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pmid: "35736692"
title: "Fontes Naturais e Propriedades Farmacológicas do Pinosilvina"
authors: "Bakrim S, Machate H, Benali T, Sahib N, Jaouadi I, Omari NE, Aboulaghras S, Bangar SP, Lorenzo JM, Zengin G, Montesano D, Gallo M, Bouyahya A"
journal: "Plants (Basel, Switzerland)"
pubdate: "2022 Jun 09"
doi: "10.3390/plants11121541"
source: "PMC Full Text"

Fontes Naturais e Propriedades Farmacológicas do Pinosilvina

Autores

Bakrim S, Machate H, Benali T, Sahib N, Jaouadi I, Omari NE, Aboulaghras S, Bangar SP, Lorenzo JM, Zengin G, Montesano D, Gallo M, Bouyahya A

Periodico

Plants (Basel, Switzerland) (2022 Jun 09)

Conteudo

Fontes Naturais e Propriedades Farmacológicas da Pinosilvina
A pinosilvina (3,5-di-hidroxi-trans-estilbeno), uma toxina estilbenoide natural pré-infecciosa, é um composto polifenólico terpenoide encontrado principalmente na família Vitaceae, no cerne de espécies de Pinus spp. (ex.: Pinus sylvestris) e na folha de pinheiro (Pinus densiflora). Ela fornece mecanismos de defesa contra patógenos e insetos para muitas plantas. Estilbenoides são encontrados principalmente em bagas e frutas, mas também podem ser encontrados em outros tipos de plantas, como musgos e samambaias. Esta revisão descreveu pesquisas anteriores sobre a pinosilvina, incluindo suas fontes, as tecnologias utilizadas para sua extração, purificação, identificação e caracterização, suas propriedades biológicas e farmacológicas, e sua toxicidade. Os dados coletados sobre a pinosilvina foram gerenciados utilizando diferentes bases de dados de pesquisa científica, como PubMed, SciFinder, SpringerLink, ScienceDirect, Wiley Online, Google Scholar, Web of Science e Scopus. Neste estudo, os achados focaram na pinosilvina para compreender suas atividades farmacológicas e biológicas, bem como sua caracterização química, a fim de explorar suas potenciais abordagens terapêuticas para o desenvolvimento de novos fármacos. Esta análise demonstrou que a pinosilvina possui efeitos benéficos para diversos fins terapêuticos, como fungitóxico, antibacteriano, anticancerígeno, anti-inflamatório, antioxidante, neuroprotetor, antialérgico e outras funções biológicas. Tem demonstrado inúmeras e diversas ações por meio de sua capacidade de bloquear, interferir e/ou estimular os principais alvos celulares responsáveis por diversos distúrbios.

1. Introdução
   Pinosilvina (3,5-di-hidroxi-trans-estilbeno), uma toxina estilbenoide natural pré-infecciosa, é um componente polifenólico estilbenoide contido principalmente na família Pinaceae, particularmente no cerne de Pinus spp. (ex.: Pinus sylvestris) e na folha de pinheiro (Pinus densiflora). Tradicionalmente, diferentes partes das árvores de pinheiro têm sido usadas no Leste Asiático para vários fins, como tratar toxicidade hepática, distúrbios gástricos e inflamação. Na Coreia do Sul, as agulhas de pinheiro eram comumente consumidas como chá e alimento.

A maioria dos estilbenos está contida na família Vitaceae de plantas, representada pela famosa uva de vinho Vitis vinifera L., que está entre as fontes mais abundantes de novos estilbenos conhecidos atualmente, juntamente com outras famílias, como Fabaceae, Dipterocarpaceae e Gnetaceae. A pinosilvina é sugerida como um composto funcional responsável por um mecanismo de defesa contra patógenos e insetos para uma ampla gama de plantas, especialmente pinheiros. Eles também são encontrados na maioria das bagas ou frutas, mas também podem ser encontrados em outros tipos de plantas, como musgos e samambaias.

A pinosilvina gera fitoalexinas por meio de uma reação entre malonil-CoA e cinamoil-CoA sob a influência de diferentes estresses bióticos e abióticos, como feridas, herbívoros, fungos, ozônio e luz ultravioleta.

A pinosilvina é amplamente explorada por sua relevância para as plantas e suas características favoráveis à saúde humana, pois possui diversas propriedades biológicas, incluindo características antimicrobianas, anti-inflamatórias, anticancerígenas, antioxidantes, neuroprotetoras e antialérgicas.

O exame farmacológico dos derivados da pinosilvina mostrou uma ampla gama de efeitos biológicos. De fato, eles apresentam atividade antibacteriana contra diferentes bactérias patogênicas humanas (Gram-positivas e Gram-negativas), como Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Listeria monocytogenes, Lactobacillus plantarum, Salmonella infantis, Pseudomonas fluorescens, Campylobacter jejuni e Campylobacter coli.

Além disso, a pinosilvina exibiu efeitos antifúngicos significativos contra fungos patogênicos como Candida albicans, Saccharomyces cerevisiae, Trametes versicolor, Phanerochaete chrysosporium, Neolentinus lepideus, Gloeophyllum trabeum, Postia placenta, Rhizoctonia solani, Sclerotinia homoeocarpa, etc.

Além disso, a pinosilvina, como molécula natural, tem sido amplamente investigada in vitro e in vivo por seu excelente potencial anti-inflamatório, como evidenciado em vários estudos.
A atividade antioxidante do pinosilvino tem sido amplamente estudada por diferentes pesquisadores, não apenas em estudos de caso isolados, mas também em associação com várias doenças, como artrite reumatoide, doenças relacionadas à idade (degeneração macular relacionada à idade (DMRI) e doença de Alzheimer) e oligoastenozoospermia, reduzindo o estresse oxidativo por meio da via do fator nuclear eritroide 2 relacionado ao fator 2 (Nrf2)/elemento de resposta antioxidante (ARE). O pinosilvino é bem reconhecido por sua potencial atividade quimiopreventiva contra o câncer, mesmo em baixas concentrações. Ele mostrou atividade anticancerígena contra câncer nasofaríngeo, câncer de próstata, fibrossarcoma, câncer colorretal e câncer oral. De fato, em células de câncer colorretal HCT116, o pinosilvino foi encontrado para bloquear a ativação de proteínas que desempenham um papel nas vias de sinalização FAK/c-Src/ERK e PI3K/Akt/GSK-3b. Além disso, em células cultivadas de fibrossarcoma humano HT1080, o pinosilvino inibiu a produção de metaloproteinase de matriz (MMP)-2, MMP-9 e MMP-1 do tipo membrana. A ação antimetastática do pinosilvino foi associada à regulação negativa de MMP-9 e ciclooxigenase-2 (COX-2). Apesar da disponibilidade de certas investigações que destacaram as diferentes funções farmacológicas do pinosilvino e seus derivados, até onde sabemos, nenhuma revisão crítica foi realizada para fornecer sugestões para potenciais usos clínicos futuros dessa molécula bioativa.

Este artigo de síntese tem como objetivo fornecer uma revisão abrangente das características deste metabólito secundário, nomeadamente suas fontes, tecnologias de extração, purificação, identificação, caracterização e propriedades farmacológicas e biológicas. Esperamos que esta revisão forneça uma base nova para futuras investigações sobre este metabólito secundário deterrent e suas ações farmacológicas, a fim de explorar novas oportunidades farmacêuticas para esta molécula natural.
2. Fontes de Pinosilvina
A pinosilvina, conhecida como 3,5-di-hidroxi-trans-estilbeno, foi isolada pela primeira vez por Erdtman em 1939 a partir de extratos derivados de Pinus sylvestris, daí o nome pinosilvina. É um estilbenoide natural pertencente ao grupo fenólico de compostos. A pinosilvina é encontrada em uma vasta gama de espécies de plantas, particularmente nas folhas e na madeira de várias espécies de Pinus (Tabela 1).
3. Tecnologia de Extração e Purificação
Os estilbenos têm atraído interesse crescente nos últimos anos por seus benefícios à saúde na prevenção de doenças. Por essas razões, sua extração e subsequente purificação são particularmente interessantes para a produção de extratos de alta qualidade. Devido à sua ocorrência muito baixa nas plantas e aos perigos ambientais e químicos associados aos processos de isolamento e purificação em várias etapas, a extração de pinosilvina de plantas era difícil e insustentável. Essas desvantagens levaram os cientistas a introduzir fontes alternativas de produção no processo de isolamento de estilbenos, como cultura de calos, cultura de plantas, cultura de células em suspensão, cultura de raízes pilosas, plantas geneticamente modificadas e a introdução dos genes biossintéticos de estilbenos em hospedeiros microbianos.
Essas diferentes abordagens biotecnológicas têm sido aplicadas para evitar a formação de muitos subprodutos indesejáveis de alto risco medicinal nos extratos obtidos por síntese química. Esses subprodutos subsequentemente exigem um processo de purificação mais complicado, como cromatografia flash sequencial em duas repetições em modo gradiente durante a fase móvel com ciclo-hexano (CX) e acetato de etila (EtOAc).
3.1. Produção de Pinosilvina em Culturas de Calos e Culturas de Células em Suspensão
Em 1961, Jorgensen mostrou que danos mecânicos aplicados à casca e ao câmbio do pinheiro-vermelho causam a penetração fúngica do alburno nos caules e raízes. Essa penetração fúngica afeta os tecidos moribundos e induz a formação de pinosilvina e seu monometil éter, que estão ausentes no alburno saudável. Em temperaturas onde a atividade celular é possível, a pinosilvina é formada por células vivas em resposta à dessecação, causando morte lenta do tecido em seções de ramos vivos ou tecidos de calos, produzindo assim os estilbenos.
Em um estudo relatado por Koo et al., os autores estabeleceram um sistema de produção de estilbeno de pinosilvina e seus derivados usando cultura in vitro de calos de Pinus strobus L. A partir de uma cultura de embriões zigóticos maduros em meio Litvay 1/2 com 1,0 mg/L de 2,4-D e 0,5 mg/L de BA, calos foram obtidos e o acúmulo de pinosilvina aumentou significativamente em culturas de calos prolongadas. Em 1984, e pela primeira vez, Schöppner e Kindl descreveram a purificação da pinosilvina sintase a partir de culturas de células em suspensão de amendoim usando cromatografia em coluna. Este estudo mostrou que a partir de hipocótilos de plântulas de 4 dias de idade, culturas de células de amendoim foram iniciadas e propagadas como culturas de calos.
Em um estudo relatado por Lange et al., o acúmulo dos estilbenos pinosilvina e 3-O-metil éter de pinosilvina em extratos celulares metanólicos foi induzido por um tratamento com suspensão celular de culturas de Pinus sylvestris L. com uma preparação elicitora do patógeno das agulhas do pinheiro.

