pmid: "31711477"
title: "Efeitos sedativos e hipnóticos da inalação do óleo essencial composto Anshen para insônia."
authors: "Zhong Y, Zheng Q, Hu P, Huang X, Yang M, Ren G, Du Q, Luo J, Zhang K, Li J, Wu H, Guo Y, Liu S"
journal: "BMC complementary and alternative medicine"
pubdate: "2019 Nov 11"
doi: "10.1186/s12906-019-2732-0"
source: "PMC Full Text"

Efeitos sedativos e hipnóticos da inalação do óleo essencial composto Anshen para insônia.

Autores

Zhong Y, Zheng Q, Hu P, Huang X, Yang M, Ren G, Du Q, Luo J, Zhang K, Li J, Wu H, Guo Y, Liu S

Periodico

BMC complementary and alternative medicine (2019 Nov 11)

Conteudo

Efeitos sedativos e hipnóticos da inalação de óleo essencial composto Anshen para insônia

Fundamentos

A composição química de muitos óleos essenciais indica que eles possuem efeitos sedativos e hipnóticos, mas ainda faltam estudos sistemáticos sobre os efeitos sedativos e hipnóticos dos óleos essenciais. Além disso, a aromaterapia parece não ter os efeitos colaterais de muitas substâncias psicotrópicas tradicionais, o que claramente vale a pena para futuras pesquisas clínicas e científicas. A aplicação clínica de óleos essenciais em aromaterapia tem recebido atenção crescente, e estudos detalhados sobre as atividades farmacológicas de óleos essenciais inalados são cada vez mais necessários.

Hipótese/objetivo

Como os insones geralmente apresentam sintomas de depressão e ansiedade em graus variados, com base na teoria da aromaterapia da Medicina Tradicional Chinesa, este experimento visa estudar um óleo essencial composto Anshen que é compatível com óleo essencial de lavanda, óleo essencial de laranja doce, óleo essencial de sândalo e outros óleos essenciais de medicina aromática com efeitos sedativos e hipnóticos, ansiolíticos e antidepressivos. Estudar os efeitos sedativos e hipnóticos da inalação do óleo essencial composto Anshen e os principais componentes químicos do óleo essencial composto Anshen, e comparar e analisar a farmacodinâmica do diazepam, um medicamento comumente usado para insônia.

Métodos

O teste de campo aberto e os experimentos de latência do sono e tempo de sono induzidos por pentobarbital foram utilizados para analisar e comparar os efeitos sedativos e hipnóticos da inalação do óleo essencial composto Anshen e da administração de diazepam em camundongos. As alterações de 5-HT e GABA no cérebro de camundongos foram analisadas por ELISA. Os principais constituintes voláteis do óleo essencial composto Anshen foram analisados por cromatografia gasosa-espectrometria de massas (GC-MS).

Resultados

A inalação do óleo essencial composto Anshen pode reduzir significativamente a atividade espontânea dos camundongos, diminuir a latência do tempo de sono e prolongar a duração do tempo de sono. Os resultados do ensaio de imunoabsorção enzimática mostraram que o óleo essencial composto Anshen pode aumentar o conteúdo de 5-HT e GABA no cérebro dos camundongos. Os principais constituintes químicos voláteis do óleo essencial composto Anshen são D-limoneno (24,07%), Linalol (21,98%), Acetato de linalila (15,37%), α-Pineno (5,39%) e α-Santalol (4,8%).

Conclusão

O estudo descobriu que a inalação do óleo essencial composto Anshen tem efeito sedativo e hipnótico. Este estudo fornece uma base teórica para futuras pesquisas e desenvolvimento dos efeitos sedativos e hipnóticos do óleo essencial composto Anshen com base na teoria da aromaterapia.

