pmid: "24379969"
title: "Estudo do efeito antinociceptivo da injeção intracerebroventricular do extrato aquoso das folhas de Origanum vulgare em ratos: possível envolvimento do sistema opioide."
authors: "Pahlavan Y, Sepehri G, Sheibani V, Afarinesh Khaki M, Gojazadeh M, Pahlavan B, Pahlavan F"
journal: "Iranian journal of basic medical sciences"
pubdate: "2013 Oct"
doi: ""
source: "PMC Full Text"
Estudo do efeito antinociceptivo da injeção intracerebroventricular do extrato aquoso das folhas de Origanum vulgare em ratos: possível envolvimento do sistema opioide.
Autores
Pahlavan Y, Sepehri G, Sheibani V, Afarinesh Khaki M, Gojazadeh M, Pahlavan B, Pahlavan F
Periodico
Iranian journal of basic medical sciences (2013 Oct)
Conteudo
Estudo do Efeito Antinociceptivo da Injeção Intracerebroventricular do Extrato Aquoso de Folhas de Origanum Vulgare em Ratos: Possível Envolvimento do Sistema Opioide
Objetivo(s): O objetivo do estudo foi investigar o efeito antinociceptivo da microinjeção intracerebroventricular (ICV) do extrato de Origanum vulgare (ORG) e o possível envolvimento dos receptores opioides.
Materiais e Métodos: Uma cânula foi inserida no ventrículo esquerdo de ratos machos. Cinco dias após a cirurgia, a Latência de Retirada da Cauda (LRC) foi medida após microinjeção ICV de ORG (1, 3 e 6 µg / rato). A dose efetiva de ORG foi injetada por ICV concomitantemente com morfina (2 mg/kg, IP), naloxona (2 mg / kg, IP) e solução salina (0,5 µl/rato) e a LRC foi registrada.
Resultados: A co-administração do extrato de ORG com morfina mostrou um aumento significativo na LRC e a naloxona, pré-tratamento, inibiu significativamente a atividade antinociceptiva de ORG e morfina.
Conclusão: O extrato aquoso de ORG possui atividades antinociceptivas no teste de retirada da cauda de forma dependente da dose. A antinocicepção induzida por ORG pode ter sido mediada por sistemas opioides.
Introdução
As plantas medicinais e ervas tradicionais ganharam importância na última década como agentes terapêuticos. Com a crescente demanda no campo dos fitoterápicos e cosméticos, tornou-se necessário e pertinente investigar a área de conhecimento sistemático sobre drogas herbais. Orégano é uma espécie de Origanum da família das mentas e nativo da Europa e região do Mediterrâneo, Sul e Ásia Central. Existem mais de 40 espécies de orégano, mas o óleo essencial produzido a partir de Origanum vulgare (ORG) é considerado o mais terapeuticamente benéfico. O óleo é extraído da erva florida seca por destilação a vapor.
Hernandez-Hernandez et al (2009) relataram o efeito antioxidante das folhas de orégano (ORG L.) e o efeito antioxidante dos extratos estudados depende não apenas da concentração de compostos fenólicos (ácido rosmarínico, carnosol e ácido carnósico), mas também do método de extração e do solvente. Outros pesquisadores relataram a atividade antibacteriana, antioxidante, atividades antimelanogênicas do ácido protocatecuico do ORG (orégano), tratamento de urolitíase prevenindo poliúria, cristalúria, oxalúria, níveis elevados de ureia e creatinina sérica e deposição de cristais nos rins. Tradicionalmente, as folhas de ORG são uma planta medicinal usada na medicina popular iraniana como analgésico, no entanto, não há dados documentados sobre seus possíveis mecanismos antinociceptivos. Assim, o presente estudo buscou avaliar o efeito antinociceptivo da microinjeção ICV do extrato de ORG e o possível envolvimento dos receptores opioides em seus mecanismos antinociceptivos usando o teste de retirada da cauda.
