PC, peso corporal; ALP, alpinetina.
Efeitos da alpinetina na atividade da GSH-Px no córtex e hipocampo. Os dados são apresentados como média ± E.P.M. (n = 5). * p < 0,05 versus o grupo de operação simulada; # p < 0,05 versus o grupo Rt.MCAO+veículo. GSH-Px, glutationa peroxidase; Rt.MCAO, oclusão da artéria cerebral média direita; PC, peso corporal; ALP, alpinetina.
Efeitos da alpinetina na atividade da SOD no córtex e hipocampo. O tratamento com alpinetina aumentou acentuadamente a atividade da SOD. Os dados são apresentados como média ± E.P.M. (n = 5). * p < 0,05 em comparação ao grupo de operação simulada; # p < 0,05 em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo. SOD, superóxido dismutase; Rt.MCAO, oclusão da artéria cerebral média direita; PC, peso corporal; ALP, alpinetina.
Os níveis de expressão de COX-2 e IL-6 no córtex cerebral e hipocampo de ratos dos grupos de operação simulada (sham-operated), Rt.MCAO+veículo, Rt.MCAO+piracetam (250 mg/kg PC) e Rt.MCAO+ALP (100 mg/kg PC) foram avaliados por meio de análise de Western blot. (A) Imunoblotas representativas mostrando a expressão de COX-2 (74 kDa) e IL-6 (25 kDa) no córtex cerebral, com β-actina (41 kDa) servindo como controle de carga. (B) Análise quantitativa da expressão de COX-2 normalizada para β-actina. (C) Análise quantitativa da expressão de IL-6 normalizada para β-actina. Os dados são apresentados como média ± E.P.M. (n = 5). * p < 0,05 em comparação ao grupo de operação simulada; # p < 0,05 em comparação ao grupo Rt.MCAO+veículo. COX-2, ciclooxigenase-2; IL-6, interleucina-6; Rt.MCAO, oclusão da artéria cerebral média direita; PC, peso corporal; ALP, alpinetina.

A estrutura química da alpinetina (7-hidroxi-5-metoxiflavanona; C16H14O4).

Resumo dos grupos experimentais e tratamentos.

Número do Grupo Nome do Grupo Tratamento Dose (mg/kg PC) Via de Administração 1 Grupo de operação simulada - - - 2 Grupo tratado com Rt.MCAO+veículo veículo 1% DMSO i.p. 3 Grupo tratado com Rt.MCAO+piracetam 250 mg/kg PC piracetam 250 mg/kg PC i.p. 4 Grupo tratado com Rt.MCAO+ALP 25 mg/kg PC alpinetina 25 mg/kg PC i.p. 5 Grupo tratado com Rt.MCAO+ALP 50 mg/kg PC alpinetina 50 mg/kg PC i.p. 6 Grupo tratado com Rt.MCAO+ALP 100 mg/kg PC alpinetina 100 mg/kg PC i.p.