Fundamentos
Insônia é um distúrbio do sono comum que pode ser causado por estresse psicológico, dor crônica e medicamentos. Um grande número de pacientes com insônia está associado a diferentes graus de depressão e ansiedade. Esses sintomas podem ocorrer simultaneamente com a insônia, resultando em diminuição da atividade mental, perda de memória, resposta lenta, disfunção autonômica, levando à redução da função imunológica e perda de memória. A insônia afeta aproximadamente 10–30% dos adultos em todo o mundo, e 6% são diagnosticados com insônia crônica. Os medicamentos usados para tratar a insônia incluem agonistas dos receptores de benzodiazepínicos, agonistas dos receptores não benzodiazepínicos, agonistas seletivos dos receptores de melatonina e antidepressivos sedativos. Além disso, a maioria dos alvos atuais para medicamentos anti-insônia são os receptores de serotonina (5-HT) e os receptores de ácido gama-aminobutírico (GABA). No entanto, o uso desses medicamentos será acompanhado por efeito "ressaca", distúrbio psicomotor, dependência de drogas, vício, tolerância, amnésia, insônia rebote e outros efeitos colaterais, e sua eficácia clínica ainda é controversa. Portanto, a pesquisa sobre novos medicamentos sedativos e hipnóticos com menos efeitos colaterais e melhor eficácia ainda está em andamento.
A aromaterapia é atualmente utilizada para tratar dor crônica, depressão, ansiedade, insônia, melhorar a eficiência cognitiva, aliviar o estresse e outros distúrbios relacionados a condições psicológicas e fisiológicas. A aromaterapia é o uso de óleos essenciais extraídos das flores, caules, folhas, raízes e frutos de várias plantas. É absorvida pelo corpo por via oral, inalação, difusão, banho e massagem para melhorar a saúde mental e física. Foi relatado que o principal mecanismo da aromaterapia pode estar relacionado ao sistema límbico do cérebro. Os componentes do aroma estimulam as células olfativas, que transmitem sinais ao cérebro e afetam o sistema nervoso autônomo e a secreção hormonal. As partículas de odor atingem o sistema límbico através do nervo olfativo, produzindo efeitos sedativos e relaxantes que afetam a pressão arterial, frequência cardíaca, memória e resposta ao estresse. Os óleos essenciais atuam diretamente nos sistemas respiratório, circulatório e nervoso central através da pele e do trato respiratório. A composição química de muitos óleos essenciais indica que eles têm um efeito calmante e hipnótico, mas ainda faltam pesquisas sistemáticas sobre os efeitos sedativos e hipnóticos dos óleos essenciais. Alguns estudos mostraram que certos óleos essenciais têm efeitos sedativos e hipnóticos, incluindo bergamota, laranja-doce, valeriana, limão, rosa, cedro e outros óleos essenciais. Os óleos essenciais de lavanda incluem principalmente linalol e acetato de linalila. Foi relatado que o linalol em baixa dose tem um efeito sedativo no corpo humano por inalação de vapor. Estudos anteriores sobre aromaterapia para melhorar o sono usaram métodos como inalação, massagem, aplicação na pele e outros, utilizando uma mistura de óleos essenciais como lavanda, gerânio, cítricos, bergamota e manjerona. Esses resultados também mostram que a aromaterapia para melhorar o sono é significativa. O uso de óleos essenciais pode ser um tratamento seguro e eficaz para ou no tratamento da insônia, o que pode reduzir o uso excessivo de medicamentos prescritos e diminuir o risco de distúrbios do sono afetarem a saúde do corpo a curto ou longo prazo. Além disso, a aromaterapia parece não ter os efeitos colaterais de muitas substâncias psicotrópicas tradicionais, o que claramente vale a pena para pesquisas clínicas e científicas adicionais. A aplicação clínica de óleos essenciais na aromaterapia tem recebido cada vez mais atenção, e pesquisas detalhadas sobre as atividades farmacológicas dos óleos essenciais inalados são cada vez mais necessárias.
A inalação é uma aromaterapia rápida e eficaz que induz resposta do sistema nervoso central em apenas 4 segundos. Ela utiliza a respiração para começar pela absorção de moléculas voláteis através da mucosa nasal, enquanto as moléculas voláteis entram no sistema circulatório após a troca gasosa nos pulmões. A via olfativa não apenas conduz o sentido do olfato, mas também regula a memória, as emoções, as atividades viscerais e funções avançadas do cérebro, como alerta e sono, por meio da regulação olfativa. O neurotransmissor das informações de transmissão olfativa e o sistema neuronal de Orexina na região lateral do hipotálamo iniciam neurônios como tronco encefálico, prosencéfalo basal e hipotálamo, produzindo ácido gama-aminobutírico (GABA), serotonina (5-HT), etc. Esses transmissores estão intimamente relacionados à patogênese da insônia e outras doenças. A administração por inalação é uma forma não destrutiva de administração, que minimiza os efeitos tóxicos e colaterais. Portanto, pode ser uma forma eficaz de controlar e tratar a insônia e outras doenças psiquiátricas.
Em muitos casos, o papel de um único medicamento é limitado e não consegue resolver completamente as condições complexas e multivariadas dos pacientes com insônia. A insônia é causada por uma variedade de fatores patogênicos. Pacientes com insônia geralmente apresentam diferentes graus de depressão e ansiedade. Portanto, o uso de um único óleo essencial pode apenas alcançar o efeito de sedação e hipnose, sem resolver completamente o problema dos distúrbios do sono. A terapia com múltiplas ervas baseada na teoria da Medicina Tradicional Chinesa é uma das características mais importantes da prática clínica da Medicina Tradicional Chinesa. A Medicina Tradicional Chinesa acredita que a insônia é causada por disfunção dos órgãos. Clinicamente, é mais comum em pacientes com insônia devido à depressão hepática, que é a principal causa da insônia. Os medicamentos reguladores do Qi têm o efeito de dispersar o qi hepático estagnado