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pmid: "38892000"
title: "Papéis dos Canais de Receptor Transiente Termossensíveis TRPV1 e TRPM8 na Dor Neuropática Periférica Induzida por Paclitaxel."
authors: "Li WW, Zhao Y, Liu HC, Liu J, Chan SO, Zhong YF, Zhang TY, Liu Y, Zhang W, Xia YQ, Chi XC, Xu J, Wang Y, Wang J"
journal: "International journal of molecular sciences"
pubdate: "2024 May 27"
doi: "10.3390/ijms25115813"
source: "PMC Full Text"

Papéis dos Canais de Receptor Transiente Termossensíveis TRPV1 e TRPM8 na Dor Neuropática Periférica Induzida por Paclitaxel.

Autores

Li WW, Zhao Y, Liu HC, Liu J, Chan SO, Zhong YF, Zhang TY, Liu Y, Zhang W, Xia YQ, Chi XC, Xu J, Wang Y, Wang J

Periodico

International journal of molecular sciences (2024 May 27)

Conteudo

Papéis dos Canais Receptores Transientes Termossensíveis TRPV1 e TRPM8 na Dor Neuropática Periférica Induzida por Paclitaxel
O paclitaxel, um fármaco quimioterápico estabilizador de microtúbulos, pode causar dor neuropática periférica grave induzida por paclitaxel (PIPNP). Os papéis do canal iônico de potencial receptor transiente (TRP) vaniloide 1 (TRPV1, um nociceptor e sensor de calor) e melastatina 8 (TRPM8, um sensor de frio) na PIPNP permanecem controversos. Neste estudo, Western blotting, imunofluorescência e imageamento de cálcio revelaram que a expressão e a atividade funcional do TRPV1 estavam aumentadas nos neurônios do gânglio da raiz dorsal (DRG) de ratos com PIPNP. Avaliações comportamentais utilizando os testes de von Frey e de escova demonstraram que a hiperalgesia mecânica na PIPNP foi significativamente inibida pela administração intraperitoneal ou intratecal do antagonista de TRPV1, capsazepina, indicando que o TRPV1 desempenhou um papel fundamental na PIPNP. Por outro lado, a expressão da proteína TRPM8 diminuiu e sua atividade de canal foi reduzida nos neurônios do DRG. Além disso, a ativação do TRPM8 por aplicação tópica de mentol ou injeção intratecal de WS-12 atenuou a dor mecânica. Mecanicamente, a atividade do TRPV1 desencadeada pela capsaicina (um agonista de TRPV1) foi reduzida após a aplicação de mentol em neurônios do DRG cultivados, especialmente no grupo tratado com paclitaxel. Esses achados mostraram que a regulação positiva do TRPV1 e a inibição do TRPM8 estão envolvidas na geração da PIPNP, e sugeriram que a inibição da função do TRPV1 nos neurônios do DRG por meio da ativação do TRPM8 pode estar subjacente aos efeitos analgésicos do mentol.

1. Introdução
   A neuropatia periférica induzida por quimioterapia (NPIQ) é um efeito colateral dose-limitante da quimioterapia que pode ocorrer a qualquer momento durante o tratamento ou mesmo após seu término. Pacientes com NPIQ frequentemente desenvolvem perda sensorial em distribuição do tipo “luva e bota”, que tipicamente se manifesta como dor em queimação, formigamento, dormência e alodinia nas mãos e nos pés. Esse efeito adverso grave é causado principalmente por medicamentos quimioterápicos de primeira linha, incluindo taxanos (ex.: paclitaxel e docetaxel), fármacos à base de platina (ex.: carboplatina, cisplatina e oxaliplatina), vincristina, entre outros. O paclitaxel é atualmente um dos agentes anticancerígenos mais amplamente utilizados para o tratamento de câncer de ovário, mama, pulmão e outros. Ele atua como estabilizador da montagem dos microtúbulos intracelulares, resultando em morte celular ao interferir nas funções dos microtúbulos necessárias para a divisão celular. No entanto, a incidência de dor neuropática periférica induzida por paclitaxel (DNPI-P) é alta e afeta seriamente a qualidade de vida dos sobreviventes de tumores. Infelizmente, faltam tratamentos eficazes para a DNPI-P devido à sua patogênese pouco clara. Canais de potencial receptor transitório (TRP), incluindo o canal TRP vanilóide 1 (TRPV1), TRP vanilóide 4 (TRPV4), TRP anquirina 1 (TRPA1) e TRP melastatina 8 (TRPM8), têm sido indicados como participantes na NPIQ e podem servir como alvos terapêuticos em estudos pré-clínicos e clínicos. No entanto, o papel dos canais TRP termosensíveis na DNPI-P está longe de ser claro.

O TRPV1 (também conhecido como receptor vanilóide tipo 1, VR1) é um canal catiônico não seletivo nocivo que é ativado por uma variedade de estímulos nocivos, como capsaicina, químicos nocivos, calor (>43 °C), ácido (pH ≤ 5,9), etc.. O TRPV1 é predominantemente expresso em neurônios sensoriais primários nociceptivos e gera sinais de dor após ativação. O paclitaxel exerce seus efeitos quimioterápicos em grande parte ao inibir a despolimerização dos microtúbulos. Estudos mostraram que a extremidade C-terminal do TRPV1 se liga à tubulina solúvel, e sua ativação é afetada pela despolimerização dos microtúbulos, sugerindo uma possível contribuição do TRPV1 na NPIQ induzida por paclitaxel. No entanto, se e como o TRPV1 participa da DNPI-P permanece controverso. Alguns estudos relataram que a expressão e a atividade do canal TRPV1 estão aumentadas no gânglio da raiz dorsal (GRD) de ratos tratados com paclitaxel, e a dor ao calor induzida por paclitaxel pode ser aliviada por antagonistas do TRPV1, indicando um papel vital do TRPV1 na DNPI-P. Por outro lado, também foi relatado que a alodinia mecânica evocada por paclitaxel se desenvolve completamente em camundongos knockout para Trpv1. Assim, se o TRPV1 está envolvido na hiperalgesia mecânica induzida por paclitaxel ainda precisa ser determinado.
TRPM8 (também conhecido como receptor de frio e mentol 1, CMR1) é outro canal catiônico não seletivo que é ativado por baixas temperaturas (8–28 °C) e uma variedade de agentes de resfriamento naturais e sintéticos, como o mentol. O TRPM8 é expresso principalmente em neurônios somatossensoriais, abrangendo majoritariamente fibras C não mielinizadas de pequeno diâmetro, bem como uma pequena coorte de fibras Aδ levemente mielinizadas, sendo responsável pela sensação de frio inócua e nociva in vivo. Na NIPQ, o TRPM8 parece desempenhar um efeito duplo de induzir dor e analgesia. Por um lado, a expressão do mRNA e da proteína TRPM8 está aumentada na NIPQ induzida por oxaliplatina, levando à alodinia ao frio induzida por oxaliplatina. Por outro lado, um número crescente de casos clínicos mostrou que a ativação do TRPM8 pela aplicação tópica de mentol pode aliviar efetivamente os sintomas semelhantes à dor em pacientes com NIPQ. Portanto, a função exata do TRPM8 na NIPQ induzida por paclitaxel merece maior investigação.

Além disso, a interação entre esses dois canais TRP tem atraído atenção nos últimos anos. Foi demonstrado que existe um subconjunto de células positivas para TRPM8 que coexpressam TRPV1, com estimativas variando de 0 a 30%, dependendo da estratégia de detecção. Além disso, foi indicado que a ativação do canal TRPM8 inibe a dor térmica ou mecânica mediada por TRPV1 em alguns processos patológicos. A interação entre os canais TRPM8 e TRPV1 pode contribuir para o desenvolvimento da PIPNP.

