pmid: "37373160"
title: "Autoanticorpos Anti-Ilhotas no Diabetes Tipo 1"
authors: "Kawasaki E"
journal: "International journal of molecular sciences"
pubdate: "2023 Jun 11"
doi: "10.3390/ijms241210012"
source: "PMC Full Text"

Autoanticorpos Anti-Ilhotas no Diabetes Tipo 1

Autores

Kawasaki E

Periodico

International journal of molecular sciences (2023 Jun 11)

Conteudo

Autoanticorpos Anti-Ilhotas no Diabetes Tipo 1
Os autoanticorpos anti-ilhotas servem como marcadores-chave no diabetes tipo 1 (DT1) de mediação imune e no DT1 de progressão lenta (SPIDDM), também conhecido como diabetes autoimune latente em adultos (LADA). Autoanticorpos contra insulina (IAA), ácido glutâmico descarboxilase (GADA), proteína tipo fosfatase de tirosina IA-2 (IA-2A) e transportador de zinco 8 (ZnT8A) são atualmente empregados no diagnóstico, análise patológica e predição do DT1. O GADA também pode ser detectado em pacientes não diabéticos com doenças autoimunes que não o DT1 e pode não refletir necessariamente a insulite. Por outro lado, o IA-2A e o ZnT8A servem como marcadores substitutos da destruição das células β pancreáticas. Uma análise combinatória desses quatro autoanticorpos anti-ilhotas demonstrou que 93–96% dos casos de DT1 de início agudo e SPIDDM foram diagnosticados como DT1 de mediação imune, enquanto a maioria dos casos de DT1 fulminante foi negativa para autoanticorpos. Avaliar os epitopos e as subclasses de imunoglobulinas dos autoanticorpos anti-ilhotas ajuda a distinguir entre autoanticorpos associados ao diabetes e não associados ao diabetes, e é valioso para prever deficiência futura de insulina em pacientes com SPIDDM (LADA). Além disso, o GADA em pacientes com DT1 e doença tireoidiana autoimune revela a expansão policlonal de epitopos de autoanticorpos e subclasses de imunoglobulinas. Avanços recentes nos ensaios de autoanticorpos anti-ilhotas incluem ensaios de fase líquida não radioativos e a determinação simultânea de múltiplos autoanticorpos bioquimicamente definidos. O desenvolvimento de um ensaio de alto rendimento para detectar autoanticorpos específicos de epitopos ou específicos de isotipos de imunoglobulinas facilitará um diagnóstico e predição mais precisos de distúrbios autoimunes. O objetivo desta revisão é resumir o que se sabe sobre o significado clínico dos autoanticorpos anti-ilhotas na patogênese e no diagnóstico do DT1.

1. Introdução
   O diabetes mellitus é um distúrbio metabólico crônico caracterizado por hiperglicemia, e é classificado em quatro categorias: diabetes tipo 1 (DT1), diabetes tipo 2 (DT2), tipos específicos de diabetes devido a outras causas e diabetes gestacional. Pacientes com hiperglicemia não tratada ou não controlada por um período prolongado podem desenvolver complicações microvasculares e macrovasculares, como neuropatia diabética, retinopatia, nefropatia, doença cardiovascular e cerebrovascular e doença vascular periférica. Consequentemente, a detecção precoce ou predição do início do diabetes e a intervenção oportuna com medicamentos apropriados, juntamente com terapia nutricional médica e exercícios, são cruciais.
   O DM1 é uma doença autoimune órgão-específica caracterizada pela destruição das células β pancreáticas, levando à deficiência absoluta de insulina. Evidências que apoiam a base autoimune do DM1 incluem: (i) a presença de infiltração linfocitária ao redor e dentro das ilhotas (denominada insulite), (ii) o aparecimento de autoanticorpos contra múltiplos autoantígenos das ilhotas, (iii) a presença de genes de susceptibilidade à doença ligados ao complexo principal de histocompatibilidade (MHC) e não ligados ao MHC, e (iv) a maior propensão a desenvolver múltiplas doenças autoimunes órgão-específicas.

O risco de desenvolver DM1 varia consideravelmente de acordo com o país de residência e etnia, sendo o Japão um dos países com as menores taxas de incidência de DM1 no mundo. Essa variação pode ser atribuída a diferenças na bagagem genética e em fatores ambientais. Na classificação etiológica atual do diabetes, o DM1 é dividido em tipos imunomediado e idiopático, distinguidos unicamente pela presença ou ausência de autoanticorpos anti-ilhotas no sangue periférico. Além disso, com base na taxa de destruição das células β, existem três subtipos de DM1: DM1 fulminante, DM1 de início agudo e DM1 de progressão lenta (SPIDDM), também conhecido como diabetes autoimune latente em adultos (LADA). Como se sabe que os autoanticorpos anti-ilhotas aparecem antes do início da doença, eles servem como importantes marcadores imunes humorais para predizer e diagnosticar o DM1. O objetivo desta revisão é descrever o que se sabe sobre o significado clínico dos autoanticorpos anti-ilhotas na patogênese e no diagnóstico do DM1, e nossos achados recentes sobre a predição de deficiência futura de insulina em pacientes com SPIDDM (LADA) são destacados.

2. História da Descoberta dos Autoanticorpos Anti-Ilhotas

A descoberta dos anticorpos de células das ilhotas (ICA) como os primeiros autoanticorpos anti-ilhotas no DM1 foi feita por Bottazzo e colaboradores em 1974. A detecção de ICA envolvia o uso de imunofluorescência indireta em cortes de pâncreas congelado de sangue humano do grupo O, que podem reconhecer vários autoantígenos. Em 1982, Baekkeskov e colaboradores descobriram autoanticorpos contra uma proteína das ilhotas com peso molecular de 64.000 (anticorpo 64 kDa) usando o método de imunoprecipitação e células das ilhotas humanas marcadas com 35S-metionina. Além disso, em 1983, Palmer e colaboradores relataram o autoanticorpo anti-insulina (IAA) em pacientes com DM1 de início recente sem uso prévio de insulina, medido por ensaio competitivo de polietilenoglicol usando insulina humana monoidada 125I-Tyr A14.
Para superar a limitação do ensaio ICA, como ser demorado, exigir tecido pancreático humano e dificultar a obtenção de resultados quantitativos, esforços extensos foram feitos para identificar antígenos-alvo contra a ICA usando técnicas moleculares avançadas, como clonagem molecular, eletroforese em gel, reação em cadeia da polimerase e análise de microarranjo de DNA. Até o momento, mais de 10 antígenos-alvo foram descobertos (Tabela 1). Após identificar a proteína das ilhotas de 64kDa como ácido glutâmico descarboxilase (GAD) em 1990, vários autoanticorpos (Figura 1) foram descobertos. Atualmente, além dos autoanticorpos IAA e GAD (GADA), os autoanticorpos contra a proteína tirosina fosfatase-like IA-2 (IA-2A) e os autoanticorpos contra o transportador de zinco 8 (ZnT8A) são utilizados para o diagnóstico, análise patológica e predição do T1D. Além disso, os métodos de detecção evoluíram da coloração imunohistoquímica usada na ICA para o radioimunoensaio (RIA), ensaio imunoenzimático (ELISA) e ensaio de eletroquimioluminescência (ECL) usando autoantígenos recombinantes produzidos por sistemas de expressão procarióticos e eucarióticos ou sistema de transcrição/tradução in vitro.

3. Fisiopatologia da Geração de Autoanticorpos Anti-Ilhotas

Embora o papel das células B na patogênese do T1D tenha sido extensivamente estudado em camundongos não obesos diabéticos (NOD), um modelo animal de T1D humano, o mecanismo de geração de autoanticorpos anti-ilhotas em humanos permanece amplamente inexplorado e atualmente é desconhecido. No entanto, supõe-se que o background genético, como o gene MHC classe II, o gene da proteína tirosina fosfatase tipo 22 e o gene do receptor α da interleucina-2, e fatores ambientais estejam associados à geração de autoanticorpos anti-ilhotas. Em camundongos NOD, foi relatado que a fuga de células T específicas das ilhotas para a periferia reduziu o número e a função das células T reguladoras, e o aumento da produção de células B autorreativas são considerados papéis-chave na geração de autoanticorpos anti-ilhotas. Pinto e colaboradores relataram que o aumento do número de células B do timo e a formação de centros germinativos tímicos levam a um aumento substancial nos níveis de autoanticorpos intratímicos, resultando na perda de certas células epiteliais tímicas medulares, uma diminuição da seleção negativa de células T autorreativas e uma sobrevida aumentada de timócitos reativos à insulina.