para aliviar a depressão e, portanto, podem ser um medicamento eficaz para tratar a insônia. Na Medicina Tradicional Chinesa, Laranja doce, Sândalo, Rosa, Olíbano, Agarwood, Flor de laranjeira são medicamentos reguladores do Qi, que têm o efeito de dispersar o qi hepático estagnado para aliviar a depressão. Laranja doce (casca de laranja) e Agarwood são pares clássicos de ervas, que têm o efeito de aliviar a estagnação do qi no fígado e resolver a estagnação para tranquilização. Do ponto de vista da medicina ocidental, a Lavanda tem efeitos sedativo-hipnóticos e ansiolíticos, o Sândalo e o Agarwood têm efeitos sedativo-hipnóticos, a Laranja doce, a Rosa, o Olíbano e a Flor de laranjeira têm efeitos antidepressivos. Neste estudo, o óleo essencial de Lavanda, comumente usado no tratamento da insônia, foi combinado com o óleo essencial de medicamentos reguladores do Qi para preparar o óleo essencial Composto Anshen e seu efeito sobre os efeitos sedativo e hipnótico com administração por inalação foi estudado. Com base na teoria da aromaterapia da Medicina Tradicional Chinesa, este experimenta visa tratar a insônia a partir da perspectiva de aliviar a estagnação do qi no fígado e resolver a estagnação para tranquilização. O objetivo do estudo é investigar o potencial tratamento da insônia com o óleo essencial Composto Anshen.
Métodos
Animais
Camundongos ICR com idade de 6 a 8 semanas, metade machos e metade fêmeas, pesando 25-35 g, fornecidos pela Jiangsu Jicui Yaokang Biotechnology Co., Ltd. Número de licença: SCXK (su) 2018–0008. Durante todo o experimento, os animais puderam obter comida e água suficientes. A temperatura do ambiente de alimentação foi de 21 °C ± 1 °C, a umidade foi de 55% ± 5%, a luz e a escuridão alternaram por 12 h, e o teste foi iniciado após 1 semana de alimentação adaptativa.
Os experimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal Institucional da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Jiangxi. Todos os animais foram mantidos de acordo com as diretrizes estabelecidas pela legislação chinesa sobre o uso ético e cuidado de animais de laboratório. Todos os animais foram mantidos de acordo com as diretrizes estabelecidas pela legislação sobre o uso ético e cuidado de animais de laboratório. Todos os esforços foram feitos para minimizar tanto o sofrimento animal quanto o número de animais utilizados para produzir dados confiáveis.
Principais medicamentos e reagentes
O óleo essencial composto Anshen é uma fórmula combinada composta por sete óleos essenciais naturais de plantas. Óleo de Lavanda, Laranja Doce, Sândalo, Olíbano, Flor de Laranjeira, Rosa e Agarwood são adquiridos da Puli Aroma Pharmaceutical Technology (Shanghai) Co., Ltd. Os sete óleos essenciais são misturados para formar um óleo composto com uma proporção de mistura específica. (Proporção de mistura dos óleos de Lavanda, Laranja Doce, Sândalo, Olíbano, Flor de Laranjeira, Rosa, Agarwood: 10:4:2:1,6:1,2:1:0,6). Diazepam (Beijing Yimin Pharmaceutical Co., LTD). Tween-80 (Shanghai Miura Reagent Co., Ltd). Desinfetante Etanol (Nanchang Likang Pharmaceutical Machinery Co., Ltd). Kit Elisa de 5-HT (Andygene). Kit Elisa de GABA (Andygene). Tampão PBS (Solarbio).
Principais equipamentos e instrumentos
Máquina de aromaterapia por atomização ultrassônica (Shenzhen Kangmeitai Industrial Co., Ltd). Sala de aromaterapia animal (estrutura de caixa grande de 50x50x40cm feita de acrílico, estrutura de 4 caixas pequenas de 20x20x20cm que podem ventilar gás, e a máquina de aromaterapia por atomização ultrassônica pode ser colocada no meio). Sistema de Análise de Vídeo e Registro de Comportamento SMART (Panlab). Espectrômetro de Massas Agilent 7890A GC-5975 (Agilent, EUA). Moinho de tecidos de alta produtividade (Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., Ltd. SCIENTZ-192). Centrífuga de alta velocidade e baixa temperatura (2K15C, SIGMA, Alemanha). Leitor de microplacas (Gene Co., Ltd. Elx800).
Estabelecimento de modelos de camundongos com insônia
Os animais experimentais, exceto o grupo controle, receberam injeção intraperitoneal de PCPA para induzir insônia animal. A PCPA é um inibidor da triptofano hidroxilase (TDH), e a TDH é a enzima limitante do neurotransmissor do sono, serotonina (5-HT). Portanto, a PCPA priva o sono ao bloquear a 5-HT. Assim, a PCPA é usada para privar o sono ao bloquear a 5-HT. Cada camundongo foi pesado com precisão para PCPA na quantidade de 300 mg/kg, e misturado com solução salina fracamente alcalina para preparar uma suspensão. Após injeção contínua por 2 dias, entre 28–32 h após a primeira injeção intraperitoneal, o ritmo circadiano desapareceu e as atividades diurnas e noturnas continuaram, indicando a modelagem bem-sucedida.
Agrupamento e tratamento
48 camundongos foram divididos aleatoriamente em 6 grupos. Este experimento consistiu em grupo controle, grupo modelo, grupo diazepam e grupos de óleo essencial Composto Anshen (grupo de dose baixa, grupo de dose média, grupo de dose alta). Após o estabelecimento do modelo de insônia PCPA, o grupo modelo não implementou a inalação da intervenção com óleo essencial, no qual os grupos de dose baixa, média e alta receberam aromaterapia diária por 7 dias consecutivos, 60 minutos por dia. O óleo essencial foi diluído com solução de Tween 80 a 1%. A concentração das doses baixa, média e alta do óleo essencial Composto Anshen foi de 1 × 10⁻³, 2 × 10⁻³, 4 × 10⁻³. O tempo de inalação foi definido diariamente das 8:00 às 16:00. O diazepam foi preparado em uma solução de 0,1 ml/10 g com água destilada. O grupo diazepam recebeu solução de diazepam por gavagem por 7 dias consecutivos, e a dose foi de 1 mg/kg (a dose foi convertida para a dose de camundongos pela área de superfície corporal de acordo com a dose para adultos). O grupo controle, grupo modelo e cada grupo de óleo essencial Composto Anshen receberam o mesmo volume de água destilada por gavagem.