Neste estudo, demonstramos uma regulação positiva do TRPV1 e uma regulação negativa do TRPM8 nos neurônios do GDR de ratos com PIPNP. Além disso, estudos funcionais revelaram que a ativação do TRPM8 inibiu a função do TRPV1. O enfraquecimento da inibição do TRPM8 sobre o TRPV1 pode contribuir para o desenvolvimento da PIPNP. A ativação do TRPM8 com seu agonista, como o mentol, poderia potencialmente servir como um meio terapêutico para aliviar a PIPNP.

2. Resultados

2.1. Dor Mecânica e Alodinia Dinâmica Foram Induzidas em um Modelo de Rato de Dor Neuropática Periférica Induzida por Paclitaxel (PIPNP)
Um modelo de rato de PIPNP foi estabelecido usando administração intraperitoneal de paclitaxel de acordo com um protocolo relatado anteriormente (Figura 1A). Neste modelo animal, o paclitaxel pode causar hiperalgesia mecânica, ao frio e térmica, sem efeito na função motora. O exame histológico não mostrou anormalidades ou degeneração óbvias nos neurônios do DRG ou em seus axônios. Aqui, investigamos duas formas de hipersensibilidade mecânica, incluindo alodinia punctata evocada por filamento e alodinia dinâmica evocada por escova. Após a indução da neuropatia periférica, observamos uma diminuição no limiar de retirada da pata (PWT) de um valor basal de 15,05 ± 0,02 g para 7,41 ± 2,01 g no dia 8. Essa hipersensibilidade mecânica persistiu até o dia 14 (5,69 ± 0,51 g, p < 0,0001) em comparação com os ratos tratados com veículo, que apresentaram um limiar médio de 14,5 ± 0,60 g no dia 8 e 13,92 ± 1,18 g no dia 14. A quantificação da área sob a curva (AUC) demonstrou ainda uma redução significativa no grupo paclitaxel em comparação com o grupo veículo (p = 0,0002) (Figura 1C). Aproximadamente 67% dos ratos apresentaram uma redução significativa no PWT após o tratamento com paclitaxel, enquanto quase 33% dos ratos não exibiram uma diminuição óbvia no PWT (Figura 1B).
Além disso, realizamos testes de escova dinâmica nos dias 4, 8, 12 e 16 após a injeção de paclitaxel para investigar os efeitos na alodinia dinâmica. Conforme mostrado na Figura 1D, o tratamento com paclitaxel causou um aumento significativo no escore dinâmico médio (1,11 ± 0,35) no grupo paclitaxel em comparação com o grupo veículo (0,44 ± 0,14) no dia 16. Uma análise da AUC corroborou uma elevação geral no escore dinâmico no grupo paclitaxel quando comparado ao grupo veículo (p = 0,0002). Também observamos hipersensibilidade térmica após a neuropatia induzida por paclitaxel, com uma diminuição significativa na latência de retirada da pata (Figura 1E). Além disso, o escore de frio medido usando testes de acetona aumentou significativamente após a injeção de paclitaxel (Figura 1F).
2.2. A Expressão e Função do TRPV1 Estavam Aumentadas na PIPNP
Para investigar se o TRPV1 está envolvido na PIPNP, primeiro examinamos a expressão da proteína TRPV1 nos neurônios do DRG no dia 14 após a injeção de paclitaxel. A coloração por imunofluorescência mostrou que a proteína TRPV1 foi predominantemente expressa em neurônios de pequeno e médio porte no DRG dos segmentos espinhais L4–L5 (Figura 2A). Em comparação com o grupo veículo, o número de neurônios TRPV1-positivos aumentou significativamente no grupo paclitaxel (Figura 2B). Além disso, a análise quantitativa do Western blotting confirmou um aumento significativo dos níveis da proteína TRPV1 no DRG após o tratamento com paclitaxel (Figura 2C).
A imagiologia de cálcio em células vivas foi realizada para monitorar a função dos canais TRPV1 em neurônios do DRG após o tratamento com paclitaxel. A capsaicina, um agonista do TRPV1, tem sido comumente usada para investigar as atividades dos canais TRPV1. A imagiologia de cálcio mostrou que a aplicação de capsaicina (1 μM) induziu aumentos significativos dos sinais de Ca2+ intracelular no DRG de ratos tratados com paclitaxel em comparação com o controle veículo (Figura 2D), indicando que a atividade do TRPV1 estava elevada na PIPNP. Além disso, a análise estatística da razão F340/F380 mostrou que a magnitude da resposta de Ca2+ induzida por capsaicina foi significativamente aumentada nos neurônios do DRG isolados do grupo paclitaxel em comparação com o grupo veículo (Figura 2D–F).
2.3. A Regulação Positiva do TRPV1 Contribui para o Desenvolvimento da Hipersensibilidade Mecânica
Para investigar melhor o papel do TRPV1 na dor mecânica induzida por paclitaxel, injeções intraperitoneais (i.p.) e intratecais do antagonista do TRPV1, capsazepina (CPZ), foram realizadas em 4 dias alternados a partir do dia 8 após o tratamento com paclitaxel. Testes comportamentais foram conduzidos 60 min após a administração de CPZ. O teste de von Frey demonstrou que a diminuição do PWT induzida por paclitaxel foi revertida após injeção i.p. de CPZ (30 mg/kg) (Figura 3A). Da mesma forma, o aumento do escore dinâmico induzido pelo tratamento com paclitaxel foi atenuado após a administração de CPZ (Figura 3B). Para descartar os efeitos sistêmicos da injeção intraperitoneal, os testes comportamentais foram repetidos em animais após administração intratecal de CPZ. Consistentemente, a hipersensibilidade mecânica e a alodinia dinâmica no grupo paclitaxel foram revertidas após injeção intratecal de CPZ (10 μg) (Figura 4A,B).
2.4. Diminuição da Expressão e Função dos Canais TRPM8 na PIPNP
Considerando que a contribuição do TRPM8 para a PIPNP é amplamente desconhecida, exploramos tanto a expressão quanto a função da proteína TRPM8 no dia 14 após a administração de paclitaxel. A coloração por imunofluorescência de cortes do DRG revelou que apenas alguns neurônios de pequeno porte eram TRPM8-positivos em ambos os grupos tratados com paclitaxel e veículo (Figura 5A). A análise estatística mostrou uma redução significativa no número de neurônios TRPM8-positivos no grupo paclitaxel em comparação com o grupo controle (Figura 5B). Além disso, a análise de Western blotting confirmou uma redução significativa nos níveis da proteína TRPM8 no DRG após o tratamento com paclitaxel (Figura 5C).
Para explorar melhor a função dos canais TRPM8 na DIPNP, realizamos imageamento de cálcio em neurônios do DRG isolados de ratos tratados com paclitaxel e veículo após a administração do agonista de TRPM8, mentol, e seu ativador seletivo WS-12. Os resultados mostraram que tanto o mentol (200 μM) quanto o WS-12 (10 μM) reduziram os aumentos de cálcio induzidos por capsaicina nos neurônios do DRG do grupo paclitaxel, quando comparados ao grupo veículo (Figura 5D–G). A análise quantitativa mostrou que a magnitude da resposta de Ca2+ induzida por mentol foi significativamente diminuída nos neurônios do DRG de ratos tratados com paclitaxel em comparação com aqueles de ratos tratados com veículo (Figura 5E). Da mesma forma, a amplitude do influxo de cálcio induzido pela ativação do canal TRPM8 pelo WS-12 foi significativamente menor no grupo tratado com paclitaxel do que no grupo tratado com veículo (Figura 5G).
2.5. Ativação do TRPM8 In Vivo Demonstra Efeitos Analgésicos na DIPNP
Para investigar melhor se o TRPM8 está envolvido na DIPNP in vivo, examinamos os efeitos de injeções intratecais de 10 μg de WS-12 nos dias 8, 10, 12 e 14 em ratos tratados com paclitaxel. Os PWTs dos ratos tratados com WS-12 aumentaram, e seus escores dinâmicos diminuíram significativamente quando comparados ao grupo controle (Figura 6A,B). Além disso, testes comportamentais foram realizados 10 min após a aplicação tópica de 1% de mentol nas patas traseiras dos ratos nos dias 7, 14, 21 e 28 após o tratamento com paclitaxel. Conforme mostrado na (Figura 6C), os PWTs do grupo tratado com etanol diminuíram do valor basal de 15,01 ± 0,02 g para 7,03 ± 0,77 g no dia 14 após o tratamento com paclitaxel, o que persistiu até o dia 28 (5,70 ± 0,37 g, p < 0,01). Em contraste, os PWTs dos ratos tratados com mentol não mostraram tal redução, mantendo um limiar médio de 13,49 ± 1,07 g no dia 7 e 15,10 ± 0,00 g no dia 28, que foram comparáveis aos do grupo controle. Uma análise de AUC demonstrou ainda uma diferença geral significativa no PWT nos grupos etanol e mentol (p < 0,001). Além disso, o aumento do escore dinâmico após o tratamento com paclitaxel foi parcialmente revertido pela aplicação tópica de mentol nos dias 14, 21 e 28 em comparação com o grupo etanol (Figura 6D).
2.6. TRPM8 Inibe a Função da Proteína TRPV1 na DIPNP
A imagem de células vivas em neurônios do GDR isolados do grupo veículo e paclitaxel foi realizada para investigar a interação entre TRPM8 e TRPV1. Foi observado que alguns neurônios do GDR reagiram tanto ao mentol quanto à capsaicina, indicando uma ativação simultânea de TRPM8 e TRPV1 (Figura 7A, setas vermelhas). Enquanto isso, alguns outros neurônios do GDR não responderam de forma óbvia ao mentol, mas mostraram reatividade acentuada à capsaicina (Figura 7A, setas azuis). Análises adicionais mostraram que, quando neurônios respondedores ao mentol (mentol+) foram expostos à capsaicina, os sinais de cálcio induzidos pela ativação do TRPV1 (ΔRazão após capsaicina) foram significativamente menores em comparação com os neurônios sem resposta ao mentol (mentol−) em ambos os grupos veículo e paclitaxel (Figura 7B,C). Concluiu-se que a pré-ativação do TRPM8 inibiu a ativação do TRPV1. Além disso, a ΔRazão geral após capsaicina (de ambos os neurônios mentol+ e mentol−) no grupo paclitaxel foi dramaticamente maior do que no grupo veículo (Figura 7D). Como a ativação do TRPM8 inibiu o TRPV1 em ambos os grupos, deduziu-se que a inibição do TRPM8 sobre o TRPV1 no grupo paclitaxel foi muito menor do que no grupo veículo. Esse resultado foi consistente com o resultado que mostrou que a função do TRPM8 no grupo paclitaxel foi significativamente diminuída (Figura 5D–G). Como consequência, a menor inibição do TRPM8 no grupo paclitaxel resultou em alta ativação do TRPV1, o que contribuiu para o desenvolvimento de PIPNP (Figura 3 e Figura 4).