3.2. Biossíntese Microbiana de Pinosilvina

A bioprodução de pinosilvina foi alcançada pela engenharia genética da cepa hospedeira para integrar as vias heterólogas das plantas com a cepa hospedeira. E. coli foi o hospedeiro comumente usado para a produção de pinosilvina. Os hospedeiros bacterianos possuem um ciclo de vida curto, alta taxa de crescimento e fácil manipulação genética e, portanto, superexpressão significativa de proteínas e enzimas. Ao mesmo tempo, eles carecem severamente da expressão de proteínas grandes e das modificações pós-traducionais necessárias para o dobramento correto e atividade funcional de proteínas recombinantes. Portanto, a engenharia de vias metabólicas é um dos métodos pioneiros no design de E. coli (taxa de bioconversão de 50%), o que facilitou a bioprodução de estilbenos em diferentes microrganismos para produzir pinosilvina bioativa de valor agregado.

Curiosamente, outro estudo descreveu o desenvolvimento de uma cepa plataforma de E. coli para produzir o estilbeno pinosilvina encontrado no cerne dos pinheiros. Os autores deste estudo relataram baixas concentrações de pinosilvina (3 mg/L) após a otimização da expressão gênica e avaliação de diferentes ambientes de construção. Para promover a produção do estilbeno pinosilvina, os autores adicionaram cerulenina para aumentar as reservas intracelulares de malonil-CoA e, subsequentemente, obtiveram concentrações mais altas de pinosilvina de até 70 mg/L a partir de glicose e 91 mg/L pela adição de L-fenilalanina. Resultados semelhantes foram obtidos em um estudo conduzido por Xu et al., que avaliou a via biossintética para a produção de pinosilvina em E. coli modificada. Foi demonstrado neste estudo que o acúmulo excessivo do precursor malonil-CoA, levando à malonilação das enzimas biossintéticas, diminui o rendimento de pinosilvina. Para mitigar essa diminuição, várias técnicas de engenharia metabólica (PTM, PTM-ME) foram estabelecidas para manter um nível ideal de concentração intracelular de acil-CoA e, assim, aumentar o rendimento de pinosilvina. Liang et al. investigaram uma abordagem alternativa para a produção de pinosilvina usando três estratégias de bioengenharia para desenvolver um processo simples e econômico para a biossíntese de pinosilvina em E. coli. Os autores conseguiram produzir 47,49 mg/L de pinosilvina a partir de glicerol, utilizando esses processos combinatórios ao promover a expressão das enzimas da via da pinosilvina, aumentando o nível do precursor chave da bioprodução de pinosilvina (malonil-CoA) na célula de E. coli. A etapa final foi introduzir E. coli superprodutora de fenilalanina para produzir ácido trans-cinâmico, que é um precursor da pinosilvina. Outros pesquisadores também estabeleceram técnicas de engenharia metabólica para E. coli para a biossíntese do estilbeno pinosilvina.
4. Tecnologia de Identificação e Caracterização
Análises cromatográficas (GC-MS, LC-MS, GC-FID ou HPLC) são frequentemente utilizadas para identificar e caracterizar estilbenos usando padrões de estilbenos. Em 1999, Holmgren et al. utilizaram espectroscopia de infravermelho com transformada de Fourier por reflectância difusa (DRIFT) e espectroscopia de infravermelho próximo FT-Raman (NIR) para detectar a presença de pinosilvina e seus derivados na madeira de Pinus sylvestris L. por meio de uma simples inspeção visual de blocos de madeira uniformes em forma de disco. Roupe et al. desenvolveram um método simples e inovador de cromatografia líquida de alta eficiência (HPLC) para determinar simultaneamente a pinosilvina e seus produtos metabólicos em soro de rato e microssomas hepáticos. O método consiste em uma precipitação preliminar do soro ou microssomas com acetonitrila após a adição de um padrão interno. A separação foi então realizada em uma coluna de amilose tris-3,5 dimetil fenil carbamato com detecção UV a 308 nm. Em outro estudo realizado por Ekeberg et al., a identificação quantitativa de extratos de cerne de P. sylvestris L., incluindo pinosilvina e seus derivados, foi realizada utilizando cromatografia gasosa (GC) com detecção por ionização de chama (FID). Similarmente, um estudo sobre resíduos de madeira de pinheiro-da-escócia/abeto da Noruega conduzido por Poljanšek et al., descreve a análise qualitativa e quantitativa dos extratos obtidos em termos de pinosilvina e éter monometílico de pinosilvina, realizada utilizando cromatografia gasosa com detector de ionização de chama (GC-FID) e cromatografia gasosa com espectrometria de massas (GC-MS).
Um pouco distante de amostras vegetais, Preusz et al. conduziram um estudo sobre resíduos orgânicos na forma de manchas pretas encontradas nos sítios dos antigos portos de Pyrgi e Castrum Novum na costa Tirrena, nos quais o éter monometílico de pinosilvina foi identificado e confirmado pela primeira vez em amostras arqueológicas usando GC-MS e HPLC com detecção fluorimétrica.
5. Propriedades Biológicas e Farmacológicas
Como evidenciado em várias investigações, descobriu-se que a pinosilvina exibe uma ampla gama de propriedades biológicas e farmacológicas, incluindo efeitos antimicrobianos, anti-inflamatórios, antioxidantes, anticancerígenos, neuroprotetores e antialérgicos (Figura 1).
5.1. Atividade Antimicrobiana
Com o aumento dos problemas de persistência e emergência de resistência microbiana, muita atenção foi dada à identificação de novos fármacos antimicrobianos derivados de compostos bioativos naturais. A pinosilvina tem sido amplamente investigada por seus benefícios à saúde e atividades biológicas, incluindo seus efeitos antimicrobianos. Lee et al. demonstraram o papel da pinosilvina como agente antimicrobiano contra diversos patógenos humanos, incluindo bactérias Gram-positivas (S. aureus) e Gram-negativas (E. coli), fungos (C. albicans) e leveduras (S. cerevisiae). C. albicans e S. cerevisiae mostraram-se mais sensíveis à pinosilvina, com valores de concentração inibitória mínima (CIM) de 62,5 e 125 µg/mL, respectivamente, enquanto a CIM para E. coli e S. aureus foi de 250 µg/mL. Além disso, a pinosilvina extraída da madeira de nó e da casca de diferentes espécies de Pinus exibe potente atividade antimicrobiana, inibindo efetivamente o crescimento de um amplo espectro de cepas patogênicas, incluindo Bacillus cereus, S. aureus, L. monocytogenes, L. plantarum, E. coli, S. infantis, P. fluorescens, C. albicans, S. cerevisiae, Aspergillus fumigatus e Penicillium brevicompactum, com diâmetros de inibição variando de 19 ± 1 a 101 ± 6 mm. Sousa e colaboradores avaliaram a potencial interação entre a pinosilvina e quatro antibióticos (tetraciclina, cloranfenicol, eritromicina e ciprofloxacino) contra Arcobacter butzleri utilizando ensaios de titulação em matriz de microdiluição. Com base nos valores de FICI, nenhum efeito sinérgico foi observado para as combinações pinosilvina/quatro antibióticos, enquanto a pinosilvina apresentou interações aditivas em todos os antibióticos testados, exceto ciprofloxacino. Além disso, esses pesquisadores investigaram a capacidade da pinosilvina de modular a atividade da bomba de efluxo usando ensaios de acumulação de brometo de etídio (EtBr). Os resultados mostraram que a pinosilvina causa uma maior acumulação intracelular de EtBr, elucidando que ela pode atenuar a atividade das bombas de efluxo (BEs). Em geral, esses achados esclarecem o uso da pinosilvina como modulador de resistência para controlar a suscetibilidade decrescente de A. butzleri aos antibióticos e sugerem o potencial da pinosilvina como um inibidor da bomba de efluxo. Além disso, a prenilação de estilbenos, incluindo a pinosilvina, demonstrou aumentar sua atividade antibacteriana, o que é explicado pelos valores de CIM. Nesse sentido, Bruijn et al. demonstraram que derivados prenilados da pinosilvina isolados do extrato de Rhizopus exibem potente atividade antimicrobiana contra Staphylococcus aureus resistente à meticilina (MRSA), especialmente a chiricanina A, com valor de CIM de 12,5 µg/mL.
Como um composto natural, a pinosilvina possui aplicações potenciais no desenvolvimento de sistemas de embalagem de alimentos antimicrobianos devido à sua atividade antimicrobiana inerente, especialmente contra Campylobacter spp. De fato, foi demonstrado que a pinosilvina ou seus complexos de inclusão (ICs) com ciclodextrinas modificadas (hidroxipropil-b-ciclodextrina e hidroxipropil-g-ciclodextrina) foram capazes de inibir o crescimento de cepas de referência e isolados clínicos da American Type Culture Collection (ATTC) de Campylobacter jejuni e Campylobacter coli.

Os valores de CIM foram entre 25 a 50 mg/mL para o composto puro e entre 16 e 64 mg/mL para os ICs. Além disso, ensaios de morte em tempo mostraram que os ICs de pinosilvina exibem ação bactericida em ambas as espécies de Campylobacter a 37 °C e mesmo a 4 ou 20 °C.

A análise por citometria de fluxo mostra que o mecanismo por trás dessa ação bactericida pode envolver principalmente danos à membrana mediados pelo comprometimento de várias funções celulares, como polarização da membrana, permeabilidade e atividade de efluxo.

Esses dados promissores tornam esses ICs de pinosilvina compostos líderes valiosos utilizados em embalagens ativas de alimentos para erradicar Campylobacter spp. em produtos avícolas frescos. Nesse contexto, em suas descobertas recentes, os mesmos autores demonstraram o papel de pads revestidos contendo ICs de pinosilvina no controle da contaminação por Campylobacter em carne de frango fresca.

O referido composto exibiu atividade bactericida in vitro eficaz contra C. jejuni com mais de 99% de inibição da contagem de colônias, mesmo nas concentrações mais baixas (0,08 mg/cm2).

Testes in vivo em exsudatos de frango e filés de frango também mostraram que esses pads ativos exibem atividade anti-Campylobacter promissora a 37 °C e 4 °C.

