pmid: "41754167"
title: "Uma Abordagem Fitoterapêutica de Múltiplos Alvos para a Hiperplasia Prostática Benigna: Caracterização Pré-Clínica de um PhytoBPH-Mix."
authors: "Amante C, De Soricellis C, Sellitto MR, Falcone G, Luccheo L, Luccheo G, Gaudio PD"
journal: "Nutrients"
pubdate: "2026 Feb 16"
doi: "10.3390/nu18040650"
source: "PMC Full Text"
Uma Abordagem Fitoterapêutica de Múltiplos Alvos para a Hiperplasia Prostática Benigna: Caracterização Pré-Clínica de um PhytoBPH-Mix.
Autores
Amante C, De Soricellis C, Sellitto MR, Falcone G, Luccheo L, Luccheo G, Gaudio PD
Periodico
Nutrients (2026 Feb 16)
Conteudo
Uma Abordagem Fitoterapêutica Multialvo para Hiperplasia Prostática Benigna: Caracterização Pré-Clínica de um PhytoBPH-Mix
Contexto: A hiperplasia prostática benigna (HPB) é uma condição prevalente que afeta mais de 50% dos homens com 60 anos ou mais, frequentemente levando a sintomas do trato urinário inferior que impactam significativamente a qualidade de vida. Os tratamentos farmacológicos atuais, incluindo antagonistas dos receptores α-adrenérgicos e inibidores da 5α-redutase, estão associados a efeitos adversos, estimulando a exploração de terapias alternativas. Este estudo investiga o papel potencial de um novo fitocomplexo multicomponente (PhytoBPH-Mix) composto por Serenoa repens, Pygeum africanum, Urtica dioica, Epilobium angustifolium L., Protium heptaphyllum, licopeno, Vitamina E, zinco e selênio. Métodos: As propriedades anti-androgênicas, anti-inflamatórias e antimicrobianas da mistura foram avaliadas in vitro. Resultados: A formulação inibiu significativamente a atividade da 5α-redutase, reduziu a liberação de citocinas pró-inflamatórias (IL-6 e TNF-α) e exibiu efeitos antibacterianos contra E. coli em comparação com extratos individuais. Conclusões: Esses achados sugerem que esta mistura específica oferece uma alternativa natural promissora ou um adjuvante para o manejo da HPB, visando múltiplos mecanismos patológicos com efeitos colaterais mínimos, podendo também servir como um adjuvante eficaz na terapia convencional.
- Introdução
A próstata é um órgão urogenital masculino localizado abaixo da bexiga e circundando a uretra. Estruturalmente, consiste em tecidos fibromusculares e glandulares. O componente fibromuscular desempenha um papel crucial na compartimentalização de fluidos durante a micção e ejaculação, enquanto o tecido glandular exerce uma função reprodutiva ao produzir o fluido prostático. Esta secreção leitosa ligeiramente ácida (pH 6,5) nutre os espermatozoides e contém enzimas, íons (notadamente zinco e citrato) e antígeno prostático específico (PSA). O zinco e o citrato melhoram a motilidade dos espermatozoides, enquanto o PSA facilita o movimento dos espermatozoides ao liquefazer o coágulo espermático. A próstata é suscetível a uma variedade de distúrbios, incluindo aumento benigno, condições inflamatórias ou bacterianas (prostatite) e doenças oncológicas. Entre estes, a hiperplasia prostática benigna (HPB) é um crescimento excessivo não maligno do tecido prostático que afeta mais de 50% dos homens com 60 anos ou mais. Embora a HPB em si não seja intrinsecamente prejudicial, pode levar a sintomas do trato urinário inferior (STUI), como jato urinário fraco, intermitência, noctúria, urgência e esvaziamento incompleto da bexiga. Os mecanismos precisos subjacentes à HPB permanecem obscuros, embora vários fatores, incluindo envelhecimento, fatores de crescimento, interleucinas e hormônios sexuais, estejam implicados. Esses fatores convergem para a interação epitélio-estromal, inflamação crônica de baixo grau e sinalização androgênica desregulada, que juntos promovem remodelamento tecidual progressivo e hiperplasia. A prevalência de HPB aumenta com a idade, afetando 50–60% dos homens na faixa dos 60 anos e 80–90% dos homens acima de 70. O volume da próstata tem sido observado aumentar anualmente em 2–2,5%. Pesquisas de McDowell et al. revelaram que as células inflamatórias na próstata liberam fatores de crescimento e interleucinas, promovendo a proliferação de células epiteliais da próstata. A interleucina-17 (IL-17), detectada apenas em próstatas inflamadas ou afetadas por HPB, estimula a produção de IL-6 e IL-8, sustentando assim um microambiente pró-inflamatório que promove a proliferação epitelial e a ativação estromal. Hormônios como estrogênios e seus moduladores também contribuem para o crescimento e diferenciação da próstata, com níveis elevados de estradiol (E2) correlacionando-se com o aumento do volume prostático. Andrógenos, particularmente a testosterona e seu metabólito di-hidrotestosterona (DHT), são críticos para o desenvolvimento normal da próstata e desempenham um papel significativo na HPB.