Estudos anteriores relataram que o TRPV1 nos neurônios do GDR desempenha um papel fundamental na hipersensibilidade ao calor induzida pelo adjuvante completo de Freund (CFA). Para confirmar ainda mais que a ativação do TRPM8 pode inibir a função do TRPV1, foi realizada a aplicação tópica de mentol a 1% em ratos com dor térmica induzida por CFA. Os resultados mostraram que a redução na latência de retirada da pata devido ao tratamento com CFA foi revertida após a aplicação de mentol, enquanto tal efeito não foi observado no grupo tratado com etanol (Figura 7E).

3. Discussão

Neste estudo, descobrimos que TRPV1 e TRPM8 são expressos em neurônios do GDR e desempenham papéis opostos na PIPNP. O TRPV1 tem um efeito promotor de dor, enquanto o TRPM8 exibe um efeito analgésico. Além disso, a ativação do TRPM8 inibe a função do TRPV1. Ademais, a aplicação tópica de mentol, um agonista do TRPM8, pode reduzir a dor térmica induzida por CFA. Esses resultados sugerem que o TRPM8 pode servir como um alvo para o tratamento da PIPNP e de outras dores relacionadas ao TRPV1, e que a analgesia induzida por mentol se deve, em parte, à inibição da função do canal TRPV1 nos neurônios do GDR.

3.1. O TRPV1 Participa da Dor Mecânica e da Alodinia Dinâmica Induzidas por Paclitaxel
Paclitaxel (da Bristol-Myers-Squibb, Nova York, NY, EUA), um fármaco antitumoral de uso clínico, foi escolhido para estabelecer um modelo de PIPNP em ratos neste estudo. A hipersensibilidade mecânica é um efeito colateral importante após o tratamento com paclitaxel. Além de medir a dor mecânica estática evocada pelo filamento de von Frey, empregamos um teste de escova para investigar a alodinia dinâmica. Diferentemente da dor mecânica estática, a dor dinâmica não é sensível à analgesia por morfina, tornando o tratamento clínico da alodinia mecânica dinâmica mais desafiador. Evidências clínicas indicam que pacientes que desenvolvem CIPNP experimentam alodinia ao usar roupas. Nossos resultados sugerem que tanto a alodinia dinâmica evocada por escova quanto a alodinia puntiforme evocada por filamento são induzidas após a injeção de paclitaxel.

O TRPV1 é um membro crucial da família TRP e um integrador de vários estímulos nociceptivos. Ele é expresso principalmente em neurônios sensoriais primários no gânglio da raiz dorsal (DRG) e no gânglio trigeminal. Estudos recentes demonstraram que o TRPV1 está envolvido no desenvolvimento da dor ao calor induzida por paclitaxel. No entanto, o papel do TRPV1 na dor mecânica induzida por paclitaxel permanece controverso. Nossos resultados apoiam a noção de que o TRPV1 nos neurônios do DRG desempenha um papel crítico na dor mecânica associada à PIPNP. A expressão da proteína TRPV1 e sua atividade de canal nos neurônios do DRG foram significativamente aumentadas nos ratos tratados com paclitaxel em comparação com o grupo tratado com veículo. Mais importante, tanto a administração intraperitoneal quanto a intratecal do antagonista de TRPV1, capsazepina, preveniu o desenvolvimento da dor mecânica, incluindo a dor mecânica estática e a alodinia mecânica dinâmica. Em relação à dor mecânica estática, nossos achados são consistentes com os achados de outros estudos em ratos. No entanto, outro estudo relatou que a hiperalgesia mecânica induzida por paclitaxel não foi alterada em camundongos knockout para Trpv1. Essa discrepância pode ser devida à expressão gênica compensatória em camundongos knockout para Trpv1 ou a diferenças de espécie entre camundongos e ratos. Além disso, o envolvimento do TRPV1 na dor mecânica estática e dinâmica sugere que os nervos aferentes que medeiam esses tipos de dor mecânica podem compartilhar as mesmas fibras periféricas positivas para TRPV1 na PIPNP.

Além disso, o TRPV1 pode contribuir para a sensibilização central na medula espinhal. Foi demonstrado que o TRPV1 está envolvido na regulação das funções dos receptores NMDA, da tirosina quinase transmembrana ErbB4 e dos receptores canabinoides tipo 2 (CB2Rs) na medula espinhal, participando assim da regulação da transdução da dor. Em conjunto, nossos dados experimentais apoiam a noção de que o TRPV1 é um importante alvo molecular potencial para o tratamento da PIPNP.

3.2. A Expressão e Função do TRPM8 nos Neurônios do DRG Foram Diminuídas na PIPNP
Estudos anteriores demonstraram que o TRPM8 está envolvido na hipersensibilidade ao frio induzida por oxaliplatina, com a expressão do TRPM8 elevada na neuropatia por oxaliplatina. Surpreendentemente, nossos resultados indicam que a expressão da proteína TRPM8 no DRG de ratos foi reduzida após o tratamento com paclitaxel. Examinamos ainda a atividade funcional dos canais TRPM8 em neurônios do DRG e confirmamos que a sensibilidade do canal TRPM8 foi regulada negativamente após o tratamento com paclitaxel. Além disso, a injeção intratecal de WS-12 (um agonista seletivo do TRPM8) aliviou a dor neuropática induzida por paclitaxel, sugerindo que a regulação negativa do TRPM8 contribui para a PIPNP.