Os efeitos da microinjeção ICV do extrato aquoso de Origanum vulgare na latência de retirada da cauda em ratos
Grupos Latência do reflexo de retirada da cauda (Seg) Min 30 Min 45 Min 60 Min 75 Min 90 Min 120 Controle 3,94+0,32 4,07+0,39 3,50+0,20 3,54+0,28 3,97+0,42 4,20+0,51 ORG (1 mg/kg) 3,71_0,75 4,05+0,32 3,54+0,37 4,05+0,63 3,55+0,24 3,64+0,19 ORG (3 mg/kg) 6,02+1,06 5,47+0,95 5,58+0,82 * 4,79+0,88 5,80+0,86 * 5,17+0,86 ORG (6 mg/kg) 5,43+0,97 4,56+0,32 5,06+0,72 4,89+0,23 3,92+0,42 3,84+0,32
O efeito antinociceptivo do ORG foi avaliado após microinjeção ICV de 1, 3 e 6 µg/rato de extrato aquoso de ORG e o TFL foi medido após 30 min por 120 min. O grupo controle recebeu o mesmo volume de solução salina intraventricularmente. Dados expressos como média ± EPM de 7 ratos em cada grupo.
ICV = intracerebroventricular, ORG = Origanum vulgare, TFL = latência do reflexo de retirada da cauda
- = P < 0,05 comparado ao controle
Material e Métodos
Animais
Todos os experimentos foram realizados em ratos Wistar machos, pesando 200-250 g, que foram alojados quatro por caixa em um ciclo claro/escuro de 12 h em uma sala com temperatura controlada (22±1°C). Os animais foram alimentados com dieta padrão (Lipton Feed) e água da torneira.
Os ratos foram divididos aleatoriamente em seis grupos experimentais, cada um contendo 7 animais. Todos os procedimentos estavam de acordo com as diretrizes para cuidado e uso de animais de laboratório do Centro de Pesquisa em Neurociências da Universidade de Ciências Médicas de Kerman e a Diretiva do Conselho das Comunidades Europeias de 24 de novembro de 1986 (86/609/EEC).
Os ratos foram anestesiados com cetamina (80 mg/kg/IP) e xilazina (10 mg/kg/IP). Em seguida, uma cânula-guia de aço inoxidável de parede fina foi inserida no ventrículo esquerdo de acordo com as características de Paxinos e Watson usando um aparelho estereotáxico (AP = -0,9 mm, DV = -3,5 mm, ML = -1,2 mm). Os animais foram permitidos recuperar-se da cirurgia por 5-7 dias antes do início do protocolo experimental.
Teste antinociceptivo
A antinocicepção foi avaliada pelo teste de retirada da cauda. Calor radiante foi aplicado a 5-8 cm da ponta da cauda usando um aparelho de retirada da cauda (PANLAB 7160, Espanha). A latência do reflexo de retirada da cauda (TFL) foi medida como o tempo de exposição ao feixe até o momento de retirada da cauda. A média de três TFL consecutivas foi medida em intervalos de 1 min antes da administração do fármaco ou solvente (latência basal) e, em seguida, TFL semelhante foi medida em tempos específicos após a administração do fármaco ou solvente (latências experimentais). A intensidade do calor radiante foi ajustada para estabelecer a latência basal de 3-5 s. Para evitar danos teciduais, um tempo de corte de 10 s foi definido. Os ensaios foram encerrados automaticamente se uma resposta não ocorresse dentro de 10 s.
Quarenta e nove ratos Wistar machos (200-250 g) foram divididos em 7 grupos (n = 7): controle, ORG (1, 3 e 6 µg/rato), morfina + ORG e naloxona + ORG e solução salina + ORG em ratos tratados.
O efeito antinociceptivo da microinjeção intracerebroventricular (ICV) de ORG foi avaliado após 1, 3 e 6 µg / rato do extrato aquoso de ORG. O grupo controle recebeu o mesmo volume de solução salina intraventricularmente e a LCC foi medida após 30 min. Para determinar o possível envolvimento do receptor opioide no efeito antinociceptivo do ORG, a dose antinociceptiva mais eficaz de ORG (3 µg / rato) foi injetada ICV juntamente com morfina (2 mg / kg / IP) ou naloxona (2 mg / kg / IP) e solução salina (0,5 µl / rato) e a LCC foi medida pelo mesmo protocolo. O extrato aquoso de ORG foi administrado 20 min após a injeção do fármaco ou veículo. A LCC dos ratos à estimulação térmica da cauda foi registrada antes e 30, 45, 60, 75, 90 e 120 min após o tratamento pelo teste de retirada da cauda. Todos os fármacos e soluções foram preparados frescos antes de cada experimento.
