pmid: "33385077"
title: "Estudo comparativo sobre a composição química do louro ("
authors: "Stefanova G, Girova T, Gochev V, Stoyanova M, Petkova Z, Stoyanova A, Zheljazkov VD"
journal: "Heliyon"
pubdate: "2020 Dec"
doi: "10.1016/j.heliyon.2020.e05491"
source: "PMC Full Text"

Estudo comparativo sobre a composição química do louro (

Autores

Stefanova G, Girova T, Gochev V, Stoyanova M, Petkova Z, Stoyanova A, Zheljazkov VD

Periodico

Heliyon (2020 Dec)

Conteudo

Estudo comparativo da composição química de folhas de louro (Laurus nobilis L.) da Grécia e da Geórgia e da atividade antibacteriana do seu óleo essencial
O louro (Laurus nobilis L.) é uma espécie vegetal da família Lauraceae, nativa da região do Mediterrâneo. O objetivo deste estudo foi comparar a composição química das folhas de louro e a atividade antibacteriana do seu óleo essencial (OE) de árvores que crescem naturalmente na Grécia e na Geórgia. As folhas de louro dos dois habitat nativos apresentaram concentrações diferentes de ácidos fenólicos. Dos flavonóis e flavonas conjugados, a quercetina (1981,3 μg/g) e a apigenina (1433,6 μg/g) foram os principais representantes nas folhas da Grécia, enquanto a luteolina (839,1 μg/g) e a quercetina (688,1 μg/g) foram os principais nas folhas da Geórgia, respectivamente. O teor de OE foi de 1,42% e 4,54% nas folhas da Grécia e da Geórgia, respectivamente. Os principais constituintes do OE das plantas de louro gregas foram 1,8-cineol (30,8%), acetato de α-terpinila (14,9%), α-terpineol (8,0%), sabineno (7,9%) e terpinen-4-ol (6,0%). Os principais constituintes do OE das plantas de louro georgianas foram 1,8-cineol (29,2%), acetato de α-terpinila (22,6%), sabineno (12,2%) e metileugenol (8,1%). As atividades antimicrobianas do OE contra 20 microrganismos foram determinadas. Entre as bactérias Gram-positivas, a cepa de Enterococcus faecalis foi a mais sensível, seguida por Staphylococcus aureus ATCC 6538. Entre as espécies de Candida, C. albicans ATCC 10231 foi a mais sensível aos OEs das folhas de louro.
Louro; Polifenóisw; Óleo essencial; Química; Química de produtos naturais; Ciência dos Alimentos; Ciência Agrícola; Bioquímica.
Introdução
O louro (Laurus nobilis L.) fam. Lauraceae é um arbusto nativo da região do Mediterrâneo e cultivado em vários países da Ásia, Europa e Américas como especiaria, ou usado como planta ornamental. As folhas de louro, também conhecidas como folhas de louro, são uma especiaria importante, tradicionalmente utilizada como ingrediente para melhorar o sabor e o paladar dos alimentos. Os compostos biologicamente ativos de ocorrência natural nas folhas incluem terpenos, derivados de terpenos, polifenóis, alcaloides, minerais, vitaminas.
O teor de óleo essencial (OE) das folhas de louro foi relatado entre 0,2% e 4,3%, dependendo da localização, época de colheita e tipo e condições de extração do OE (por exemplo, hidrodestilação ou destilação a vapor). Pesquisas anteriores mostraram que até 270 constituintes do OE podem ser encontrados nas folhas de louro, sendo os principais o 1,8-cineol (22–56%), linalol (0,9–26,9%), acetato de α-terpinila (4,5–18,2%), α-pineno (2,2–15,9%), β-pineno (1,9–15,3%), sabineno (4,5–12,7%), α-terpineol (0,9–12,0%), terpineol-4 (0,9–4,1%). Assim como em outras plantas que contêm OE, a composição do OE das folhas de louro varia significativamente em função do ambiente, genótipo e tipo e duração do processo de destilação. Uma retrospectiva recente sobre a química de L. nobilis e as atividades biológicas de seu OE foi publicada por. Além disso, o OE das folhas de louro apresentou atividades antimicrobiana e antioxidante.
Os principais fornecedores de folhas de louro no mercado internacional são Turquia, Portugal, Espanha e Irã, embora as populações nativas sejam raras e dispersas ao redor do Mediterrâneo, elas poderiam ser potencialmente usadas para o desenvolvimento de novas variedades. Além disso, L. nobilis coletada em ambiente silvestre pode ter melhor valor nutricional do que o louro cultivado. O objetivo deste estudo foi comparar a composição química das folhas de louro de árvores silvestres encontradas em dois países europeus diferentes (Grécia e Geórgia) e avaliar a atividade antimicrobiana de seus OEs contra microrganismos patogênicos e deteriorantes.