É importante notar que o TRPM8 é único por poder ser tanto pró-nociceptivo quanto anti-nociceptivo. Como mencionado anteriormente, foi relatado que o TRPM8 contribui para o desenvolvimento de hipersensibilidade ao frio em pacientes submetidos ao tratamento com oxaliplatina. Experimentos de voltage clamp em células inteiras em camundongos também mostraram que a oxaliplatina aumentou a corrente do TRPM8 induzida por mentol. No entanto, a atividade funcional do TRPM8 no DRG difere entre a PIPNP e a CIPNP induzida por oxaliplatina. Nossos dados experimentais demonstram que o TRPM8 desempenha um papel analgésico na dor mecânica induzida por paclitaxel, enquanto provavelmente desempenha um papel promotor de dor na dor ao frio induzida por oxaliplatina.

Neste estudo, o comportamento de dor ao frio foi induzido pelo teste de acetona no modelo de rato com PIPNP. No entanto, a expressão e a função do TRPM8, que demonstrou mediar a dor ao frio, foram reduzidas. Essa discrepância pode ser explicada pelo fato de que o TRPM8 não é a única molécula que medeia a dor nociceptiva ao frio; outras proteínas, como o TRPA1, também contribuem para a geração da dor ao frio. Em seguida, examinamos a expressão do TRPA1 e descobrimos que o TRPA1 no DRG estava dramaticamente aumentado na PIPNP, apoiando a possibilidade de que a dor ao frio na PIPNP possa ser mediada pelo TRPA1.

3.3. A ativação do TRPM8 inibe a função do TRPV1
Evidências emergentes indicam que a ativação do canal TRPM8 pode inibir a dor térmica ou mecânica mediada pelo TRPV1. Em camundongos diabéticos, a injeção intraplantar de mentol (um agonista do TRPM8) reduziu significativamente o comportamento nociceptivo induzido pela capsaicina (um agonista do TRPV1). Da mesma forma, em estudos de dor ocular superficial persistente causada por doença do olho seco, a expressão do TRPV1 estava aumentada, enquanto a expressão do TRPM8 estava diminuída no gânglio trigêmeo. Outro estudo relatou que o comportamento de esfregar os olhos foi intensificado após uma infusão crônica de capsaicina em ratos, e esse comportamento nociceptivo foi aliviado pelo mentol. Além disso, os efeitos inibitórios do TRPM8 sobre o TRPV1 foram observados não apenas em estudos relacionados à dor, mas também em estudos de tumores. No melanoma maligno, a ativação do TRPM8 bloqueia a ativação do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF) no TRPV1, inibindo assim a neovascularização induzida pelo VEGF e o crescimento do melanoma. Portanto, o mecanismo de regulação do canal iônico TRPM8 sobre o TRPV1 é de grande importância para a supressão da dor e da proliferação tumoral.
No presente estudo, mostramos que a atividade do TRPV1 é inibida pela ativação do TRPM8 na PIPNP. No entanto, seu mecanismo subjacente permanece desconhecido. Estudos anteriores relataram a colocalização do TRPM8 e do TRPV1 em neurônios do GDR. Usando imageamento de cálcio, descobrimos que alguns neurônios do GDR exibiam ambas as atividades do TRPM8 e do TRPV1, sugerindo uma interação entre esses dois receptores de canal através de moléculas de sinalização dentro de um neurônio. Estudos anteriores mostraram que a hidrólise do fosfatidilinositol (4,5)bifosfato (PIP2) tem efeitos opostos sobre o TRPV1 e o TRPM8, o que poderia potencialmente produzir hiperalgesia ao sensibilizar fibras responsivas ao calor, enquanto simultaneamente suprime e contrapõe a ação analgésica das fibras sensíveis ao frio. Deve-se notar que possíveis interações entre neurônios que expressam TRPM8 e TRPV1 não podem ser excluídas, uma vez que foi relatado que neurônios positivos para TRPM8 no GDR podem inibir a função de neurônios positivos para TRPV1 através dos ramos axonais. Além disso, potenciais interações nas terminações nervosas na medula espinhal merecem investigação adicional.
3.4. Aplicação Tópica de Mentol: Um Tratamento Candidato para PIPNP
Mentol, um produto natural refrescante da hortelã, é amplamente utilizado para aliviar a dor de lesões esportivas, artrite e outras condições dolorosas. Devido à possível alta expressão de TRPM8 em órgãos além do sistema nervoso, como na próstata, a administração sistêmica de agonistas de TRPM8 pode causar alguns efeitos colaterais. Portanto, os alvos farmacológicos periféricos oferecem uma maneira útil de reduzir os efeitos colaterais sistêmicos, diminuir o risco de overdose, obter relativamente poucas interações medicamentosas e ter acesso direto aos locais de dor. Dada a ampla distribuição dos terminais periféricos dos neurônios do gânglio da raiz dorsal (DRG) na pele, a aplicação tópica de mentol pode ativar o canal TRPM8 nos neurônios do DRG. Alguns casos clínicos mostraram que a aplicação tópica de mentol pode inibir efetivamente sintomas semelhantes à dor na neuropatia periférica induzida por quimioterapia (CIPN). No entanto, deve-se prestar atenção à concentração e às condições durante o uso do mentol. Estudos recentes mostraram que a alodinia ao frio pode ser induzida quando altas concentrações de mentol são aplicadas topicamente em roedores. Sob condições fisiológicas, concentrações baixas a moderadas de mentol sensibilizam o TRPM8, enquanto o mentol em concentrações mais altas pode ativar tanto o TRPM8 quanto o TRPA1, induzindo alodinia ao frio. Patologicamente, a ativação do TRPM8 pelo mentol alivia a alodinia mecânica e a hiperalgesia térmica após lesão nervosa ou estimulação química. No presente estudo, descobrimos que uma baixa concentração de mentol aplicada nas patas traseiras de ratos pode atenuar significativamente a dor mecânica na neuropatia periférica induzida por paclitaxel (PIPNP), incluindo alodinia mecânica estática e dinâmica, sugerindo que o mentol tem efeitos analgésicos potentes e pode ser um fármaco candidato para o tratamento da PIPNP.
Em resumo, descobrimos que TRPV1 e TRPM8 desempenham papéis opostos na PIPNP. O mentol reduz a sensibilidade do canal TRPV1 em neurônios dissociados do DRG. A ativação do TRPM8 é considerada um método eficaz para aliviar a PIPNP.
4. Materiais e Métodos
4.1. Animais Experimentais
Ratos machos Sprague–Dawley (180–200 g) foram obtidos do centro de animais do Centro de Ciências da Saúde da Universidade de Pequim. Os ratos foram alojados em salas com clima controlado em um ciclo claro-escuro de 12 h (luzes acesas das 08:00 às 20:00) com livre acesso a comida e água. Os animais foram aclimatados por 5 dias (d) antes do início de qualquer procedimento experimental. Todos os procedimentos experimentais estavam em conformidade com as diretrizes do Comitê de Cuidado e Uso Animal da Universidade de Pequim. O código ético para este estudo é DLASBD0109.
4.2. Modelo Animal de PIPNP
O modelo animal de PIPNP foi gerado seguindo a metodologia descrita anteriormente. Taxol (da Bristol-Myers-Squibb, Nova York, NY, EUA) e 30 mg/6 mL de paclitaxel em Cremophor EL e veículo etanol (1:1) foram diluídos em solução salina a 0,9% até uma concentração final de 1 mg/mL imediatamente antes de sua administração intraperitoneal (i.p.). A solução foi administrada em 4 dias alternados (dias 1, 3, 5 e 7 com uma dose cumulativa de 8 mg/kg por rato).
4.3. Modelo de Dor Inflamatória Induzida por CFA
Para induzir dor inflamatória, 0,1 mL de CFA 25% (F5881; Millipore Sigma, Burlington, VT, EUA) foi injetado na superfície plantar da pata traseira direita de ratos adultos sob breve anestesia com isopentano. O CFA (100%) foi diluído para 25% em adjuvante incompleto de Freund (F5506; Millipore Sigma, Burlington, VT, EUA) para evitar inflamação excessiva e comportamento de dor espontânea. A injeção de CFA produziu inchaço local caracterizado por eritema, edema e hipersensibilidade.