Alterações de peso nos camundongos
Os camundongos foram pesados antes do estabelecimento do modelo de insônia PCPA e ao final do experimento, e o ganho de peso foi calculado.

Teste de campo aberto
Após a aromaterapia final ou administração do medicamento por 30 minutos, os camundongos de cada grupo foram submetidos a um teste de campo aberto. Os camundongos foram aclimatados ao ambiente por 5 minutos, e os parâmetros comportamentais foram contados em 3 minutos, e as diferenças entre os camundongos de cada grupo foram comparadas. Índice do teste de atividade autônoma: Distância total de movimento, unidade: cm; Velocidade máxima, unidade: cm/s; Velocidade média, unidade: cm/s; Tempo de repouso, unidade: s; Número de levantamentos.

Sono induzido por pentobarbital
Camundongos de cada grupo receberam injeção intraperitoneal de uma dose limiar de pentobarbital sódico de 45 mg/kg após a aromaterapia final ou 30 minutos da administração. Após a administração, o desaparecimento do reflexo de endireitamento dos camundongos por 1 minuto foi considerado como o índice de entrada no sono. O tempo desde a injeção do medicamento até o desaparecimento do reflexo de endireitamento foi a latência do tempo de sono, o tempo desde o desaparecimento do reflexo de endireitamento até a recuperação foi a duração do tempo de sono, e a latência do tempo de sono e a duração do tempo de sono foram registradas.

Análise de neurotransmissores cerebrais
Após a conclusão do teste de campo aberto, os camundongos foram submetidos a jejum de 6 h. Os camundongos de cada grupo foram sacrificados por deslocamento cervical, o crânio foi removido, o tecido cerebral foi exposto e o tecido cerebral foi completamente removido. Após separar o cérebro, o sangue e os tecidos foram lavados em tampão PBS gelado e pesados com balança eletrônica. O cérebro do camundongo foi colocado em um tubo de centrífuga, uma quantidade determinada de tampão PBS foi adicionada, homogeneizado completamente, centrifugado (3000 r/min, 20 min), e o sobrenadante foi coletado. Após tratamento com os kits ELISA de 5-HT e GABA para camundongos, os conteúdos de 5-HT e GABA foram medidos a 450 nm em um leitor de microplacas.
Análise da composição química do óleo essencial Compound Anshen
Condições cromatográficas gasosas: foi utilizada coluna capilar Agilent DB-624 (30 m×320 μm×1,8 μm), o gás de arraste foi He de alta pureza (99,999%), o volume de injeção foi de 1 μL, a razão de split foi 40:1 e a vazão foi de 1 mL/min. Programa de temperatura: temperatura inicial 40 °C (por 1 min), rampa de 10 °C/min até 220 °C, e então aumentar a temperatura a 25 °C/min até 280 °C (por 9 min). Condições de espectrometria de massas: fonte de íons EI, energia de elétrons 70 eV, temperatura da fonte de íons 230 °C, temperatura do quadrupolo MS 150 °C; temperatura da interface 250 °C, atraso do solvente 3,0 min, padrão de varredura de qualidade varredura completa, faixa de varredura de 30 a 650 amu. Recuperação da biblioteca espectral padrão NIST11, método de normalização da área do pico para calcular a porcentagem relativa de cada componente.
Análise estatística
Os resultados dos testes foram expressos como Média ± DP. O software SPSS 21.0 foi utilizado para análise estatística, o método ANOVA de um fator foi utilizado para análise, o método LSD foi utilizado para homogeneidade de variância, o método Games-Howell foi utilizado para heterogeneidade de variância, e P < 0,05 foi adotado como nível de teste.
Resultados
Resultados da medição das alterações de peso corporal em camundongos
Comparação do ganho de peso em cada grupo ao final do experimento (,n = 8). O ganho de peso ao final do experimento foi mostrado Fig. 1.Os grupos de baixa dose, média dose e alta dose receberam aromaterapia diária, e a concentração diária das doses baixa, média e alta do óleo essencial Compound Anshen (CEO) foi de 1 × 10−3, 2 × 10−3,4 × 10−3 por 7 dias consecutivos. Nota: comparado com o grupo controle, ΔP<0.05,ΔΔP<0.01,comparado com o grupo modelo,*P<0.05,**P<0.01
Os animais foram pesados antes do estabelecimento do modelo de insônia PCPA e ao final do experimento, e o ganho de peso foi calculado. O efeito do óleo essencial Composto Anshen no peso corporal dos animais foi estudado por meio do experimento de variação de peso e comparado com o grupo diazepam (Fig. 1). Em comparação com o grupo controle, o ganho de peso do grupo modelo (P = 0,000) foi extremamente reduzido de forma significativa, o ganho de peso do grupo diazepam (P = 0,000) foi extremamente aumentado de forma significativa, o ganho de peso do grupo de dose baixa (P = 0,14) e do grupo de dose alta (P = 0,14) foi aumentado de forma significativa, e o ganho de peso do grupo de dose média (P = 0,370) não apresentou diferença significativa; Em comparação com o grupo modelo (P = 0,237), o ganho de peso dos outros grupos (P = 0,000) foi extremamente aumentado de forma significativa, exceto pelo grupo diazepam.

