pmid: "33623100"
title: "Pterostilbeno inibe a progressão do câncer de vesícula biliar ao suprimir a via PI3K/Akt."
authors: "Tong C, Wang Y, Li J, Cen W, Zhang W, Zhu Z, Yu J, Lu B"
journal: "Scientific reports"
pubdate: "2021 Feb 23"
doi: "10.1038/s41598-021-83924-4"
source: "PMC Full Text"

Pterostilbeno inibe a progressão do câncer de vesícula biliar ao suprimir a via PI3K/Akt.

Autores

Tong C, Wang Y, Li J, Cen W, Zhang W, Zhu Z, Yu J, Lu B

Periodico

Scientific reports (2021 Feb 23)

Conteudo

O pterostilbeno inibe a progressão do câncer de vesícula biliar ao suprimir a via PI3K/Akt
O câncer de vesícula biliar é o tumor maligno mais comum do sistema biliar e é caracterizado por dificuldade de diagnóstico em estágios iniciais, alto grau de malignidade e prognóstico reservado. Encontrar novos medicamentos pode melhorar o prognóstico para esse câncer sombrio. Neste estudo, investigamos a potencial aplicação do pterostilbeno (PTS) contra o câncer de vesícula biliar in vivo e in vitro. O PTS inibiu potentemente a proliferação celular, migração e invasão de células de câncer de vesícula biliar. Além disso, o PTS também teve função de induzir apoptose in vitro. Enquanto isso, o PTS reverteu a EMT com uma inibição correlacionada da ativação de PI3K/Akt. Modelos de xenoenxerto tumoral mostraram que o PTS inibiu o crescimento tumoral e apresentou baixa toxicidade in vivo, o que foi consistente com os dados in vitro. Essas descobertas indicam que o PTS interrompe o crescimento celular através da inibição da sinalização PI3K/AKT e é um medicamento potencial para a terapia do câncer de vesícula biliar.
Introdução
O câncer de vesícula biliar (GBC) é um tumor maligno derivado de células epiteliais da vesícula biliar e tem prognóstico reservado. Embora o GBC seja relativamente raro em países ocidentais, é mais comum em países em desenvolvimento como Leste Asiático, Índia e América do Sul. Um estudo recente mostrou que o GBC representou 0,76–1,2% de todos os cânceres na China. No mesmo período, o GBC representou 0,4–3,8% de todas as doenças do trato biliar na China, ocupando a 6ª posição entre os tumores do trato digestivo. A taxa de sobrevida global em 5 anos dos pacientes com GBC é de apenas 5%. Em 2014, a incidência de GBC foi de 3,82/100.000, a incidência de bid-winning foi de 2,38/100.000, e a incidência cumulativa foi de 0,27% na China. A maioria apresenta alta taxa de recorrência após cirurgia potencialmente curativa. A falta de medicamentos eficazes é outro fator importante que contribui para o prognóstico sombrio do GBC. Embora a quimioterapia baseada em gencitabina tenha sido relatada como melhorando o prognóstico de pacientes com GBC, seu efeito terapêutico real na clínica está longe de ser satisfatório. Assim, encontrar novos medicamentos potenciais e identificar seu mecanismo de ação subjacente poderia melhorar os resultados para esse tipo agressivo de câncer.
O pterostilbeno (trans-3,5-dimetoxi-4′-hidroxiestilbeno; PTS) é extraído de mirtilos, uvas e serralhas. O PTS pode atuar em uma variedade de vias de sinalização para inibir a proliferação de células tumorais. Estudos anteriores mostraram que o PTS elimina espécies reativas de oxigênio e bloqueia o câncer de pele induzido por ultravioleta. Diferentes concentrações de PTS mostram diferentes efeitos nas células cancerígenas. Altas concentrações de PTS podem causar parada do ciclo celular na fase G1, enquanto baixas concentrações de PTS podem induzir um bloqueio do ciclo celular na fase S, embora o mecanismo não seja claro. Além disso, o PTS pode induzir apoptose em várias células tumorais, incluindo cânceres de bexiga, pulmão, mama, próstata, linfomas e mucosa oral.
Transição epitelial-mesenquimal (TEM) é necessária para muitos processos fisiológicos, mas também pode levar a fibrose patológica e progressão do câncer. Estudos anteriores mostraram que a TEM é um mecanismo importante que promove o crescimento e a capacidade de células-tronco das células de GBC. Geralmente, níveis elevados de marcadores mesenquimais e expressão diminuída de marcadores epiteliais são encontrados em células que sofreram TEM.