4.4. Administração de Fármacos

4.4.1. Injeção Intraperitoneal de Capsazepina

Para administração intraperitoneal de fármacos, os ratos foram contidos, e 30 mg/kg de capsazepina (HY-15640; MCE) ou veículo controle foi administrado a cada rato.

4.4.2. Injeção Intratecal de Capsazepina e WS-12

Para administração intratecal de fármacos, um cateter de polietileno PE-10 foi inserido no espaço intratecal acima do aumento lombar da medula espinhal. Os ratos foram anestesiados com isoflurano durante a operação e permitiu-se que se recuperassem por 5 dias antes da indução de PIPNP. Um total de 10 µL de capsazepina (1 µg/µL, HY-15640; MCE) e WS-12 (1 µg/µL, HY-108449; MCE) ou veículo controle foram administrados quatro vezes a cada rato através do cateter.

4.4.3. Aplicação Tópica de Mentol

Mentol (1%, HY-75161; MCE), ou etanol como controle, foi aplicado topicamente nos ratos imergindo suas patas na solução por 5 s. Testes comportamentais foram realizados 10 min após a aplicação de mentol ou etanol. Diferentes concentrações de mentol foram testadas em um experimento preliminar.

4.5. Testes Comportamentais

Três dias antes do teste formal, os ratos foram colocados sobre uma grade de metal e cobertos com uma tampa de plexiglass transparente (18 cm × 8 cm × 8 cm) por 30–60 min para se adaptar ao ambiente. Além disso, antes do início de cada teste comportamental, os ratos também foram colocados sobre uma grade de metal e cobertos com plexiglass transparente por 30 min para se aclimatar ao ambiente. Uma vez que os ratos cessaram as atividades de alisar e explorar e estavam em um estado relativamente quieto, o experimento começou.

4.5.1. Teste de Von Frey

O limiar de retirada da pata de 50% (50% PWT) induzido pelo filamento de von Frey foi usado para refletir o grau de sensibilização à dor devido ao toque neuropático em ratos, medido pelo método "up and down". Uma série de filamentos de von Frey padronizados foram usados para estimular a parte plantar central das patas traseiras dos ratos. A ponta do filamento de von Frey foi pressionada contra a parte central da pata traseira dos ratos até que ficasse levemente curvada em forma de S e mantida por 6–8 s para observar se os ratos apresentavam retirada da pata. Uma reação rápida de retirada da pata ocorreu nos ratos durante o tempo de estimulação ou imediatamente após a remoção do filamento de von Frey, a qual foi registrada como uma reação positiva, enquanto a reação de retirada da pata devido à atividade física não foi registrada como reação positiva. O limiar de redução de 50% foi calculado com o mesmo método usado em nosso estudo anterior.

4.5.2. Escova Dinâmica
A pontuação dinâmica induzida por um pincel foi usada para avaliar a resposta de ratos à hipersensibilidade mecânica dinâmica (ou seja, a resposta a estímulos táteis leves). Um pincel foi usado para acariciar suavemente as patas traseiras laterais dos ratos a uma velocidade de aproximadamente 2 cm/s, do calcanhar ao dedo, e a reação da pata traseira foi observada. De acordo com o método relatado por Qiufu Ma et al., a resposta da pata traseira do rato foi avaliada e pontuada da seguinte forma: Para cada teste, nenhum movimento evocado foi pontuado como 0, retirada rápida da pata (1 s ou menos) foi pontuada como 1, e levantamento contínuo da pata (2 s ou mais de 2 s) foi pontuado como 2. O teste foi repetido três vezes para cada rato, com um intervalo de pelo menos 10 min entre as medições. A pontuação média das três medições foi considerada como a pontuação final para cada rato.
4.5.3. Teste de Hargreaves
O grau de sensibilização à dor térmica neuropática nos ratos foi avaliado medindo a latência de retirada da pata (PWL) em resposta à estimulação por calor radiante. Durante o teste, o ponto de foco da lâmpada de calor radiante foi direcionado ao centro da pata traseira de cada rato, e a lâmpada de calor radiante foi ligada enquanto um temporizador automático começava a registrar. Uma rápida retirada da pata pelo rato foi considerada uma reação positiva. Ao observar uma resposta positiva, a lâmpada de calor radiante foi desligada e o temporizador foi parado. A intensidade do calor radiante foi ajustada para que a PWL basal ficasse entre 10–15 s. Se um rato não apresentasse reação positiva dentro de 30 s, a lâmpada era desligada e a temporização interrompida para evitar queimaduras. Cada rato foi medido repetidamente três vezes, com um intervalo de 15 min entre os testes. O valor médio das três medições foi definido como a latência de retirada da pata ao calor radiante do rato.
4.5.4. Teste de Dor ao Frio
Antes do teste formal, os ratos foram colocados sobre uma grade metálica e cobertos com uma tampa transparente de plexiglass para se aclimatarem ao ambiente por 30 min. Acetona (10 μL) foi aplicada na superfície ventral da pata traseira do rato usando uma pipeta, e então a resposta comportamental foi monitorada por 1 min. A resposta dos ratos à acetona foi classificada usando uma escala de 4 pontos: 0 = sem resposta, 1 = retirada da pata ou um único movimento rápido, 2 = movimentos rápidos repetidos da pata, e 3 = lamber a pata. Cada rato foi medido três vezes, com um intervalo de pelo menos 15 min entre duas medições. A pontuação média das três medições foi considerada como a pontuação final de cada rato.
4.6. Imunofluorescência
No 14º dia após a injeção de paclitaxel ou veículo, os ratos foram anestesiados com tribromoetanol (350 mg/kg, i.p.) e perfundidos transcardialmente com solução salina, seguida de paraformaldeído a 4% em PBS. Os DRGs de L4–L5 foram removidos, pós-fixados em paraformaldeído a 4% por 6–8 h e tratados com sacarose a 20% (em PBS) por 24 h, seguido de sacarose a 30% (em PBS). Os DRGs foram então embebidos em Tissue-Tek OCT (Sakura Finetek, Torrance, CA, EUA). Em seguida, foram seccionados com espessura de 10 μm e colocados em lâminas catiônicas. Os cortes congelados foram assados a 42 °C por 24 h e depois secos a 37 °C em estufa por três dias.

Após a secagem, a imunofluorescência foi realizada da seguinte forma: (1) os cortes foram hidratados com PBS por 20–30 min à temperatura ambiente; (2) os cortes foram incubados com o tampão de bloqueio contendo albumina sérica bovina a 3% em Triton X-100 a 0,6% em PBS à temperatura ambiente por 40–60 min; (3) os cortes foram lavados três vezes com PBS e incubados com o anticorpo primário durante a noite a 4 °C; (4) os cortes foram lavados com PBS e incubados com o anticorpo secundário fluorescente à temperatura ambiente por 2 h; (5) os cortes foram selados com meio de montagem antifading (com DAPI) e observados por microscopia confocal (Leica, TCS-SP8 DIVE, Wetzlar, Alemanha).

Os anticorpos primários utilizados foram os seguintes: anticorpo TRPV1 (1:200, sc-398417; Santa Cruz Biotechnology, Dallas, TX, EUA), anticorpo TRPM8 (1:1000, ACC049; Alomone Labs, Jerusalém, Israel). Os anticorpos secundários correspondentes para TRPV1 e TRPM8 foram IgG de cabra anti-camundongo conjugado com TRITC (1:1000; Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA, EUA) para TRPV1 e IgG de burro anti-coelho conjugado com FITC (1:1000; Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, EUA) para TRPM8.