4. Localização e Função dos Autoantígenos contra Autoanticorpos Anti-Ilhotas

Insulina

A insulina é um hormônio peptídico convertido a partir da pró-insulina nas células β pancreáticas. A pró-insulina consiste em uma cadeia A (21 aminoácidos), uma cadeia B (30 aminoácidos) e um peptídeo C (31 aminoácidos), e a insulina madura é gerada após o peptídeo C ser excisado por uma série de clivagens proteolíticas. A função da insulina é regular os níveis de glicose no sangue e induzir o armazenamento de glicose no fígado, músculos e tecido adiposo.
GAD é uma enzima limitante da taxa que catalisa uma reação de descarboxilação para produzir o neurotransmissor ácido γ-aminobutírico a partir do L-glutamato. Existem duas isoformas de GAD, GAD65 (585 aminoácidos) e GAD67 (594 aminoácidos), ambas abundantes no sistema nervoso central e nas ilhotas pancreáticas. Nas células β pancreáticas, GAD65 e GAD67 estão localizadas nas vesículas semelhantes a sinapses e no citosol, respectivamente.

IA-2 e IA-2β/fogrina
IA-2 (também conhecida como ICA512) é uma glicoproteína transmembrana da família das proteínas tirosina fosfatases (PTP) que colocaliza com IA-2β/fogrina e é expressa nas membranas dos grânulos secretores de insulina nas células β pancreáticas. IA-2 consiste em 979 aminoácidos e IA-2β/fogrina consiste em 1015 aminoácidos. Ambos os polipeptídeos regulam o conteúdo dos grânulos secretores de insulina e o crescimento das células β pancreáticas.

ZnT8
ZnT8, um membro da família de transportadores de zinco, está especificamente localizado na membrana dos grânulos secretores de insulina das células β pancreáticas e consiste em 369 aminoácidos. ZnT8 é responsável pelo transporte do influxo de zinco do citoplasma para os grânulos de insulina, facilitando a formação de hexâmeros de insulina. Os íons de zinco transportados para a cavidade dos grânulos secretores de insulina por ZnT8 são usados para estabilizar os hexâmeros de insulina, e os íons de zinco ejetados para fora das células durante a secreção de insulina têm um efeito autócrino nas células β, ou alternativamente, exercem uma ação parácrina nas células α.

Carboxipeptidase H
Carboxipeptidase H é uma enzima que converte pró-insulina em insulina e peptídeo C catalisando a liberação de resíduos de arginina ou lisina C-terminais de polipeptídeos. Esta enzima está localizada nos grânulos secretores de insulina e na membrana dos grânulos das células β pancreáticas.

ICA69
O autoantígeno de células das ilhotas 69 (ICA69) está localizado na membrana dos grânulos secretores de insulina e consiste em 483 aminoácidos. Esta proteína está envolvida na sinalização e maturação de vesículas de núcleo denso.

Gangliosídeo GM2-1
O gangliosídeo GM2-1 (ácido N-acetilneuramínico-galactose-galactosamina-galactosamina-glicose-ceramida) é um monossialogangliosídeo pancreático que migra entre os padrões GM2 e GM1, localizado nos grânulos secretores das células β e células não β. No entanto, a função do gangliosídeo GM2-1 ainda é desconhecida.

Proteína de choque térmico 60
As proteínas de choque térmico foram originalmente descritas como "respondedoras ao estresse celular" por seu papel como chaperonas. A proteína de choque térmico 60 (HSP60) consiste em 569 aminoácidos e está localizada nos grânulos secretores de insulina. Esta proteína auxilia no dobramento correto de polipeptídeos parcialmente dobrados e na apresentação de antígenos às moléculas de MHC.

GLUT2
O transportador de glicose-2 (GLUT2) é uma subclasse de GLUTs e consiste em 524 aminoácidos. GLUT2 é expresso principalmente nas células β pancreáticas do pâncreas, fígado e rim. Este transportador está localizado na membrana da superfície das células β e é responsável pelo transporte de glicose do sangue para as células β.

Tetraspanina-7
A tetraspanina-7 é expressa nas membranas dos grânulos contendo insulina das células β pancreáticas e das células α produtoras de glucagon. Esta proteína consiste em 249 aminoácidos e está envolvida na regulação da exocitose de insulina dependente de Ca2+.

ICA12/SOX13
A ICA12/SOX13 pertence ao subgrupo classe D dos fatores de transcrição SOX e está localizada no citoplasma e núcleo das células β e células não β. A ICA12/SOX13 consiste em 604 aminoácidos e contém um domínio de zíper de leucina. A função deste fator de transcrição nas ilhotas ainda é desconhecida.

5. Significância dos Autoanticorpos Anti-Ilhotas na Fisiopatologia do DM1

A Juvenile Diabetes Research Foundation (JDRF), a American Diabetes Association (ADA) e a Endocrine Society recomendam classificar a história natural do DM1 em três estágios (Figura 2). No Estágio 1, a autoimunidade contra as células das ilhotas pancreáticas é induzida por células T citotóxicas, e a destruição das células β pancreáticas (insulite) começa, embora os níveis de glicose no sangue permaneçam dentro da faixa normal. Dois ou mais dos IAA, GADA, IA-2A e ZnT8A surgem neste estágio, com os riscos de desenvolvimento de DM1 em cinco e dez anos sendo aproximadamente 44% e 70%, respectivamente, enquanto o risco ao longo da vida se aproxima de 100%. No entanto, atualmente entende-se que os autoanticorpos anti-ilhotas não causam diretamente a destruição das células β pancreáticas; eles surgem como resultado da destruição das células β mediada por células T. No Estágio 2, semelhante ao Estágio 1, os indivíduos testam positivo para dois ou mais autoanticorpos anti-ilhotas, e a destruição das células β progride, levando à intolerância à glicose ou disglicemia. O risco de desenvolvimento de DM1 em cinco anos neste estágio é de aproximadamente 75%, e o risco ao longo da vida se aproxima de 100%. O Estágio 3 é marcado pelas manifestações dos sintomas e sinais clínicos típicos do DM1, incluindo poliúria, polidipsia, perda de peso, fadiga geral, cetoacidose diabética e outros. Neste estágio, a quantidade de células β pancreáticas residuais diminui para 20–30% dos níveis normais. Como os autoanticorpos anti-ilhotas aparecem no sangue periférico durante o Estágio 1 e o Estágio 2, eles são usados como uma ferramenta para prever o início do DM1. O número de autoanticorpos positivos é mais importante para a predição do que os autoanticorpos positivos específicos.