Resultados do teste de campo aberto
Efeito do óleo essencial Composto Anshen na distância de movimento, velocidade média, velocidade máxima, tempo de repouso e número de levantamentos de braços dos camundongos (n = 8). Os resultados experimentais da atividade autônoma dos camundongos após inalação do óleo essencial Composto Anshen são mostrados na Fig. 2. Os grupos de dose baixa, dose média e dose alta receberam aromaterapia diária, e a concentração diária das doses baixa, média e alta do óleo essencial Composto Anshen (CEO) foi de 1 × 10⁻³, 2 × 10⁻³, 4 × 10⁻³ por 7 dias consecutivos. Nota: em comparação com o grupo controle, ΔP < 0,05, ΔΔP < 0,01; em comparação com o grupo modelo, *P < 0,05, **P < 0,01.
Do ponto de vista da distância de movimento dos camundongos (Fig. 2), em comparação com o grupo controle, a distância de movimento do grupo modelo (P = 0,002) aumentou de forma extremamente significativa, e a distância de movimento do grupo diazepam (P = 0,039) diminuiu significativamente. Em comparação com o grupo modelo, não houve diferença significativa na distância de movimento no grupo de dose baixa (P = 0,062), e a distância de movimento do grupo controle (P = 0,002), do grupo diazepam (P = 0,000) e do grupo de dose média (P = 0,000) foi extremamente reduzida de forma significativa, e a distância de movimento do grupo de dose alta (P = 0,020) aumentou significativamente. Do ponto de vista da velocidade média dos camundongos, a velocidade média do grupo modelo (P = 0,002) aumentou de forma extremamente significativa, e a velocidade média do grupo diazepam (P = 0,039) diminuiu significativamente. Em comparação com o grupo modelo, não houve diferença significativa na velocidade média do grupo de dose baixa (P = 0,062), a velocidade média do grupo controle (P = 0,002) diminuiu de forma extremamente significativa, a velocidade média do grupo diazepam (P = 0,000) e do grupo de dose média (P = 0,000) diminuiu de forma extremamente significativa, e a velocidade média do grupo de dose alta (P = 0,021) diminuiu de forma extremamente significativa. Do ponto de vista da velocidade máxima dos camundongos, em comparação com o grupo controle, a velocidade máxima do grupo modelo (P = 0,000) aumentou de forma extremamente significativa, e não houve diferença significativa nos outros grupos (P > 0,05). Em comparação com o grupo modelo, a velocidade máxima do grupo controle (P = 0,000), do grupo diazepam (P = 0,000) e do grupo de dose média (P = 0,002) foi extremamente reduzida de forma extremamente significativa, e a velocidade máxima do grupo de dose baixa (P = 0,017) e do grupo de dose alta (P = 0,015) diminuiu significativamente. Em relação ao tempo de repouso dos camundongos, em comparação com o grupo controle, o grupo modelo (P = 0,004) apresentou diferença extremamente significativa, que se manifestou como um aumento no tempo de repouso, e não houve diferença significativa nos outros grupos (P > 0,05); Em comparação com o grupo modelo, os outros grupos apresentaram diferenças extremamente significativas (P < 0,01), que se manifestaram como um aumento no tempo de repouso.
Do ponto de vista do número de levantamento de braços dos camundongos, em comparação com o grupo controle, o grupo modelo apresentou diferença significativa (P = 0,010), o que mostrou um aumento no número de levantamento de braços, enquanto o grupo diazepam (P = 0,000) e o grupo de dose média (P = 0,008) apresentaram diferença extremamente significativa, o que mostrou que o número de levantamento de braços diminuiu. Em comparação com o grupo modelo, houve diferenças significativas nos outros grupos (P < 0,05), entre os quais o grupo diazepam (P = 0,000), o grupo de baixa dose (P = 0,007), o grupo de dose média (P = 0,000) e o grupo de alta dose (P = 0,001) apresentaram diferenças extremamente significativas, o que mostrou que o número de levantamento de braços foi reduzido. Do ponto de vista do número de levantamento de braços dos camundongos, em comparação com o grupo controle, o número de levantamento de braços no grupo modelo (P = 0,010) aumentou significativamente, e o número de levantamento de braços no grupo diazepam (P = 0,000) e no grupo de dose média (P = 0,008) foi extremamente significativamente reduzido. Em comparação com o grupo modelo, o número de levantamento de braços no grupo diazepam (P = 0,000), no grupo de baixa dose (P = 0,007), no grupo de dose média (P = 0,000) e no grupo de alta dose (P = 0,001) foi extremamente significativamente reduzido.
Sono induzido por pentobarbital
Efeito do óleo essencial Composto Anshen na latência do tempo de sono e duração do tempo de sono em camundongos induzidos por pentobarbital sódico (,n = 8). Os resultados experimentais da latência do tempo de sono e duração do tempo de sono induzidos por pentobarbital sódico após inalação do óleo essencial Composto Anshen em camundongos foram mostrados na Fig. 3. Os grupos de dose baixa, dose média e dose alta receberam aromaterapia diária, e a concentração diária das doses baixa, média e alta do óleo essencial Composto Anshen (CEO) foi de 1 × 10− 3, 2 × 10− 3, 4 × 10− 3 por 7 dias consecutivos. Nota: comparado com o grupo em branco, Δ
P<0,05,ΔΔ
P<0,01, comparado com o grupo modelo, *P<0,05, **P<0,01