Materiais e métodos
Produtos químicos
Os seguintes reagentes e produtos químicos foram utilizados neste estudo: polifenóis, 1,8-cineol e sulfato de sódio anidro da Sigma-Aldrich; Ágar Nutricional (AN); Ágar Sabouraud Dextrose com cloranfenicol (ASD); Caldo Műller-Hinton (CMH); Caldo Sabouraud Dextrose (CSD); ciprofloxacina (CPH 5 μg/disco); fluconazol (FLC 25 μg/disco).
Material vegetal
Folhas de L. nobilis L. foram coletadas apenas de árvores silvestres, de uma localização por país. Subamostras foram geradas a partir de 10 árvores diferentes por localização, amostrando folhas em diferentes alturas e exposições dentro de uma árvore. As folhas foram colhidas no final da estação de crescimento, durante a formação dos frutos. As folhas foram coletadas em outubro de 2016, na península de Athos, em uma terra pertencente ao mosteiro búlgaro (Norte da Grécia, a 160 m de altitude, 40°09′26″N e 24°19′35″E) e em dezembro de 2016, na província de Meria (Geórgia Ocidental, a 200 m de altitude, 41°56′27″N e 41°53′45″E).
As amostras coletadas foram identificadas como Laurus nobilis L. pela Dra. Ivanka Dimitrova, da Universidade de Plovdiv “Paisii Hilendarski”, em Plovdiv, Bulgária. A umidade (39,7 ± 0,35% para folhas da Grécia e 29,5 ± 0,35% para folhas da Geórgia) foi determinada após secagem a 105 °C até peso constante. As amostras foram analisadas quanto ao teor de polifenóis e OE, e os valores foram apresentados com base no peso seco absoluto.
Determinação de polifenóis
A preparação das amostras e as análises por CLAE foram realizadas de acordo com.
Análises por CLAE: As medições quantitativas e qualitativas de ácidos fenólicos e flavonoides foram realizadas utilizando sistemas de HPLC Waters 1525 Binary Pump (Waters, Milford, MA, EUA) que possuíam um Detector de Absorbância Dupla Waters 2484 (Waters, Milford, MA, EUA) e uma coluna Supelco Discovery HS C18 (5 μm, 25 cm × 4,6 mm) operando sob controle do software Breeze 3.30.
As análises de ácidos fenólicos e flavonoides foram realizadas de acordo com e.
Isolamento do óleo essencial (OE)
O OE foi extraído por hidrodestilação de 3 h de 100 g de folhas de louro usando aparelho de vidro tipo Clevenger da Farmacopeia Britânica, modificado por. O OE obtido foi seco com sulfato de sódio anidro e colocado em frascos escuros a 4 °C até a análise por cromatografia gasosa (CG).
Análises cromatográficas gasosas para a composição química do óleo essencial
Uma análise por CG foi realizada usando um cromatógrafo gasoso Agilent 7890A, coluna HP-5 MS (30 m × 250 μm x 0,25 μm), temperatura: 35 °C/3 min, 5 °C/min até 250 °C por 3 min, 49 min no total, hélio como gás de arraste, velocidade constante de 1 ml/min, razão de divisão 30:1. Uma análise por cromatografia gasosa-espectrometria de massa (CG/EM) foi realizada em um espectrômetro de massa Agilent 5975C, hélio como gás de arraste, coluna e temperatura iguais às da análise por CG. A identificação dos constituintes químicos foi feita por comparação com seus tempos de retenção e dados de biblioteca (; banco de dados NIST 08; bibliotecas próprias). Os componentes foram listados de acordo com seus índices de retenção (Kovat's), calculados usando uma mistura de calibração padrão de n-alcanos C8 - C40 em n-hexano. A concentração dos compostos foi calculada como porcentagem da corrente iônica total (TIC).
Atividade antimicrobiana dos OEs
Os efeitos antimicrobianos dos OEs foram avaliados contra bactérias Gram-positivas: Bacillus cereus ATCC 11778, Enterococcus faecalis (isolado clínico), Enterococcus faecium (isolado clínico), duas cepas de Staphylococcus aureus (ATCC 6538 e um isolado de deterioração de alimentos), e Listeria monocytogenes NCTC 11994; bactérias Gram-negativas: Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae (isolado clínico), duas cepas de Salmonella abony (ATCC 6017 e um isolado clínico), Shigella flexneri (isolado clínico), duas cepas de Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853 e um isolado clínico), e um isolado de deterioração de alimentos de Pseudomonas fluorescens. Proteus mirabilis (isolado clínico), e Proteus vulgaris (isolado clínico); leveduras: duas cepas de Candida albicans (ATCC 10231 e um isolado clínico), C. glabrata (isolado clínico) e C. tropicalis (isolado clínico). Os isolados clínicos de bactérias foram gentilmente fornecidos pelo Departamento de Microbiologia e Imunologia da Universidade Médica de Plovdiv, e os isolados de leveduras foram gentilmente fornecidos pelo Laboratório Nacional de Referência de Micologia do Centro Nacional de Doenças Infecciosas e Parasitárias em Sofia, Bulgária.