4.7. Análise de Western Blot
No 14º dia após a injeção de veículo ou paclitaxel, os ratos foram sacrificados, e os DRGs nos níveis L4–L5 foram removidos e imediatamente congelados em nitrogênio líquido. Os DRGs foram homogeneizados em tampão de lise gelado a 4 °C por 40 min. Os homogenatos foram então centrifugados a 12.000× g por 3 min a 4 °C, e o sobrenadante foi coletado para análise. A concentração de proteínas foi medida usando um kit de ensaio BCA (Pierce Biotechnology, Waltham, MA, EUA). Cada amostra (50 μg) foi fervida por 3–5 min em tampão de amostra SDS-PAGE e submetida a SDS-PAGE usando géis de corrida a 10% (60 V por cerca de 60 min, depois 120 V até que o tampão de carregamento atingisse a parte inferior do gel). As proteínas foram então transferidas para uma membrana de nitrocelulose (Pall Gelman Laboratory, New York, NY, EUA). As membranas foram bloqueadas com 5% de leite desnatado em TBST por 40 min à temperatura ambiente e depois incubadas durante a noite a 4 °C com o anticorpo primário. Os anticorpos primários usados neste estudo foram os seguintes: anticorpo TRPV1 (1:1000, ACC029; Alomone Labs), anticorpo TRPM8 (1:1000, ACC049; Alomone Labs). Os blots foram então lavados três vezes em TBST e depois incubados com um anticorpo secundário conjugado com HRP (1:5000, goat anti-rabbit ou goat anti-mouse; Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, EUA) por 2 h à temperatura ambiente. Finalmente, os blots foram revelados usando um kit de substrato HRP quimioluminescente (WBKLS0500; Millipore Sigma).