A via de sinalização PI3K/Akt é uma importante via regulatória nas células que controla sobrevivência, metabolismo, crescimento, diferenciação e recombinação esquelética. Múltiplos fatores de crescimento e oncogenes afetam a via PI3K/Akt, incluindo a tirosina quinase do receptor de insulina, o receptor do fator de crescimento epidérmico, o receptor relacionado do fator de crescimento semelhante à insulina tipo 1 e os receptores do fator de crescimento derivado de plaquetas. A desregulação da via PI3K/Akt leva a alterações anormais em múltiplos efetores a jusante, resultando em proliferação, diferenciação e metabolismo celular anormais.

Nós levantamos a hipótese de que o PTS poderia ser um tratamento potencial para GBC. As atividades do PTS foram avaliadas estudando as características das células de GBC com e sem tratamento com PTS, incluindo sua proliferação, migração e sobrevivência. Além disso, a via PI3K/Akt foi identificada como o mecanismo subjacente para a função do PTS nas células de GBC.

Resultados

O PTS inibiu a proliferação das células de GBC

O PTS diminuiu a viabilidade das células de GBC humanas. (A) O ensaio CCK8 mostrou que o PTS induziu citotoxicidade dose-dependente nas células GBC-SD, SGC-996 e NOZ. (B) Os ensaios de formação de colônias mostraram que a capacidade de formação de colônias das células GBC-SD, SGC-996 e NOZ diminuiu com o aumento das concentrações de PTS. *P < 0,05; **P < 0,01; ***P < 0,001, em comparação com o grupo controle.

O efeito do PTS na proliferação das células GBC-SD, SGC-996 e NOZ foi determinado por ensaios CCK8. Os resultados mostraram que o PTS teve um efeito inibitório dose-dependente na proliferação das células GBC-SD, SGC-996 e NOZ (P < 0,001, Fig. 1A). A sensibilidade das três linhagens celulares ao PTS foi semelhante (Fig. 1A). Os ensaios de formação de colônias também mostraram que o PTS inibiu a formação de colônias em ambas as células GBC-SD, SGC-996 e NOZ em comparação com os grupos controle (Fig. 1B). O antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA) é um marcador de proliferação celular, e a análise de western blot mostrou que as células GBC-SD, SGC-996 e NOZ apresentaram níveis mais baixos de PCNA após o tratamento com PTS (Fig. 4C). Esses resultados sugeriram que o PTS inibiu a proliferação das células de GBC.

