pmid: "24250616"
title: "Efeito Antinociceptivo do Extrato Aquoso de Origanum vulgare L. em Ratos Machos: Possível Envolvimento do Sistema GABAérgico."
authors: "Afarineshe Khaki MR, Pahlavan Y, Sepehri G, Sheibani V, Pahlavan B"
journal: "Iranian journal of pharmaceutical research : IJPR"
pubdate: "2013"
doi: ""
source: "PMC Full Text"

Efeito Antinociceptivo do Extrato Aquoso de Origanum vulgare L. em Ratos Machos: Possível Envolvimento do Sistema GABAérgico.

Autores

Afarineshe Khaki MR, Pahlavan Y, Sepehri G, Sheibani V, Pahlavan B

Periodico

Iranian journal of pharmaceutical research : IJPR (2013)

Conteudo

Efeito Antinociceptivo do Extrato Aquoso de Origanum vulgare L. em Ratos Machos: Possível Envolvimento do Sistema GABAérgico
O objetivo da presente investigação foi avaliar o possível envolvimento do mecanismo GABAérgico no efeito analgésico do extrato aquoso de Origanum Vulgare (ORG) em um modelo de teste de dor aguda em ratos. Sessenta e três ratos Wistar machos anestesiados (200-250 g) foram canulados no ventrículo esquerdo. Cinco a sete dias após a recuperação da cirurgia, o extrato de ORG foi injetado por via intraventricular na dose de 3 μg/rato i.c.v. Em seguida, baclofeno (10 mg/Kg, IP), CGP35348 (100 nmol/Kg, i.c.v), muscimol (1 mg/Kg IP) e bicuculina (5 mg/Kg IP) foram injetados separadamente 20 min antes da injeção de ORG. Os grupos experimentais foram comparados com o grupo intacto (controle) (n = 7). A latência de resposta dos ratos à estimulação térmica foi registrada usando o teste de Tail-Flick. A injeção do extrato de ORG resultou em um aumento significativo e dose-dependente na latência de resposta. Houve também um aumento significativo na latência de resposta após a coadministração do extrato de ORG com baclofeno quando comparado ao grupo controle. No entanto, após a coadministração do extrato de ORG/bicuculina, foi observada uma diminuição significativa na latência de resposta em comparação ao grupo controle. Em conclusão, os resultados do presente estudo sugerem que o extrato aquoso de Origanum vulgare L. ssp. viridis possui atividade antinociceptiva de forma dose-dependente e que a antinocicepção induzida por ORG pode ser mediada, pelo menos em parte, por ambos os receptores GABA.
Introdução
Acredita-se que os produtos naturais sejam uma importante fonte de novas substâncias químicas com potencial aplicação terapêutica. Várias espécies de plantas foram tradicionalmente usadas como analgésicos. Em geral, a determinação dos efeitos de plantas herbais no tratamento de doenças e no alívio da dor é uma das estratégias importantes na medicina. Existem vários relatos indicando os efeitos analgésicos de plantas medicinais. O presente estudo foi desenhado para avaliar o efeito analgésico de Origanum vulgare L. em um modelo de dor aguda em ratos.
A família de plantas Labiadas é geralmente conhecida por seus múltiplos efeitos farmacológicos, como atividades analgésicas e anti-inflamatórias. Origanum vulgare faz parte da família Labiatae e pertence ao gênero Origanum, que é nativo de ambientes temperados quentes, desde a Eurásia até a região do Mediterrâneo. ORG é usado na medicina tradicional como diurético, estimulante, antimicrobiano, anti-inflamatório, antioxidante e anticancerígeno. Muitas dessas atividades foram atribuídas a compostos, incluindo carvacrol, timol, ácido rosmarínico, borneol, organol (A e B), ácido ursólico, hidrocarbonetos monoterpênicos (limoneno, terpineno, ocimeno, cariofileno, β-bisaboleno e p-cimeno) e álcoois monoterpênicos (linalol, 4-terpineol).
Até onde sabemos, o efeito analgésico de Origanum vulgare não foi totalmente investigado. Este trabalho forneceu evidências do envolvimento do sistema GABAérgico nos efeitos analgésicos induzidos por ORG no teste de retirada da cauda.