A testosterona é convertida em DHT pela enzima 5α-redutase, particularmente a isoenzima tipo 2. A DHT é essencial para o crescimento da próstata adulta, e seus níveis elevados em tecidos com HBP levaram ao uso de inibidores da 5α-redutase, como finasterida e dutasterida, para aliviar os sintomas do trato urinário inferior (LUTS) e reduzir o tamanho da próstata e os níveis de PSA. No entanto, esses medicamentos frequentemente estão associados a efeitos adversos, incluindo diminuição da libido, redução do volume ejaculatório, impotência e ginecomastia devido à conversão da testosterona em estrogênio, o que limita a adesão a longo prazo e destaca a necessidade de alternativas mais seguras e com múltiplos alvos. Além disso, antagonistas dos receptores α-adrenérgicos, como tansulosina e silodosina, são utilizados para melhorar os sintomas urinários ao relaxar a musculatura lisa da próstata e do colo vesical, embora esses medicamentos possam causar efeitos colaterais como ejaculação retrógrada. A combinação dessas terapias, conforme recomendado pelas diretrizes do Medical Therapy of Prostatic Symptoms (MTOPS), pode exacerbar os efeitos colaterais, necessitando da exploração de tratamentos alternativos. Nos últimos anos, os fitoterápicos surgiram como potenciais alternativas devido aos seus mínimos efeitos colaterais. A Serenoa repens (saw palmetto), nativa das regiões costeiras dos EUA e partes tropicais das Américas, contém compostos bioativos como fitoesteróis e ácidos graxos. A Serenoa repens (comumente conhecida como saw palmetto) é uma pequena palmeira nativa do sudeste dos Estados Unidos. Na fitoterapia, o principal material vegetal utilizado é seu fruto maduro, do qual se obtém um extrato hexânico lipídico-esterólico. Este extrato, comercialmente conhecido como Permixon®, é amplamente utilizado no tratamento da HBP. A eficácia terapêutica deste extrato é atribuída à presença de compostos bioativos, incluindo fitoesteróis e ácidos graxos livres ou esterificados, que apresentam propriedades anti-inflamatórias e antiandrogênicas.