Além disso, os ICs de pinosilvina em pads revestidos também são eficazes contra outras bactérias alimentares importantes do frango, sugerindo usos futuros desse revestimento como uma nova alternativa para controlar o crescimento microbiano em carne de frango embalada.
Por outro lado, o potencial antifúngico da pinosilvina e do éter monometílico da pinosilvina isolados do extrato de cerne de pinho foi avaliado in vitro contra Plasmopara viticola. Este estudo mostrou que a pinosilvina apresenta propriedades antimíldio promissoras, induzindo inibição significativa da mobilidade dos zoósporos (IC50 = 34 μM) e do desenvolvimento do míldio (IC50 = 23 μM). Esses achados são corroborados pelos descritos por outros autores. De fato, a pinosilvina e o éter monometílico da pinosilvina de árvores do gênero Pinus já demonstraram efeitos antifúngicos significativos contra fungos de podridão branca (Trametes versicolor e Phanerochaete chrysosporium) e de podridão parda (Neolentinus lepideus, Gloeophyllum trabeum e Postia placenta). Além disso, a pinosilvina da fração de cloreto de metileno de Pinus densiflora apresentou atividade antifúngica eficaz contra patógenos de plantas como Rhizoctonia solani AG1-1B, R. solani AG2-2IV, R. cerealis e S. homoeocarpa. S. homoeocarpa apresentou a maior sensibilidade, com o menor valor médio de CE50 (8,426 μg/mL), enquanto entre os patógenos de Rhizoctonia, R. cerealis teve o maior valor médio de CE50 (99,832 μg/mL). A pinosilvina pode ser um composto líder valioso para o desenvolvimento de novos agentes antifúngicos eficazes e ecológicos.
5.2. Atividade Anti-Inflamatória
Nas últimas décadas, vários cientistas dedicaram seus esforços ao desenvolvimento de novos fármacos anti-inflamatórios a partir de moléculas naturais para superar os efeitos colaterais graves e excessivos dos medicamentos atuais. Como molécula natural, a pinosilvina tem sido extensivamente investigada (in vitro e in vivo) por seus excelentes potenciais efeitos anti-inflamatórios (Tabela 2).
Resultados de pesquisa de Park e colaboradores (2005) mostraram que a pinosilvina regula negativamente a produção de mediadores pró-inflamatórios, como prostaglandina E2 (PGE2) e óxido nítrico (NO), de maneira dose-dependente. Esse efeito foi diretamente relacionado à inibição da COX e da óxido nítrico sintase induzível (iNOS). Além disso, a pinosilvina inibiu significativamente outras enzimas inflamatórias chave, interleucina 6 (IL6) (IC50 = 32,1 µM) e proteína quimiotática de monócitos 1 (MCP1) (IC50 = 38,7 µM). Adicionalmente, a investigação in vivo medindo edema de pata induzido por carragenina em camundongos machos C57BL/6 mostrou que a pinosilvina, na dose de 30 mg/kg, reduziu significativamente a resposta inflamatória ao regular negativamente a produção das citocinas inflamatórias IL6, MCP1 e NO em comparação com um grupo tratado com LY294002. Os efeitos anti-inflamatórios semelhantes da pinosilvina aos do conhecido inibidor comercial da fosfatidilinositol-3 quinase (PI3K) LY294002 sugerem que esses efeitos podem ser mediados pela inibição da via PI3K/Akt (Figura 2).
Além disso, o tratamento com pinosilvina mostrou inibir significativamente a produção de NO induzida por estímulo de macrófagos murinos com lipopolissacarídeo (LPS) de maneira dependente da dose, com um valor de IC50 de 39,9 μM em comparação com o L-NMMA de referência (IC50 = 30,7 μM). Além disso, a pinosilvina suprimiu a expressão do gene iNOS por meio da regulação negativa da expressão do fator regulador de interferon 3 (IRF-3) e do interferon-E (IFN-E) relacionada à via de sinalização mediada pelo adaptador que induz interferon-β contendo domínio TIR (TRIF). Esses eventos foram então associados à supressão da fosforilação da quinase JAK, que diminuiu a fosforilação do transdutor de sinal e ativador da transcrição-1, um dos ativadores transcricionais da iNOS.

Uma vez que os padrões de substituição do trans-estilbeno demonstraram aumentar várias propriedades biológicas, Park et al. avaliaram as substituições do grupo di-hidroxi na pinosilvina com diferentes derivados lipofílicos em células RAW 264.7 induzidas por LPS. Os resultados mostraram que os derivados de pinosilvina sintetizados, especialmente 3,5-dimetoxi-trans-estilbeno e 3-hidroxi-5-benziloxi-trans-estilbeno, suprimem significativamente a produção de PGE2 mediada pela expressão de mRNA de COX-2. Por outro lado, o tratamento com pinosilvina em doses de 5 e 10 µM protegeu grandemente as células RPE humanas do estresse oxidativo. Os níveis de expressão da heme oxigenase-1 (HO-1), uma enzima com atividades anti-inflamatórias e imunomoduladoras, foram regulados positivamente pelo tratamento com pinosilvina e correlacionaram-se marcadamente com a sobrevivência celular. Essas descobertas demonstraram o papel do tratamento com pinosilvina na proteção contra o estresse oxidativo, indução da expressão de HO-1 em células RPE humanas e, portanto, potencial promoção da saúde contra o estresse oxidativo e doenças relacionadas ao envelhecimento, como DMRI e doença de Alzheimer.

Curiosamente, além de sua capacidade de reduzir a concentração de espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, a pinosilvina demonstrou potencializar a eficácia terapêutica do metotrexato (MTX), um fármaco imunossupressor no tratamento da artrite. De fato, Bauerova et al. mostraram que o tratamento da AA em ratos com pinosilvina em combinação com MTX (doses orais de 50 mg/kg de peso corporal para PIN e 0,4 mg/kg de peso corporal para MTX) reduziu significativamente o estresse oxidativo por meio da regulação positiva da expressão de HO-1 nos pulmões e da redução das substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) plasmáticas, bem como diminuiu acentuadamente a atividade da lipoxigenase (LOX) nos pulmões.
A proteína de anquirina do subtipo 1 (TRPA1) tem sido envolvida em várias respostas inflamatórias. Sua supressão pode oferecer alvos promissores para o tratamento de diversas condições patológicas relacionadas à dor aguda, inflamação e hiperalgesia. Nesse contexto, Moilanen e colaboradores (2018) conduziram sua pesquisa para investigar o efeito do pinosilvina sobre o TRPA1 in vitro, medindo o influxo de Ca2+ mediado pela proteína de anquirina do subtipo 1 do potencial receptor transitório (TRPA1) e as correntes de membrana. Os achados relataram um efeito inibitório dose-dependente do pinosilvina (IC50 = 16,7 μM) nas respostas mediadas pelo TRPA1 induzidas por AITC. Experimentos in vivo, utilizando a inflamação da pata induzida por AITC como modelo, demonstraram que o tratamento com pinosilvina reduziu efetivamente a formação de edema na pata, atenuando a produção da citocina inflamatória IL-6 no local da inflamação.

5.3. Atividade Antioxidante

A atividade antioxidante do pinosilvina foi amplamente estudada por diferentes pesquisadores, não apenas como um caso de estudo isolado (ensaios in vitro de ORAC, ABTS+ e FRAP), mas em relação a diversas doenças, como artrite reumatoide, doenças relacionadas à idade e oligoastenospermia (Tabela 3).

Bauerova et al. avaliaram o impacto do tratamento em parâmetros selecionados em ratos AA (Alko, álcool) quando o pinosilvina foi administrado por 28 dias como monoterapia e em combinação com metotrexato (MTX). O experimento incluiu controles saudáveis, AA não tratado e AA tratado com 50 mg/kg de peso corporal de pinosilvina diariamente por via oral. O AA foi monitorado usando volume da pata traseira, proteína C reativa, atividade de MCP-1, TBARS, F2-isoprostanos no plasma, atividade de g-glutamiltransferase no baço, atividade de LOX pulmonar, atividade de HO-1 e fator nuclear kappa B (NF-κB). A monoterapia com pinosilvina aumentou a ativação de NF-κB no fígado e pulmão, a expressão de HO-1 e a atividade de LOX no pulmão, os níveis plasmáticos de MCP-1 (no 14º dia) e os níveis plasmáticos de F2-isoprostanos. A redução no OS (aumento na expressão de HO-1 nos pulmões e redução nos TBARS plasmáticos) e a diminuição na atividade de LOX nos pulmões foram contribuições substanciais do pinosilvina.
A fisiopatologia da artrite reumatoide é fortemente influenciada pelo metabolismo do oxigênio. Pacientes com artrite reumatoide apresentam uma barreira de capacidade de defesa antioxidante alterada, o que liga o estresse oxidativo, a inflamação e o sistema imunológico.

Drafi et al. investigaram o impacto do pinosilvino em monoterapia para o tratamento da AA. De fato, o pinosilvino (30 mg/kg de massa corporal diariamente por via oral) foi administrado em monoterapia a ratos com AA por 28 dias. Nos ratos, parâmetros como alterações no volume da pata traseira e escore de artrite foram medidos como indicadores de alterações clínicas destrutivas relacionadas à artrite, com determinação de indicadores oxidativos, níveis plasmáticos de TBARS e a latência da peroxidação lipídica induzida por Fe2+ (tau-FeLP) no plasma e no cérebro. Os níveis de PCR no sangue e a atividade da gamaglutamiltransferase (GGT) no baço e articulações foram utilizados como indicadores inflamatórios. O pinosilvino não conseguiu reduzir significativamente o escore artrítico em animais artríticos em comparação com animais artríticos não tratados. A administração de pinosilvino reduziu um pouco a atividade da GGT no baço. O pinosilvino foi menos eficaz na redução do dano oxidativo conforme determinado pelos níveis plasmáticos de TBARS.

Jančinová et al. realizaram sua investigação para avaliar os efeitos do estilbenoide natural pinosilvino na atividade de neutrófilos in vitro e na artrite experimental, e para determinar se a ativação da proteína quinase C (PKC) funcionava como um alvo presumido da ação do pinosilvino. A explosão oxidativa foi avaliada usando quimioluminescência amplificada de neutrófilos de sangue humano fresco. A citometria de fluxo foi usada para analisar a viabilidade dos neutrófilos, e o Western blotting foi usado para determinar a fosforilação da PKC. A artrite adjuvante foi produzida em ratos Lewis usando Mycobacterium butyricum morto pelo calor, e os animais receberam pinosilvino (30 mg/kg, via oral) diariamente por 21 dias após o estabelecimento da artrite. O pinosilvino (10 e 100 µmol/L) reduziu bastante a geração de oxidantes extracelulares e intracelulares e inibiu eficientemente a ativação da PKC desencadeada pelo acetato de forbol miristato (0,05 µmol/L) em neutrófilos humanos isolados. No entanto, a inibição não ocorreu devido a danos nos neutrófilos ou aumento da apoptose. As contagens de neutrófilos no sangue estavam consideravelmente elevadas em ratos artríticos, assim como a quimioluminescência do sangue total (espontânea e estimulada por PMA). A injeção de pinosilvino reduziu o número de neutrófilos e diminuiu consideravelmente o número de espécies reativas de oxigênio no sangue. O pinosilvino é um potente inibidor da atividade de neutrófilos e tem potencial para ser benéfico como medicamento adjuvante em condições relacionadas à inflamação crônica.
Os resultados observados qualificaram o pinosilvino como um inibidor eficiente da atividade de neutrófilos, sugerindo que ele poderia ser benéfico como terapia complementar em situações patológicas relacionadas à inflamação crônica.
Koskela et al. estudaram a capacidade da pinosilvina de controlar o estresse oxidativo em células do EPR humano. Células ARPE-19 foram tratadas com pinosilvina (5 µM) por 6 h, e o mRNA foi extraído em quatro pontos temporais (2 h, 6 h, 12 h e 24 h) para determinar alterações na expressão de Nrf2, sequestossomo 1 (p62/SQSTM1), HO-1 e glutationa S-transferase pi 1 (GSTP1). Para compreender melhor o mecanismo molecular subjacente à proteção mediada pela pinosilvina, células ARPE-19 foram transfectadas com siRNAs para p62 e Nrf2 por 24 h, e os papéis de p62, Nrf2 e seu gene alvo HO-1 na proteção contra o estresse oxidativo foram investigados usando PCR quantitativo em tempo real (qRT-PCR) e ensaio de viabilidade celular. Nas doses de 5 e 10 µM, a pinosilvina melhorou dramaticamente a sobrevivência celular contra o estresse oxidativo e aumentou a expressão de HO-1, uma enzima com capacidades antioxidante, anti-inflamatória e imunomoduladora, e foi substancialmente ligada à sobrevivência celular. No entanto, o tratamento com pinosilvina não influenciou a expressão de Nrf2 ou de seus genes alvo, p62 ou GSTP1, embora tenha tido um forte efeito sobre a expressão de HO-1, outro gene controlado por Nrf2. O estudo de interferência por RNA verificou a importância de Nrf2 e HO-1 na proteção mediada por PS contra o estresse oxidativo, enquanto a contribuição de p62 pareceu menor nos níveis de expressão gênica e viabilidade celular. De acordo com os achados desta pesquisa, a terapia com pinosilvina protege contra o estresse oxidativo induzindo HO-1 em células do EPR humano.