O GABA é o neurotransmissor inibitório de ação rápida no cérebro dos mamíferos. Ele afeta diferentes subtipos, incluindo receptores GABAA e GABAB. Foi demonstrado que a alteração na inibição mediada por GABA está envolvida na dor patológica. Isso ocorre endogenamente em modelos animais de dor inflamatória e neuropática. Em um mecanismo hipotético, o gradiente transmembrana de cloreto neural é distribuído após menor entrada GABAérgica inibitória em resposta a danos nervosos. Inversamente, o aumento da inibição mediada por receptores GABAA alivia a dor. A ativação dos receptores GABAA pode induzir sedação forte e outros vários efeitos colaterais. Muitos fármacos de origem natural e herbal podem não apresentar esses efeitos colaterais.

Experimental
Animais e drogas
Sessenta e três ratos Wistar machos (200-250 g) foram obtidos do centro de pesquisa em neurociências da Universidade de Ciências Médicas de Kerman. Eles foram alojados em sala com controle de luz (12:12 h) e temperatura constante (23 ± 3°C). Os animais foram alimentados com dieta padrão de laboratório (Lipton Feed) e água. Todos os procedimentos estavam de acordo com as diretrizes para cuidado e uso de animais de laboratório no Centro de Pesquisa em Neurociências da Universidade de Ciências Médicas de Kerman e no Comitê de Ética em Neurociências (EC/KNRC/89-5A).

Os ratos foram anestesiados com injeção intraperitoneal de mistura de cetamina (80 mg/Kg) / xilazina (10 mg/Kg) e a cânula foi inserida estereotaxicamente no ventrículo esquerdo do cérebro de acordo com o atlas de Paxinos e Watson (Coordenadas do bregma: AP = -0.9 mm, DV = -3.5 mm , ML = -1.2 mm). Os animais foram recuperados da cirurgia por 5-7 dias antes do teste comportamental. Quatro grupos de ratos (n = 7) receberam diferentes doses do extrato (1, 3, 6 μg/rato). O mesmo volume de solução salina (5 μL/rato), como veículo, também foi injetado intracerebroventricularmente no grupo salina. Houve também um grupo intacto ou controle. Trinta minutos após a injeção, a latência de resposta à estimulação térmica foi medida 30, 45, 60, 75, 90 e 120 minutos após a administração do fármaco usando o teste de retirada da cauda. Assim, no exame primário, 3 μg/rato de extrato de ORG foi escolhido como dose eficaz para os experimentos subsequentes.

Para determinar o(s) mecanismo(s) da antinocicepção induzida por ORG, os ratos foram divididos em 5 grupos (n = 7):
a) Grupo salina (salina 0.5 mL IP/salina 5 μL, i.c.v.)
b) Baclofeno como agonista do receptor GABA(B) (10 mg/Kg, IP) + grupo ORG
c) CGP 35348 como antagonista do receptor GABA(B) (100 nmol/Kg, i.c.v.) + grupo ORG
d) Muscimol como agonista do receptor GABA(A) (1 mg/Kg, IP) + grupo ORG
e) Bicuculina como antagonista do receptor GABA(A) (5 mg/Kg, IP) + grupo ORG
O extrato aquoso de ORG (3 μg/rato, i.c.v.) foi administrado 20 minutos após as injeções do fármaco ou veículo. A latência de resposta à estimulação das caudas dos ratos foi medida 30, 45, 60, 75, 90 e 120 minutos após o tratamento pelo teste de Retirada da Cauda (Tail-Flick). Ao final do experimento, os animais foram profundamente anestesiados e decapitados. O cérebro foi retirado e a precisão da canulação foi confirmada.
Retirada da cauda (Tail flick)
O teste de retirada da cauda foi utilizado no presente trabalho conforme descrito por D’Amour e Smith. Resumidamente, a cauda do animal foi colocada sobre uma superfície plana, um calor radiante foi aplicado à cauda e a latência de resposta do rato para remover sua cauda do calor foi registrada. Aqui, o tempo máximo de exposição ao calor (tempo de "corte") para evitar danos teciduais foi de 10 segundos.
Análise Estatística
O software SPSS foi usado para análise dos dados. O teste ANOVA de Medidas Repetidas foi utilizado para analisar os dados, seguido pelo teste post hoc de Bonferroni; p < 0,05 foi considerado significativo. Os dados dos grupos foram apresentados como média ± EPM.
Resultados e Discussão
O resultado deste estudo mostrou que não houve diferença significativa na latência de resposta entre os grupos controle e salina [(salina 0,5 mL IP/salina 5 μL, i.c.v.) e (salina 5 μL/rato, i.c.v.)], portanto, o resultado dos grupos teste é comparado com o controle.
A injeção intracerebroventricular do extrato de ORG administrada de forma dose-dependente (1, 3 e 6 μg/rato) aumentou a latência para retirada da cauda no teste de retirada da cauda (p < 0,001). Uma diferença significativa foi observada na dose de 3 μg/rato de ORG quando comparada ao grupo controle e ao grupo ORG (F3,144 = 17,17; p < 0,0001). Conforme mostra a Figura 1, a latência máxima de resposta foi observada aos 30, 60, 90 e 120 minutos após a injeção de ORG (p > 0,05, p > 0,05, p > 0,01, p > 0,05, respectivamente). Não houve correlação significativa entre a latência de resposta e o tempo após o tratamento (F15,144 = 0,45, p > 0,0001).
O efeito da injeção intracerebroventricular do extrato de orégano (1, 3 e 6 μg/rato) e do grupo intacto (controle) na latência de retirada da cauda de ratos. Os dados representam a média ± EPM de 7 ratos machos. Valores de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significativos. * = p > 0,05 e ** = p > 0,01, ORG (3 μg/rato) vs grupo controle. ψ = p > 0,05, ORG (6 μg/rato) vs grupo controle.
Os resultados do presente estudo indicam que o extrato aquoso de Origanum vulgare possui atividades antinociceptivas centrais marcantes de forma dose-dependente. Esses dados são consistentes com vários relatos indicando que a injeção intraperitoneal do extrato aquoso de Origanum vulgare pode produzir uma analgesia significativa em ratos pelo teste de formalina. O efeito antinociceptivo de outras espécies da família do orégano, como Origanum onites, também foi demonstrado usando o teste de retirada da cauda (tail flick). É relatado que o efeito analgésico do ORG pode ser atribuído à existência do composto chamado carvacrol. A família de plantas do orégano é rica em carvacrol (um isômero fenil terpênico do timol). O carvacrol tem um efeito inibitório sobre as prostaglandinas. A inibição das prostaglandinas causa antinocicepção. Recentemente, foi demonstrado que o carvacrol pode diminuir a hipernocicepção e a resposta inflamatória. O orégano também é uma fonte importante de ácido rosmarínico. Embora alguns pesquisadores tenham mostrado que o ácido rosmarínico não afetava a resposta nociceptiva, outros pesquisadores mostraram que esse composto antioxidante pode produzir um efeito analgésico no cérebro.