O PTS induziu apoptose nas células de GBC
PTS aumentou a apoptose em células GBC humanas. (A) O efeito do PTS nas porcentagens de células vivas, apoptóticas e necróticas GBC-SD foi avaliado por ensaios de apoptose com Anexina V/PI. Os valores médios da porcentagem de células vivas, apoptóticas e necróticas de experimentos independentes ± DP são apresentados. (B) Coloração com Hoechst de células GBC-SD e NOZ tratadas com PTS por 48 h. Setas brancas destacam células apoptóticas. *P < 0,05; **P < 0,01; ***P < 0,001, em comparação com o grupo controle.
Os fármacos anticancerígenos exibem atividade antineoplásica ao inibir a proliferação e induzir a apoptose. Assim, em seguida, examinamos se o PTS induzia apoptose em células GBC. A apoptose foi detectada usando o ensaio de apoptose com Anexina V/PI. Os resultados mostraram que o número de células apoptóticas aumentou significativamente, enquanto o número de células vivas diminuiu quando as células GBC-SD foram tratadas com 40 ou 80 μM de PTS (P < 0,01, Fig. 2A). A coloração com Hoechst 33,342 mostrou que os núcleos das células GBC-SD e NOZ tratadas com PTS estavam concentrados e brilhantes, enquanto as células do grupo controle não apresentaram núcleos apoptóticos (Fig. 2B). Esses resultados indicaram que o PTS promoveu a apoptose em células GBC.
PTS inibiu a migração e invasão de células GBC
O tratamento com PTS reduziu as capacidades de migração e invasão das células GBC humanas. (A) Os ensaios de scratch demonstraram que a capacidade de migração das células GBC-SD e SGC-996 foi inibida pelo tratamento de 48 h com diferentes concentrações de PTS. (B) Os efeitos do PTS na migração e invasão das células GBC-SD e NOZ in vitro. As células foram contadas em três campos aleatórios com aumento de 400 × após uma incubação de 48 h. *P < 0,05; **P < 0,01; ***P < 0,001, em comparação com o grupo controle.
Ensaios de scratch foram realizados para investigar o efeito do PTS na migração de células GBC. Com o aumento das concentrações de PTS, a distância entre as bordas do risco após 48 h de incubação aumentou gradualmente nas células GBC-SD e SGC-996 (P < 0,001, Fig. 3A). Além disso, os resultados do ensaio Transwell mostraram que as capacidades de migração e invasão das células GBC-SD e NOZ foram significativamente inibidas com diferentes concentrações de PTS em comparação com o grupo controle (Fig. 3B). Além disso, foi observada uma dependência da concentração após o tratamento com PTS. Em conjunto, esses dados indicaram que o PTS inibiu a migração e invasão de células GBC.
PTS reverteu a EMT ao inibir a sinalização PI3K/Akt em células GBC
O tratamento com PTS regula a sinalização através da via PI3K/Akt. (A) N-caderina, Vimentina e β-catenina foram diminuídas, enquanto a expressão de ZO-1 foi significativamente aumentada em células GBC-SD e NOZ tratadas com PTS. (B) Quantificação dos níveis de proteínas relacionadas à EMT no blot. (C) A análise de Western blot mostrou que os níveis de PCNA, Akt, p-Akt, PI3K, p-PI3K foram regulados negativamente em células GBC-SD, SGC-996 e NOZ tratadas com PTS. (D) Quantificação dos níveis de proteínas relacionadas à PI3K/Akt no blot. *P < 0,05; **P < 0,01; ***P < 0,001, em comparação com o grupo controle.
Células de câncer apresentam comportamentos aprimorados de migração e invasão após a EMT. Assim, investigamos em seguida os níveis de proteínas associadas à EMT por western blot em células GBC-SD após tratamento com PTS. Proteínas associadas a mesênquima, incluindo N-caderina, Vimentina e β-catenina, foram reguladas negativamente em células GBC-SD e NOZ após 48h de tratamento com PTS, enquanto a molécula de adesão epitelial ZO-1 foi regulada positivamente (Fig. 4A,B).
A via PI3K/Akt regula a EMT em vários tipos de câncer. Nossos resultados mostraram que as proteínas-chave na via PI3K/Akt, incluindo PI3K, p-PI3K, AKT e p-Akt. p-PI3K e p-Akt foram ambas significativamente reguladas negativamente em células GBC-SD, SGC-966 e NOZ após tratamento com PTS (Fig. 4C,D).
PTS inibiu a formação de xenoenxertos de GBC in vivo
(A) O efeito antitumoral de PTS no modelo de xenoenxerto GBC-SD. Pesos corporais de camundongos portadores de xenoenxerto GBC-SD após tratamento com PTS. Pesos e tamanhos dos tumores de xenoenxertos GBC-SD tratados com PTS. (B) Expressão das proteínas PI3K, p-PI3K, Akt e p-Akt em xenoenxertos GBC-SD. (C) Um modelo proposto para como a sinalização PI3K/Akt/β-catenina medeia a EMT em células GBC-SD. *P < 0,05; **P < 0,01, comparado com o grupo controle.
Para avaliar melhor a aplicação potencial de PTS in vivo, foi investigada a formação de xenoenxertos em camundongos nus. Os resultados mostraram que a injeção intraperitoneal de PTS inibiu significativamente o crescimento tumoral in vivo, enquanto o PTS não teve uma influência notável no peso corporal dos camundongos portadores de tumor (Fig. 5A).
Em seguida, os tumores xenoenxertados foram excisados e os níveis de proteínas relacionadas à via PI3K/Akt foram examinados por western blot. Descobrimos que p-PI3K e p-Akt também foram significativamente reguladas negativamente nos tecidos tumorais (P < 0,05, Fig. 5B). Isso indicou que a inibição da via PI3K/Akt era o mecanismo potencial de como o PTS regulava a plasticidade das células de GBC (Fig. 5C).
Discussão
Nos últimos 20 anos, avanços na eficácia dos tratamentos anticancerígenos melhoraram o prognóstico de alguns cânceres, incluindo câncer de mama e cólon. No entanto, o GBC não pertence a essa série e ainda tem um prognóstico não melhorado. Assim, explorando novos fármacos potenciais e avaliando sua atividade em modelos pré-clínicos, esperamos melhorar o prognóstico do GBC.
Alguns extratos vegetais têm sido utilizados na clínica para tratar o câncer, incluindo paclitaxel e hidroxicamptotecina. O resveratrol (3,4′,5-trihidroxidistireno) é encontrado em mirtilos, uvas, palmettos e outras plantas. O PTS é um derivado dimetílico do resveratrol (3,5-dimetoxil-4′-hidroxiestireno) que possui atividades biológicas semelhantes. Suas funções incluem efeitos antidislipidêmicos, proteção cardiovascular e neuroproteção. Como um monômero extraído de plantas, o PTS também demonstrou ter efeitos antitumorais em vários tipos de câncer, incluindo câncer de bexiga, pulmão, mama, próstata, linfomas e mucosa oral. Os mecanismos potenciais do PTS incluem inibir a proliferação e migração de células tumorais, induzir parada do ciclo celular, acelerar a apoptose e inibir a metástase. Além disso, o PTS pode inibir o processo de EMT no câncer de mama através dos RNAs longos não codificantes. Neste estudo, investigamos os efeitos do PTS no GBC in vivo e in vitro.