Além disso, um estudo envolvendo parentes de primeiro grau de pacientes com DM1 relatou que IAA ou GADA apareceram primeiro, seguidos por IA-2A e ZnT8A imediatamente antes do início do diabetes. Observamos uma emergência sequencial semelhante de autoanticorpos anti-ilhotas em pacientes com DM1 que desenvolveram a condição durante a terapia com interferon. Com base nessa evidência, IA-2A e ZnT8A são considerados marcadores substitutos para a destruição das células β pancreáticas. Isso é apoiado por um relatório demonstrando a disseminação de epítopos da IA-2A durante o estágio pré-clínico do DM1.
Por outro lado, conforme mostrado na Tabela 2, o GADA é detectado não apenas em pacientes com DM1 de início agudo e SPIDDM, mas também em alguns pacientes com DM1 fulminante e pacientes não diabéticos com síndrome poliglandular autoimune, doença autoimune da tireoide (DAIT) e síndrome da pessoa rígida. Portanto, diferentemente do IA-2A e do ZnT8A, presume-se que o GADA possa não ser um marcador específico para a destruição das células β pancreáticas. Em nosso caso, em que o GADA se reelevou mais de 10 anos após o início do DM1, os autoanticorpos antitireoidianos tornaram-se positivos imediatamente antes da reelevação do GADA. Portanto, é importante notar que o GADA pode estar associado à autoimunidade tireoidiana em vez de à insulite em alguns casos.
6. Papel dos Autoanticorpos Anti-Ilhotas no Diagnóstico de DM1
Nesta seção, discutimos as principais considerações ao diagnosticar DM1 usando autoanticorpos anti-ilhotas. Primeiro, como distinguir o IAA dos anticorpos insulínicos produzidos pela injeção exógena de insulina é desafiador, consideramos pacientes positivos para IAA se anticorpos contra insulina estivessem presentes em pacientes virgens de insulina ou naqueles dentro de 2 semanas do início da insulinoterapia. Nosso estudo usando soros obtidos dentro de 2 semanas após o início revelou que a prevalência de IAA, GADA, IA-2A e ZnT8A em pacientes com DM1 de início agudo foi de 58, 80, 66 e 63%, respectivamente (Figura 3A). Da mesma forma, a prevalência desses autoanticorpos em pacientes com SPIDDM foi de 41, 83, 27 e 27%, respectivamente (Figura 3B). Assim, uma análise combinatória dos quatro autoanticorpos indicou que 96% do DM1 de início agudo e 93% do SPIDDM eram DM1 imunomediado, enquanto aproximadamente 5% foram classificados como DM1 idiopático. Esses dados são consistentes com relatos anteriores de estudos realizados em países com populações caucasoides. Em contraste, a maioria dos pacientes com DM1 fulminante foi negativa para autoanticorpos anti-ilhotas (Figura 3C) e são classificados como DM1 idiopático, sugerindo que o mecanismo de destruição das células β no DM1 fulminante pode diferir do DM1 de início agudo e do SPIDDM.
No Japão, as diretrizes do seguro médico instruem os médicos a medir o GADA primeiro quando houver suspeita de DM1. No entanto, cerca de 10% dos pacientes com DM1 não fulminante são positivos para outros autoanticorpos anti-ilhotas sem GADA. Portanto, medir múltiplos autoanticorpos é crucial para o diagnóstico preciso do DM1 imunomediado.
7. Epítopos para Autoanticorpos Anti-Ilhotas e sua Relevância Clínica
7.1. Autoanticorpos Insulínicos
Poucos estudos de análise de epítopos foram realizados sobre IAA em comparação com aqueles de GADA e IA-2A. Em um estudo anterior, foi demonstrada a importância do aminoácido A13 da cadeia A para a ligação de IAA no DM1. Além disso, foi revelado que o epítopo conformacional abrangendo os resíduos de aminoácidos A8–A13 na cadeia A e B1–B3 na cadeia B era o principal sítio de ligação para IAA e estava associado à doença. Outra análise de epítopos usando um Fab recombinante do anticorpo monoclonal específico para insulina relatou que o epítopo de IAA estava localizado nos resíduos A8–A10 da cadeia A. No entanto, o radioimunoensaio para IAA não distingue entre epítopos na molécula de insulina ligados por IAA e anticorpos contra insulina induzidos por injeção exógena de insulina. Portanto, Devendra e colaboradores utilizaram a biblioteca aleatória de peptídeos exibidos em fagos e soro obtido de um paciente com DM1 positivo para IAA e de um paciente com síndrome autoimune insulínica tratado com insulina para examinar a diferença nos epítopos ligados por ambos os anticorpos. Como resultado, eles identificaram dois fagotopos (fagos que carregam peptídeos que mimetizam epítopos), designados IAS-9 e IDD-10, que foram capazes de discriminar entre anticorpos contra insulina associados e não associados ao diabetes. Isso sugere que a tecnologia de exibição em fagos poderia potencialmente ser explorada para desenvolver um RIA específico para IAA.
7.2. Autoanticorpos GAD
O GADA está presente em 70–80% dos parentes pré-diabéticos e pacientes com DM1 de início recente. A principal região antigênica do GADA foi determinada usando peptídeos truncados ou proteínas quiméricas de GAD65 e GAD67 para manter a estrutura conformacional, conforme estudos anteriores relataram que o GADA em pacientes com DM1 reconhece a estrutura conformacional da molécula de GAD. Além disso, foi relatado que o GADA associado à doença é direcionado contra GAD65, e a reatividade imune humoral ao GAD67 provavelmente é reativa cruzada com GAD65. A Figura 4A mostra uma representação esquemática do GAD65 e a localização dos epítopos de GADA no DM1. Estudos anteriores demonstraram que o GADA em pacientes com DM1 reconhece epítopos específicos da doença no GAD65, localizados nas regiões média e C-terminal do GAD65. No entanto, esses estudos podem também ter detectado epítopos que reagem de forma cruzada com o autoanticorpo GAD67. Para detectar epítopos específicos do autoanticorpo GAD65, realizamos um radioimunoensaio competitivo com a proteína GAD67 recombinante usando uma série de construções quiméricas GAD65/GAD67, e identificamos os epítopos de autoanticorpos na região N-terminal (aminoácidos 1–244; N), no domínio médio (aminoácidos 245–359; E1 e aminoácidos 360–442; E3) e na região C-terminal (aminoácidos 443–585; E2) do GAD65.
Embora as especificidades dos epítopos de GADA permaneçam relativamente estáveis após o início clínico do T1D, foi relatado que, em indivíduos geneticamente predispostos, a GADA é inicialmente gerada contra as regiões média e C-terminal da GAD65. Além disso, a resposta autoimune pode sofrer disseminação intramolecular de epítopos para epítopos no N-terminal e outros epítopos localizados no meio.
7.3. Autoanticorpos contra IA-2
Conforme mostrado na Figura 4B, esta proteína tem 979 aminoácidos de comprimento e compreende um domínio luminal (aminoácidos 27–576), domínio transmembrana (aminoácidos 577–600) e domínio citoplasmático (aminoácidos 601–979). Embora a sequência central da PTP seja encontrada nos aminoácidos 907–917 no domínio citoplasmático, a proteína recombinante expressa não exibe atividade de proteína tirosina fosfatase. Estudos que avaliam as propriedades biológicas da IA-2 demonstraram seu papel como um importante regulador do número de vesículas de núcleo denso, bem como da secreção de insulina induzida por glicose e basal.
O IA-2A está presente em 60–70% dos parentes pré-diabéticos e pacientes com início recente de T1D. Nós e outros analisamos os epítopos de IA-2A reconhecidos por soros diabéticos usando uma série de fragmentos de IA-2 ou proteínas quiméricas IA-2/fogrina, e descobrimos que os principais epítopos estão localizados no domínio citoplasmático. Aproximadamente 95% dos pacientes com T1D e parentes pré-diabéticos que são positivos para IA-2A reconhecem o domínio semelhante à PTP (aminoácidos 687–979), enquanto apenas 5% dos soros reagem com o domínio luminal. Além disso, nossa análise de ligação e competição usando múltiplas construções quiméricas IA-2/fogrina demonstrou que um epítopo único principal para IA-2A está localizado nos aminoácidos 762–887. Um epítopo conformacional associado aos 31 aminoácidos C-terminais da IA-2 é reconhecido por um terço dos soros, e um epítopo menor está localizado nos aminoácidos 601–762 da IA-2. Notavelmente, a disseminação intramolecular de epítopos foi encontrada em parentes de pacientes com T1D que posteriormente progrediram para T1D. No entanto, parentes que permaneceram não diabéticos exibiram uma diminuição no número de epítopos reconhecidos. Esses estudos são consistentes com a hipótese de que a IA-2 pode ser reconhecida como consequência da destruição das células β.
Outro epítopo importante foi mapeado no domínio justamembrana da IA-2 (aminoácidos 601–629; IA-2JM). Nossos dados demonstraram que a idade de início da doença em pacientes com apenas IA-2JMA foi significativamente maior do que em pacientes que reagiram com o domínio semelhante à PTP, sugerindo que o reconhecimento de autoanticorpos dos epítopos da IA-2 no diabetes autoimune está associado à idade de início da doença, o que pode refletir a intensidade do processo de destruição das células β.
7.4. Autoanticorpos contra ZnT8
Em 2007, Sladek e colaboradores identificaram quatro loci contendo variantes que conferem risco de DM2 por meio de um estudo de associação genômica ampla, incluindo um polimorfismo não sinônimo no gene ZnT8 (membro 8 da família 30 de transportadores de soluto, SLC30A8), rs13266634 (C/T), que causa uma modificação R325W na sequência proteica. No mesmo ano, Hutton e colaboradores descobriram a ZnT8 como um autoantígeno principal no DM1, e a ZnT8A tem sido reconhecida como um dos quatro principais autoanticorpos anti-ilhotas.