Todas as cepas foram depositadas na Coleção de Culturas Microbianas do Departamento de Bioquímica e Microbiologia da Universidade Paisii Hilendarski de Plovdiv, Bulgária.
A atividade antibacteriana dos EOs foi avaliada de acordo com o método de referência do Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI) para testes de suscetibilidade a discos antimicrobianos. A atividade anticandida dos EOs foi avaliada de acordo com o método de referência do CLSI para testes de suscetibilidade a discos de difusão antifúngica em leveduras. Os discos de papel filtro utilizados (Whatman nº1) no teste de difusão em disco foram preparados por embebição com 10 μL das amostras de óleos essenciais testados. O 1,8-Cineol representa cerca de 30% do teor total de óleo e os discos de papel filtro foram preparados por embebição com 3 μL de 1,8-cineol. Os controles positivos utilizados de discos de antibióticos de referência Ciprofloxacino (5 μg/disco) e antifúngico Fluconazol (25 μg/disco) foram adquiridos da HiMedia (Índia). A atividade antimicrobiana dos EOs e do 1,8-cineol determinada por testes de difusão em disco foi expressa como diâmetro da zona de inibição (ZI) em mm; essas zonas foram medidas com aproximação de milímetro usando uma escala de zona de antibiótico. As atividades antimicrobianas de CPH e FLC também foram determinadas como controles positivos.
Análise estatística
Todos os experimentos foram realizados pelo menos três vezes. Todos os dados foram apresentados como média ± erro padrão da média. A significância estatística foi avaliada pelo teste t de Student ou pela análise de variância de uma via (ANOVA) seguida pela comparação múltipla de Tukey. Diferenças entre as médias foram consideradas estatisticamente significativas se p > 0,05.
Resultados e discussão
Composição de polifenóis
Teor de polifenóis das folhas de louro da Grécia e da Geórgia (média ± DP).
Tabela 1
№ Compostos RT, min Conteúdo, μg/g ps Folhas da Grécia Folhas da Geórgia Livre Conjugado Livre Conjugado Derivados de ácido hidroxicinâmico 1. Ácido rosmarínico 6,54 47,5 ± 0,08 -a - - 2. Ácido clorogênico 33,13 243,9 ± 0,36 - - 48,1 ± 0,04 3. Ácido cafeico 38,59 586,1 ± 0,67 56,8 ± 0,09 31,4 ± 0,05 789,3 ± 0,81 4. Ácido p-cumárico 46,59 151,1 ± 0,12 246,6 ± 0,35 45,3 ± 0,06 375,9 ± 0,36 5. Ácido sinápico 47,14 607,7 ± 0,72 560,4 ± 0,52 - 1513,9 ± 1,22 6. Ácido ferúlico 47,69 300,1 ± 0,41 2193,0 ± 2,11 29,4 ± 0,04 70,4 ± 0,09 7. Ácido cinâmico 53,41 135,0 ± 0,11 486,2 ± 0,51 22,7 ± 0,04 513,4 ± 0,71 Derivados de ácido hidroxibenzoico 8. Ácido gálico 9,47 24,8 ± 0,03 - - - 9. Ácido protocatecuico 19,19 - 17,2 ± 0,02 13,3 ± 0,02 68,6 ± 0,07 10. Ácido salicílico 28,87 207,3 ± 0,36 41,7 ± 0,04 - 29,4 ± 0,03 11. Ácido vanílico 37,84 - 83,9 ± 0,12 37,0 ± 0,04 - 12. Ácido siríngico 39,86 242,0 ± 0,21 19,6 ± 0,01 5,9 ± 0,0 789,1 ± 0,72 Flavonóis 13. Miricetina 15,63 124,5 ± 0,11 75,2 ± 0,08 75,5 ± 0,08 47,2 ± 0,04 14. Quercetina 21,46 48,9 ± 0,05 42,3 ± 0,04 65,3 ± 0,07 44,9 ± 0,05 15. Canferol 26,78 122,2 ± 0,11 1981,3 ± 2,00 250,7 ± 0,24 688,1 ± 0,70 Flavonas 16. Luteolina 23,89 4,8 ± 0,0 388,6 ± 0,36 59,0 ± 0,06 839,1 ± 0,84 17. Apigenina 27,93 268,6 ± 0,26 1433,6 ± 1,12 161,7 ± 0,15 262,7 ± 0,25 Flavanonas 18. Hesperetina 16,09 - 116,4 ± 0,11 - 31,2 ± 0,03 Glicosídeos de quercetina 19. Rutina 7,42 217,4 ± 0,20 - - - 20. Hiperosídeo 8,98 141,8 ± 0,13 - - -
Composto não encontrado.
O conteúdo de polifenóis é mostrado na Tabela 1.