Extratos de CO2 supercrítico (SC-CO2) de serra palmetera demonstraram maior eficácia no alívio dos sintomas de HBP em comparação com extratos convencionais. Na Europa, Serenoa repens tem sido amplamente utilizada como opção fitoterápica de primeira linha para o manejo de SINTOMAS DO TRATO URINÁRIO INFERIOR (STUI) associados à HBP, devido ao seu perfil de segurança favorável e eficácia clínica no controle dos sintomas. Pygeum africanum, derivado da casca de Prunus africana, uma árvore nativa dos planaltos africanos, contém fitoesteróis, ácidos graxos e compostos triterpenoides. Suas propriedades farmacológicas incluem atividades anti-inflamatórias, antiproliferativas e antiandrogênicas, além da inibição da 5α-redutase. Urtica dioica (urtiga) contém lignanas que inibem a ligação de andrógenos aos receptores de hormônios sexuais, e ácidos como o ácido salicílico, com propriedades anti-inflamatórias. Além disso, seus polissacarídeos e lectinas bloqueiam o receptor do fator de crescimento epidérmico, limitando o crescimento prostático. Este extrato também inibe a aromatase, uma enzima que converte testosterona em estrogênio, abordando ainda mais a patologia da HBP. Epilobium, um gênero de plantas herbáceas, contém um fitocomplexo rico em flavonoides, ácidos fenólicos e taninos, como o oenothein B. Esses compostos possuem propriedades antioxidantes e antibacterianas, benéficas para o manejo de infecções do trato urinário e prostatites. Protium heptaphyllum, uma árvore da família Burseraceae, produz uma resina rica em triterpenos, notavelmente α e β-amirina, que exibem efeitos anti-inflamatórios ao inibir prostaglandinas e o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α). Revisões recentes destacaram a plausibilidade mecanicista, particularmente através da modulação da sinalização de NF-κB, inibição da 5α-redutase e atenuação das vias de estresse oxidativo, para o uso de compostos de origem vegetal na HBP, enfatizando seus efeitos anti-inflamatórios, antiandrogênicos e antioxidantes. Evidências de estudos em humanos e animais sugerem que o estresse oxidativo desempenha um papel fundamental no início da inflamação prostática. Níveis elevados de 8-OH desoxiguanosina, um marcador de dano oxidativo ao DNA, foram detectados em tecidos de HBP, correlacionando-se com o aumento do peso prostático e localizados predominantemente em células epiteliais. Em camundongos transgênicos que superexpressam Nox4 na próstata, o aumento do dano oxidativo foi associado a hiperplasia epitelial, espessamento estromal e fibrose, reforçando a ligação entre o desequilíbrio redox e os mecanismos inflamatórios subjacentes aos STUI. Nesse contexto, o estresse oxidativo foi identificado como um fator chave na patogênese da prostatite crônica e HBP, apoiando o uso terapêutico de antioxidantes como licopeno, vitamina E (α-tocoferol), zinco e selênio para mitigar danos oxidativos e potencializar os benefícios clínicos terapêuticos.
Este estudo investiga o papel potencial de uma combinação aditiva de extratos herbais naturais de Serenoa repens, Pygeum africanum, Urtica dioica, Epilobium, Protium heptaphyllum, acrescidos de licopeno derivado do tomate, Vitamina E, zinco e selênio, projetada para modular simultaneamente o metabolismo androgênico, a sinalização inflamatória, o estresse oxidativo e a carga microbiana no microambiente prostático, para o manejo da HBP. Ao aproveitar as diversas propriedades dessas substâncias bioativas, incluindo atividades anti-inflamatórias, antioxidantes, moduladoras de andrógenos e inibidoras da 5α-redutase, esta formulação oferece uma estratégia terapêutica alternativa promissora. A mistura não apenas tem potencial para abordar os principais mecanismos patológicos da HBP, mas também para minimizar os efeitos adversos comumente associados aos tratamentos convencionais, abrindo caminho para opções de manejo mais seguras e abrangentes. - Materiais e Métodos
Os extratos foram gentilmente doados pela Anvest Health s.r.l. (Castel San Giorgio, Itália). Especificamente, Serenoa repens (Bartram) Small, frutos maduros, com extrato lipido-esterólico (85–95% de ácidos graxos) obtido por extração com CO2 supercrítico; Prunus africana (Hook. f.) Kalkman (Pygeum), extrato da casca padronizado a 2,5% de β-sitosterol; Urtica dioica L. (Urtiga), extrato da raiz padronizado a 0,8% de β-sitosterol; Epilobium angustifolium L., partes aéreas; extrato com razão droga/extrato de 4:1; Protium heptaphyllum (Aubl.) Marchand, extrato da resina padronizado a 2,5% de α-/β-amirinas; Lycopersicon esculentum Mill. (Tomate), extrato do fruto padronizado a 18% de licopeno; Vitamina E, Zinco; Selênio. Todos os outros solventes e produtos químicos eram de grau analítico da Sigma-Aldrich (Milão, Itália).
Para experimentos in vitro, a formulação PhytoBPH-Mix foi ressuspendida em dimetilsulfóxido (DMSO) e diluída no meio de cultura apropriado, com uma concentração final de DMSO não excedendo 0,1% v/v para evitar efeitos citotóxicos.