ZnT8A estão presentes em 50–60% dos parentes pré-diabéticos e pacientes com início recente de DM1. Conforme mostrado na Figura 4C, a ZnT8 é uma proteína transmembrana politópica de 369 aminoácidos com caudas citoplasmáticas N- e C-terminais. Foi relatado que a ZnT8A reconhece 101 aminoácidos localizados na região C-terminal citoplasmática. Em particular, o resíduo de aminoácido 325 (R325W) definido pelo polimorfismo SLC30A8 é crítico para a autoimunidade humoral a esse autoantígeno, e a ligação da ZnT8A contra dois isotipos (ZnT8-325R, ZnT8-325W) depende do genótipo SLC30A8 do paciente. Consequentemente, heterozigotos com o genótipo CT respondem tanto à ZnT8-325R quanto à ZnT8-325W, enquanto homozigotos CC e TT respondem exclusivamente à ZnT8-325R ou ZnT8-325W, respectivamente. Assim, os indivíduos respondem à proteína ZnT8 endógena determinada por seu próprio genoma; e, portanto, o atual ensaio de ZnT8A utiliza uma proteína híbrida de dois isotipos de ZnT8 como antígenos.

Além disso, Wenzlau e colaboradores identificaram que os resíduos 332R, 333E, 336K e 340K contribuem para um epítopo conformacional de ZnT8A independente do resíduo 325, comparando proteínas ZnT8 quiméricas humanas e de camundongos, sugerindo que este epítopo pode aumentar a utilidade diagnóstica da medição de ZnT8A.

7.5. Outros Autoanticorpos Anti-Ilhotas
Outros autoanticorpos anti-ilhotas incluem autoanticorpos contra gangliosídeo GM2-1, HSP60, GLUT2, tetraspanina-7 e ICA12/SOX13 (Tabela 1). Entre estes, os epítopos dos autoanticorpos GM2-1 e dos autoanticorpos GLUT2 ainda não foram analisados até o momento. Foi relatado que os autoanticorpos HSP60 reconhecem duas regiões de epítopos na HSP60 (aminoácidos 394–413 e aminoácidos 435–454). A primeira região é semelhante à sequência encontrada no GAD, enquanto a segunda se sobrepõe em grande parte ao epítopo de células T p277. Utilizando uma série de fragmentos peptídicos sobrepostos, Eugster e colaboradores mapearam os autoepítopos reconhecidos pelos autoanticorpos tetraspanina-7 e descobriram que os epítopos de autoanticorpos estão predominantemente dentro do primeiro e terceiro domínios citoplasmáticos da proteína. A caracterização adicional da ligação de autoanticorpos a construções mutadas revelou que os epítopos estão dentro de uma região relativamente curta (20 aminoácidos) representada por pelo menos dois dos três domínios citoplasmáticos, fornecendo mais evidências da importância da conformação proteica na ligação de anticorpos. Além disso, o mapeamento de epítopos dos autoanticorpos ICA12/SOX13 usando vários fragmentos truncados de SOX13 sugere que os autoanticorpos são direcionados a pelo menos dois epítopos, um que requer os aminoácidos 66–604 e um segundo confinado dentro dos aminoácidos 327–604.
8. Predição de Deficiência Futura de Insulina em Pacientes com SPIDDM (Diabetes Mellitus Insulino-Dependente de Início Tardio)
SPIDDM (também conhecido como LADA) é caracterizado pela presença de autoanticorpos anti-ilhotas e um declínio gradual na capacidade secretora de insulina. A Sociedade de Imunologia do Diabetes definiu LADA da seguinte forma: (1) início do diabetes > 35 anos, (2) teste positivo para pelo menos um dos autoanticorpos anti-ilhotas conhecidos e (3) necessidade de tratamento com insulina > 6 meses após o diagnóstico do diabetes. LADA abrange pacientes diabéticos com autoanticorpos anti-ilhotas positivos tanto em estado insulinodependente quanto não insulinodependente, o que é quase idêntico ao SPIDDM. De acordo com os critérios diagnósticos recentemente revisados para SPIDDM, o intervalo desde o diagnóstico do diabetes até a necessidade de tratamento com insulina é > 3 meses. Além disso, pacientes com secreção endógena de insulina exaurida (peptídeo C de jejum < 0,6 ng/mL) no último ponto de observação são definidos como “SPIDDM (definido)”. Em contraste, pacientes com autoanticorpos anti-ilhotas positivos em estado não insulinodependente são classificados como “SPIDDM (provável)” (Tabela 3). Usando este critério diagnóstico, a medição de autoanticorpos anti-ilhotas diferentes de GADA resulta em um aumento de aproximadamente 3 vezes na incidência de SPIDDM entre pacientes diabéticos não tratados com insulina em comparação com a medição apenas de GADA (2,0–2,4% vs. 7–8%). De fato, no Estudo de Intervenção/Prevenção do Diabetes Autoimune de Nagasaki, a prevalência de autoanticorpos anti-ilhotas diferentes de GADA no diabetes de início na idade adulta virgem de insulina foi de 8,6%, o que é 2,6 vezes maior em comparação com a de GADA (3,3%) (Figura 5). Como esse subtipo de DM1 é geralmente indistinguível do DM2 no momento do diagnóstico, a medição de autoanticorpos anti-ilhotas é crucial para o diagnóstico precoce e tratamento adequado do SPIDDM (LADA).

A positividade para autoanticorpos anti-ilhotas, especialmente ICA e GADA, é preditiva para a progressão para um estado futuro de dependência de insulina após o diagnóstico de diabetes. Por exemplo, o UKPDS (United Kingdom Prospective Diabetes Study) constatou que pelo menos 50% dos pacientes com LADA necessitaram de tratamento com insulina 6 anos após o diagnóstico. No entanto, nem todos os pacientes com SPIDDM (LADA) necessitaram de tratamento com insulina, mesmo após 10 anos do diagnóstico.
De acordo com uma pesquisa nacional conduzida pela Sociedade Japonesa de Diabetes, os preditores de progressão para um estado dependente de insulina incluem: (1) idade de início ≤47 anos, (2) período até a detecção positiva de GADA ≤5 anos, (3) título de GADA (método RIA) ≥13,6 U/mL e (4) peptídeo C em jejum ≤0,65 ng/mL. Além disso, o número de autoanticorpos anti-ilhotas positivos e o reconhecimento de epítopos de GADA também são importantes para a predição. Para identificar os marcadores preditivos para necessidade precoce de insulina em SPIDDM (provável) não dependente de insulina, avaliamos IAA, IA-2A e ZnT8A juntamente com o reconhecimento de epítopos específicos de GADA em 47 pacientes diabéticos GADA-positivos. Entre esses pacientes, 38% apresentavam um ou mais de IAA, IA-2A ou ZnT8A e 15% apresentavam dois ou mais desses autoanticorpos. Um título elevado de GADA (≥10 U/mL), a presença de GADA-E1 e a presença de um ou mais entre IAA, IA-2A ou ZnT8A no diagnóstico marcaram o risco para necessidade de terapia precoce com insulina. Além disso, múltiplos autoanticorpos anti-ilhotas foram os fatores de risco mais relevantes para a necessidade de insulina (odds ratio 13,77; IC 95% 2,77-68,45; p < 0,001) em uma análise de regressão logística multivariada. Portanto, a medição de autoanticorpos anti-ilhotas diferentes de GADA e ICA é essencial para predizer o risco de progressão de pacientes com SPIDDM (LADA).