O crescimento descontrolado e a supressão da apoptose ajudam as células cancerígenas a atingir um crescimento rápido. Os medicamentos anticâncer geralmente funcionam inibindo a proliferação celular e promovendo a apoptose. Nossos resultados mostraram que o PTS inibiu a proliferação e acelerou a apoptose nas células de GBC. Várias vias de sinalização foram invocadas para explicar o mecanismo da função antitumoral do PTS em diferentes cânceres, incluindo vias relacionadas à Akt. Foi confirmado que o PTS inibe a proliferação de células de câncer de pulmão em camundongos ao inibir a sinalização do fator de crescimento epidérmico, o que reduz a fosforilação da Akt a jusante. Outros estudos mostraram que o PTS inibiu o câncer colorretal relacionado à obesidade e atenuou a progressão do linfoma de células do manto ao regular o PI3K. A via PI3K/Akt é conhecida por desempenhar papéis importantes nas células cancerígenas. As PI3Ks são uma família de lipídeos quinases que transferem proteínas de sinalização para as membranas celulares ao produzir fosfolipídios. Essas proteínas de sinalização incluem a Akt, que é recrutada para as membranas celulares e fosforilada em SER473. Uma vez fosforilada, a Akt regula várias respostas biológicas através de diversas moléculas a jusante. Estudos anteriores mostraram que o PTS inibe a expressão do receptor do fator de crescimento epidérmico, reduzindo assim os níveis de p-Akt, o que leva à diminuição da ativação das fases G e S do ciclo celular, inibindo, em última análise, a proliferação de células de câncer de pulmão. Da mesma forma, em nosso estudo, os níveis de proteína PI3K e p-Akt foram significativamente diminuídos nas células de GBC após o tratamento com PTS. Esses resultados sugerem que o PTS inibe a proliferação e induz a apoptose nas células de GBC ao diminuir a sinalização PI3K/Akt.
Vários estudos confirmaram que a sinalização PI3K está intimamente relacionada à EMT. A EMT é o processo pelo qual as células epiteliais adquirem a capacidade de migrar; a EMT também está associada à desdiferenciação celular. Através da EMT, as células perdem sua polaridade, bem como as conexões com as membranas basais. Após a EMT, as células tumorais adquirem a capacidade de resistir à apoptose e degradar a matriz extracelular, e assim exibem fenótipos mesenquimais, como aumento da migração e invasão. A EMT das células GBC é regulada através da via PI3K/Akt. Estudos anteriores mostraram que o PTS inibe PI3K e Akt, e aumenta a fosforilação da β-catenina, promovendo sua degradação. Em conjunto, a fosforilação de Akt ativa uma série de alterações que aceleram a EMT. Vale ressaltar que em nosso estudo, o PTS inibiu a metástase das células GBC e regulou a expressão de marcadores de EMT ao diminuir a atividade da sinalização PI3K-Akt. Enquanto o PTS aumentou significativamente a expressão de ZO-1, o tratamento diminuiu a expressão de Vimentina e N-caderina. A ZO-1 é necessária para a formação e função das junções oclusivas, está envolvida na regulação da permeabilidade paracelular e polaridade celular, e na prevenção do movimento de proteínas transmembrana entre as superfícies celulares apical e basolateral. A Vimentina é um biomarcador preditivo para o crescimento tumoral e metástase que está intimamente relacionado à invasão e metástase de vários tumores malignos. Como um dos importantes marcadores de EMT, a N-caderina desempenha um papel fundamental na invasão e metástase de muitos tumores. Essas alterações são consideradas um fenômeno comum na EMT, e a expressão de N-caderina pode ser usada como um indicador biológico para avaliar o prognóstico. As proteínas acima desempenham um papel importante na evolução da EMT, e as alterações características nessas proteínas foram verificadas em nosso estudo. Juntos, esses dados indicam que o PTS regula a plasticidade das células GBC através da redução da sinalização PI3K/Akt.
Em conclusão, o PTS inibiu a proliferação, apoptose, migração e invasão de células GBC humanas, o que pode estar relacionado à inibição da via PI3K/Akt.
Materiais e métodos
Produtos químicos e reagentes
PTS (C16H16O3; pureza > 98%) foi adquirido da Shanghai Yuanye Biotechnology Company (Cat No. B21702, Xangai, China). O Cell Counting Kit-8 (CCK-8) foi obtido da MCE (Monmouth Junction, NJ, EUA). O Kit de Detecção de Apoptose Anexina V foi adquirido da BD Biosciences (Franklin Lakes, NJ, EUA). Anticorpos primários contra fosfo-Akt (Ser473), p-PI3 Quinase, PI3 Quinase, ZO-1 e N-Caderina foram adquiridos da Cell Signaling Technology (Danvers, MA, EUA). Anticorpos primários contra Akt e GAPDH foram adquiridos da Proteintech (Wuhan, China).
Cultura de células
A linhagem celular humana de GBC, GBC-SD, foi obtida do Cell Bank of Type Culture Collection da Academia Chinesa de Ciências (Xangai, China); as células SGC-996 foram obtidas do laboratório do Dr. Ying-Bin Liu no Xin Hua Hospital afiliado à Shanghai Jiao Tong University School of Medicine (China). As células NOZ foram obtidas do HAKATA Cell Bank da Shanghai Chuanqiu Biotechnology Co., LTD (Xangai, China). As linhagens celulares GBC-SD e SGC-996 foram cultivadas em RPMI‑1640 e as linhagens NOZ foram cultivadas em meio DMEM com 10% de soro fetal bovino (ambos da Gibco, Waltham, MA, EUA) em atmosfera umidificada contendo 5% de CO2 a 37 °C. O PTS foi dissolvido em DMSO e diluído em RPMI-1640 ou DMEM (com o mesmo nível de DMSO nos controles) até um valor final de DMSO < 0,1%.