Neste estudo, doze ácidos fenólicos foram quantificados nas folhas de louro (Tabela 1). De modo geral, os resultados mostraram diferenças significativas no conteúdo de ácidos fenólicos livres e conjugados, determinado após hidrólise ácida. Nas folhas de louro da Grécia, nos derivados de ácidos hidroxicinâmicos, os ácidos sinápico (607,7 μg/g), cafeico (586,1 μg/g) e ferúlico (300,1 μg/g) foram os principais ácidos fenólicos livres, enquanto os ácidos ferúlico (2193,0 μg/g), sinápico (560,4 μg/g) e cinâmico (486,2 μg/g) foram os principais ácidos conjugados. Os principais derivados livres de ácidos hidroxibenzoicos foram os ácidos siríngico (242,0 μg/g) e salicílico (207,3 μg/g), enquanto o ácido vanílico (83,9 μg/g) foi o principal ácido conjugado. O kaempferol (1981,3 μg/g) e a apigenina (1433,6 μg/g) foram os principais representantes do grupo de flavonóis e flavonas conjugados, respectivamente. No grupo dos glicosídeos de quercetina, apenas as formas livres de rutina e hiperosídeo foram identificadas nas folhas gregas. Nas folhas de louro da Geórgia, o ácido p-cumárico (45,3 μg/g) foi o principal ácido fenólico livre no grupo dos derivados de ácidos hidroxicinâmicos, enquanto os ácidos sinápico (1513,9 μg/g), cafeico (789,3 μg/g) e cinâmico (513,4 μg/g) foram os principais ácidos conjugados. No grupo dos derivados de ácidos hidroxibenzoicos, o predominante foi o ácido siríngico (789,1 μg/g). A luteolina (839,1 μg/g) e o kaempferol (688,1 μg/g) foram os principais constituintes do grupo de flavonóis e flavonas conjugados, respectivamente. Os derivados do grupo de ácidos cinâmicos conjugados foram os compostos dominantes nas folhas georgianas, enquanto o nível de flavonóis e flavonas foi menor (Tabela 1).
As diferenças observadas na composição de polifenóis das amostras dos dois países podem ser explicadas pelas diferentes condições ambientais nos dois locais de coleta. O Monte Athos, na península de Athos (Grécia), está na costa do Egeu, e a vila de Meria, na Geórgia Ocidental, está perto do Mar Negro. A precipitação média anual de longo prazo no local de amostragem na Grécia (Hilandar, no Monte Athos) é de 474 mm. Nesse local, a temperatura média em julho é de 25 °C, enquanto em janeiro é de 8 °C. Além disso, a maior parte da precipitação ocorre em dezembro, com uma média de 80 mm de chuva. Por outro lado, o clima no local de amostragem na Geórgia Ocidental, ao redor da vila de Meria, é quente, úmido, ameno e temperado. A estação meteorológica em Ozurgeti, Geórgia (cerca de 10 km do local de coleta em Meria) tem precipitação média anual de longo prazo de 1981 mm, com temperatura média em agosto de 22,7 °C e temperatura média em janeiro de 5,0 °C. Em geral, os resultados aqui relatados mostraram que diferenças climáticas em ambas as regiões causaram diferenças significativas nos polifenóis das folhas. Portanto, nossos resultados estão de acordo com relatos anteriores da literatura sobre outras plantas cultivadas em diferentes regiões geográficas.
Rendimento e composição do óleo essencial
Os OEs das duas localidades eram amarelo-claros e tinham odor específico.
O teor de OE das folhas de louro gregas foi de 1,42 ± 0,01% (v/p), enquanto o teor de OE das folhas de louro georgianas foi de 4,54 ± 0,04% (v/p). O teor de OE das folhas de louro foi semelhante ao de alguns relatos na literatura, mas diferente de outros, provavelmente devido a diferenças ambientais e genotípicas. Estudos anteriores relataram que o teor de OE de folhas de louro secas era de 0,2% a 4,3%. As diferenças relatadas no teor e rendimento de OE entre este estudo e os relatos da literatura também podem ser devidas a fatores ambientais, de colheita e de processamento pós-colheita.
Composição do óleo essencial de folhas de louro de árvores nativas da Grécia e Geórgia (média ± DP).
Tabela 2
Nº Componentes TR, min RIa Conteúdo, (% do TICb) Folhas da Grécia Folhas da Geórgia 1. α-Tujeno MH 8,95 931 0,3 ± 0,0 0,7 ± 0,0 2. α-Pineno MH 9,22 939 5,3 ± 0,04 5,5 ± 0,05 3. Canfeno MH 9,71 954 0,6 ± 0,0 0,2 ± 0,0 4. Sabineno MH 10,58 971 7,9 ± 0,07 12,2 ± 0,09 5. β-Pineno MH 10,72 979 3,6 ± 0,05 3,7 ± 0,03 6. β-Mirceno MH 11,05 991 0,5 ± 0,0 1,3 ± 0,02 7. α-Felandreno MH 11,96 1003 0,3 ± 0,0 0,8 ± 0,0 8. 