No estudo de Mačičková et al., a pesquisa focou no impacto da pinosilvina no desenvolvimento da artrite adjuvante em ratos. A AA foi desenvolvida em ratos Lewis machos usando uma única injeção intradérmica de Mycobacterium butyricum em adjuvante incompleto de Freund. Pinosilvina (30 mg/kg) foi administrada regularmente por via oral a animais artríticos. A terapia consistiu em administrar os produtos químicos examinados do dia 0 (dia da imunização) ao dia 28 (dia experimental), medindo vários parâmetros, nomeadamente a alteração no volume da pata traseira (HPV) nos dias 14, 21 e 28, quimioluminescência articular (CL) e atividade de mieloperoxidase (MPO) em homogenatos de articulação da pata traseira (dia 28). Animais artríticos tratados com pinosilvina reduziram substancialmente o HPV nos dias 14 e 28. Em contraste com camundongos não tratados, a pinosilvina reduziu a CL articular e a atividade de MPO no homogenato articular. Esta molécula demonstrou um impacto anti-inflamatório e antioxidante favorável sobre as alterações bioquímicas induzidas pelo estresse oxidativo na AA, de acordo com as três medidas funcionais.

Rodríguez-Bonilla et al. mediram a capacidade antioxidante da pinosilvina usando uma variedade de metodologias analíticas (ORAC, ABTS+ ou FRAP). A pinosilvina apresentou alta atividade antioxidante e de eliminação de radicais livres em todos os experimentos devido aos grupos hidroxila fenólicos.
Considerando que o estresse oxidativo crônico eventualmente leva à agregação de proteínas em combinação com autofagia prejudicada, como observado na DMRI, Tamminen et al. investigaram os efeitos do extrato comercial natural de pinosilvina, Retinari™, no eletrorretinograma, tomograma de coerência óptica, atividade autofágica, capacidade antioxidante e marcadores de inflamação em seu estudo. Durante 10 semanas antes dos experimentos, camundongos selvagens e knockout para NFE2L2 receberam ração comum ou ração com Retinari™. A terapia com Retinari™ restaurou muitas funções retinianas, com as amplitudes das ondas a e b nas respostas do eletrorretinograma sendo consideravelmente preservadas. Além disso, esse tratamento reduziu o afinamento da retina em animais mutantes para NFE2L2, que apresentaram menor acúmulo de proteínas marcadas com ubiquitina e superexpressão local do fator H do complemento e das enzimas antioxidantes superóxido dismutase 1 e catalase. Consequentemente, no modelo de doença KO para NFE2L2, a terapia diminuiu o estresse oxidativo crônico enquanto mantinha a função e a forma da retina. Os achados sugerem que a suplementação com pinosilvina pode reduzir a probabilidade de desenvolver degeneração macular relacionada à idade e interromper sua progressão.

A pinosilvina, um análogo do resveratrol desenvolvido por Wang et al., foi amplamente estudada no tratamento da oligoastenospermia. Eles exploraram a base molecular para a melhora dos parâmetros espermáticos em um modelo murino de oligoastenospermia induzido pelo tratamento com bussulfano (BUS) a 6 mg/kg de peso corporal. Camundongos receberam concentrações variadas de pinosilvina diariamente durante duas semanas após o tratamento com bussulfano. Em seguida, a concentração e a motilidade dos espermatozoides epididimários foram avaliadas e a histologia testicular foi realizada. Os níveis de hormônios séricos, incluindo testosterona (T), hormônio luteinizante (LH) e hormônio folículo-estimulante (FSH), foram testados usando kits de ELISA específicos para cada hormônio. O sequenciamento de RNA foi utilizado para estabelecer os perfis de expressão de mRNA testicular. PCR quantitativo em tempo real, Western blotting e ELISA foram empregados para confirmar esses resultados. Após o tratamento com BUS, a pinosilvina melhorou a concentração e a motilidade dos espermatozoides epididimários, aumentou os níveis de testosterona e facilitou a recuperação morfológica testicular. A enzima antioxidante glutationa peroxidase 3 diminuiu drasticamente o estresse oxidativo por meio do antioxidante dependente de Nrf2/ARE. A pinosilvina melhorou a oligoastenospermia neste modelo murino ao reduzir o estresse oxidativo via via Nrf2-ARE.

5.4. Atividade Anticâncer

A pinosilvina é um composto funcional em espécies de Pinus conhecido por exibir potencial atividade quimiopreventiva contra o câncer, mesmo em baixas concentrações. Com base nisso, a principal preocupação dos pesquisadores foi revelar seus mecanismos moleculares subjacentes, bem como seu potencial contra tipos resistentes de câncer e metástase. (Tabela 4).
Os efeitos do pinosilvino na migração e invasão de células de câncer oral humano permanecem desconhecidos, assim como os processos subjacentes. Chen et al. avaliaram os efeitos de concentrações variadas de pinosilvino (0–80 μM) nas capacidades metastática e invasiva das células SAS, SCC-9 e HSC-3. O pinosilvino suprimiu a atividade da enzima metaloproteinase-2 da matriz (MMP-2) e reduziu seu nível proteico nos ensaios de Western blotting e zimografia de gelatina, mas aumentou a expressão do inibidor tecidual de metaloproteinase-2 (TIMP-2). O pinosilvino também inibiu a migração de células de câncer oral (SAS, SCC-9 e HSC-3) no experimento de cicatrização de feridas e usando a técnica de transwell. Além disso, esta substância inibiu a fosforilação da expressão da proteína ERK1/2 nas células SAS e SCC-9 (Figura 3).
Esses achados sugerem que o pinosilvino pode ser um fármaco anticancerígeno promissor para prevenir a disseminação do câncer oral. Chuang et al. tiveram como objetivo examinar o papel funcional do pinosilvino em células de carcinoma nasofaríngeo (NPC) (NPC039, NPCBM e RPMI 2650). De acordo com ensaios de fechamento de lacuna e transwell, o pinosilvino reduziu a migração e invasão das células NPC039 e NPCBM em doses crescentes. Não apenas inibiu a atividade das enzimas MMP2, mas também reduziu os níveis de expressão das proteínas MMP2 e MMP9. O pinosilvino inibiu a expressão de vimentina e N-caderina, enquanto aumentou dramaticamente a de zonula occludens-1 e E-caderina em células NPC. Também inibiu a invasão e migração das células NPC039 e NPCBM ao modular as vias p38, ERK1/2 e JNK1/2. De acordo com os achados desta investigação, o pinosilvino suprimiu a migração e invasão de células NPC.
Atualmente, existem poucas opções terapêuticas para o câncer de próstata resistente à castração (CRPC). Uma triagem de alto rendimento de 4910 fármacos e moléculas semelhantes a fármacos foi utilizada em um estudo conduzido por Ketola et al. para detectar substâncias antiproliferativas no câncer de próstata após terapia de ablação androgênica. Os efeitos dos compostos na sobrevivência celular foram examinados em células de câncer de próstata LNCaP submetidas à ablação androgênica, células LNCaP cultivadas em andrógenos e duas células epiteliais prostáticas não malignas (RWPE-1 e EP156T). O éter metílico de pinosilvino (PSME) foi um forte inibidor do crescimento de células LNCaP submetidas à ablação androgênica em ensaios de validação de fármacos antiproliferativos específicos para câncer. Um estudo de expressão gênica em todo o genoma em células expostas ao PSME foi realizado para obter insights sobre os mecanismos inibitórios do crescimento no CRPC. Em células LNCaP com depleção androgênica, o pinosilvino afetou a expressão de genes envolvidos no ciclo celular, na produção de esteroides e colesterol. A expressão reduzida do receptor de andrógeno e do antígeno prostático específico nas células expostas ao PSME verificou a diminuição da sinalização androgênica. Em conjunto, nossa triagem abrangente revelou o PSME como um novo agente antiproliferativo para CRPC. Esses achados fornecem uma base sólida para futuras investigações pré-clínicas e clínicas sobre o tratamento do CRPC.
A capacidade do pinosilvino de modificar o estresse oxidativo em células RPE humanas foi investigada por Koskela et al.; primeiramente, avaliando a faixa de toxicidade do PS expondo células ARPE-19 a doses de PS de 0,1–200 μM por 24 h, seguidas de um teste de sobrevivência celular. As células ARPE-19 foram então pré-incubadas em pinosilvino por 24 h antes de serem expostas à hidroquinona (HQ) sem pinosilvino por mais 24 h. A terapia com pinosilvino em doses de 5 e 10 μM melhorou significativamente a sobrevivência celular contra o estresse oxidativo. A terapia com pinosilvino elevou a produção de HO-1, uma enzima com habilidades antioxidantes, anti-inflamatórias e imunomoduladoras, que está positivamente associada à sobrevivência celular. O tratamento com pinosilvino não influenciou a expressão de Nrf2 ou de seus genes-alvo, p62 ou GSTP1, embora tenha tido um forte efeito na expressão de HO-1, outro gene controlado por Nrf2. A investigação por interferência de RNA verificou a importância de Nrf2 e HO-1 na proteção contra o estresse oxidativo mediada pelo pinosilvino, enquanto a contribuição de p62 pareceu menor nos níveis de expressão gênica e viabilidade celular. Os achados mostram que a terapia com pinosilvino protege contra o estresse oxidativo ao induzir HO-1 em células RPE humanas.