Ensaios de viabilidade celular
A proliferação das células GBC-SD, SGC-996 e NOZ sob tratamento com PTS foi avaliada pelo ensaio CCK-8. Resumidamente, as células em fase de crescimento logarítmico foram inoculadas em placas de 96 poços a 5 × 10³ células por poço e cultivadas durante a noite. As células foram tratadas com diferentes concentrações de PTS (0–80 µmol/L) por 48 h, e cinco poços paralelos foram usados para cada grupo. Após o tratamento, 10 µL da solução de CCK8 foram adicionados a cada poço e incubados a 37 °C por 1 h. O valor de absorbância de cada poço foi detectado a 450 nm com um leitor de microplacas (Molecular Devices Co., San Jose, CA, EUA), e a viabilidade celular foi analisada utilizando o GraphPad Prism 5.0 (GraphPad Software Inc., La Jolla, CA, EUA).

Ensaios de risco (scratch)
A migração das células GBC-SD e SGC-996 foi examinada por ensaios de risco. Resumidamente, as células foram semeadas e crescidas até confluência em placas de cultura celular de 35 mm. Em seguida, foram feitos riscos com uma ponteira estéril de 200 µL, e as placas foram lavadas três vezes com PBS. Então, foi adicionado meio sem soro contendo diferentes concentrações de PTS. Imagens foram capturadas nos tempos 0, 24 e 48 h para registrar as larguras dos riscos. As imagens foram obtidas com um sistema de microscópio de luz Nikon (Tóquio, Japão).

Ensaios de formação de colônias
As células GBC-SD, SGC-996 e NOZ foram semeadas individualmente em placas de 6 poços a 5 × 10² células por poço e cultivadas durante a noite. As células foram tratadas com diferentes concentrações de PTS (0–80 µmol/L) por 10 dias, com reposição do meio a cada 2 dias. Após 10 dias, o sobrenadante foi descartado, as células foram fixadas com paraformaldeído a 4% e coradas com violeta cristal a 0,1%, e então as colônias com mais de 50 células foram contadas usando um microscópio de luz Nikon.