1,8-Cineol OM 12,50 1032 30,8 ± 0,29 29,2 ± 0,25 9. γ-Terpineno MH 13,28 1055 3,3 ± 0,04 0,6 ± 0,0 10. Linalol OM 14,63 1096 -c 3,8 ± 0,03 11. Terpinen-4-ol OM 17,09 1179 6,0 ± 0,05 1,8 ± 0,03 12. α-Terpineol OM 17,56 1189 8,0 ± 0,10 1,7 ± 0,03 13. Acetato de bornila OM 20,01 1269 1,2 ± 0,02 - 14. Acetato de α-terpinila OM 21,87 1333 14,9 ± 0,13 22,6 ± 0,20 15. Eugenol PP 21,98 1363 2,7 ± 0,04 0,8 ± 0,0 16. Metileugenol PP 23,17 1371 3,6 ± 0,05 8,1 ± 0,08 17. β-Elemeno SH 24,20 1390 - 0,1 ± 0,0 18. β-Cariofileno SH 24,49 1429 0,4 ± 0,0 0,4 ± 0,0 19. Germacreno D SH 25,18 1484 0,3 ± 0,0 0,1 ± 0,0 20. Elemicina SH 26,10 1522 - 1,1 ± 0,0 21. Óxido de cariofileno OS 27,49 1574 1,8 ± 0,03 0,2 ± 0,0 22. Espatulenol OS 27,61 1619 0,4 ± 0,0 0,2 ± 0,0 23. β-Eudesmol OS 28,05 1642 - 0,7 ± 0,0 24. n-Heptadecano AH 29,27 1700 0,2 ± 0,0 0,1 ± 0,0 25. n-Heneicosano AH 32,50 2100 0,6 ± 0,0 0,2 ± 0,0 26. Fitola D 32,86 2105 1,5 ± 0,02 0,1 ± 0,0 27. n-Docosano AH 33,79 2200 0,7 ± 0,0 0,2 ± 0,0 28. n-Tricosano AH 35,00 2300 0,4 ± 0,0 0,1 ± 0,0 29. n-Tetracosano AH 36,13 2400 0,3 ± 0,0 0,1 ± 0,0 30. n-Pentacosano AH 38,10 2500 0,5 ± 0,0 0,2 ± 0,0 31. n-Hexacosano AH 39,88 2600 0,8 ± 0,0 0,3 ± 0,0 32. n-Heptacosano AH 41,72 2700 0,9 ± 0,01 0,3 ± 0,0 33. n-Octacosano AH 44,40 2800 0,3 ± 0,0 0,1 ± 0,0 34. Esqualeno T 45,02 2817 0,9 ± 0,01 0,3 ± 0,0 Hidrocarbonetos alifáticos (AH),% 4,79 1,66 Hidrocarbonetos monoterpênicos (MH),% 22,10 25,50 Monoterpenos oxigenados (OM),% 61,46 60,40 Hidrocarbonetos sesquiterpênicos (SH),% 0,73 1,71 Sesquiterpenos oxigenados (OS),% 2,18 0,39 Diterpenos (D),% 1,49 0,11 Triterpenos (T),% 0,90 0,30 Fenilpropanoides (PP),% 6,37 9,93
RI – índice de retenção (Kovat's).
TIC – corrente iônica total; Todos os dados são apresentados como valor médio ± desvio padrão (n = 3).
nd – abaixo de 0.05% do TIC ou não detectado.
A composição química dos EOs de folhas de louro da Grécia e da Geórgia é mostrada na Tabela 2.
No geral, 30 constituintes de EO, ou 99.0% do teor total de óleo foram encontrados no EO de louro grego (Tabela 2). Quatorze dos constituintes do EO apresentaram concentrações acima de 1%. Os principais constituintes do EO foram: 1,8-cineol (30.8%), acetato de α-terpinila (14.9%), α-terpineol (8.0%), sabineno (7.9%), terpinen-4-ol (6.0%), α-pineno (5.3%), β-pineno (3.6%), metileugenol (3.6%) e γ-terpineno (3.3%).
Trinta e três constituintes, ou 97.8% do total de óleo foram identificados no EO de louro da Geórgia. Onze desses constituintes do EO estavam em concentrações acima de 1%. Os principais no EO de louro da Geórgia foram: 1,8-cineol (29.2%), acetato de α-terpinila (22.6%), sabineno (12.2%), metileugenol (8.1%), α-pineno (5.5%), linalol (3.7%) e β-pineno (3.7%). Algumas das diferenças na composição química dos EOs de folhas de louro neste estudo e em alguns relatos podem ser devidas a fatores ambientais e genéticos.
No geral, a composição dos EOs de louro grego e da Geórgia neste estudo variou dentro da faixa da composição química de folhas de louro relatada anteriormente. Relatos anteriores mostraram que os EOs de folhas de louro produzidos de diferentes regiões eram ricos em 1,8-cineol (5.7–6,3%), acetato de α-terpinila (5.9–25.7%), linalol (3.7–16.4%), sabineno (2.3–14.1%), metileugenol (3.1–12.5%), terpinen-4-ol (3.4–11.1%), limoneno (5.3%), α-pineno (3.00–7.4%) e β-pineno (1.6–13.4%).
Monoterpenos oxigenados (1,8-cineol, acetato de α-terpinila, α-terpineol, terpinen-4-ol) foram o grupo dominante no EO de louro grego, seguidos por hidrocarbonetos monoterpênicos (sabineno, α-pineno, β-pineno, γ-terpineno), fenilpropanoides (metileugenol) e hidrocarbonetos alifáticos. Monoterpenos oxigenados também foram o grupo dominante no EO de louro da Geórgia, seguidos por hidrocarbonetos monoterpênicos e fenilpropanoides.
Atividade antimicrobiana dos óleos essenciais (EOs)
Atividade antimicrobiana de óleos essenciais de folhas de louro de árvores de crescimento selvagem na Grécia e na Geórgia (média ± DP).
Tabela 3
Test microorganisms Inhibitory zone diameter (IZ), mm Antibiotics Laurel leaf essential oil from Greece10 μl/disc Laurel leaf essential oil from Georgia10 μl/disc 1,8-cineole3 μl/disc Ciprofloxacin Gram-positive bacteria
B. cereus ATCC 11778 18.0 ± 0.18 12.0 ± 0.13 10.2 ± 0.30 28.0 ± 0.27
E. faecalis (clinical isolate) 52.0 ± 0.53 11.5 ± 0.13 10.0 ± 0.11 26.0 ± 0.26
E. faecium (clinical isolate) 20.0 ± 0.19 12.0 ± 0.13 10.0 ± 0.11 ni
S. aureus ATCC 6538 40.0 ± 0.38 12.5 ± 0.13 10.5 ± 0.13 30.0 ± 0.29
S. aureus (clinical isolate) 19.0 ± 0.19 15.0 ± 0.16 12.5 ± 0.13 30.0 ± 0.29
L. monocytogenes NCTC 11994 12.0 ± 0.13 10.0 ± 0.10 9.5 ± 0.11 18.0 ± 0.17