Sabe-se que o pinosilvino tem um efeito anti-inflamatório em células endoteliais. Assim, Kwon et al. tentaram compreender o processo exato em sua pesquisa. O pinosilvino foi testado para determinar se aumentava a atividade de COX ou lipoxigenase (LOX) em células THP-1 e U937. O pinosilvino aumentou significativamente a atividade de LOX sem afetar a atividade de COX. Além disso, aumentou os níveis de mRNA e proteína de ALOX15, demonstrando que a atividade de LOX induzida por pinosilvino se deve ao aumento da expressão de ALOX15. O pinosilvino pareceu aumentar a fosforilação de ERK e JNK nesta investigação de sinalização celular. Observou-se que inibidores de ERK e JNK reduziram a expressão de ALOX15 e a apoptose induzida por LPS produzida pelo pinosilvino. Finalmente, o pinosilvino promoveu a apoptose em leucócitos pré-condicionados com LPS ao aumentar a expressão de ALOX15 via ERK e JNK.
Em pacientes com câncer, as metástases são uma das principais causas de mortalidade. Pesquisas anteriores revelaram que a pinosilvina possui um potencial efeito quimiopreventivo contra o câncer e suprime o desenvolvimento de muitas linhagens de células cancerígenas humanas ao regular a progressão do ciclo celular. Neste estudo, os autores investigaram a possível ação antimetastática da pinosilvina utilizando modelos in vitro e in vivo. Em células HT1080 de fibrossarcoma humano cultivadas, a pinosilvina inibiu a produção de MMP-2, MMP-9 e metaloproteinase de membrana tipo 1 (MT1-MMP). A pinosilvina também foi relatada como interferindo na migração de células HT1080 nos métodos de dispersão de colônias e cicatrização de feridas. A pinosilvina (10 mg/kg de peso corporal, tratamento intraperitoneal) reduziu efetivamente o crescimento de nódulos tumorais e o peso do tumor em tecidos pulmonares em um modelo in vivo de metástase pulmonar espontânea após a injeção de células de carcinoma de cólon CT26 em camundongos BALB/c. O estudo dos tumores em tecido pulmonar revelou que o impacto antimetastático da pinosilvina estava associado a uma diminuição na produção de MMP-9 e COX-2 e na ativação de ERK1/2 e Akt. Esses achados mostram que a pinosilvina, por meio da modulação das MMPs, pode ser um inibidor eficaz da metástase de células tumorais.

Park et al. investigaram a ação antiproliferativa da pinosilvina em células humanas de câncer colorretal HCT-116 para identificar os processos moleculares subjacentes. A pinosilvina inibiu a proliferação de células HCT-116 ao impedir a progressão do ciclo celular da fase G1 para a fase S, além de reduzir a expressão de ciclina D1, ciclina E, ciclina A, quinase dependente de ciclina 2 (CDK2), CDK4, c-Myc e proteína do retinoblastoma (pRb) e aumentar a expressão de p21WAF1/CIP1 e p53. A pinosilvina também demonstrou inibir a ativação de proteínas envolvidas na quinase de adesão focal e no sistema de sinalização da fosfoinositídeo 3-quinase.
O pinosilvina, em altas concentrações (100 μmol/L), foi previamente relatado como promotor de morte celular em células endoteliais da aorta bovina. Na investigação conduzida por Park et al., tentou-se revelar o papel da pinosilvina na apoptose, autofagia e necrose. A pinosilvina aumentou a ativação da caspase-3, condensação nuclear e o “flip-flop” da fosfatidilserina em altas concentrações, sugerindo que a pinosilvina desencadeia apoptose. Por outro lado, verificou-se que a pinosilvina suprime a necrose, um processo pós-apoptótico, com base em dados de citometria de fluxo adquiridos usando dupla marcação com anexina V e iodeto de propídio. A pinosilvina promoveu a conversão de LC3 de LC3-I para LC3-II e a degradação de p62, ambas indicações essenciais de autofagia. Além disso, a pinosilvina pareceu estimular a proteína quinase ativada por AMP (AMPK), e um inibidor de AMPK reduziu significativamente a conversão de LC3. A pinosilvina reverteu o impacto inibitório de um inibidor de AMPK. Essas descobertas implicam que a pinosilvina causa autofagia ao ativar a AMPK. Adicionalmente, um inibidor de autofagia mostrou aumentar a necrose, que foi posteriormente restaurada com pinosilvina, mas o inibidor de caspase-3 não teve impacto na necrose. Esses resultados mostram que a autofagia induzida por pinosilvina inibe a progressão necrótica em células endoteliais.

No estudo realizado por Simard et al., extratos metanólicos de madeira de Pinus resinosa contendo pinosilvina foram citotóxicos seletivamente contra células de câncer de pulmão humano, A549 (IC50 = 41,6 μg/mL) e células de adenocarcinoma colorretal humano, DLD-1 (IC50 = 47,4 μg/mL) em comparação com células saudáveis, WS1 (IC50 = 130,11 μg/mL). Cinco compostos conhecidos foram isolados e identificados como: éter monometílico de pinosilvina (1), pinosilvina (2), éter dimetílico de pinosilvina (3), pinobanksina (4) e (-)-norachelogenina usando espectroscopia de RMN de 1H-, 13C e espectrometria de massa HR-ESI-MS (5). Os compostos 1–5 foram testados quanto à sua citotoxicidade contra A549, DLD-1 e WS1. O composto 1 (éter monometílico de pinosilvina) apresentou a maior citotoxicidade contra ambas as linhagens celulares tumorais e saudáveis, com valores de IC50 de 25,4, 20,1 e 34,3 μM para A549, DLD-1 e WS1, respectivamente.

Skinnider e Stoessl investigaram os efeitos das fitoalexinas lubimina, (-)-maackiaina, pinosilvina e produtos químicos relacionados desidroloroglossol e hordatina M no desenvolvimento das linhagens celulares linfoblastoides humanas Molt e Raji. Os autores descobriram que (-)-maackiaina, pinosilvina e desidroloroglossol inibiram significativamente a proliferação celular. A inibição da absorção de [3H] timidina e [3H] leucina na pinosilvina e desidroloroglossol foi estudada e mostrou-se eficaz. Fitoalexinas e produtos químicos semelhantes são abundantes em plantas e podem servir como fonte de medicamentos antineoplásicos.
Vários testes foram realizados na investigação de Song et al. para determinar como altas concentrações de pinosilvina (50 μM) promovem a morte de células endoteliais. Demonstrou-se que a pinosilvina, em altas concentrações, promove a morte de células endoteliais ao aumentar a atividade da caspase-3, o flip-flop da fosfatidilserina e a fragmentação nuclear. Eles descobriram que altas concentrações de pinosilvina aumentaram a atividade da caspase-3, que foi amplificada pela privação de soro ou pelo tratamento com 100 μM de etoposídeo. Também descobriram que altas concentrações de pinosilvina estimularam a ativação da c-Jun N-terminal quinase (JNK) e da óxido nítrico sintase endotelial (eNOS). Em seguida, realizaram uma série de testes para determinar qual molécula sinalizadora era importante na apoptose induzida por pinosilvina. Finalmente, descobriram que o SP-600125, um inibidor de JNK, inibiu a morte de células endoteliais induzida por pinosilvina, enquanto o L-NAME, um inibidor de eNOS, não teve impacto. Esses achados sugerem que a JNK está implicada na apoptose induzida por pinosilvina. Em altas concentrações, a pinosilvina promove a morte celular através da ativação de JNK.

O resveratrol (análogo da pinosilvina) demonstrou promover a morte celular em células leucêmicas em altas doses (50–100 μmol/L). Song et al. descobriram que a morte celular aumentou significativamente de 50 a 100 μmol/L de pinosilvina em células THP1 e U937. A pinosilvina também induziu a ativação da caspase-3, o flip-flop da fosfatidilserina, o acúmulo de LC3II, os puncta de LC3 e a degradação de p62 em células THP1 e U937. Esses achados sugerem que a morte celular induzida por pinosilvina pode ocorrer através de apoptose e autofagia. Além disso, descobrimos que a pinosilvina inibe a proteína quinase ativada por AMP 1 (AMPK1) em células leucêmicas. Como resultado, uma conexão foi encontrada entre a regulação negativa de AMPK1 e a morte de células leucêmicas. A inibição de AMPK1 reduz a apoptose e autofagia induzidas por pinosilvina em células leucêmicas, indicando que a AMPK é um regulador crucial da morte de células leucêmicas. Além disso, quando células leucêmicas com superexpressão de AMPK1 foram comparadas a células transfectadas com vetor, a progressão da autofagia e apoptose foram inibidas pela pinosilvina. A superexpressão de AMPK1 aumentou a morte celular, mas os inibidores de caspase-3 ou inibidores de autofagia reduziram significativamente a morte celular induzida por pinosilvina. Esses achados implicam que a redução de AMPK1 pela pinosilvina aumenta a morte celular por apoptose e autofagia em células leucêmicas.

5.5. Atividade Neuroprotetora
Com base no fato de que a neuroproteção é uma técnica típica para reduzir o dano da isquemia cerebral, Xu et al. propuseram-se a avaliar a eficácia neuroprotetora do pinosilvino. A terapia com pinosilvino reduziu a morte celular em células PC12 danificadas por OGD/R e melhorou a função cerebral em ratos MCAO/R. O pinosilvino diminuiu o número de células despolarizadas (baixo potencial de membrana mitocondrial) em células PC12 danificadas por OGD/R, sugerindo um papel na melhora da função mitocondrial. Pesquisas adicionais revelaram que o pinosilvino desencadeia a mitofagia protetora mediada por PINK1/Parkin e ativa a via Nrf2, conforme demonstrado pelo aumento dos níveis proteicos de LC3 II, Beclin1, PINK1 e Parkin, bem como pela translocação de Nrf2 para o núcleo. O pinosilvino proporcionou neuroproteção ao desencadear a mitofagia mediada por PINK1/Parkin para eliminar mitocôndrias danificadas e ao ativar a via Nrf2 para atenuar a disfunção mitocondrial induzida pelo estresse oxidativo.

5.6. Atividade Antialérgica

Um extrato dos ramos de H. dulcis (contendo pinosilvino) foi testado quanto ao seu potencial antialérgico utilizando a linhagem celular de leucemia basofílica de rato (RBL)-2H3 e o modelo de anafilaxia cutânea passiva (PCA) em camundongos, empregando vários ensaios. O extrato inibiu a secreção de hexosaminidase (indicando desgranulação) e a liberação de histamina em células RBL-2H3 estimuladas por antígeno, com diminuição da expressão e produção dos mediadores inflamatórios COX-2 e PGE2, bem como das citocinas IL-4 e TNF-α, e supressão da ativação de NF-κB, indicando o potencial do extrato como um agente antialérgico potente.