Ensaios de invasão e migração
Câmaras com (ensaios de invasão) ou sem (ensaios de migração) revestimento de Matrigel que se encaixam em placas de 24 poços foram adquiridas da Corning Inc. (Corning, NY, EUA). As células GBC foram lavadas duas vezes com PBS e, em seguida, ressuspensas em meio sem soro a uma concentração de 2 × 105 células/mL na presença ou ausência de PTS. Em seguida, 100 µL das misturas de células foram adicionados ao poço superior das câmaras de invasão. Meio contendo soro (600 µL) foi adicionado ao poço inferior de cada poço. Após incubação por 48 h, cotonetes foram usados para remover as células do poço superior, e violeta cristal a 0,1% foi usado para corar as células remanescentes após fixação com formaldeído. Os valores médios do número de células migradas em 10 campos aleatórios ao microscópio foram calculados, assim como o desvio padrão.

Análise de apoptose
A apoptose foi analisada por dois métodos: citometria de fluxo e coloração com Hoechst 33.342. Para os experimentos de citometria de fluxo, as células GBC-SD foram incubadas com diferentes concentrações de PTS por 48 h. Após lavagem duas vezes com PBS frio, as células foram ressuspensas em tampão de ligação a uma concentração de 1 × 106 células/mL e, em seguida, misturadas com 5 µL de iodeto de propídio (PI) e 5 µL de FITC Annexin V. Após incubação por 30 min à temperatura ambiente no escuro, as células foram analisadas por um FACScan (Beckman Coulter Inc., Brea, CA, EUA). Para a coloração com Hoechst 33.342, as células GBC-SD e NOZ foram inoculadas em placas de 6 poços e tratadas com diferentes concentrações de PTS por 2 dias. As células foram coradas com Hoechst 33.342 (Beyotime Institute of Biotechnology, Nanjing, China) e observadas em um microscópio de fluorescência Nikon.

Análise de Western blot
As células GBC-SD, SGC-996 e NOZ foram incubadas por 48 h com diferentes concentrações de PTS, e então a proteína total foi extraída com tampão de lise (Beyotime) contendo fluoreto de fenilmetanossulfonila (Beyotime). Os xenoenxertos de GBC-SD foram triturados em nitrogênio líquido. As proteínas citoplasmáticas foram coletadas por sonicação e centrifugação. O kit BCA (Beyotime) foi usado para determinar as concentrações de proteína. 20 µg de proteína total foram separados em gel de SDS-PAGE a 10–12% e transferidos para membranas de fluoreto de polivinilideno (Merck KGaA, Temecula, CA, EUA). As membranas foram bloqueadas em leite desnatado a 5% por 1 h a 25 °C e incubadas com anticorpos primários a 4 °C durante a noite. As membranas foram lavadas três vezes com TBST e incubadas com anticorpos secundários conjugados com peroxidase de rábano (1:2000; Beyotime) à temperatura ambiente por 1 h. As bandas imunorreativas foram detectadas com o kit ECL (Millipore, Temecula, CA, EUA) e quantificadas pelo Quantity One (Bio‑Rad, Hercules, CA, EUA).