4.8. Dissociação de Neurônios do DRG e Imagem de Cálcio

No 14º dia após a injeção de veículo ou paclitaxel, os DRGs L4–L5 foram removidos dos ratos e digeridos usando colagenase tipo IA (1,5 mg/mL; Millipore Sigma) por 50 min, seguido por tripsina a 0,125% (Millipore Sigma) por 7 min a 37 °C. O tratamento enzimático foi interrompido usando soro fetal bovino. Os DRGs foram suavemente dissociados por trituração com uma pipeta Pasteur polida à chama e centrifugados a 800 rpm por 3 min. O sedimento celular resultante foi ressuspenso em DMEM. As células dissociadas foram plaqueadas em lamínulas de vidro revestidas com Poli-D-Lisina (100 mg/mL; Millipore Sigma) dentro de placas de cultura de 35 mm com um poço de 10 mm de diâmetro e mantidas por 1,5 h a 37 °C. As células do DRG foram então lavadas com solução salina tamponada com fosfato de Dulbecco (DPBS) e incubadas em Fura-2 AM (5 mM, diluição 1:200 com DPBS contendo 1% de albumina de soro bovino; Thermo Fisher Scientific) à temperatura ambiente por 30 min. Após lavagem com DPBS, as células foram incubadas em meio Neurobasal à temperatura ambiente no escuro por um período de recuperação de 1 h. Para imagem de cálcio, um microscópio de fluorescência invertido equipado com conjuntos de filtros de excitação de 340 e 380 nm (Olympus, Tóquio, Japão) e um computador com software de análise de imagem (MetaFluor®, Molecular Devices, Sunnyvale, CA, EUA, (acessado em 20 de maio de 2024)) foram utilizados. Imagens de fluorescência e a razão F340:F380 foram adquiridas a cada 5 s. A ativação de TRPV1 e TRPM8 foi induzida pela adição de capsaicina (1 μM, HY-10448; MCE), mentol (200 μM, HY-75161; MCE) ou WS-12 (10 μM, HY-108449; MCE), respectivamente.
4.9. Análise Estatística
Todos os dados são apresentados como médias ± EPM. As análises estatísticas foram realizadas utilizando o software Prism 9.0 (GraphPad Prism Software, La Jolla, CA, EUA). As diferenças entre os grupos experimental e controle foram comparadas utilizando teste t não pareado ou ANOVA de duas vias seguida pelo teste post hoc de Bonferroni. A significância estatística foi definida como p < 0,05.
Aviso/Nota do Editor: As declarações, opiniões e dados contidos em todas as publicações são de responsabilidade exclusiva do(s) autor(es) e colaborador(es) e não da MDPI e/ou do(s) editor(es). A MDPI e/ou o(s) editor(es) se isentam de responsabilidade por quaisquer danos a pessoas ou propriedades resultantes de quaisquer ideias, métodos, instruções ou produtos mencionados no conteúdo.
Contribuições dos Autores
Conceituação, J.W.; metodologia, W.-W.L. e Y.Z.; análise formal, H.-C.L.; investigação, W.-W.L., Y.Z., H.-C.L., Y.-F.Z., J.L., T.-Y.Z., Y.L., W.Z. e Y.-Q.X.; recursos, Y.W.; curadoria de dados, J.X. e X.-C.C.; redação – preparação do rascunho original, W.-W.L. e J.W.; redação – revisão e edição, S.-O.C.; supervisão, J.W.; aquisição de financiamento, J.W. e Y.W. Todos os autores leram e concordaram com a versão publicada do manuscrito.
Declaração do Comitê de Revisão Institucional
O protocolo do estudo animal foi aprovado pelo Comitê Institucional de Cuidado e Uso de Animais (IACUC) do Centro de Ciências da Saúde da Universidade de Pequim (Número de Aprovação IACUC: DLASBD0109).
Declaração de Consentimento Informado
Não aplicável.
Declaração de Disponibilidade de Dados
Todos os dados relevantes estão dentro do manuscrito. O conjunto de dados gerado e analisado durante o estudo atual também está disponível junto ao autor correspondente mediante solicitação.
Conflitos de Interesse
Os autores declaram não haver conflitos de interesse.
Referências
Neuropatia induzida por quimioterapia
Neurotoxicidade periférica induzida por quimioterapia: Uma análise crítica
Neurotoxicidade periférica induzida por quimioterapia: Manejo informado pela farmacogenética
Neuropatia periférica induzida por quimioterapia: Onde estamos agora?
Neuropatia Periférica Induzida por Quimioterapia: Epidemiologia, Patomecanismos e Tratamento
Tratamento Baseado em Evidências da Dor na Neuropatia Periférica Induzida por Quimioterapia
Atualizações no Tratamento da Neuropatia Periférica Induzida por Quimioterapia
Canais TRP sensíveis a redox: Um alvo farmacológico promissor na neuropatia periférica induzida por quimioterapia
Evidências Pré-clínicas e Clínicas de Agentes Terapêuticos para a Neuropatia Periférica Induzida por Paclitaxel
O receptor de capsaicina: Um canal iônico ativado por calor na via da dor
O receptor vanilóide: Uma porta molecular para a via da dor
Identificação e caracterização de novos motivos de ligação à tubulina localizados no C-terminal do TRPV1
Complexo TRPV1-tubulina: Envolvimento da tubulina de membrana na regulação da neuropatia periférica induzida por quimioterapia
O quimioterápico oncológico Paclitaxel aumenta as respostas dos neurônios sensitivos humanos e de roedores ao TRPV1 por ativação do TLR4
Participação do receptor vaniloide de potencial transitório 1 na nocicepção visceral e periférica aguda induzida por paclitaxel em roedores
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Efeito do paclitaxel no receptor vaniloide de potencial transitório 1 no gânglio da raiz dorsal de ratos
A eletroacupuntura alivia a dor neuropática periférica induzida por paclitaxel em ratos ao suprimir a sinalização de TLR4 e a regulação positiva de TRPV1 em neurônios sensoriais
A resolvina D5 inibe a dor neuropática e inflamatória em camundongos machos, mas não em fêmeas: Ações distintas das resolvinas da série D na neuropatia periférica induzida por quimioterapia
O receptor 2 ativado por proteinase sensibiliza o receptor vaniloide de potencial transitório 1, o receptor vaniloide de potencial transitório 4 e o receptor anquirina de potencial transitório 1 na dor neuropática induzida por paclitaxel
Identificação de um receptor de frio revela um papel geral para os canais TRP na termossensação
Sensibilidade ao frio atenuada em camundongos nulos para TRPM8
Canais de Receptor de Potencial Transitório (TRP) na Dor, Transtornos Neuropsiquiátricos e Epilepsia
Papel do TRPM8 e TRPA1 na alodinia ao frio em pacientes com lesão por frio
Reversão da neuropatia periférica limitante de dose induzida por carboplatina com o ativador de TRPM8, mentol, permite uma administração adicional eficaz de quimioterapia
Dor neuropática relacionada ao tratamento do câncer: Estudo de prova de conceito com mentol—Um agonista de TRPM8
Mentol tópico para tratamento de neuropatia periférica induzida por quimioterapia
Envolvimento do aumento da expressão do receptor melastatina de potencial transitório 8 na alodinia ao frio induzida por oxaliplatina em camundongos
Expressão distinta dos mRNAs de TRPM8, TRPA1 e TRPV1 em neurônios aferentes primários de ratos com fibras aδ/c e colocalização com receptores trk
O desenvolvimento de circuitos neurais periféricos ao frio baseado na expressão de TRPM8
Neurônios da linhagem TRPV1 são necessários para a sensação térmica
Receptores de calor nocivo presentes em células sensoriais ao frio em ratos
Papel dos Canais de Receptor de Potencial Transitório Trpv1 e Trpm8 na Neuropatia Periférica Diabética
Canais TRPV1 e TRPM8 e Comportamento Nocifensivo em um Modelo de Olho Seco em Ratos
Uma neuropatia periférica dolorosa em ratos produzida pelo fármaco quimioterápico paclitaxel
Nogo-A promove hiperalgesia térmica inflamatória ao manter a função do TRPV-1 no neurônio do gânglio da raiz dorsal de ratos
Patobiologia da neuropatia periférica induzida por quimioterapia contra o câncer (CIPN)
Mecanismos subjacentes à dor neuropática induzida por paclitaxel: Canais, inflamação e regulações imunes
A inibição do TRPV1 espinal reduz a fosforilação do receptor 2B de NMDA e produz efeitos antinociceptivos em camundongos com dor inflamatória
Uma nova conexão neuronal espinal para a sensação de calor
Agonistas do receptor canabinoide 2 (CB(2)R) administrados perifericamente perdem efeitos anti-alodínicos em camundongos knockout para TRPV1, enquanto a administração intratecal leva à anti-alodinia e redução da expressão de GFAP, CCL2 e TRPV1 na medula espinal dorsal e no DRG
Canais TRP Termossensíveis: Novos Alvos para o Tratamento da Dor Periférica Induzida por Quimioterapia
A hipersensibilidade ao frio induzida por oxaliplatina é devida à remodelação da expressão de canais iônicos em nociceptores
A base molecular e celular da termossensação em mamíferos
Oxaliplatina Causa Alterações Transientes na Atividade do Canal TRPM8
Efeitos da Oxaliplatina na Sensibilidade Facial a Temperaturas Frias e nos Neurônios do Gânglio Trigeminal que Expressam TRPM8 em Camundongos
TRPM8, mas não TRPA1, é necessário para respostas neurais e comportamentais a temperaturas frias nocivas agudas e miméticos de frio in vivo
Papel da atividade do potencial receptor transitório melastatina 8 na sensibilidade ao frio induzida por mentol e sua percepção qualitativa no olho seco
A Ativação do TRPM8 via 3-Iodotironamina Atenua a Transativação do TRPV1 Induzida por VEGF em Células de Melanoma Uveal Humano
Canais TRP e dor
Mecanismos centrais da analgesia induzida por mentol
O papel distintivo do mentol na dor e analgesia: Mecanismos, práticas e avanços
Avaliação Pré-Clínica do Agonista do Canal Iônico Trpm8 D-3263 para Hiperplasia Prostática Benigna
A Expressão de Trpm8 em Adenocarcinoma Prostático Resistente à Castração Humano e de Camundongo Abre Caminho para o Desenvolvimento Pré-Clínico de Terapias Direcionadas Baseadas em TRPM8
Tratamentos Tópicos e Seus Mecanismos Moleculares/Celulares em Pacientes com Dor Neuropática Periférica - Revisão Narrativa
Palestra do Prêmio Bonica: Hiperexcitabilidade Neuronal Periférica: O alvo de 'fácil acesso' para estratégias terapêuticas seguras na dor neuropática
Do laboratório ao leito: Um caso de reversão rápida da dor neuropática induzida por bortezomibe pelo ativador de TRPM8, mentol
Estudo psicofísico dos efeitos da aplicação tópica de mentol em voluntários saudáveis
Mentol tópico — Um modelo humano de dor por frio através da ativação e sensibilização de nociceptores C
Os papéis de iPLA2, TRPM8 e TRPA1 na hipersensibilidade ao frio induzida quimicamente
Canais TRP e monoterpenos: Indicações passadas e atuais sobre propriedades analgésicas
Identificação de circuitos espinhais envolvidos na dor mecânica dinâmica evocada pelo toque
Hipersensibilidade mecânica em um modelo de rato de dor neuropática periférica induzida por paclitaxel (PIPNP). (A) Protocolo experimental para estabelecer um modelo de rato de PIPNP. As setas vermelhas indicam o momento da administração de paclitaxel (PTX). (B) Hipersensibilidade mecânica indicada pelo teste de von Frey em PIPNP. Esquerda: Curva temporal do limiar de retirada da pata (PWT) após injeção de PTX ou veículo (Veh). Direita: Análise estatística da área sob a curva (AUC). (C) Porcentagem de ratos com dor mecânica óbvia no dia 14 após o tratamento com paclitaxel (PWT < 10 g, n = 48). (D) Efeito temporal e análise da AUC do escore dinâmico indicado pelo teste de escova após tratamento com PTX ou Veh. (E) Efeito temporal e análise da AUC da latência de retirada da pata (PWL) indicada pelo teste de Hargreaves após injeção de PTX ou Veh. (F) Efeito temporal do escore de frio indicado pelo teste de acetona e sua análise da AUC. Os dados foram analisados usando ANOVA de duas vias seguida por testes post hoc de Bonferroni para o efeito temporal. As AUCs foram analisadas usando teste t não pareado. * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001, n = 6 em (B,D,E) n = 5 em (F). Todos os dados são média ± EPM.
Regulação positiva da expressão e função do TRPV1 após tratamento com paclitaxel. (A) Imagens representativas de imunocoloração de TRPV1 no dia 14 após injeção de Veh e PTX. As barras de escala representam 100 μm (painel esquerdo) e 50 μm (painel direito). (B) Análise quantitativa de neurônios TRPV1-positivos dentro da área fixa (1 mm2). Os dados foram analisados usando teste t não pareado. *** p < 0,001, n = 6. (C). Análise de Western blot dos níveis da proteína TRPV1 no DRG no dia 14 após tratamento com Veh e PTX. Os níveis de expressão de TRPV1 foram normalizados para β-actina. Os histogramas exibem a análise estatística dos níveis relativos da proteína TRPV1 nos grupos Veh e PTX. Os dados foram analisados usando teste t não pareado. *** p < 0,001, n = 4. (D) Imagens de neurônios dissociados do DRG L4–L5 dos grupos Veh e PTX antes e após estimulação com capsaicina (Cap). Neurônios responsivos à capsaicina são indicados por setas. As barras de escala representam 100 μm. (E) Alterações na razão F340/F380 em neurônios responsivos a Cap nos grupos Veh e PTX. (F) Análise estatística da razão média F340/F380 em neurônios responsivos a Cap nos grupos Veh e PTX. Os dados foram analisados usando ANOVA de duas vias seguida pelo teste post hoc de Bonferroni (3 experimentos independentes). *** p < 0,001. n = 5, 7 nos painéis (E,F). Veh: veículo, BL: basal, PTX: paclitaxel.
Atenuação da dor mecânica induzida por paclitaxel pela injeção intraperitoneal do antagonista do TRPV1 capsazepina (CPZ). (A) A hipersensibilidade mecânica estática na PIPNP foi reduzida após injeção intraperitoneal de CPZ. Esquerda: Curso temporal do PWT após injeção intraperitoneal de CPZ (30 mg/kg) nos dias 4, 8, 12 e 16 após o tratamento com paclitaxel. n = 11. Direita: Análise estatística da AUC do PWT do painel esquerdo. (B) A alodinia mecânica dinâmica na PIPNP foi aliviada pela injeção intraperitoneal de CPZ. Esquerda: Curso temporal do escore dinâmico após injeção intraperitoneal de CPZ (30 mg/kg) nos dias 4, 8, 12 e 16 após o tratamento com PTX e Veh. n = 6. Direita: Análise estatística da AUC do escore dinâmico do painel esquerdo. As áreas rosadas nos painéis esquerdos de (A,B) indicam o período de criação do modelo PIPNP. Os dados foram analisados usando ANOVA de duas vias seguida por testes post hoc de Bonferroni e teste t não pareado. ** p < 0,01, *** p < 0,001. ## p < 0,01, ### p < 0,001.
A injeção intratecal de CPZ alivia significativamente a dor mecânica na PIPNP. (A) Curso temporal (esquerda) e análise da AUC do PWT (direita) após injeção intratecal de 10 μg de CPZ nos dias 4, 8, 12 e 16 após o tratamento com PTX. n = 7, 5. (B) Curso temporal (esquerda) e análise da AUC (direita) do escore dinâmico após injeção intratecal de 10 μg de CPZ nos dias 4, 8, 12 e 16 após o tratamento com PTX. n = 8, 6. As áreas rosadas nos painéis esquerdos de (A,B) indicam o período de criação do modelo PIPNP. Os dados foram analisados usando ANOVA de duas vias seguida por testes post hoc de Bonferroni e teste t não pareado. * p < 0,05, ** p < 0,01.
Expressão e função reduzidas do TRPM8 após tratamento com paclitaxel. (A) Fotomicrografias representativas da imunofluorescência para TRPM8 no dia 14 após tratamento com Veh e PTX. (B) Análise estatística do número de neurônios TRPM8-positivos na área fixa (1 μm²). Os dados foram analisados usando o teste t. * p < 0,05, n = 5, 4. (C) Análise por Western blot dos níveis da proteína TRPM8 em DRGs no dia 14 após tratamento com Veh e PTX. A expressão de TRPM8 foi normalizada para a expressão de β-actina. Os histogramas mostram a quantidade relativa da proteína TRPM8 em ratos tratados com Veh e PTX. Os dados foram analisados usando o teste t não pareado. *** p < 0,001, n = 5. (D,F) A resposta dos neurônios do DRG ao mentol foi significativamente reduzida no grupo tratado com PTX em comparação com o grupo tratado com Veh. (D) Imagens representativas dos sinais de cálcio em neurônios do DRG isolados de ratos tratados com Veh e PTX após estimulação com mentol (200 μM). As setas brancas indicam os neurônios do DRG responsivos ao mentol. (F) Análise estatística da razão F340/F380 nos grupos Veh e PTX após estimulação com mentol. Os dados foram analisados usando ANOVA de duas vias seguida de testes post hoc de Bonferroni (3 experimentos independentes). *** p < 0,001, n = 26, 22. (E,G) A resposta dos neurônios do DRG ao WS-12 (um agonista seletivo do TRPM8) foi significativamente diminuída no grupo tratado com PTX em comparação com o grupo tratado com Veh. (E) Imagens de cálcio representativas de neurônios do DRG isolados de ratos tratados com Veh e PTX após estimulação com WS-12 (10 μM). As setas brancas indicam os neurônios do DRG responsivos ao WS-12. (G) Análise estatística da razão F340/F380 após estimulação com WS-12. Os dados foram analisados usando ANOVA de duas vias seguida de testes post hoc de Bonferroni, 3 experimentos independentes, *** p < 0,001, n = 7, 16. As barras de escala em (D,E) representam 100 μm. Veh: veículo, PTX: paclitaxel, BL: basal.
A ativação do TRPM8 atenuou significativamente a hipersensibilidade mecânica na PIPNP.
(A,B) A injeção intratecal de 10 μg de WS-12 aliviou significativamente tanto a dor mecânica estática quanto a dinâmica.
(A) Curva temporal e análise estatística do PWT em ratos tratados com PTX nos dias 8, 10, 12 e 14 após injeção intratecal de WS-12 ou do controle.
(B) Curva temporal e análise da AUC do escore dinâmico em ratos tratados com PTX após administração de WS-12 ou do controle.
(C,D) A aplicação tópica de mentol a 1% demonstrou um efeito analgésico significativo na dor mecânica induzida por paclitaxel.
(C) Curva temporal do PWT e análise da AUC nos grupos tratados com veículo, tratados com PTX e tratados com PTX com aplicação de mentol nos dias 7, 14, 21 e 28.
(D) Curva temporal e análise estatística da AUC do escore dinâmico nos grupos tratados com veículo, tratados com PTX e tratados com PTX com aplicação de mentol nos dias 7, 14, 21 e 28.
As áreas rosa nos painéis esquerdos de (A–D) indicam o período de criação do modelo PIPNP.
Os dados foram analisados usando ANOVA de duas vias seguida por testes post hoc de Bonferroni e teste t não pareado.