9. Diabetes Tipo 1 e Doenças Autoimunes Associadas
   Os clínicos devem estar cientes de que complicações decorrentes de distúrbios autoimunes adicionais são observadas com mais frequência em pacientes com DM1, sendo a doença autoimune órgão-específica mais comum associada ao DM1 a doença tireoidiana autoimune (DTA), como a doença de Graves e a tireoidite de Hashimoto, afetando mais de 90% das pessoas com DM1 e distúrbios autoimunes. Além disso, foi relatado que crianças, especialmente meninas, com DM1 apresentam risco aumentado de desenvolver outras doenças autoimunes, com a prevalência de autoanticorpos antitireoidianos no início da doença sendo de cerca de 20%. Ademais, a prevalência de anticorpos antitireoidianos aumenta com a idade, e a presença desses anticorpos no diagnóstico de DM1 é preditiva de doença tireoidiana futura. O acompanhamento de longo prazo sugere que até 30% dos pacientes com DM1 desenvolvem DTA, e pacientes com autoimunidade tireoidiana têm 18 vezes mais probabilidade de desenvolver DTA do que aqueles sem. Portanto, para possibilitar um diagnóstico precoce de DTA em crianças com DM1, as Diretrizes Clínicas de Consenso da Sociedade Internacional para Diabetes Pediátrico e do Adolescente recomendam a triagem da função tireoidiana por meio da análise do TSH circulante no momento do diagnóstico de diabetes e a cada dois anos a partir de então em indivíduos assintomáticos sem bócio, e com triagem mais frequente em pacientes com bócio presente.
   Para caracterizar os pacientes com DM1 que apresentam DAT coexistente (referido como variante da síndrome poliglandular autoimune tipo 3, APS3v), analisamos suas características clínicas em comparação com aqueles sem DAT. Os pacientes com APS3v demonstraram predomínio feminino significativo, idade de início do DM1 mais tardia e mais lenta, e maior prevalência e nível de GADA. Além disso, entre os pacientes com doença de Graves, 60% desenvolveram a doença antes do DM1, 30% tiveram DM1 antecedente e 10% desenvolveram DM1 e doença de Graves simultaneamente. O intervalo entre o início do DM1 e a doença de Graves foi <10 anos na maioria dos casos, mas aproximou-se ou excedeu 20 anos em algumas instâncias.
   A prevalência de GADA em pacientes não diabéticos com DAT é de 8–10%, e foi relatado que a positividade para GADA está associada a uma capacidade reduzida de secreção de insulina, sugerindo que a positividade para GADA poderia ser um marcador de insulite subclínica. Além disso, a incidência de DM1/SPIDDM em pacientes com doença de Graves positivos para anticorpos anti-ilhotas foi relatada como sendo 2,5 vezes maior do que em pacientes negativos para autoanticorpos. As razões exatas pelas quais o nível de GADA em pacientes com DM1 e DAT é extremamente elevado em comparação com pacientes sem DAT permanecem obscuras. Estudos anteriores relataram que a GAD65 é expressa na glândula tireoide, e os pacientes com DM1 e DAT demonstraram maior policlonalidade no reconhecimento de epítopos de GADA e subclasses de IgG em comparação com pacientes sem DAT (Figura 6). Quarenta e oito por cento dos pacientes com DM1 e DAT reconheceram epítopos da região N-terminal, domínio médio e região C-terminal da GAD65, enquanto o mesmo ocorreu em apenas 9% daqueles sem DAT (p < 0,005). Além disso, a prevalência de pacientes com duas ou mais subclasses de IgG foi significativamente maior em pacientes com DM1 e DAT do que naqueles sem DAT (57% vs. 17%, p < 0,001). Portanto, a superprodução de GADA em pacientes com DM1 e DAT pode ser atribuível à ativação da resposta policlonal de linfócitos B pela GAD na glândula tireoide.
10. Avanços Recentes no Ensaio de Autoanticorpos Anti-Ilhotas
    Conforme descrito na seção anterior, o ICA é detectado por imuno-histoquímica utilizando imunofluorescência indireta ou técnicas imunológicas enzimáticas em cortes congelados de pâncreas humano do grupo sanguíneo O. Alcançar uma concordância dos resultados obtidos em diferentes laboratórios é essencial para comparar estudos de vários centros. Para abordar essa questão, uma série de workshops internacionais sobre a padronização do ICA foi iniciada em 1985 sob os auspícios do Immunology and Diabetes Workshop (atualmente Immunology and Diabetes Society). No entanto, amplas variações nos resultados persistiram apesar do uso do mesmo protocolo experimental. Portanto, workshops subsequentes empregaram curvas padrão construídas a partir de um soro de referência (padrão JDRF), o que levou a uma diminuição na variação interlaboratorial.
    Após a descoberta do GAD como um antígeno alvo principal contra ICA, numerosos ensaios recombinantes de autoanticorpos anti-ilhotas, incluindo ensaios de ligação por radioligante (RBA), RIA e ELISA, foram desenvolvidos. Com esses ensaios, a prevalência relatada de autoanticorpos anti-ilhotas, como GADA, em pacientes com DM1 recentemente diagnosticado variou amplamente de 25% a 80%. Para padronizar os ensaios recombinantes de autoanticorpos anti-ilhotas, o primeiro workshop de GADA foi realizado em 1993. Em contraste com o workshop de ICA, foi observada considerável concordância na classificação dos níveis de GADA em 16 amostras diferentes entre vários formatos de ensaio. No segundo workshop de GADA, que utilizou um grande número de soros de DM1 e controles, o formato RBA demonstrou maior sensibilidade que o ELISA convencional. Formatos de ELISA em fase sólida podem detectar anticorpos de ligação à insulina em pacientes que recebem injeções de insulina. Entretanto, esses ensaios não conseguem detectar IAA associados a riscos de doença, provavelmente devido à alta afinidade aparente (10¹⁰) e capacidade extremamente baixa (10⁻¹²) dos autoanticorpos de pré-diabetes. Além disso, o RBA em fase fluida amplamente utilizado tem se mostrado desafiador para muitos laboratórios implementarem. Em resposta à necessidade de ensaios de autoanticorpos anti-ilhotas aprimorados, um ensaio em fase fluida não radioativo foi desenvolvido, oferecendo alta sensibilidade e especificidade. Este ensaio utiliza um formato de ELISA modificado, baseado na capacidade dos autoanticorpos de formar uma ponte entre autoantígenos recombinantes (como GAD, IA-2 e ZnT8) revestidos na placa de ELISA e autoantígenos correspondentes marcados com biotina, permitindo a detecção de antígenos ligados a autoanticorpos, em vez das próprias imunoglobulinas. Usando o mesmo formato de ensaio, um ensaio de autoanticorpos anti-ilhotas foi recentemente desenvolvido, permitindo a medição simultânea de múltiplos autoanticorpos em um único poço (3 Screen ICA ELISA). Embora este ensaio não possa distinguir quais dos três autoanticorpos estão presentes, ele pode servir como um teste de triagem útil para DM1 e facilitar o diagnóstico eficiente de DM1 imunomediado. Outros ensaios sensíveis de alto rendimento eficazes para triagem em larga escala incluem um ensaio multiplex de ECL e um ensaio multiplex de autoanticorpos por aglutinação-PCR que combina todos os quatro autoanticorpos anti-ilhotas bioquimicamente definidos. Essas inovações de todo o mundo aumentarão nossa capacidade de identificar indivíduos de alto risco para DM1 com mais precisão e eficiência em estágio inicial, promovendo o avanço de intervenções precoces em benefício da saúde pública.
11. Autoanticorpos Anti-Ilhotas em Ensaios de Novas Abordagens Terapêuticas para a Preservação da Função das Células β