Experimentos com animais
Camundongos nus atímicos machos (6 semanas de idade) foram adquiridos da SLAC Laboratory Animal Company (Xangai, China). Todos os procedimentos foram aprovados pelo Comitê de Cuidado e Uso Animal do Hospital Popular de Shaoxing e estavam em conformidade com as diretrizes ARRIVE 2.0 publicadas na PLOS Biology. Os camundongos nus tiveram acesso ad libitum a comida e água e foram mantidos a 20°C, com 50% de umidade sob ciclos claro/escuro de 12 horas. As nádegas de todos os camundongos nus foram injetadas subcutaneamente com 100 μL de PBS contendo células GBC-SD (1 × 106). Xenotransplantes tumorais surgiram aproximadamente 4–6 dias após a injeção das células. Os camundongos foram divididos aleatoriamente em dois grupos (N = 6). O grupo controle recebeu injeção intraperitoneal de solução veículo (soro fisiológico 0,9%, DMSO 20%), enquanto o grupo experimental recebeu injeção de PTS (30 mg/kg, dissolvido em DMSO 20%). Os tratamentos com PTS foram iniciados 7 dias após a injeção das células e realizados a cada 2 dias durante 3 semanas. Os pesos dos camundongos foram medidos semanalmente, e os camundongos foram sacrificados após 3 semanas para isolar os tumores e registrar seus pesos.
Análise estatística
Todos os experimentos foram repetidos pelo menos três vezes, e os dados são apresentados como média ± DP. O teste t de Student foi utilizado para determinar a significância estatística entre dois grupos. ANOVA de uma via seguida pelo ajuste de Tukey–Kramer foi utilizado para examinar diferenças entre múltiplos grupos. Todas as análises estatísticas foram realizadas usando SPSS v20.0 (IBM, Armonk, NY, EUA) e P < 0,05 foi considerado estatisticamente significativo.
Informações Suplementares
Nota do editor
Springer Nature permanece neutra em relação a reivindicações jurisdicionais em mapas publicados e afiliações institucionais.
Estes autores contribuíram igualmente: Chenhao Tong e Yali Wang.
Informações Suplementares
A versão online contém material suplementar disponível em 10.1038/s41598-021-83924-4.
Contribuições dos autores
Conceitualização: J.Y., B.L.; metodologia: J.Y.; software: Y.W., J.L.; investigação: W.Z.; curadoria de dados: C.T., W.C.; redação - rascunho original: C.T.; redação - revisão e edição: J.Y.; supervisão: Z.Z.; administração do projeto: J.Y., B.L.; aquisição de financiamento: W.Z., Z.Z., J.Y., B.L.
Financiamento
O trabalho foi patrocinado pela Fundação Provincial de Ciências Naturais de Zhejiang da China sob o número de concessão LY19H160016, pelos Projetos de Pesquisa em Aplicação de Tecnologia de Bem-Estar Público Provincial de Zhejiang sob o número de concessão LGF18H030008, pela Fundação Nacional de Ciências Naturais da China (NSFC) sob o número 81602044, e pelo Projeto Provincial de Ciência e Tecnologia Médica e de Saúde de Zhejiang sob os números de concessão 2020RC127, 2019ZD057, 2018KY836 e 2018RC077.
Conflitos de interesse
Os autores declaram não haver conflitos de interesse.
Referências
Avanços no tratamento do câncer de trato biliar metastático ou irressecável
Epidemiologia, patogênese e genética molecular do câncer de vesícula biliar: atualização recente
Câncer de vesícula biliar: epidemiologia e desfecho
Estratégias de tratamento em evolução para o câncer de vesícula biliar
Relatório de incidência e mortalidade do câncer de vesícula biliar na China, 2024
Nomograma prognóstico para colangiocarcinoma intra-hepático após hepatectomia parcial
Nomograma para predizer o benefício da quimiorradioterapia adjuvante para câncer de vesícula biliar ressecado
Quimioterapia à base de gencitabina para carcinomas avançados do trato biliar
Gencitabina mais cisplatina versus quimiorradioterapia no câncer do trato biliar localmente avançado: estudo randomizado de fase II da Federação Francófona de Cancerologia Digestiva 9902
Cisplatina mais gencitabina versus gencitabina para câncer do trato biliar
O papel da cirurgia e terapia adjuvante em cânceres linfonodo-positivos da vesícula biliar e ductos biliares intra-hepáticos
Potencial terapêutico promissor do pterostilbeno e seus insights mecanísticos com base em evidências pré-clínicas
Ações biológicas e efeitos moleculares do resveratrol, pterostilbeno e 3'-hidroxipterostilbeno
Regulação de microRNA usando fitoquímicos dietéticos promissores: possível opção preventiva e de tratamento do mesotelioma maligno
Atividade quimiopreventiva e terapêutica dependente da via ATM/CHK/p53 no câncer de pulmão pelo pterostilbeno
Pterostilbeno exerce atividade anticancerígena no câncer de pulmão de não pequenas células via ativação do estresse do retículo endoplasmático