Do ponto de vista da latência do tempo de sono (Fig. 3), em comparação com o grupo controle, a latência do tempo de sono do grupo diazepam (P = 0,000) e do grupo de dose média (P = 0,000) foi extremamente significativamente encurtada, e a latência do tempo de sono do grupo modelo (P = 0,000) foi extremamente significativamente aumentada. Em comparação com o grupo modelo, a latência do tempo de sono dos outros grupos foi significativamente diferente (P < 0,01), o que se manifestou como diminuição da latência do tempo de sono. Do ponto de vista da duração do tempo de sono, em comparação com o grupo controle, o tempo de sono do grupo diazepam (P = 0,000), do grupo de dose baixa (P = 0,000), do grupo de dose média (P = 0,000) e do grupo de dose alta (P = 0,001) foi extremamente significativamente aumentado, e o tempo de sono do grupo modelo (P = 0,027) foi significativamente reduzido. Em comparação com o grupo modelo, a duração do tempo de sono dos outros grupos foi significativamente diferente (P < 0,01), o que se manifestou como aumento da duração do tempo de sono.
Análise de neurotransmissores cerebrais
Efeitos do óleo essencial Composto Anshen sobre neurotransmissores no cérebro de camundongos (,n = 8). Os resultados experimentais dos efeitos do óleo essencial Composto Anshen sobre neurotransmissores cerebrais são mostrados na Fig. 4. Os grupos de dose baixa, dose média e dose alta receberam aromaterapia diária, e a concentração diária das doses baixa, média e alta do óleo essencial Composto Anshen (CEO) foi de 1 × 10− 3, 2 × 10− 3, 4 × 10− 3 por 7 dias consecutivos. Nota: Os resultados experimentais do efeito do óleo essencial Composto Anshen sobre neurotransmissores no cérebro são mostrados na figura 4. comparado com o grupo controle, Δ
P<0,05,ΔΔ
P<0,01, comparado com o grupo modelo, *P<0,05, **P<0,01
Do ponto de vista da concentração de 5-HT no cérebro de camundongos (Fig. 4), em comparação com o grupo controle, a concentração de 5-HT no grupo modelo (P = 0,001) foi extremamente reduzida de forma significativa, a concentração de 5-HT no grupo de dose baixa (P = 0,031) e no grupo de dose alta (P = 0,012) foi significativamente aumentada. Em comparação com o grupo modelo, a concentração de 5-HT no grupo diazepam (P = 0,002), no grupo de dose média (P = 0,000) e no grupo de dose alta (P = 0,000) foi extremamente aumentada de forma significativa, e a concentração de 5-HT do grupo de dose baixa (P = 0,193) não apresentou diferença significativa. Do ponto de vista da concentração de GABA no cérebro de camundongos, em comparação com o grupo controle, a concentração de GABA no grupo modelo (P = 0,000), no grupo diazepam (P = 0,000) e no grupo de dose baixa (P = 0,000) foi extremamente reduzida de forma significativa, enquanto não houve diferença significativa no grupo de dose média (P = 0,434) e no grupo de dose alta (P = 0,114). Em comparação com o grupo modelo, exceto pelo grupo de dose baixa (P = 0,614), todos os outros grupos apresentaram diferenças significativas (P < 0,01), o que mostrou que a concentração de GABA no cérebro aumentou.
Análise dos componentes do óleo essencial Compound Anshen
Principais composições químicas e porcentagem do óleo essencial Compound Anshen
Nº Tempo de Retenção (min) Composto Fórmula química Peso molecular Quantidade Relativa (%) 1 5,943 α-Thujene C10H16 136 0,63 2 6,064 α-Pinene C10H16 136 5,39 3 6,482 Sabinene C10H16 136 0,28 4 6,733 β-Phellandrene C10H16 136 0,58 5 6,796 β-Pinene C10H16 136 0,4 6 6,927 3-Octanone C8H16O 128 0,66 7 6,998 β-Myrcene C10H16 136 1,04 8 7,079 Sarcosine C3H7NO2 89 0,25 9 7,358 Hexyl acetate C4H8O2 144 0,51 10 7,585 Cymene C10H14 134 0,79 11 7,657 D-Limonene C10H16 136 24,07 12 7,771 trans-β-Ocimene C10H16 136 1,81 13 7,948 β-Ocimene C10H16 136 1,17 14 8,148 γ-Terpinene C10H16 136 0,41 15 8,803 Linalool C10H18O 154 21,98 16 10,076 4-Terpineol C10H18O 154 1,73 17 8,953 1-Octen-3-yl acetate C10H18O2 170 0,63 18 10,076 Terpinen-4-ol C10H18O 154 1,73 19 10,206 Cyclobutanol C4H8O 72 0,26 20 10,28 α-Terpineol C10H18O 154 0,95 21 10,812 Citronellol C10H20O 156 1,42 22 11,171 Linalyl acetate C12H20O2 196 15,37 23 11,666 lavandulyl acetate C12H20O2 196 1,8 24 12,971 Geranyl acetate C12H20O2 196 0,51 25 13,624 Caryophyllene C15H24 204 1,71 26 13,958 β-Famesene C15H24 204 1,57 27 14,094 β-santalene C15H24 204 0,38 28 16,839 α-Santalol C15H24O 220 4,8 28 19,023 Nonadecane C19H40 268 1,21 29 19,702 Dibutyl phthalate C16H22O4 278 1,21 30 20,636 Eicosane C20H42 282 0,4
Análise por CG-EM do componente TIC do óleo essencial Compound Anshen
A composição química principal e a porcentagem relativa do óleo essencial Composto Anshen analisadas por GC-MS estão apresentadas na Tabela 1. A análise do componente TIC do óleo essencial Composto Anshen por GC-MS é mostrada na Fig. 5. Um total de 30 componentes químicos foram identificados, representando 93,92% do óleo volátil total, com os maiores teores de D-limoneno (24,07%), Linalol (21,98%), Acetato de linalila (15,37%), α-Pineno (5,39%), α-Santalol (4,8%), entre outros.
Discussão