    O objetivo mais importante do gerenciamento do diabetes é melhorar a qualidade de vida e prolongar a expectativa de vida, prevenindo doenças micro e macrovasculares. Para atingir esse objetivo, é crucial manter um bom controle glicêmico e a função residual das células β. Nos últimos 30 anos, embora numerosos ensaios clínicos sobre prevenção primária tenham sido realizados, até o momento, nenhum tratamento ou agente se mostrou eficaz na prevenção do DM1 em indivíduos suscetíveis. No entanto, vários agentes terapêuticos demonstraram utilidade em retardar a progressão do Estágio 2 para o Estágio 3 do DM1, ao mesmo tempo em que preservam a função das células β no Estágio 3. Esses agentes incluem abatacepte (anti-CTLA-4), alefacepte (uma proteína de fusão do antígeno de função linfocitária solúvel com fragmentos Fc de IgG1), rituximabe (anti-CD20) e globulina antitimócito, que preservam a produção de peptídeo C em comparação com placebo no DM1 em Estágio 3. Além disso, o teplizumabe (anti-CD3) demonstrou retardar a progressão do Estágio 2 para o Estágio 3 do DM1 em uma mediana de 3 anos. Com base nesses resultados, em novembro de 2022, a Administração de Alimentos e Medicamentos dos EUA aprovou o teplizumabe como o primeiro medicamento a retardar a progressão do Estágio 2 para o Estágio 3 do DM1 em adultos e crianças > 8 anos. Os ensaios de prevenção anteriores visavam indivíduos que eram positivos para pelo menos um ou mais autoanticorpos anti-ilhotas. No entanto, como esses estudos usaram o método RBA para medir autoanticorpos anti-ilhotas, existe a possibilidade de que indivíduos de baixo risco também tenham sido incluídos. Portanto, é crucial triar indivíduos com ensaios que possam detectar exclusivamente autoanticorpos de alta afinidade, a fim de verificar efeitos preventivos mais confiáveis. Além disso, a capacidade de avaliar múltiplos autoanticorpos em um único teste deve se mostrar valiosa para futuros ensaios de intervenção.
12. Conclusões
    Este artigo focou em revisar o entendimento atual sobre os autoanticorpos anti-ilhotas no diabetes tipo 1 (T1D). As utilidades clínicas dos autoanticorpos anti-ilhotas em pacientes com diabetes incluem diagnóstico (imunomediado ou idiopático), predição (progressor ou não progressor) e a compreensão da fisiopatologia (fenômeno específico ou inespecífico da insulite) (Figura 7). Como o nível de autoanticorpos anti-ilhotas diminui com a duração da doença e pode se tornar negativo, é essencial medi-los precocemente no início do T1D para um diagnóstico preciso. O SPIDDM ou LADA é frequentemente indistinguível do T2D; portanto, uma medição mais precoce dos autoanticorpos anti-ilhotas é de grande importância clínica para diagnóstico precoce e tratamento adequado. Além dos perfis de autoanticorpos anti-ilhotas, a idade de início e o escore de risco genético também devem ser considerados para a triagem de risco. Além disso, o desenvolvimento de um ensaio de alto rendimento para detectar autoanticorpos específicos para epítopos ou específicos de isotipos de imunoglobulinas deve garantir o diagnóstico preciso e a predição de doenças autoimunes. Além disso, o novo tipo de ensaio de autoanticorpos, que pode medir simultaneamente múltiplos autoanticorpos, apresenta vantagens de alta sensibilidade e especificidade, e a capacidade de medir um grande número de amostras, tornando-o adequado para uma triagem populacional em larga escala do T1D.
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    Conflitos de Interesse
    O autor declara não haver conflito de interesse.
    Abreviações
    ADA Associação Americana de Diabetes AITD doença tireoidiana autoimune APS3v variante da síndrome poliglandular autoimune tipo 3 ECL eletroquimioluminescência ELISA ensaio imunoenzimático HSP proteína de choque térmico GAD descarboxilase do ácido glutâmico IA-2 proteína tirosina fosfatase IA-2 IAA autoanticorpos contra insulina ICA anticorpos de células das ilhotas ICA12 antígeno de células das ilhotas 12 JDRF Fundação de Pesquisa sobre Diabetes Juvenil JM justamembrana LADA diabetes autoimune latente no adulto MHC complexo principal de histocompatibilidade NOD não obeso diabético PTP proteína tirosina fosfatase RBA ensaio de ligação por radioligante RIA radioimunoensaio SOX13 caixa 13 do grupo de alta mobilidade do tipo região determinante do sexo SPIDDM diabetes tipo 1 de progressão lenta T1D diabetes tipo 1 T2D diabetes tipo 2 UKPDS Estudo Prospectivo de Diabetes do Reino Unido ZnT8 transportador de zinco 8
    Referências
    Classificação e diagnóstico de diabetes: Padrões de cuidado em diabetes-2023
    Diabetes mellitus tipo 1 como uma doença da célula β (não culpe o sistema imunológico?)
    Incidência mundial de diabetes tipo 1 na infância. Grupo do Projeto Diabetes Mondiale (DiaMond)
    Diabetes tipo 1 no Japão
    Anticorpos de células das ilhotas no diabetes mellitus com deficiências poliednócrinas autoimunes
    Autoanticorpos em crianças diabéticas recém-diagnosticadas imunoprecipitam proteínas de células das ilhotas pancreáticas humanas
    Anticorpos anti-insulina em diabéticos insulinodependentes antes do tratamento com insulina
    Identificação do autoantígeno de 64 K no diabetes insulinodependente como a enzima sintetizadora de GABA, ácido glutâmico descarboxilase
    Clonagem molecular e identificação de uma proteína tirosina fosfatase do tipo receptor, IA-2, de insulinoma humano
    O transportador de efluxo de cátions ZnT8 (Slc30A8) é um autoantígeno importante no diabetes tipo 1 humano
    As células beta pancreáticas expressam duas formas autoantigênicas do ácido glutâmico descarboxilase, uma forma hidrofílica de 65 kDa e uma forma anfifílica de 64 kDa que pode ser tanto ligada à membrana quanto solúvel
    A proteína transmembrana de vesículas de núcleo denso IA-2 é um regulador do número de vesículas e da secreção de insulina
    Clonagem molecular e caracterização do homólogo humano da proteína tirosina fosfatase transmembrana, fogrina, um autoantígeno do diabetes tipo 1
    A deleção de IA-2 e/ou IA-2β em camundongos diminui a secreção de insulina ao reduzir o número de vesículas de núcleo denso
    Autoantígenos potenciais no DMID. Expressão de carboxipeptidase-H e insulina, mas não de glutamato descarboxilase, na superfície da célula β
    O autoantígeno de células das ilhotas de 69 kDa é uma proteína relacionada à arfaptina associada ao complexo de Golgi de células de insulinoma INS-1
    A perda da função de ZnT8 protege contra o diabetes por meio do aumento da secreção de insulina
    Armazenamento de insulina e homeostase da glicose em camundongos nulos para o transportador de zinco granular ZnT8 e estudos das variantes associadas ao diabetes tipo 2
    O autoantígeno de ilhotas gangliosídeo GM2-1 no diabetes mellitus insulinodependente é expresso em grânulos secretores e não é específico da célula β
    Detecção de autoanticorpos contra a proteína de choque térmico 60 das ilhotas pancreáticas no diabetes mellitus insulinodependente
    Autoanticorpos contra o transportador de glicose GLUT-2 das células β no diabetes mellitus insulinodependente de início recente
    Autoanticorpos contra tetraspanina 7 no diabetes tipo 1
    A proteína relacionada à região determinante do sexo Y SOX13 é um autoantígeno do diabetes expresso nas ilhotas pancreáticas
    Autoanticorpos específicos da célula β: são apenas um indicador de diabetes tipo 1?