Preparação dos extratos de ORG
Folhas de ORG foram coletadas na primavera na cidade de Yazd. A planta foi identificada e confirmada por um botânico do departamento de biologia da Universidade Shahid-Bahonar (Kerman, Irã) como ORG. As folhas foram secas à sombra e pulverizadas. O pó foi refluxado com água destilada morna (abaixo de 50°C) na proporção de 1 / 100 por 24 h. O extrato foi filtrado com papel de filtro Whatman No. 2. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida a 40°C em um evaporador rotatório. A evaporação produziu uma massa semissólida com rendimento de 8 % W/W. A solução estoque do extrato foi preparada dissolvendo 5 g do extrato em 100 ml de água destilada para obter uma concentração de 50 mg ml-1. Outras concentrações foram preparadas a partir desta solução estoque por diluição apropriada com água destilada.
Os efeitos da injeção de morfina ou naloxana (IP) / extrato de Origanum vulgare na latência de retirada da cauda em ratos
Grupos Latência de retirada da cauda (Seg) Min 30 Min 45 Min 60 Min 75 Min 90 Min 120 Controle 2.86±.57 3.36± .43 3.11± .46 2.98± .38 2.77±.44 2.79± .65 (Salina+ORG) 4.25± .49* 3.75± .38* 3.63±.44 3.03± .27* 2.29±.212* 1.77±.410* Morfina+ORG 4.63±.93 4.94± .79 4.05± .57 3.40±.31 2.57± .34 1.88±.401 Naloxana+ORG 2.74± .33 2.48 ±.36 2.34± .48 2.08± .37 1.45± .15 1.42± .20
O efeito antinociceptivo do ORG foi avaliado após microinjeção ICV de 1, 3 e 6 µg / rato do extrato aquoso de ORG e a LCC foi medida após 30 min por 120 min. O grupo controle recebeu o mesmo volume de solução salina intraventricularmente. Os dados são expressos como média ± EPM de 7 ratos em cada grupo
ICV = intracerebroventricular, ORG = Origanum vulgare, LCC = latência de retirada da cauda
- = P < 0,05 comparado ao controle
O teste de medidas repetidas foi usado para determinar diferenças significativas entre os grupos. A análise de variância de uma via seguida pelo teste de comparação múltipla de Tukey-Kramer foi usada para determinar diferenças significativas dentro do grupo. Os dados são expressos como Média ± erro padrão da média (EPM). P < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.
Resultados
O efeito antinociceptivo da microinjeção intracerebroventricular (ICV) de ORG foi avaliado após 1, 3 e 6 µg / rato de extrato aquoso de ORG. O grupo controle recebeu o mesmo volume de solução salina intraventricularmente e a TFL foi medida após 30 min por 120 min. O resultado deste estudo mostrou que a microinjeção ICV do extrato de ORG resultou em aumento significativo e dependente da dose na TFL no teste de retirada da cauda e um efeito significativo foi observado na dose de 3 µg / rato (P< 0.001). A TFL máxima foi observada aproximadamente aos 60 min (5.58 ± 0.82 no grupo ORG vs 3.50 ± 0.20 no grupo controle) e 90 min (5.80 ± 0.86 no grupo ORG vs 3.97± 0.42 no grupo controle) após microinjeção de 3 µg/rato de ORG (P < 0.001)(Tabela 1).
Houve um aumento significativo no limiar da dor ou na TFL após a coadministração do extrato de ORG com morfina no teste de retirada da cauda 30 min após o tratamento com o fármaco (4.63 ± 0.93) em comparação com os ratos tratados com controle (2.86 ± 0.57) e ORG (4.25± .49) (P >0.05) (Tabela 2).