De acordo com os presentes resultados, a injeção intraperitoneal de baclofeno, o agonista do receptor GABA B, aumentou significativamente o efeito analgésico da administração intracerebroventricular do extrato de ORG. Houve um aumento significativo na latência de resposta ou limiar de dor após a coadministração de baclofeno mais extrato de ORG em comparação com o grupo controle nos tempos de latência de 30, 45, 60, 75, 90 e 120 min (F4,180 = 109,14; p < 0,0001) (Figura 1). Uma correlação significativa foi demonstrada entre a latência de resposta e o tempo após o tratamento (F20,180 = 2,92; p < 0,0001). Como pode ser visto na Figura 2, o CGP 35348, como antagonista do receptor GABA(B), bloqueou o efeito analgésico do extrato de ORG. Uma análise adicional dos resultados mostrou que a latência de resposta no grupo (CGP35348/ORG) foi significativamente diminuída em comparação com o grupo ORG nos 30–120 min após a intervenção (p < 0,05). Além disso, a comparação entre o grupo baclofeno + ORG e o grupo ORG mostrou um aumento significativo na latência de resposta aos 30 e 75 min (p < 0,05) (Figura 2). Foi demonstrado que os receptores GABA B são responsáveis pelo efeito antinociceptivo e analgésico do baclofeno. Assim, sugere-se um efeito sinérgico ou aditivo do extrato de ORG e do baclofeno.