Gram-negative bacteria
E. coli ATCC 25922 15.6 ± 0.17 nia 8.4 ± 0.08 21.5 ± 0.20
K. pneumoniae (clinical isolate) 10.0 ± 0.11 ni ni 13.0 ± 0.13
S. abony ATCC 6017 14.0 ± 0.14 9.5 ± 0.11 8.4 ± 0.08 12.5 ± 0.13
S. abony (clinical isolate) 14.0 ± 0.14 9.0 ± 0.10 8.4 ± 0.08 18.5 ± 0.20
S. flexneri (clinical isolate) 14.0 ± 0.14 ni ni 16.5 ± 0.14
P. aeruginosa ATCC 27853 ni ni ni 15.0 ± 0.14
P. aeruginosa (clinical isolate) ni ni ni 12.0 ± 0.13
P. fluorescens (clinical isolate) ni ni ni 16.8 ± 0.17
P. mirabilis (clinical isolate) 11.0 ± 0.12 ni ni 12.0 ± 0.13
P. vulgaris (clinical isolate) 12.0 ± 0.13 8.5 ± 0.08 8.2 ± 0.08 12.5 ± 0.13

Yeasts Fluconazole
C. albicans ATCC 10231 24.8 ± 0.24 16.3 ± 0.14 14.2 ± 0.13 21.5 ± 0.21
C. albicans (clinical isolate) 21.0 ± 0.21 16.0 ± 0.14 14.1 ± 0.11 22.5 ± 0.22
C. glabrata (clinical isolate) 15.0 ± 0.14 10.0 ± 0.10 9.1 ± 0.11 21.0 ± 0.20
C. tropicalis (clinical isolate) 16.6 ± 0.15 12.0 ± 0.13 10.1 ± 0.11 16.5 ± 0.16