    Ser B ou não ser B: (anti)corpos de evidência na cena do crime do diabetes tipo 1?
    Ataque mediado por células B tímicas ao estroma tímico precede o desenvolvimento do diabetes tipo 1
    Estadiamento do diabetes tipo 1 pré-sintomático: uma declaração científica da JDRF, da Sociedade de Endocrinologia e da Associação Americana de Diabetes
    Soroconversão para múltiplos autoanticorpos de ilhotas e risco de progressão para diabetes em crianças
    Grupo de Estudo TrialNet de Diabetes Tipo 1. O uso de desfechos intermediários no delineamento de ensaios de prevenção do diabetes tipo 1
    Predição de diabetes tipo 1 em parentes de primeiro grau usando uma combinação de autoanticorpos contra insulina, GAD e ICA512bdc/IA-2
    Autoanticorpos anti-ilhotas geralmente se desenvolvem de forma sequencial, em vez de simultânea
    Trajetórias de autoanticorpos anti-ilhotas antes do desenvolvimento de diabetes tipo 1 em pacientes com hepatite C tratados com interferon. Relatos de caso e uma revisão da literatura
    Definição de múltiplos epítopos de autoanticorpos ICA512/fogrina e detecção de disseminação intramolecular de epítopos em parentes de pacientes com diabetes tipo 1
    Elevação sequencial de autoanticorpos contra tireoglobulina e descarboxilase do ácido glutâmico no diabetes tipo 1
    Diferenças na autorreatividade humoral ao transportador de zinco 8 entre diabetes tipo 1 de início na infância e na idade adulta em pacientes japoneses
    Autoanticorpos contra o transportador de zinco 8 e o genótipo SLC30A8 estratificam o risco de diabetes tipo 1
    Mudanças nos autoanticorpos contra o transportador de zinco 8 após o início do diabetes tipo 1: O workshop de autoanticorpos do consórcio de genética do diabetes tipo 1
    Contribuição dos anticorpos contra IA-2β e transportador de zinco 8 para a classificação do diabetes diagnosticado antes dos 40 anos de idade
    Caracterização de autoanticorpos contra insulina em parentes de pacientes com diabetes tipo 1
    Análise de epítopos de autoanticorpos contra insulina usando Fab recombinante
    Análise longitudinal de epítopos de anticorpos de ligação à insulina no diabetes tipo 1
    O uso de phage display para distinguir idiotipos de autoanticorpo contra insulina (IAA) de anticorpo contra insulina (IA)
    Dois aminoácidos na descarboxilase do ácido glutâmico atuam em conjunto para a manutenção de determinantes conformacionais reconhecidos por autoanticorpos do diabetes tipo 1
    Detecção de anticorpos recombinantes contra GAD65 e GAD67 usando um radioimunoensaio simples
    Uma análise da reatividade cruzada de autoanticorpos contra GAD65 e GAD67 no diabetes
    Duas especificidades distintas de autoanticorpos contra descarboxilase do ácido glutâmico no DMID têm como alvo epítopos diferentes
    Reconhecimento da descarboxilase do ácido glutâmico (GAD) por autoanticorpos de diferentes fenótipos positivos para anticorpos anti-GAD
    Análise de epítopos de autoanticorpos anti-GAD65 em pacientes japoneses com diabetes autoimune
    Mudanças dinâmicas nas especificidades de epítopos de autoanticorpos anti-GAD65 em indivíduos com risco de desenvolver diabetes tipo 1
    Clonagem e expressão de autoantígenos humanos específicos do DMID
    Avaliação de radioimunoensaios de autoanticorpos contra antígeno de células das ilhotas (ICA) 512/IA-2 usando construções sobrepostas de ICA512/IA-2
    Identificação de determinantes antigênicos únicos no amino terminal de IA-2 (ICA512) no diabetes autoimune infantil e adulto: Desenvolvimento de novo biomarcador
    Associação entre especificidades de epítopos de autoanticorpos anti-IA-2 e idade de início em pacientes japoneses com diabetes autoimune
    Um estudo de associação genômica ampla identifica novos loci de risco para diabetes tipo 2
    Um polimorfismo de nucleotídeo único não sinônimo comum no gene SLC30A8 determina a especificidade de autoanticorpos anti-ZnT8 no diabetes tipo 1
    Associação entre especificidades de autoanticorpos anti-ZnT8 e a variante Arg325Trp do SLC30A8 em pacientes japoneses com diabetes tipo 1
    Mapeamento de epítopos conformacionais de autoanticorpos em ZnT8
    Anticorpos contra diferentes epítopos da proteína de choque térmico 60 em crianças com diabetes mellitus tipo 1
    Extremidades citoplasmáticas da tetraspanina 7 abrigam epítopos reconhecidos por autoanticorpos no diabetes tipo 1
    Manejo do diabetes autoimune latente em adultos: Uma declaração de consenso de um painel internacional de especialistas
    Novos critérios diagnósticos (2023) de diabetes tipo 1 de progressão lenta (SPIDDM) - Relatório do Comitê de diabetes tipo 1 da Sociedade Japonesa de Diabetes
    Autoanticorpos de alto título contra ácido glutâmico descarboxilase mais autoanticorpos contra insulina e IA-2 predizem a necessidade de insulina em pacientes diabéticos adultos
    Anticorpos anti-GAD em pacientes japoneses classificados como diabetes tipo 2 no diagnóstico. Título elevado de GADAb é um marcador preditivo para tratamento precoce com insulina -- relatório do estudo do oeste do Japão (Kyushu, Yamaguchi, Osaka) para diabetes GAD Ab(+)
    Autoanticorpos contra insulina, antígeno-2 associado ao insulinoma e transportador de zinco 8 melhoram a predição da necessidade precoce de insulina no diabetes autoimune de início na idade adulta
    UKPDS 25: Autoanticorpos contra citoplasma de células das ilhotas e ácido glutâmico descarboxilase para predição da necessidade de insulina no diabetes tipo 2. Grupo de Estudo Prospectivo de Diabetes do Reino Unido
    Características clínicas e genéticas do diabetes autoanticorpo-positivo para ácido glutâmico descarboxilase (GAD) sem necessidade de insulina: Um levantamento nacional no Japão
    Doença autoimune associada em pacientes com diabetes tipo 1: Uma revisão sistemática e meta-análise
    Doenças autoimunes associadas em crianças e adolescentes com diabetes mellitus tipo 1 (DM1)
    Diabetes tipo 1 e autoimunidade
    Autoimunidade tireoidiana em crianças e adolescentes com diabetes tipo 1: Um levantamento multicêntrico
    Disfunção tireoidiana em pacientes com diabetes tipo 1: Um estudo longitudinal
    O papel da autoimunidade no diagnóstico do diabetes tipo 1 no desenvolvimento de doença tireoidiana e celíaca e complicações microvasculares
    Diretrizes de Consenso de Prática Clínica da ISPAD 2014. Outras complicações e condições associadas ao diabetes em crianças e adolescentes
    Características clínicas e genéticas da variante da síndrome poliglandular autoimune tipo 3 na população japonesa
    Autoanticorpos contra ácido glutâmico descarboxilase em pacientes com doença tireoidiana autoimune: Relação com autoanticorpos insulínicos competitivos
    A frequência de autoanticorpos contra células β das ilhotas de Langerhans (Anti-GAD) em crianças e adolescentes georgianos com tireoidite autoimune crônica
    Autoimunidade antipancreática e doença de Graves: Estudo de uma coorte de 600 pacientes caucasianos
    A positividade para anticorpo anti-ácido glutâmico descarboxilase está associada a uma resposta insulínica prejudicada à glicose e arginina em pacientes não diabéticos com tireoidite autoimune
    Prevalência de diabetes e presença de autoanticorpos contra transportador de zinco 8 e ácido glutâmico descarboxilase no diagnóstico e no acompanhamento da doença de Graves
    Ácido γ-aminobutírico fora do cérebro de mamíferos