• p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001, ##
  p < 0,01, ###
  p < 0,001. n = 8, 5 em (A); n = 11, 9 em (B); n = 6 em (C) e n = 5 em (D).
  A ativação do TRPM8 pelo mentol inibiu a função do TRPV1 in vitro e in vivo. (A–D) O experimento de imageamento de cálcio demonstrou que os neurônios do DRG pré-ativados por 200 μM de mentol apresentaram uma resposta significativamente diminuída a 1 μM de capsaicina. (A) Imagens representativas de cálcio de neurônios do DRG de ratos tratados com PTX e veículo. Neurônios responsivos ao mentol são indicados por setas vermelhas (mentol+), enquanto aqueles não responsivos ao mentol são indicados por setas azuis (mentol−). (B) Análise estatística das mudanças no sinal de cálcio após o tratamento com capsaicina (ΔRazão após capsaicina) nos neurônios responsivos e não responsivos ao mentol dos ratos tratados com veículo. (C) Análise dos dados das mudanças no sinal de cálcio em neurônios do DRG em resposta à capsaicina entre os grupos responsivo e não responsivo ao mentol dos ratos tratados com PTX. (D) Comparação das mudanças gerais (incluindo neurônios mentol+ e mentol−) no sinal de cálcio em resposta à capsaicina nos grupos veículo e PTX após ativação do TRPM8 pelo mentol. Os dados foram analisados usando ANOVA de duas vias seguida por testes post hoc de Bonferroni, 3 experimentos independentes, * p < 0,05, *** p < 0,001, n = 15, 9 em (B); n = 12, 11 em (C); n = 8, 5 em (D). (E) A aplicação tópica de 1% de mentol atenuou significativamente a hiperalgesia térmica inflamatória induzida por CFA. Esquerda: Latência de retirada da pata (PWL) no teste de Hargreaves para os grupos controle, CFA e CFA/mentol. Direita: Análise estatística da PWL da figura à esquerda. As setas pretas nos painéis esquerdos de (B–D) indicam o ponto temporal da administração de mentol ou capsaicina. Todos os dados são apresentados como média ± EPM. Os dados foram analisados usando ANOVA de duas vias seguida por testes post hoc de Bonferroni e um teste t não pareado. * p < 0,05, ** p < 0,01, *** p < 0,001, #
  p < 0,05, ###
  p < 0,001, n = 5, 5, 6.