ni – nenhuma inibição detectada.
Neste estudo, as amostras de EO de folha de louro demonstraram atividade antimicrobiana contra todas as bactérias Gram-positivas e leveduras testadas (Tabela 3).
Entre as bactérias Gram-positivas, a cepa pertencente a E. faecalis foi a mais sensível, seguida por S. aureus ATCC 6538, enquanto L. monocytogenes NCTC 11994 foi a mais resistente. Entre as espécies pertencentes ao gênero Candida, C. albicans foi a mais sensível e C. glabrata foi a mais resistente aos EOs de folha de louro testados. Além disso, P. aeruginosa e P. fluorescens foram resistentes às amostras de EO testadas. S. flexneri e K. pneumoniae foram resistentes aos EOs. No geral, as bactérias Gram-positivas e leveduras foram mais sensíveis aos EOs testados em comparação com as bactérias Gram-negativas, o que está de acordo com relatos anteriores.
Em geral, o EO de folha de louro da Geórgia demonstrou atividade inibitória mais fraca. A diferença nas atividades antimicrobianas das amostras de EO testadas deveu-se muito provavelmente às diferenças em sua composição química. O teor de monoterpenos oxigenados nos dois óleos era diferente; por exemplo, 1,8-cineol, acetato de α-terpinila, α-terpineol, terpinen-4-ol, etc., e a presença desses compostos pode explicar a atividade antimicrobiana dos EOs. A atividade antimicrobiana do 1,8-cineol, que é o componente mais abundante de ambos os EOs de louro, também foi estudada. O 1,8-cineol puro demonstrou atividade antimicrobiana mais fraca em comparação com os EOs, o que significa que a atividade antimicrobiana dos EOs de louro não poderia ser atribuída apenas ao composto dominante, mas o efeito adicional de alguns compostos minoritários, bem como efeitos sinérgicos, podem ter desempenhado um papel.

A atividade antimicrobiana dos EOs testados neste estudo foi comparável à atividade do antibiótico antibacteriano ciprofloxacino e do antimicótico fluconazol, com exceção da atividade do EO contra Pseudomonas spp. A diferente resistência antimicrobiana de ambos os tipos de bactérias deveu-se provavelmente à diferente estrutura e composição química da parede celular das bactérias Gram-positivas e Gram-negativas. De fato, a chamada “membrana externa”, que é típica das bactérias Gram-negativas, pode prevenir ou retardar a difusão do extrato de EO do meio nutritivo através da parede celular e da membrana para o citoplasma.

Os EOs também demonstraram atividade antimicrobiana contra três espécies de leveduras de importância médica pertencentes ao gênero Candida. No geral, espécies NAC C. glabrata e C. tropicalis foram mais resistentes em comparação com C. albicans.