6. Conclusões e Perspectivas

Aqui, as principais características farmacológicas e fontes do pinosilvino foram documentadas e destacadas. Numerosas pesquisas publicadas demonstraram que esta molécula natural possui propriedades biológicas excepcionais, especialmente contra linhagens de células tumorais. Análises moleculares e celulares revelaram que o pinosilvino bloqueia e inibe as principais vias no câncer nasofaríngeo, câncer de próstata, fibrossarcoma, câncer colorretal e câncer oral, com diferentes sítios-alvo. Isso indica que pode ser um componente valioso de fármacos anticancerígenos. Além disso, as propriedades antimicrobianas, anti-inflamatórias, antioxidantes e antialérgicas desta molécula podem qualificá-la como um ingrediente bioativo eficaz no tratamento de câncer e doenças neurodegenerativas. No entanto, é necessário um conhecimento mais aprofundado de sua farmacocinética e farmacodinâmica para sua introdução como quimioterápico. Além disso, sua segurança requer validação por meio de estudos toxicológicos adicionais.

Nota da Editora: A MDPI permanece neutra em relação a reivindicações jurisdicionais em mapas publicados e afiliações institucionais.
Conceptualização, A.B.; metodologia, A.B., A.B., S.B., H.M. e T.B.; software, S.A. e I.J.; validação, A.B., G.Z., D.M. e M.G.; análise formal, A.B. e D.M.; investigação, A.B., N.E.O. e G.Z.; recursos, N.S., H.M. e S.B.; curadoria de dados, A.B.; redação—preparação do rascunho original, I.J., S.B., H.M. e N.S.; redação—revisão e edição, S.P.B., J.M.L. e G.Z.; visualização, D.M. e M.G.; supervisão, A.B.; administração do projeto, A.B. Todos os autores leram e concordaram com a versão publicada do manuscrito.
Declaração do Conselho de Revisão Institucional
Não aplicável.
Declaração de Consentimento Informado
Não aplicável.
Declaração de Disponibilidade de Dados
Não aplicável.
Conflitos de Interesse
Os autores declaram não haver conflito de interesse.
Abreviações
AMD Degeneração macular relacionada à idade MAPK Proteína quinase ativada por mitógeno JNK Quinase amino-terminal c-Jun NF-κB Fator nuclear kappa B Nrf2 Fator nuclear eritroide 2 relacionado ao fator 2 ARE Elemento de resposta antioxidante HCT Célula de câncer colorretal FAK Quinase de adesão focal ERK Quinase regulada por sinal extracelular GSK3 Quinase 3 da glicogênio sintase PI3K/AKT Fosfatidilinositol 3-quinase/Proteína quinase B MMP Metaloproteinase da matriz CX Ciclo-hexano EtOAc Acetato de etila DRIFT Espectroscopia no infravermelho por transformada de Fourier de reflectância difusa NIR Espectroscopia no infravermelho próximo FID Detecção por ionização em chama GC Cromatografia gasosa GC-MS Cromatografia gasosa-espectrometria de massas MIC Concentração inibitória mínima EtBr Brometo de etídio Eps Bombas de efluxo MRSA Staphylococcus aureus resistente à meticilina; ATTC Coleção de culturas tipo americana; PGE2 Prostaglandina E2 NO Óxido nítrico COX Ciclo-oxigenase iNOS Óxido nítrico sintase induzível IL6 Interleucina 6 MCP1 Proteína quimiotática de monócitos 1 LPS Lipopolissacarídeo IRF-3 Fator regulador de interferon 3 IFN-E Interferon-E TRIF Adaptador contendo domínio TIR que induz interferon-β HO-1 Heme oxigenase-1 MTX Metotrexato TBARS Substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico plasmáticas LOX Lipoxigenase TRPA1 Proteína 1 do subtipo anquirina AA Artrite adjuvante GGT Glutamiltransferase CRP Proteína C reativa PKC Proteína quinase C GSTP1 Glutationa S-transferase pi 1 qRT-PCR Reação em cadeia da polimerase de transcrição reversa quantitativa HPV Volume da pata traseira CL Quimioluminescência MPO Mieloperoxidase LH Hormônio luteinizante FSH Hormônio folículo-estimulante ELISA Ensaio imunossorvente ligado a enzima NFE2L2 Fator nuclear eritroide 2 como 2 TIMP-2 Inibidor tecidual de metaloproteinase-2 NPC Carcinoma nasofaríngeo CRPC Câncer de próstata resistente à castração PSME Éter metílico de pinosilvina HQ Hidroquinona CDK2 Quinase dependente de ciclina 2 pRb Proteína do retinoblastoma AMPK Proteína quinase ativada por AMP eNOS Óxido nítrico sintase endotelial RBL Leucemia basofílica de rato PCA Anafilaxia cutânea passiva LC3-II Proteína 1 de cadeia leve 3-II associada a microtúbulos
Pinosilvina Induz Sobrevivência Celular, Migração e Anti-Aderência de Células Endoteliais via Produção de Óxido Nítrico: Pinosilvina é um composto vasorregulador
Estilbenoides Naturais: Distribuição no Reino Vegetal e Interesse Quimiotaxonômico em Vitaceae
Atividade Antileishmania In Vitro de Compostos de Trans-Estilbeno e Terfenila
Atividades Biológicas de Estilbenoides
Atividade Antimetastática da Pinosilvina, um Estilbenoide Natural, Está Associada à Supressão das Metaloproteinases da Matriz
Os Efeitos Antimicrobianos dos Polifenois Associados à Madeira sobre Patógenos Alimentares e Organismos Deteriorantes
Controle do Crescimento Microbiano em Carne de Frango Fresca Usando Almofadas Absorventes de Embalagem à Base de Complexos de Inclusão de Pinosilvina
Polifenois como Moduladores de Resistência em Arcobacter Butzleri
Eficácia de Pinosilvinas contra Fungos de Podridão Branca e Podridão Parda
Atividade Antifúngica da Pinosilvina de Pinus Densiflora em Doenças Fúngicas de Gramados
Estilbenoides Naturais Têm Propriedades Anti-Inflamatórias In Vivo e Regulam Negativamente a Produção de Mediadores Inflamatórios NO, IL6 e MCP1 Possivelmente de Maneira Dependente de PI3K/Akt
Pinosilvina Altera a Polarização de Macrófagos para Apoiar a Resolução da Inflamação
Pinosilvina e Monometilpinosilvina, Constituintes de um Extrato do Nó de Pinus Sylvestris, Reduzem a Expressão Gênica Inflamatória e as Respostas Inflamatórias In Vivo
Estrigolactona GR24 e Pinosilvina Atenuam a Adipogênese e a Inflamação de Adipócitos Brancos
Pinosilvina Inibe o Influxo de Cálcio Induzido por TRPA1 In Vitro e a Inflamação Aguda da Pata Mediada por TRPA1 In Vivo
Marcadores de Inflamação e Estresse Oxidativo Estudados na Artrite Induzida por Adjuvante em Ratos em Nível Sistêmico e Local Afetados por Pinosilvina e Metotrexato e sua Combinação
Influência Farmacológica nos Processos de Artrite Adjuvante: Efeito da Combinação de uma Substância Ativa Antioxidante com Metotrexato
Estudo Comparativo da Capacidade Antioxidante de Quatro Estilbenos Usando Técnicas ORAC, ABTS+ e FRAP
Dois Análogos do Resveratrol, Pinosilvina e 4,4′-Di-Hidroxiestilbeno, Melhoram a Oligoastenozoospermia em um Modelo de Camundongo ao Atenuar o Estresse Oxidativo via Via Nrf2-ARE
Pinosilvina Reduziu a Migração e Invasão de Carcinoma Oral ao Regular a Expressão da Metaloproteinase-2 da Matriz e a Via da Quinase Regulada por Sinal Extracelular
Supressão da Sinalização Src/ERK e GSK-3/β-Catenina pela Pinosilvina Inibe o Crescimento de Células de Câncer Colorretal Humano
Pinosilvina em Alta Concentração Induz Autofagia Mediada por AMPK para Prevenir Necrose em Células Endoteliais Aórticas Bovinas
Triagem de Compostos Baseada em Células de Alto Rendimento Identifica Éter Metílico de Pinosilvina e Tanshinona IIA como Inibidores do Câncer de Próstata Resistente à Castração
Abelhas Britânicas e Pólen Transportado pelo Vento
Identificação do Cerne de Pinus nigra Arn. como uma Fonte Rica de Estilbenos Bioativos por QNMR
Extrativos da Casca de Pinus banksiana: Ocorrência de Éter Dimetílico de Cis- e Trans-Pinosilvina e Ésteres de Ácido Ferúlico
Atividade Antifúngica de Estilbenos em Bioensaios in Vitro e em Populus Transgênico Expressando um Gene Codificador de Pinosilvina Sintase
Extratos de Nó de Madeira e Casca: Potentes Antioxidantes de Materiais Residuais
Análises de Triagem de Estilbenos de Pinosilvina, Ácidos Resinosos e Lignanas em Coníferas Norueguesas
Inibição in Vitro de Extrativos do Nó de Madeira de Pinus sylvestris e Pinus nigra no Crescimento de Schizophyllum commune, Trametes versicolor, Gloeophyllum trabeum e Fibroporia Vaillantii
Efeitos Antibacterianos de Extrativos de Nó de Madeira em Bactérias de Fábrica de Papel
Extrativos de Madeira do Tronco e Resíduos de Serraria de Pinus sylvestris L. para Biorrefinaria em Quatro Regiões Climáticas na Finlândia - Compostos Fenólicos e Ácidos Resinosos
Mudanças Químicas e Estruturais durante a Formação do Cerne em Pinus sylvestris
Inibição da Colinesterase e Agregação de Amiloide-&bgr; por Oligômeros de Resveratrol de Vitis amurensis
Uma Estilbeno Sintase de Pinus densiflora: Implicações para o Acúmulo de Fitoalexinas e Regulação Negativa da Biossíntese de Flavonoides
Identificação de Alguns Compostos Associados à Resistência de Pinus densiflora a Fomes annosus
Atividade Antioxidante de Extrativos de Nó de Madeira e Compostos Fenólicos de Espécies Arbóreas Selecionadas
Caracterização Molecular e Enzimática de Duas Estilbeno Sintases de Pinus strobus: Uma Única Diferença Arg/His Determina a Atividade e a Dependência de pH das Enzimas
Acúmulo Aumentado de Estilbenos de Pinosilvina e Expressão Gênica Relacionada em Pinus strobus após Infecção pelo Nematoide da Madeira do Pinheiro
Produção Aumentada de Estilbeno de Pinosilvina com o Envelhecimento de Calos de Pinus strobus e Atividade Nematicida de Extratos de Calos contra Nematoide da Madeira do Pinheiro
Polifenóis em Pinus taeda Infectado por Ceratocystis minor: Metabólitos Fúngicos, Fenóis do Floema e Xilema
Separação e Isolamento de Principais Polifenóis de Nós de Pinus pinaster por Cromatografia de Partição Centrífuga em Duas Etapas Monitorada por LC-MS e Espectroscopia de RMN