O efeito do resveratrol, seus derivados naturais e ácido tânico na indução de parada do ciclo celular e apoptose em linhagens celulares de glioma de rato C6 e humano T98G
Pterostilbeno inibe o crescimento de células de câncer esofágico humano regulando o estresse do retículo endoplasmático
Pterostilbeno previne a polimerização mediada pelo eixo AKT-ERK da fibronectina de superfície em células de câncer de pulmão suspensas independentemente da apoptose e suprime metástase
Pterostilbeno induz autofagia e apoptose em células de câncer de bexiga humano sensíveis e quimiorresistentes
Pterostilbeno induz apoptose e parada do ciclo celular em células de linfoma difuso de grandes células B
Pterostilbeno induz autofagia em células de câncer oral humano através da modulação da via Akt e proteína quinase ativada por mitógeno
Mecanismos moleculares da transição epitélio-mesenquimal
Ascochlorina aumenta a sensibilidade da doxorrubicina levando à reversão da transição epitélio-mesenquimal no carcinoma hepatocelular
Metástase mediada por exossomos: da transição epitélio-mesenquimal à fuga da imunovigilância
MiR-20a desencadeia metástase do carcinoma de vesícula biliar
Fosfatases de fosfoinositídeos na dinâmica das células cancerígenas - Além de PI3K e PTEN
A via PI3K na doença humana
Antígeno nuclear de proliferação celular (PCNA): um dançarino com muitos parceiros
Supressor tumoral PTEN: a barragem da 'stemness' no câncer
Funções distintas das isoformas de AKT no câncer de mama: uma revisão abrangente
Rumo ao tratamento personalizado para câncer de mama HER2-positivo em estágio inicial
Câncer de mama HER2-positivo
Implementação da terapia anti-receptor do fator de crescimento epidérmico (EGFR) no câncer colorretal metastático: desafios e perspectivas futuras
Efeitos mecanísticos e clínicos do paclitaxel no câncer de mama
A ativação da autofagia dependente do eixo AMPK-mTOR-ULK1 promove a apoptose induzida por hidroxicamptotecina em células de câncer de bexiga humana
Multiplicidade de efeitos e benefícios à saúde do resveratrol
Resveratrol: um composto natural milagroso para o tratamento de doenças
O pterostilbeno inibe células de mieloma múltiplo humano através das vias ERK1/2 e JNK in vitro e in vivo
A ativação da via c-Met mobiliza uma rede inflamatória no microambiente cerebral para promover metástase cerebral do câncer de mama
Resultado após ressecção de cistadenoma biliar: experiência de um único centro e revisão da literatura
RNAs longos não codificantes contribuem para a inibição da proliferação e EMT pelo pterostilbeno no câncer de mama humano
Uma visão sobre a resistência a medicamentos no câncer
A ingestão dietética de pterostilbeno, um constituinte dos mirtilos, inibe a via de sinalização downstream beta-catenina/p65 e a carcinogênese do cólon em ratos
Efeitos quimiopreventivos do pterostilbeno na carcinogênese pulmonar induzida por uretano em camundongos através da inibição de vias mediadas por EGFR e da indução de apoptose e autofagia
O pterostilbeno inibe a migração de células de câncer colorretal induzida por meio condicionado de adipócitos através do direcionamento da via de sinalização relacionada à FABP5
O direcionamento da via de sinalização PI3K/Akt/mTOR pelo pterostilbeno atenua a progressão do linfoma de células do manto
A rede PI3K-AKT na interface da sinalização oncogênica e do metabolismo do câncer
O ginsenosídeo Rg3 suprime a proliferação e induz apoptose em osteossarcoma humano
O polissacarídeo de Dipsacus asperoides induz apoptose em células de osteossarcoma modulando a via PI3K/Akt
Efeito quimiopreventivo e terapêutico do flavonoide dietético kaempferol: uma revisão abrangente
Transição epitélio-mesenquimal na metástase tumoral
CCL18 secretado por macrófagos M2 promove migração e invasão através da via PI3K/Akt no câncer de vesícula biliar
STYK1 promove a proliferação de células cancerígenas e a transformação maligna ativando a via PI3K-AKT no carcinoma de vesícula biliar
Direcionamento de células-tronco cancerígenas no câncer de mama: potenciais propriedades anticancerígenas do 6-shogaol e do pterostilbeno
Fechando as junções oclusivas
A Parkin direciona o HIF-1alfa para ubiquitinação e degradação a fim de inibir a progressão do tumor mamário
Transição epitélio-mesenquimal em pacientes com adenocarcinoma pulmonar: correlação com marcadores de células-tronco cancerígenas e prognóstico
A N-caderina promove a transição epitélio-mesenquimal e características semelhantes a células-tronco cancerígenas através da sinalização ErbB em células de câncer de próstata
A N-caderina medeia a migração de células MCF-10A submetidas à transição epitélio-mesenquimal mediada pela proteína morfogenética óssea 4