O pré-tratamento com naloxona (2 mg / kg / sc) inibiu a atividade antinociceptiva da microinjeção ICV do extrato de ORG (3 µg / rato). A TFL nos ratos tratados com naloxona foi significativamente reduzida em comparação com o grupo ORG (2.34±.48 no grupo naloxona vs 3.63±.44 no grupo ORG) e com o grupo morfina + ORG (2.34± .48 no grupo naloxona vs4.05±.57 no grupo morfina + ORG) 60 min após o tratamento com o fármaco (P >0.05) (Tabela 2).
Discussão
Os resultados deste estudo mostraram que a injeção ICV do extrato de ORG apresentou atividade analgésica de forma dependente da dose e a antinocicepção máxima foi observada aos 60 e 90 min após a injeção ICV e um efeito significativo foi observado na dose de 3 µg / rato (P< 0.001). A TFL máxima foi observada aproximadamente aos 60 min e 90 min após a microinjeção de 3 µg / rato de ORG (P < 0.001). Outros estudos relataram que algumas plantas da família ORG possuem efeitos antinociceptivos. A eficiência antinociceptiva está relacionada ao tempo e à dose da injeção.
Este resultado está de acordo com estudos de outros pesquisadores. Arzi et al (2009) demonstraram que a administração do extrato hidroalcoólico de ORG apresentou efeito analgésico no teste de formalina. Mikaili et al (2010) mostraram que injeções IP de ORG (1, 1.5 e 2 mg/ml) causaram efeito analgésico significativo em modelo de dor aguda pelo teste de retirada da cauda. Em nosso estudo, a TFL máxima foi observada aproximadamente aos 60 min e 90 min após a microinjeção de 3 µg / rato de ORG, o que está em total concordância com resultados previamente relatados em camundongos. ORG está entre as medicinas tradicionais persas que são utilizadas para o tratamento farmacológico da cefaleia. Além disso, outros relataram que a composição de timol, α-pineno e carvacrol de ORG apresentou alta atividade antibacteriana.
O(s) mecanismo(s) do efeito antinociceptivo do ORG ainda não está(ão) determinado(s), no entanto, pode ser mediado pela composição química dos óleos essenciais do ORG, principalmente seu constituinte carvacrol/timol. Outros também relataram o efeito antinociceptivo do carvacrol (CARV) (5-isopropil-2-metilfenol) em vários modelos de dor em camundongos.
Guimarães et al (2010) relataram que o CARV reduziu o número de contorções abdominais induzidas por ácido acético de forma significativa em comparação ao grupo controle, sem participação opioide em camundongos (P< 0,001). No teste de formalina, o CARV também inibiu significativamente tanto a fase inicial (dor neurogênica) quanto a fase tardia (dor inflamatória) do ato de lamber induzido por formalina para a fase inflamatória. O CARV também produziu uma inibição significativa da dor causada por capsaicina (P< 0,001) e glutamato (P< 0,01). Da mesma forma, Melo et al (2012) mostraram que o carvacrol produziu inibições significativas na nocicepção nos testes de constrição abdominal induzida por ácido acético, formalina e placa quente em camundongos, no entanto, nos testes de campo aberto e rotarod, o carvacrol não prejudicou significativamente o desempenho motor.
A antinocicepção no teste de retirada da cauda é considerada envolver principalmente mecanismos espinhais, portanto, os presentes resultados mostram principalmente o possível envolvimento de mecanismos espinhais na antinocicepção induzida pelo ORG, enquanto a antinocicepção induzida pelo óleo ou extratos do ORG também pode ser mediada por mecanismos supraespinhais (ou seja, cérebro). Dessa forma, foi de alta prioridade e importância testar o efeito analgésico do óleo ou extratos do ORG pelo método do teste de placa quente tardia, o que pode revelar a natureza central da atividade antinociceptiva do extrato do ORG, o que poderia ser considerada como a primeira limitação do nosso estudo. Além disso, recomenda-se o estudo da atividade analgésica do extrato do ORG após sua administração intratecal.