Nó de Pinus pinaster: Uma Fonte de Polifenóis contra Plasmopara viticola
Recuperação de Compostos Bioativos da Madeira de Pinus pinaster por Etapas Consecutivas de Extração
Efeito Inibitório dos Ramos de Hovenia dulcis Thunb. e de Seu Constituinte Pinosilvina nas Atividades de Mastócitos Mediada por IgE e Anafilaxia Cutânea Passiva em Camundongos
Significância Taxonômica da Variação de Flavonoides em Espécies Temperadas de Nothofagus
Estudos de Isolamento de Produtos Naturais das Espécies Vegetais Paleoendêmicas Nothofagus gunnii e Nothofagus cunninghamii
Di-hidrofenantrenos e Outros Estilbenoides Antifúngicos de Stemona cf. Pierrei
Purificação e Propriedades de uma Estilbeno Sintase de Culturas de Células em Suspensão Induzidas de Amendoim
Isolamento de Pinosilvinas Puras de Resíduo Industrial de Nó de Madeira com Solventes Não Clorados
Formação de Fenóis do Cerne em Culturas de Tecido de Calo de Pinus resinosa
Elicitor-Induced Formation of Free and Cell-Wall-Bound Stilbenes in Cell-Suspension Cultures of Scots Pine (Pinus sylvestris L.)
Estratégias para Alcançar Expressão Gênica de Alto Nível em Escherichia coli
Engenharia Metabólica Modular Multivariada de Escherichia coli para Produzir Resveratrol a partir de L-Tirosina
Biossíntese de Estilbeno-Policetídeos Específicos de Plantas em Escherichia coli Metabolicamente Engenheirada
Engenharia Metabólica de Escherichia coli para a Síntese do Polifenol Vegetal Pinosilvina
Acetilação de Proteínas Afeta a Via Biossintética Artificial para Produção de Pinosilvina em E. coli Engenheirada
Um Novo Processo para Obter Pinosilvina Usando Bioengenharia Combinatória em Escherichia coli
Aumentando a Produção de Pinosilvina em Escherichia coli pela Redução do Nível de Expressão do Gene FabI que Codifica a Enoil-Acil Portador de Proteína Redutase
Biossíntese Direcionada por Precursor de Éteres Metílicos de Estilbeno em Escherichia coli
Engenharia Metabólica de Escherichia coli para a Biossíntese de Vários Derivados de Fenilpropanoides
Detecção de Pinosilvinas em Madeira Sólida de Pinus sylvestris Usando Espectroscopia Raman e Infravermelho por Transformada de Fourier
Determinação e Validação de Ensaio de Pinosilvina em Soro de Rato: Aplicação ao Metabolismo de Fármacos e Farmacocinética
Determinação Qualitativa e Quantitativa de Extrativos em Cerne de Pinus sylvestris (Pinus sylvestris L.) por Cromatografia Gasosa
Perfil Químico de Resíduos Orgânicos de Ânforas Antigas Encontradas em Pyrgi e Castrum Novum, Mar Tirreno (Itália)
Atividade Antibacteriana e Antifúngica da Pinosilvina, um Constituinte do Pinheiro
A Pinosilvina Proporciona Neuroproteção contra Lesão de Isquemia e Reperfusão Cerebral através do Aumento da Mitofagia Mediada por PINK1/Parkin e da Via Nrf2
Espécies de Cinnamomum: Unindo Conhecimento Fitoquímico, Propriedades Farmacológicas e Segurança Toxicológica para Benefícios à Saúde
Uso Tradicional, Fitoquímica, Toxicologia e Farmacologia de Origanum majorana L.
Uso Etnomedicinal, Fitoquímica, Farmacologia e Toxicologia de Ajuga iva (L.) Schreb
A Planta Alimentícia Silybum marianum (L.) Gaertn.: Fitoquímica, Etnofarmacologia e Evidências Clínicas
Estilbenoides Prenilados Antibacterianos do Amendoim (Arachis hypogaea)
Complexos de Inclusão de Fitoalexinas Estilbenoides: Uma Estratégia Baseada na Natureza para Controlar o Patógeno de Origem Alimentar Campylobacter
Compostos Químicos de Polifenóis Derivados de Bagas e Seus Efeitos na Microbiota Intestinal, Inflamação e Câncer
Propriedades Anti-Inflamatórias e Analgésicas de Plantas Medicinais Marroquinas: Fitoquímica, Investigações in vitro e in vivo, Insights de Mecanismo, Evidências Clínicas e Perspectivas
Atividade Antifúngica contra Fungos Fitopatogênicos de Caetoviridinas Isoladas de Chaetomium globosum
Proteção Mediada por Pinosilvina contra Estresse Oxidativo em Células Epiteliais Pigmentares da Retina Humana
Síntese e Efeitos Inibitórios de Derivados da Pinosilvina na Produção de Prostaglandina E2 em Células de Macrófagos de Camundongo Induzidas por Lipopolissacarídeo
Pinosilvina Suprime a Expressão da Óxido Nítrico Sintase Induzível Estimulada por LPS via Via de Sinalização IRF-3 Dependente de TRIF, mas Independente de MyD88, em Células de Macrófagos de Camundongo
Efeito in vivo da Pinosilvina e Pterostilbeno no Modelo Animal de Artrite Adjuvante
O Estilbenoide Natural Pinosilvina e Neutrófilos Ativados: Efeitos sobre o Burst Oxidativo, Proteína Quinase C, Apoptose e Eficiência na Artrite Adjuvante
A Pinosilvina Exacerba a Apoptose Induzida por LPS via Regulação Positiva da ALOX 15 em Leucócitos
Cajanus Cajan – uma Fonte de Ativadores de PPARγ que Levam a Efeitos Anti-inflamatórios e Citotóxicos
Efeitos Supressivos da Pinosilvina, um Estilbenoide Natural, sobre a Ciclooxigenase-2 e a Óxido Nítrico Sintase Induzível e a Inibição do Crescimento de Células Cancerígenas
O Extrato de Pinosilvina Retinari™ Sustenta a Função Eletrofisiológica, Previne o Afinamento da Retina e Aumenta a Resposta Celular ao Estresse Oxidativo em Camundongos Knockout para NFE2L2
A Pinosilvina Aumenta a Morte de Células Leucemicas via Regulação Negativa da Expressão de AMPKα: Atividade Anticâncer da Pinosilvina
Efeito Apoptótico da Pinosilvina em Alta Concentração Regulado pela Quinase N-terminal c-Jun em Células Endoteliais de Aorta Bovina
O Efeito das Fitoalexinas Lubimina, (−)-Maackiaina, Pinosilvina e dos Compostos Relacionados Deidroloroglossol e Hordatina M em Linhagens Celulares Linfoblastoides Humanas
Isolamento e Identificação de Compostos Citotóxicos da Madeira de Pinus resinosa
A Pinosilvina Inibe a Migração e Invasão de Células de Carcinoma Nasofaríngeo via Regulação da Transição Epitélio-Mesenquimal e Inibição da MMP-2
Principais propriedades farmacológicas da pinosilvina.
Efeitos anti-inflamatórios da pinosilvina. Esta figura ilustra a capacidade da pinosilvina de reduzir a expressão de algumas citocinas e enzimas pró-inflamatórias, provavelmente via inativação de NF-κB e da via PI3K/Akt. Abreviações: NF-κB, fator nuclear kappa B; NO, óxido nítrico; COX-2, ciclooxigenase-2; iNOS, óxido nítrico sintase induzível; IL6, interleucina 6; MCP1, proteína quimiotática de monócitos 1; TNF-α, fator de necrose tumoral-α.
Atividade anticancerígena da pinosilvina contra células de câncer oral. A pinosilvina suprimiu a invasão e migração de células de câncer oral inibindo a fosforilação da expressão da proteína ERK1/2 em células SAS e SCC-9. Abreviações: MMP-2, metaloproteinase de matriz-2; TIMP-2, inibidor tecidual de metaloproteinase-2; ERK, quinase regulada por sinal extracelular.
Fontes de Pinosilvina.
Espécie Extrato/Óleo Essencial Referências Pinus sylvestris Extrato Pinus resinosa Extrato Pinus banksiana Extrato Pinus nigra Arn. Extrato Pinus densiflora Extrato Pinus sibirica Extrato Pinus contorta Extrato Pinus strobus Extrato Pinus taeda Extrato Pinus cembra Extrato Pinus pinaster Extrato Hovenia dulcis Thunb. Extrato Picea glauca Extrato Nothofagus (Faias do sul) Extrato Stemona cf. pierrei Extrato Arachis hypogaea Extrato
Efeitos anti-inflamatórios da pinosilvina.
Abordagens Experimentais Principais Resultados Referências Análise de Western blot e reação em cadeia da polimerase com transcrição reversa (RT-PCR) Inibiu a expressão proteica e gênica de COX-2 e iNOS Modelo de adipócitos murinos, ensaios de citotoxicidade, coloração lipídica, Western blotting e ensaios de ELISA Atenuou a adipogênese e a inflamação através da regulação negativa da expressão de PPARγ, C/EBP e da secreção de IL-6 estimulada por TNF-α Análise de viabilidade celular e interferência de RNA Protegeu (10 µM) a sobrevivência celular do dano oxidativo ao promover a indução de HO-1 Células RAW 264.7 de macrófagos de camundongo induzidas por LPS Suprimiu a produção de PGE2 mediada por COX-2 (IC50 = 10,6 µM) Células de macrófagos estimulados por LPSAnálise de Western blotAnálise de RT-PCR Inibiu a expressão proteica e de mRNA de iNOS induzida por LPS de forma dose-dependente (IC50 = 39,9 μM)Diminuiu os níveis de expressão do fator regulador de interferon 3 (IRF-3) e do interferon-ε (IFN-ε) Modelo de inflamação aguda da pata induzida por AITC em camundongosEnsaio Fluo-3-AM e patch clamping Reduziu a formação de inflamação na pata ao inibir e atenuar a produção de IL-6 no local da inflamação Artrite induzida por adjuvante em ratos Pinosilvina + MTX reduziram o estresse oxidativo ao aumentar a expressão de HO-1 nos pulmões e reduzir a atividade plasmática de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e da lipoxigenase (LOX) nos pulmões Culturas primárias de condrócitos humanos de OA Aumentou a expressão de agrecanInibiu a produção de IL-6 ao atenuar a atividade de NF-κB AA em ratosQuimiluminescência (CL) da articulação e atividade da mieloperoxidase (MPO) Diminuiu HPVReduziu a CL da articulação e a atividade de MPO do homogeneizado articular Edema de pata induzido por carragenina em camundongos C57BL/6 machos Reduziu a resposta inflamatória ao regular negativamente a produção das citocinas inflamatórias IL6, MCP1 e NO AA foi induzida em ratos LewisNeutrófilos de sangue humano fresco como modelo Reduziu a formação de oxidantes, tanto extracelulares quanto intracelularesSuprimiu a ativação de PKC induzida por acetato de miristato de forbolReduziu a contagem de neutrófilosDiminuiu a quantidade de ROS (in vivo) Apoptose desencadeada por LPS no leucócito Aumentou a apoptose de leucócitos pré-condicionados por LPS através da diminuição da expressão de ALOX 15 mediada pelas vias ERK e JNK Linhagens celulares monocíticas THP-1 humanasAnálise de Western blotting Suprimiu as enzimas pró-inflamatórias TNF-α e IL-8 pela inibição da ativação de NF-κB Modelo de macrófagos murinos e humanos U937qRT-PCR e ELISA Alterou a polarização de macrófagos do M1 pró-inflamatório