2.1. Preparação do PhytoBPH-Mix
O PhytoBPH-Mix foi preparado utilizando um método de diluição geométrica. Especificamente, os componentes foram pesados de acordo com as quantidades relatadas na Tabela 1, em seguida, misturados gradual e homogeneamente usando um almofariz e pistilo para garantir distribuição uniforme dos ingredientes ativos. A Serenoa repens utilizada na formulação foi um extrato SC-CO2 contendo aproximadamente 90% de ácidos graxos totais livres e esterificados (fornecido pela Anvest Health s.r.l. Castel San Giorgio, Salerno, Itália). As proporções relativas dos componentes foram selecionadas para refletir a potência do extrato padronizado e as faixas de formulação comumente usadas em preparações experimentais e nutracêuticas.
2.2. Medição da Atividade Inibidora da 5-α-Redutase
A atividade de inibição do PhytoBPH-Mix sobre a 5α-redutase foi avaliada através de um método bioquímico. Células epiteliais prostáticas e fibroblastos prostáticos (4 × 10⁴ células por poço em placas de 24 poços) foram suspensas em um meio contendo 4 mM de tampão fosfato (pH 6,5 para 5α-redutase tipo 1 ou pH 5,0 para tipo 2) e 1,9 nCi de [4-¹⁴C] testosterona. A incubação com o extrato de Serenoa repens (10 µg/mL), Pygeum africanum (2,5 µg/mL) e a formulação contendo a mesma quantidade de extratos foi realizada por 30 min a 37 °C. As células foram ressuspensas em etanol para extrair a 5α-redutase, e sua atividade foi calculada a partir da porcentagem da extensão da conversão de [4-¹⁴C] testosterona em [4-¹⁴C] diidrotestosterona. O substrato marcado radioativamente [4-¹⁴C] testosterona utilizado no ensaio foi adquirido da PerkinElmer (Cat. No. NET370250UC; Waltham, MA, EUA). Todas as incubações foram realizadas utilizando células epiteliais e estromais prostáticas, conforme descrito abaixo. Células não tratadas foram utilizadas como controle.
2.3. Atividade Anti-Inflamatória
Para avaliar a atividade anti-inflamatória do PhytoBPH-Mix, as citocinas pró-inflamatórias IL-6 e o fator de necrose tumoral alfa TNF-α foram dosados em sobrenadantes livres de células utilizando kits comerciais de ensaio imunoenzimático (ELISA). Tanto células VCaP quanto linhagens celulares responsivas imunes (THP-1 e RAW 264.7) foram utilizadas em paralelo para avaliar a atividade anti-inflamatória. Os níveis de citocinas foram quantificados em sobrenadantes de ambos os modelos. O uso de células epiteliais prostáticas complementa os dados imunológicos e reflete mais de perto o contexto inflamatório da HBP. Para o ensaio, linhagens celulares responsivas imunes, como macrófagos murinos RAW 264.7 ou monócitos humanos THP-1, foram semeadas em placas de 96 poços a uma densidade de aproximadamente 1 × 10⁵ células por poço. Essas células foram então estimuladas com lipopolissacarídeo (LPS) para induzir uma resposta inflamatória robusta antes do tratamento com o PhytoBPH-Mix. O lipopolissacarídeo (LPS) de Escherichia coli O111:B4 (Sigma-Aldrich, Cat. No. L4391, Merck KGaA, Darmstadt, Alemanha) foi utilizado a uma concentração final de 1 µg/mL, dose suficiente para induzir uma resposta pró-inflamatória mensurável sem comprometer a viabilidade celular. Após a incubação, os sobrenadantes foram coletados e submetidos a ELISA para quantificação de citocinas. Kits de ELISA para IL-6 humana (R&D Systems, Cat. No. D6050) e TNF-α (R&D Systems, Cat. No. DTA00C) (Minneapolis, MN, EUA) foram utilizados de acordo com os protocolos do fabricante. As placas foram lidas usando um leitor de microplacas Bio-Rad iMark™ (Bio-Rad, Hercules, CA, EUA) a 450 nm com correção a 550 nm. Após a adição do substrato TMB (3,3′,5,5′-tetrametilbenzidina), a reação enzimática produziu uma mudança de cor, que foi interrompida com ácido sulfúrico ou clorídrico. O teste ELISA utilizou dois anticorpos e um sistema de detecção para identificar as citocinas acima em placas imunossorventes após leitura espectrofotométrica no comprimento de onda de 450 nm (corrigido para 550 nm). Células VCaP (células prostáticas imortalizadas) foram plaqueadas em multipoços e tratadas serialmente por 24 h com Serenoa repens, Pygeum africanum, Protium heptaphyllum e a formulação em uma faixa de concentração de 0,5–3,0 µg/mL. A faixa de concentração de 0,5–3,0 µg/mL foi selecionada com base na literatura indicando que extratos similares mantêm a viabilidade celular nessas doses. O potencial anti-inflamatório do PhytoBPH-Mix foi então avaliado com base em sua capacidade de reduzir significativamente esses níveis em comparação ao grupo controle apenas com LPS.