Médias das latências de retirada da cauda após a injeção do fármaco ou soro fisiológico no grupo controle, grupo ORG (ORG 3 μg/rato, i.c.v.), grupo Baclofeno/ORG e grupo CGP35348/ORG. Os dados representam média ± EPM. Valores de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significativos (n = 7). * = p < 0,001, grupo Baclofeno/ORG vs grupo controle. Φ = p < 0,05, grupo Baclofeno/ORG vs grupo ORG. η = p < 0,05, η η = p < 0,01 e η η η = p < 0,001, grupo CGP35348/ORG vs grupo ORG.
Além disso, os resultados atuais mostraram uma diminuição significativa na latência de resposta ou limiar de dor após a coadministração de bicuculina+ORG em comparação ao grupo controle (aos 30 e 45 min, p > 0,05 e p < 0,001, respectivamente). A injeção combinada do extrato de ORG mais muscimol não mostrou diferença significativa quando comparada ao grupo controle (Figura 3).
Média das latências de retirada da cauda após a injeção do fármaco ou solução salina no grupo controle, grupo ORG (ORG 3 μg/rato, i.c.v.), grupo Bicuculina/ORG e grupo Muscimol/ORG. Os dados representam média ± EPM. Valores de p < 0,05 foram considerados estatisticamente significativos (n = 7). * = p > 0,05, grupo Bicuculina/ORG Vs grupo controle. φ = p > 0,05, φ φ φ = p > 0,001, grupo Bicuculina/ORG Vs grupo ORG. η = p > 0,05 e η η η = p > 0,001, grupo Muscimol/ORG Vs grupo ORG.
A coadministração de muscimol, como agonista do receptor GABA(A), e extrato de ORG não aumentou o efeito analgésico, mas a bicuculina, como antagonista do receptor GABA A, inibiu o efeito analgésico. Uma possível razão pode ser o fato de que o extrato de ORG e o muscimol podem induzir um efeito antagonista competitivo nos receptores GABA(A). Portanto, a coadministração de muscimol e extrato de ORG não produziu efeito adicional. Uma análise adicional dos resultados mostrou que a latência de resposta do grupo muscimol/ORG e do grupo bicuculina apresentou uma diminuição significativa em comparação ao grupo ORG entre 30-120 min após a intervenção (p < 0,05) (Figura 3).
Quantidades variáveis de compostos oxigenados como o borneol existem na folha de orégano. Estudos recentes demonstraram que o borneol é um monoterpeno bicíclico que possui efeitos analgésicos e aumenta a atividade dos receptores GABA A. Considerando os resultados deste estudo, pode-se concluir que os efeitos analgésicos do extrato aquoso de ORG podem ser devidos à presença de material de borneol nos extratos aquosos de ORG que induz a estimulação dos receptores GABA A.
Os receptores GABA A estão diretamente conectados aos canais de cloreto e a atividade desses receptores, diretamente por meio da abertura dos canais de cloreto, aumenta a condutância de cloreto. A bicuculina pode antagonizar a atividade dos receptores GABA A.
Também foi indicado que o extrato metanólico de ORG contém compostos oxigenados como o ácido ursólico. Estudos in vitro e in vivo mostraram que o ácido ursólico possui efeito anti-inflamatório.
Finalmente, a folha do extrato aquoso de Origanum vulgare tem um efeito antioxidante comparável ao do ácido ascórbico. O ácido rosmarínico, o carvacrol e o timol, como os principais compostos do extrato de ORG, têm ação antioxidante eficaz. Outros pesquisadores relataram que o origanol A e o origanol B têm efeitos antioxidantes no extrato aquoso de ORG comparáveis aos do ácido rosmarínico. Este estudo demonstrou que o efeito analgésico do ORG, pelo menos em parte, pode ser atribuído ao efeito do extrato de ORG nos receptores GABA.
Conclusão
Os achados do presente estudo mostraram que o extrato aquoso de Origanum Vulgare L. ssp. viridis possui atividades antinociceptivas no teste de Tail-Flick de forma dose-dependente. Além disso, foi indicado que a antinocicepção induzida por ORG pode ser mediada, pelo menos em parte, pela ativação dos receptores GABA.
Referências
Avaliação do efeito analgésico do extrato de Echium amoenum Fisch & C.A. Mey. em camundongos: possível mecanismo envolvido
Atividade analgésica da raiz de Piper longum Linn.
Atividades analgésica e anti-inflamatória do extrato de sementes de Trigonella foenum-graecum
Efeito antinociceptivo de algumas plantas da família Amaryllidaceae em camundongos
Efeitos antinociceptivo e anti-inflamatório de extratos e óleo essencial de Satureja hortensis L.
Ação antinociceptiva de Ocimum sanctum (Tulsi) em camundongos: possíveis mecanismos envolvidos
Efeitos ntinociceptivos do extrato alcaloide de Peganum harmala L. no teste de formalina em camundongos.
Atividades antinociceptiva e anti-inflamatória do extrato aquoso de folhas de Ocimum gratissimum (Labiate) em roedores
Mecanismos envolvidos na antinocicepção causada pelo extrato etanólico obtido das folhas de Melissa officinalis (erva-cidreira) em camundongos
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(+)- E (-)-borneol: moduladores positivos eficazes da ação GABA em receptores GABAA recombinantes humanos alfa1beta2gamma2L
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