fenótipo para o fenótipo M2
Promoveu a resolução da inflamação e reparo
Expressão aumentada de PPAR-γ em macrófagos tratados com IL-4
Células RAW 264.7 de macrófagos de camundongo induzidos por LPS
Inflamação diminuída em macrófagos estimulados por LPS
Atividade de PPARγ inibida in vitro
Linhagem celular tipo mastócito estimulada por antígeno, leucemia basofílica de rato (RBL)-2H3 e modelo de camundongo de anafilaxia cutânea passiva (PCA)
Ensaio de degranulação
RT-PCR, PCA
Análises de Western blot
Suprimiu a liberação e expressão de enzimas-chave alérgicas e pró-inflamatórias (IL-4, TNF-α e PGE2, COX-2, NFKB1 e NFKB2) de forma dose-dependente
Atividade antioxidante da pinosilvina.
Origens Linhagens Celulares Métodos Principais Achados Referências
Sintetizado Modelo murino de oligoastenosspermia Avaliação da concentração e motilidade espermática epididimalAvaliação dos níveis hormonaisPCR em tempo realAnálise de Western blotAvaliação dos níveis testiculares de ROS e MDA Redução do estresse oxidativo através da glutationa peroxidase 3 reduziu drasticamente o estresse oxidativo (in vivo) ao inibir a via do fator nuclear eritroide 2 relacionado ao fator 2 (Nrf2)/elemento de resposta antioxidante (ARE)
Adquirido Cepa de camundongos WT e NFE2L2 KO (NFE2L2−/−) Registro e processamento de sinais ERGImagem OCTAnálise de capacidade antioxidanteImuno-histoquímicaImagem confocal Função retiniana preservadaDiminuição do acúmulo de proteínas marcadas com ubiquitinaDiminuição do estresse oxidativo crônicoFunção e morfologia retiniana preservadas no modelo de doença NFE2L2 KORisco reduzido de degeneração macular relacionada à idade (AMD) e interrupção de seu desenvolvimento
Adquirido Ensaios não enzimáticos in vitro Ensaio ORAC-FLEnsaio ABTSEnsaio FRAP Fortes propriedades antioxidantes e removedoras de radicais livres
Sintetizado Modelo de AA induzido em ratos Lewis Administração oral de pinosilvina em animais com AA induzidaMonitoramento do volume da pata traseiraMonitoramento da quimioluminescência (CL) aumentada por luminol da articulaçãoMonitoramento da atividade da mieloperoxidase (MPO) na articulação da pata traseira HPV reduzido (nos dias 14 e 28)CL articular e atividade de MPO reduzidas no homogenato articular
Não relatado Células epiteliais pigmentares da retina humana (ARPE-19) Avaliação de toxicidadeAvaliação de estresse oxidativoEnsaio MTT-PCR em tempo realInterferência de RNA de Nrf2 e p62 Melhora da viabilidade celular contra estresse oxidativo (5 e 10 µM)Validação da importância de Nrf2 e HO-1 na proteção mediada por pinosilvina contra estresse oxidativo
Sintetizado Células endoteliais de aorta bovina (BAECs) Medição de apoptoseMedição da atividade de caspase-3Proliferação celularAnálise de Western blotMigração celularAdesão de THP-1 a BAECs Ativou a óxido nítrico sintase endotelialImpactou a proliferação celular em células endoteliaisEstimulou a migração celular e a formação de tubosEvitou distúrbios cardiovasculares inflamatórios
Sintetizado Modelo de AA induzido em ratos Formação de espécies reativas de oxigênioAnálise de Western blotMedição da liberação de ATPCitometria de fluxoEfeitos da pinosilvina na artrite Redução da geração de oxidantes extracelulares e intracelulares em neutrófilos humanos isoladosInibição da ativação de PKC desencadeada por forbol miristato acetatoAumento do número de neutrófilos no sangue de
arthritic rats
Improved whole blood chemiluminescence (both spontaneous and PMA-stimulated)
Reduced the number of neutrophils and the number of reactive oxygen species in the blood
Não relatado
Modelo de AA induzido em ratos
28 dias de administração oral
Changes in hind paw volume and arthrogram evaluation
γ-glutamyltransferase (GGT) activity assessment
Measurement of thiobarbituric acid reactive substances (TBARS)
Diminuiu a atividade da GGT no baço
Reduziu a atividade da GGT no tecido articular
Apresentou eficácia moderada na prevenção de danos oxidativos
Sintetizado
Modelo de AA induzido em ratos
Avaliação do volume da pata traseira
Medição da proteína C reativa
Medição do nível da proteína quimiotática de monócitos-1 (MCP-1)
Medição dos níveis plasmáticos de substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) e F2-isoprostanos
Avaliação da atividade da G-glutamiltransferase e lipoxigenase (LOX)
Aumentou a ativação de NF-κB no fígado e pulmão, expressão de HO-1 e atividade de LOX no pulmão, níveis de MCP-1 no plasma e níveis plasmáticos de F2-isoprostano
Reduziu o OS (um aumento da expressão de HO-1 no pulmão e redução nos TBARS plasmáticos)
Diminuiu a atividade da LOX no pulmão
Atividades anticancerígenas do pinosylvin.
Origem Linhas Celulares Métodos Principais Descobertas Referências Não claro Linhas celulares monocíticas THP1 e U937 Ensaio de exclusão com azul de tripanoAnálise por separação celularRT-PCRPreparo de lisados celularesAnálise por Western blotDetecção de puncta LC3Transfecção de DNA Aumento (50–100 μmol/L) de morte celularCausou ativação de caspase-3, exteriorização de fosfatidilserina, acúmulo de LC3II, puncta LC3 e degradação de p62Induziu morte celularCausou regulação negativa da proteína quinase ativada por AMP (AMPK) α1 Não relatado Células endoteliais aórticas bovinas Ensaio de apoptoseAnálise por Western blotAnálise por citometria de fluxoMedição da atividade de caspase-3 Aumentou a atividade de caspase-3, flip-flop de fosfatidilserina e fragmentação nuclearAtivou JNK e óxido nítrico sintase endotelial Sintetizado Linhas celulares linfoblastoides Molt e Raji Ação inibitória do crescimentoContagem e viabilidade celularAvaliação da síntese de DNA e proteínas Inibiu a proliferação celularInibiu a captação de [3H] timidina e leucina Pinus resinosa Células A549, DLD-1 e WS1 Ensaio de citotoxicidade 66 ± 10 < IC50 < 75 ± 14 μM Sintetizado Células de câncer colorretal HCT 116 Teste de potencial inibitório da proliferaçãoAnálise da distribuição do ciclo celularAnálise por Western blotRT-PCRIdentificação da expressão gênicaMicroarranjo de cDNAEnsaio de mobilidade eletroforética Reduziu o crescimento celularDesacelerou a transição do ciclo celular da fase G1 para a fase SDiminuiu os níveis de ciclina D1, ciclina E, CDK2, c-Myc, pRb e p53Interrompeu a ativação de proteínas envolvidas na via de sinalização FAK/c-Src/ERK e na via de sinalização PI3K/Akt/GSK-3bInibiu a translocação de b-catenina nuclear Sintetizado Fibrossarcoma humano HT1080 e camundongos Balb/c RT-PCREnsaio de cicatrização de feridaAvaliação da dispersão de colôniasMétodo de metástase pulmonar in vivoZimografia em gelatina Inibiu a produção de metaloproteinase de matriz (MMP)-2, MMP-9 e MMP tipo 1 de membranaReduziu a migração de células HT1080Reduziu o crescimento de nódulos tumorais e o peso tumoral no tecido pulmonarRegulou negativamente a expressão de MMP-9 e ciclooxigenase-2 (COX-2) e a fosforilação de ERK1/2 e Akt em tecidos de carcinoma pulmonar Não relatado Células ARPE-19 Avaliação de toxicidadeAvaliação de estresse oxidativoViabilidade celularRT-PCRInterferência de RNA de Nrf2 e p62 Melhorou a viabilidade celular diante do estresse oxidativoAumentou a expressão de HO-1Sem efeito na expressão de Nrf2Protegeu contra danos oxidativos Adquirido Células de câncer de próstata LNCaP-par e LNCaP-abl Triagem de alto rendimento (HTS)Ensaios de viabilidade celular e apoptoseAnálise de expressão gênicaqPT-PCR Inibiu a sinalização androgênica
e esteroidogênese intracelular em células CRPC Comprado Células de câncer de cavidade nasal (RPMI 2650) Ensaio MTTAvaliação de fechamento de lacunaEnsaio de migração celularEnsaio de invasão celularAnálise de Western blotArray de protease humana do Proteome Profiler Suprimiu a migração e invasão das células NPC039 e NPCBM em doses crescentesReduziu os níveis de expressão proteica de MMP2 e MMP9Diminuiu a atividade enzimática de MMP2Reduziu a expressão de vimentina e N-caderina (em células NPC)Aumentou a expressão de zonula occludens-1 e E-caderinaInibiu a invasão e migração das células NPC039 e NPCBM através da modulação das vias p38, ERK1/2 e JNK1/2Inibiu a migração e invasão de células NPC Comprado Células de câncer SCC-9 e HSC-3 (língua escamosa) Ensaio MTTAvaliação de fechamento de feridaZimografia de gelatinaAvaliação de migração e invasão celularAnálise de Western blot Diminuiu a atividade enzimática de MMP-2 e reduziu seu nível proteicoAumentou a expressão de TIMP-2Parou o crescimento de células cancerosas em um experimento de cicatrização de feridasReduziu a fosforilação da proteína ERK1/2 em células SAS e SCC-9 Não relatado Células endoteliais aórticas bovinas Experimento de apoptoseAnálise de Western blotCitometria de fluxoMedição da atividade de caspase-3Coloração Hoechst Induziu (100 μmol/L) morte celularAumentou a ativação de caspase-3, condensação nuclear e o “flip-flop” da fosfatidilserina (em altas concentrações)Inibiu a necrosePromoveu a conversão de LC3 de LC3-I para LC3-II e degradação de p62Estimulou a proteína quinase ativada por AMP (AMPK) e um inibidor de AMPKReverteu o impacto inibitório de um inibidor de AMPKInduziu autofagia via ativação de AMPK