    Ligação de anticorpos em soros de pacientes diabéticos tipo 1 (insulino-dependentes) à descarboxilase do glutamato de tecidos de rato. Evidência para formas antigênicas e não antigênicas da enzima
    Oficinas de Imunologia e Diabetes: Relatório da primeira oficina internacional sobre a padronização de anticorpos citoplasmáticos de células das ilhotas
    Oficinas de Imunologia e Diabetes: Relatório da segunda oficina internacional sobre a padronização de anticorpos citoplasmáticos de células das ilhotas
    Autoanticorpos contra a descarboxilase do ácido glutâmico (GAD) detectados por um ensaio de atividade enzimática por imuno-captura: Relação com diabetes mellitus insulino-dependente e anticorpos de células das ilhotas
    Anticorpos contra a descarboxilase do ácido glutâmico discriminam os principais tipos de diabetes mellitus
    Autoanticorpos contra a descarboxilase do ácido glutâmico em pacientes com DMID e doença tireoidiana autoimune
    Alto nível de concordância entre ensaios para anticorpos contra a descarboxilase do ácido glutâmico. A primeira oficina internacional de anticorpos contra a descarboxilase do ácido glutâmico
    Sensibilidade e especificidade de 52 ensaios para anticorpos contra a descarboxilase do ácido glutâmico. A segunda oficina internacional de anticorpos GAD
    Novo ensaio imunoenzimático (ELISA) para autoanticorpos bivalentes ZnT8
    Triagem de autoanticorpos de ilhotas em sangue capilar para identificar pré-diabetes tipo 1 na população geral: Desenho e resultados iniciais do estudo Fr1da
    Ensaios multiplex de autoanticorpos por aglutinação-PCR (ADAP) comparados a autoanticorpos por radiomarcação no diabetes tipo 1 e doença celíaca
    Tecnologias de ensaio eficazes adequadas para triagem populacional em larga escala do diabetes tipo 1
    Modulação da coestimulação com abatacepte em pacientes com diabetes tipo 1 de início recente: Acompanhamento 1 ano após a cessação do tratamento
    Alefacepte proporciona efeitos clínicos e imunológicos sustentados em pacientes com diabetes tipo 1 de início recente
    Grupo de Estudo Anti-CD20 do TrialNet de Diabetes Tipo 1. Rituximabe, depleção de linfócitos B e preservação da função das células β
    Globulina antitimócito em baixa dose preserva o peptídeo C, reduz a HbA1c e aumenta a proporção de células T reguladoras para convencionais no diabetes tipo 1 de início recente: Dados de ensaio clínico de dois anos
    Grupo de Estudo do TrialNet de Diabetes Tipo 1. Um anticorpo anti-CD3, Teplizumabe, em parentes com risco para diabetes tipo 1
    Teplizumabe melhora e estabiliza a função das células beta em indivíduos de alto risco com anticorpos positivos
    Cronologia da descoberta de autoanticorpos anti-ilhotas. Autoanticorpos anti-ilhotas usados para predição e diagnóstico de DM1 são IAA, GADA, IA-2A e ZnT8A.
    Três estágios da história natural do DM1.
    Análise combinatória de autoanticorpos anti-ilhotas em pacientes com DM1 de início agudo (A), SPIDDM (B) e DM1 fulminante (C) Adaptado com permissão da Ref..
    Ilustração de epítopos antigênicos reconhecidos por soros de DM1 nas proteínas GAD65 (A), IA-2 (B) e ZnT8 (C).
    Prevalência de GADA, IA-2A, ZnT8A e IAA em 788 pacientes com diabetes de início na idade adulta e sem uso prévio de insulina.
    Comparação dos epítopos de GADA (superior) e subclasses de IgG (inferior) em pacientes com DM1 sem e com doença tireoidiana autoimune. (Painel esquerdo) DM1 sem AITD. (Painel direito) DM1 com AITD.
    Utilidades clínicas dos autoanticorpos anti-ilhotas em pacientes com diabetes.
    Localização e função dos autoantígenos contra autoanticorpos anti-ilhotas.
    Nome do Antígeno Localização Função Referência Insulina Grânulos secretores de insulina Regular os níveis de glicose no sangue e induzir o armazenamento de glicose no fígado, músculos e tecido adiposo GAD65 Vesículas semelhantes a sinapses no citoplasma das células β Enzima limitante envolvida na síntese do neurotransmissor ácido γ-aminobutírico a partir de L-glutamato GAD67 Citosol das células β Enzima limitante envolvida na síntese do neurotransmissor ácido γ-aminobutírico a partir de L-glutamato IA-2 Membrana do grânulo secretor de insulina Regular o conteúdo do grânulo secretor de insulina e o crescimento das células β Phogrin/IA-2β Membrana do grânulo secretor de insulina Regular o conteúdo do grânulo secretor de insulina e o crescimento das células β Carboxipeptidase H Grânulos secretores de insulina e membrana do grânulo Converter pró-insulina em insulina e peptídeo C catalisando a liberação de resíduos de arginina ou lisina C-terminais de polipeptídeos ICA69 Membrana do grânulo secretor de insulina Sinalização e maturação de vesículas de núcleo denso ZnT8 Membrana do grânulo secretor de insulina Transportar íons de zinco do citosol para os grânulos secretores de insulina GM2-1 gangliosídeo Grânulos secretores em células β e células não β desconhecida Proteína de choque térmico 60 Grânulos secretores de insulina Auxiliar o dobramento correto de polipeptídeos parcialmente dobrados e apresentação de antígeno às moléculas de MHC GLUT2 Membrana da superfície das células β Captar glicose do sangue para as células β Tetraspanina-7 Membrana do grânulo secretor de insulina Regular a exocitose de insulina dependente de Ca2+ ICA12/SOX13 Citoplasma e núcleo em células β e células não β Fator de transcrição (Função nas ilhotas é desconhecida)
    Especificidade da doença dos autoanticorpos GAD.
    Sujeito Prevalência Controle saudável <1% Diabetes tipo 1 de início agudo (no início) 60–80% Diabetes tipo 1 fulminante 5–9% LADA (SPIDDM) 100% Diabetes tipo 2 (dieta/OHA) 4–5% Síndrome autoimune poliglandular tipo 1 30–40% Síndrome autoimune poliglandular tipo 2 30–50% Doença tireoidiana autoimune 6–8% Síndrome da pessoa rígida 60–70%
    LADA, diabetes autoimune latente em adultos; SPIDDM, diabetes insulinodependente de progressão lenta; OHA, agentes hipoglicemiantes orais.
    Critérios diagnósticos (2023) de diabetes tipo 1 de progressão lenta (SPIDDM).
    Item obrigatório: (1) A presença de autoanticorpos anti‑ilhotas em algum momento durante o curso da doença a; (2) A ausência de cetose ou cetoacidose no diagnóstico do diabetes e a desnecessidade de tratamento com insulina para corrigir a hiperglicemia imediatamente após o diagnóstico, em princípio; (3) A diminuição gradual da secreção de insulina ao longo do tempo, necessidade de tratamento com insulina por mais de 3 meses b após o diagnóstico de diabetes e secreção endógena de insulina exaurida (imunorreatividade do peptídeo C sérico em jejum < 0,6 ng/mL) no último ponto de observação. Julgamento: Quando o caso preenche os critérios de todos os três descritos acima ((1), (2) e (3)), o caso é diagnosticado com “diabetes tipo 1 de progressão lenta (definitivo)”; quando o caso preenche apenas os critérios (1) e (2), mas não (3), o caso é diagnosticado com “diabetes tipo 1 de progressão lenta (provável)”.
    a Autoanticorpos anti‑ilhotas incluem autoanticorpo contra descarboxilase do ácido glutâmico (GAD), autoanticorpo contra antígeno‑2 associado ao insulinoma (IA‑2), anticorpo de células das ilhotas (ICA), autoanticorpo contra transportador de zinco 8 (ZnT8) ou autoanticorpo contra insulina (IAA). A medição do IAA deve ser realizada antes do início do tratamento com insulina. b Mais de 6 meses em um caso típico.