Os resultados deste estudo confirmaram dados publicados sobre as atividades antimicrobianas dos EOs de louro. No entanto, em alguns dos relatos anteriores, o EO de folha de louro foi isolado seguindo métodos diferentes, e o material vegetal era originário de outros locais com condições ambientais diferentes.

Os resultados desta pesquisa foram utilizados por membros da equipe do autor para o desenvolvimento da documentação necessária para o equipamento e a instalação de processamento por destilação a vapor de folhas de louro de árvores silvestres ao redor do mosteiro búlgaro no Monte Athos, Grécia. Consequentemente, em 2019, o EO de folhas de louro foi isolado nesta instalação de processamento. O EO resultante está sendo atualmente avaliado quanto à sua utilização em diversos alimentos, cosméticos e outros produtos de consumo, sujeito a pesquisas adicionais pela equipe de pesquisa. Além disso, membros da equipe de pesquisa estão desenvolvendo documentação para o processamento industrial do louro cultivado silvestre ao redor da vila de Meria, Geórgia.

Conclusões
Este estudo encontrou dissimilaridades significativas no perfil químico dos óleos essenciais (OEs) de folhas de louro da Grécia e da Geórgia. Derivados dos ácidos hidroxicinâmico e hidroxibenzoico, flavonóis e flavonas dominaram nas folhas de louro da Grécia, enquanto os compostos dominantes nas folhas da Geórgia foram o grupo de ácidos cinâmicos conjugados. O principal grupo de constituintes nos OEs das folhas de louro gregas e georgianas foi composto pelos monoterpenos oxigenados 1,8-cineol, α-terpinil acetato, α-terpineol e terpinen-4-ol. Os OEs demonstraram atividade antimicrobiana contra microrganismos patogênicos e deteriorantes. As plantas de louro da Grécia e da Geórgia mostram potencial como uma nova fonte de folhas de louro para o mercado internacional de especiarias.
Declarações
Declaração de contribuição dos autores
Galina Stefanova, Tanya Girova, Velizar Gochev, Magdalena Stoyanova, Zhana Petkova, Valtcho D. Zheljazkov: Realizaram os experimentos; Analisaram e interpretaram os dados; Escreveram o artigo.
Albena Stoyanova: Concebeu e projetou os experimentos; Realizou os experimentos; Analisou e interpretou os dados; Escreveu o artigo.
Declaração de financiamento
Esta pesquisa não recebeu nenhuma bolsa específica de agências de fomento do setor público, comercial ou organizações sem fins lucrativos. A APC foi paga com fundos iniciais concedidos ao Dr. Valtcho D. Jeliazkov (Zheljazkov).
Declaração de disponibilidade de dados
Dados incluídos no artigo.
Declaração de interesses
Os autores declaram não haver conflito de interesses.
Informações adicionais
Nenhuma informação adicional está disponível para este artigo.
Referências
Evaluation of the volatile oil composition and antiproliferative activity of Laurus nobilis L. (Lauraceae) on breast cancer cell line models
Seasonal variation in volatile oil, polyphenol content and antioxidant activity in extract of Laurus nobilis grown in Iran
On improved apparatus for microdistillation of rose flowers
Laurus nobilis: composition of essential oil and its biological activities
A review on chemistry and biological activities of Laurus nobilis L. essential oil
Nutritional and antioxidant contributions of Laurus nobilis L. leaves: would be more suitable a wild or a cultivated sample?
The content of polyphenols and carotenoids in three apricot cultivars depending on stage of maturity and geographical region
Antioxidant and antimicrobial activities of essential oils extracted from Laurus nobilis L. leaves by using solvent-free microwave and hydrodistillation
Chemical composition and antimicrobial activity of Laurus nobilis L. essential oils from Bulgaria
Determination of polyphenols in Spanish wines by capillary zone electrophoresis. Application to wine characterization by chemometric
Study of the chemical composition, antibacrterial and antioxidant activities of the essential oil extracted from the leaves of Algerian Laurus nobilis Lauraceae
The role of structure and molecular properties of terpenoids in determining their antimicrobial activity
Atividades antioxidantes e compostos fenólicos em espécies búlgaras de Fumaria
Sistema de imersão temporária em duas fases para transformação genética de sálvia (Salvia tomentosa Mill.) por Agrobacterium rhizogenes
Variações sazonais dos componentes do óleo volátil das folhas de Laurus nobilis L. em Isfahan, Irã
Óleo essencial de louro (Laurus nobilis L.): um estudo sobre sua aplicação em odontologia