Para estudar os efeitos sedativos e hipnóticos da inalação do óleo essencial Composto Anshen no tratamento da insônia, os animais precisam estabelecer um modelo de insônia por PCPA. O grupo controle e o grupo modelo PCPA não receberam intervenção de tratamento para insônia, e os outros grupos realizaram intervenção com terapia medicamentosa. Comparando e analisando os parâmetros experimentais dos outros grupos e dos grupos modelo, a fim de explorar a farmacodinâmica da inalação do óleo essencial Composto Anshen para insônia. Ao comparar e analisar a farmacodinâmica do óleo essencial Composto Anshen e do diazepam, foi explorada a diferença entre os efeitos sedativos e hipnóticos do óleo essencial Composto Anshen e do diazepam. Portanto, os efeitos sedativos e hipnóticos do óleo essencial Composto Anshen em animais foram estudados experimentalmente e comparados com o grupo do diazepam. Neste experimento, os efeitos sedativos e hipnóticos da inalação do óleo essencial Composto Anshen foram estudados. Em comparação com o grupo modelo, os camundongos no grupo de dose baixa, no grupo de dose média, no grupo de dose alta e no grupo do diazepam apresentaram cor do pelo brilhante, ritmo circadiano normal e aumento significativo da massa corporal, sendo que o grupo de dose apresentou o melhor desempenho. Para estudar os efeitos da inalação do óleo essencial Composto Anshen na atividade espontânea e na latência do tempo de sono e duração do tempo de sono induzidos por pentobarbital em camundongos, os resultados mostraram que o óleo essencial Composto Anshen pode reduzir significativamente a atividade autonômica. Em geral, a diminuição da atividade autonômica em camundongos indica um efeito sedativo do medicamento, e essa mudança no comportamento é considerada como refletindo uma excitabilidade reduzida do sistema nervoso central. O efeito inibitório sobre a atividade autonômica indica que o óleo essencial Composto Anshen tem um efeito sedativo e inibitório sobre a excitabilidade. Ao mesmo tempo, o óleo essencial Composto Anshen tem efeito sinérgico com o pentobarbital, reduzindo a latência do tempo de sono e prolongando a duração do tempo de sono, demonstrando o efeito hipnótico do óleo essencial Composto Anshen.
Disfunção de 5-HT, GABA e outros neurotransmissores está intimamente relacionada à insônia. Foi relatado que drogas terapêuticas induzem sedação e hipnose ao regular a neurotransmissão, como o sistema 5-HTérgico ou o sistema GABAérgico no sistema nervoso central. Portanto, a análise dos níveis de 5-HT e GABA no cérebro é de grande importância para a detecção de medicamentos para o tratamento da insônia. A serotonina (5-HT) desempenha um papel fundamental na regulação do sono-vigília. Acredita-se que a serotonina seja um neurotransmissor do sono que produz o sono ao inibir o sistema reticular ativador do mesencéfalo ou o componente de norepinefrina do lócus cerúleo. Por outro lado, a PCPA, um inibidor da triptofano hidroxilase, consome 5-HT, levando à insônia. Após 24–36 h, a PCPA apresentou um forte efeito inibitório sobre a síntese de 5-HT. O GABA é um importante neurotransmissor inibitório no sistema nervoso central (SNC). O sistema de receptores GABA exerce um papel inibitório principal no cérebro e desempenha um papel crucial na regulação do equilíbrio geral entre excitação e inibição neuronal. Neurônios na parte anterior do hipotálamo liberam GABA, que inibe áreas do hipotálamo e do tronco encefálico que promovem a vigília. Disfunção ou déficits no sistema GABAérgico estão associados a epilepsia, dor e ansiedade. O neurotransmissor GABAérgico desempenha um papel fundamental na regulação do sono. O sítio de ligação dos BZD no receptor GABAA é o alvo da maioria das drogas sedativas e hipnóticas. Barbitúricos, como o pentobarbital, atuam em complexos de grupos iônicos de receptores GABA, o que favorece a ligação do GABA. Benzodiazepínicos, como o diazepam, aumentam a afinidade do GABA por seus receptores, aumentando assim a duração do sono induzido por pentobarbital. Foi sugerido que componentes de óleos essenciais desempenham um papel promotor do sono ao regular o sistema 5-HTérgico ou o sistema GABAérgico. Portanto, o efeito do óleo essencial Composto Anshen nos níveis de 5-HT e GABA no cérebro é de grande importância para avaliar a farmacodinâmica do óleo essencial Composto Anshen no tratamento da insônia. Além das razões acima, este experimento utiliza o modelo de insônia por PCPA, porque a PCPA é um inibidor da triptofano hidroxilase, consome 5-HT, levando à insônia, e a detecção dos níveis de 5-HT no cérebro pode refletir o estabelecimento bem-sucedido do modelo de insônia. Neste estudo, os níveis de 5-HT e GABA no cérebro foram medidos por ensaio imunoenzimático.
Os resultados mostraram que os grupos de dose baixa, dose média e dose alta do óleo composto Anshen apresentaram diferentes graus de regulação positiva de 5-HT e GABA de forma dose-dependente. Os níveis de 5-HT e GABA nos grupos de dose média e dose alta foram semelhantes aos do grupo controle e mais altos que os do grupo diazepam. Portanto, a administração por inalação do óleo essencial composto Anshen pode aumentar significativamente os níveis de 5-HT e GABA no cérebro. A partir do experimento de mudança de peso e da análise do nível de neurotransmissores cerebrais, o efeito da inalação do óleo essencial composto Anshen sobre a insônia é melhor que o do diazepam. Pode-se observar que a inalação do óleo essencial composto Anshen pode ser um tratamento seguro e eficaz ou tratamento adjuvante da insônia, o que pode reduzir o uso excessivo de medicamentos prescritos como o diazepam e reduzir o risco de efeitos de curto ou longo prazo na saúde do sono. Seu mecanismo sedativo e hipnótico mais profundo precisa de mais estudos.