Nossos resultados mostraram que a coadministração do extrato do ORG com morfina causou um aumento significativo na TFL no teste de retirada da cauda em comparação com ratos controle e tratados com ORG (P<0,05) e o pré-tratamento com naloxona revelou uma redução significativa na TFL da microinjeção ICV do extrato do ORG, o que mostra que parte da antinocicepção do extrato do ORG pode ser mediada pela participação opioide. Embora não haja dados documentados sobre o envolvimento dos receptores opioides no mecanismo de antinocicepção do CARV na dor aguda, no entanto, outros mostraram que a antinocicepção do CARV (como principal composição química do ORG) na contorção abdominal induzida por ácido acético não é mediada por receptores opioides, então propõe-se que outras composições químicas do ORG, como timol/alfa-terpineol; acetato de linalila e linalol, ácido carnósico e carnosol, germacreno D, beta-ocimeno e sabineno ou beta-cariofileno e compostos ativos não identificados podem estar envolvidos em seu efeito antinociceptivo através do sistema opioide. Além disso, sua antinocicepção pode ser mediada pela modulação ou inibição da dor causada por capsaicina e/ou glutamato.
Embora outros pesquisadores tenham relatado que o carvacrol, o principal constituinte do extrato de ORG, não prejudicou significativamente o desempenho motor nos testes de campo aberto e rotarod, as respostas observadas após a administração de ORG podem ser devidas, pelo menos em parte, a algumas alterações no comportamento dos camundongos. Portanto, seria melhor determinar se o extrato bruto de ORG altera ou não a coordenação motora dos camundongos e a motilidade espontânea, e esta é a segunda limitação do nosso estudo.
Outros relataram que os extratos de ORG possuem a maior capacidade antioxidante, possivelmente devido à presença de altas concentrações de ácido carnósico e carnosol, germacreno D, beta-ocimeno e sabineno ou beta-cariofileno e compostos ativos não identificados. Ainda outros relataram que a composição de timol, α-pineno e carvacrol do ORG mostrou maior atividade antibacteriana do que a estreptomicina.
Conclusão
Os resultados do nosso estudo mostraram que o extrato aquoso de ORG possui atividades antinociceptivas no teste de retirada da cauda de forma dose-dependente. Além disso, nossos resultados mostraram que o pré-tratamento com naloxona revelou uma redução significativa no TFL da microinjeção ICV do extrato de ORG, o que mostra que parte da antinocicepção do extrato de ORG pode ser mediada pela participação de opioides.
Referências
O óleo essencial de Origanum vulgare L. ssp. vulgare crescendo silvestre no distrito de Vilnius (Lituânia)
Marcadores químicos em Origanum vulgare L. do Himalaia de Kumaon: um estudo quimiossistemático
Efeito dose-dependente do orégano (Origanum vulgare L.) na peroxidação lipídica e no estado antioxidante na carcinogênese do cólon de rato induzida por 1,2-dimetilhidrazina
Constituintes químicos e estudos biológicos de Origanum vulgare Linn
Efeito antioxidante dos extratos de alecrim (Rosmarinus officinalis L) e orégano (Origanum vulgare L) sobre TBARS e cor de massas de carne suína crua modelo
Composição química e atividade antimicrobiana dos óleos essenciais de três quimiotipos de Origanum vulgare L ssp hirtum (Link) Ietswaart crescendo silvestre na Campânia (Sul da Itália)
Atividades antioxidante e antimicrobiana de óleos essenciais obtidos de orégano (Origanum vulgare ssp hirtum) usando diferentes métodos de extração
A administração intracerebroventricular (ICV) de W-7, um inibidor de calmodulina, atenua o desenvolvimento de tolerância à morfina em ratos
Avaliação guiada por bioensaio das atividades antioxidante e antinociceptiva do carvacrol
Estudo do efeito antinociceptivo dos extratos de Nepeta meyeri, Raphanus sativus e Origanum vulgare em camundongos pelo método de avaliação da dor aguda
O estudo do efeito analgésico do extrato hidroalcoólico de Origanum vulgare em ratos pelo teste de formalina
Tratamento farmacológico da cefaleia usando a medicina tradicional persa
O estudo das composições e propriedades antimicrobianas do óleo essencial de Origanum vulgare e Rosmarinus officinalis em patógenos humanos
Atividade antinociceptiva do carvacrol (5-isopropil-2-metilfenol) em camundongos