Com base nisso, a composição do óleo essencial Composto Anshen foi analisada por cromatografia gasosa-espectrometria de massas (GC-MS). Foram identificados 30 constituintes químicos, totalizando 93,39% do óleo volátil total. Os principais componentes do óleo essencial Composto Anshen são ésteres, álcoois, alcenos, alquilas e outros compostos, com os maiores teores de D-limoneno (24,07%), Linalol (21,98%), Acetato de linalila (15,37%), α-Pineno (5,39%) e α-Santalol (4,8%). D-limoneno, Linalol, Acetato de linalila e α-Santalol têm sido relatados como possuindo efeito sedativo no sistema nervoso central. Além disso, o D-limoneno tem efeitos anti-ansiedade e calmantes, o Linalol tem efeitos anti-ansiedade e do tipo depressão, e o α-Pineno tem efeitos anti-ansiedade e de alívio do estresse. Especula-se que o efeito sedativo e hipnótico do óleo essencial Composto Anshen está relacionado à sua composição química principal e atividade. Com base na farmacologia de rede, os componentes ativos, alvos e vias do óleo essencial Composto Anshen foram previstos. Os resultados da análise de farmacologia de rede foram publicados. Entre os constituintes químicos voláteis do óleo essencial Composto Anshen rastreados por GC-MS, os ingredientes ativos relacionados à insônia foram selecionados e os alvos e vias relevantes foram previstos. O estudo descobriu que Ftalato de dibutila, Cariofileno, Acetato de geranila, Linalol, α-Terpineol e Terpinen-4-ol desempenharam um papel fundamental no tratamento da insônia no óleo essencial Composto Anshen. Os componentes químicos com maior teor rastreados por GC-MS foram D-Limoneno, Acetato de linalila, α-Pineno, que também foram correlacionados com o tratamento da insônia. Prevê-se que o óleo essencial Composto Anshen exerça efeitos farmacodinâmicos principalmente através de proteínas alvo relacionadas, como ESR1, GABRA1, GABRA2, GABRA3, GABRA4, GABRA5, NR1H4, CHRM1, SLC6A2, SLC6A3, SLC6A4, CYP3A4, DRD1, DRD2, OPRD1, OPRM1, HCRTR1, HTR2A, etc. Está principalmente relacionado à Via de sinalização do cálcio, Interação neuroativa ligante-receptor, Sinapse colinérgica, Sinapse GABAérgica e outras vias. Com base no método de farmacologia de rede, os ingredientes ativos do óleo essencial Composto Anshen têm efeitos sedativos, hipnóticos, anti-ansiedade e antidepressivos, e a correlação entre os ingredientes ativos e o alvo e via. Em certa medida, confirmou-se a confiabilidade do estudo sobre os efeitos sedativos e hipnóticos do óleo essencial Composto Anshen e a confiabilidade da análise GC-MS dos componentes químicos. Conclusão
O estudo constatou que a inalação do óleo essencial Composto Anshen possui efeito sedativo e hipnótico, podendo reduzir significativamente as atividades autonômicas, encurtar a latência do tempo de sono e prolongar a duração do tempo de sono, além de aumentar os níveis de 5-HT e GABA no cérebro. Os principais componentes químicos do óleo essencial Composto Anshen contêm muitos tipos de componentes químicos que possuem efeito sedativo e hipnótico no centro nervoso, efeito ansiolítico e efeito antidepressivo.
Abreviação
CEO
Óleo essencial Composto Anshen
Nota do Editor
A Springer Nature permanece neutra em relação a reivindicações jurisdicionais em mapas publicados e afiliações institucionais.
Contribuições dos autores
Projetaram os experimentos, analisaram os dados e redigiram o primeiro rascunho do manuscrito: YZ e QZ. Conceberam as hipóteses e ideias de pesquisa, redigiram o manuscrito: QZ e MY. Conduziram a preparação do medicamento, preparação do óleo essencial e análise de dados relacionados: PYH, XYH, QD. Conduziram a análise de cromatografia gasosa-espectrometria de massas, análise e interpretação de dados relacionados e discussão sobre a concepção principal: YZ, JL e KNZ. Todos os autores estiveram envolvidos na revisão e aprovação do manuscrito final.
Financiamento
Este trabalho foi apoiado pelo Projeto de Talentos de Inovação Científica e Tecnológica 5511 da Província de Jiangxi (No.20171BCB18001), que apoiou o projeto, análise e interpretação dos dados neste estudo, e pelo Projeto de Disciplina de Primeira Classe da Província de Jiangxi (No.JXSYLXK-ZHYA0091), e pelo Projeto de Disciplina de Primeira Classe da Província de Jiangxi (No.JXSYLXK-ZHYA0092), que forneceram os animais, medicamentos e outros materiais necessários para o estudo.
Disponibilidade de dados e materiais
Os conjuntos de dados usados e/ou analisados durante o estudo atual estão disponíveis com o autor correspondente mediante solicitação razoável.
Aprovação ética
Os experimentos foram aprovados pelo Comitê de Ética Animal Institucional da Universidade de Medicina Tradicional Chinesa de Jiangxi. Todos os animais foram mantidos de acordo com as diretrizes estabelecidas pela legislação chinesa sobre o uso ético e cuidado de animais de laboratório. Todos os animais foram mantidos de acordo com as diretrizes estabelecidas pela legislação sobre o uso ético e cuidado de animais de laboratório. Todos os esforços foram feitos para minimizar tanto o sofrimento animal quanto o número de animais usados para produzir dados confiáveis.
Consentimento para publicação
Não aplicável.
Interesses concorrentes
Os autores declaram que não possuem interesses concorrentes.
Referências
Efeitos sedativos e hipnóticos de Vaccinium bracteatum Thunb. através da regulação dos sistemas serotoninérgico e GABAérgico: envolvimento da atividade agonista do receptor 5-HT. Biomed
Hazel E, David B, Beth S, et al. Antidepressivos para insônia em adultos [J]. Cochrane Database Syst Rev. 2018;5(10). 10.1002/14651858.CD010753.pub2.
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