2.4. Atividade Antibacteriana: Ensaio de Cinética de Morte
Para avaliar a atividade antimicrobiana do PhytoBPH-Mix, foram realizados estudos de cinética de morte em E. coli (ATCC 15221) em cocultura com células VCaP (células prostáticas imortalizadas). A suspensão bacteriana (escala 0,5 McFarland) em MHB, correspondente a 1,5 × 10⁶ UFC/mL (unidade formadora de colônia por mL), foi preparada e incubada a 37 °C sob agitação constante. Em seguida, a suspensão bacteriana em cocultura com células VCaP (1 × 10⁵ células) foi inoculada em placas estéreis de 96 poços (200 µL/poço) e mantida a 37 °C durante a noite. Após isso, as suspensões bacterianas com células foram tratadas com uma solução de Epilobium a 0,7 mg/mL e a formulação contendo a mesma quantidade de Epilobium. Uma solução salina foi utilizada como controle positivo. Em pontos de tempo especificados (1, 3 e 7 dias), as contagens viáveis foram determinadas para contar UFC/mL por meio de diluições seriadas em MHA incubado a 37 °C. Caldo Mueller–Hinton (MHB) e ágar Mueller–Hinton (MHA) foram obtidos da Oxoid, Thermo Fisher Scientific (Basingstoke, Reino Unido). A cepa de E. coli utilizada no ensaio foi a ATCC 15221. Os gráficos foram obtidos, plotando o tempo contra o número de UFC recuperadas. Cada ensaio antimicrobiano foi realizado em triplicata em dias separados.
2.5. Condições de Cultura Celular
Todas as linhagens celulares utilizadas neste estudo foram adquiridas comercialmente e mantidas de acordo com protocolos padrão.
Para ser mais específico, para Células Epiteliais Prostáticas (PECs) e Fibroblastos Prostáticos (Células Estromais), células epiteliais prostáticas primárias humanas e fibroblastos estromais foram adquiridos da ScienCell Research Laboratories (Carlsbad, CA, EUA; Cat. Nos. 4410 e 4420, respectivamente). As células foram cultivadas em Meio para Células Epiteliais Prostáticas (PrEGM™, Lonza, Walkersville, MD, EUA) ou Meio para Fibroblastos (FM, ScienCell Carlsbad, CA, EUA), suplementado com 10% de soro fetal bovino (SFB), penicilina (100 U/mL) e estreptomicina (100 µg/mL), a 37 °C em atmosfera umidificada com 5% de CO₂.
No caso das células VCaP, a linhagem celular de câncer de próstata humano VCaP foi obtida da ATCC® (CRL-2876™). As células foram cultivadas em DMEM (Meio Eagle Modificado por Dulbecco, alta glicose, Thermo Fisher Scientific) suplementado com 10% de SFB, 1% de L-glutamina e antibióticos (100 U/mL de penicilina e 100 µg/mL de estreptomicina).
Quando as células RAW 264.7 foram utilizadas, as células de macrófago murino RAW 264.7 foram adquiridas da ATCC® (TIB-71™) e mantidas em meio RPMI-1640 (Gibco, Grand Island, N.Y.) suplementado com 10% de SFB e antibióticos.
No caso das células THP-1, as células monocíticas humanas THP-1 foram obtidas da ATCC® (TIB-202™, Manassas, VA, EUA). As células foram cultivadas em meio RPMI-1640 suplementado com 10% de SFB, 1 mM de piruvato de sódio, 0,05 mM de β-mercaptoetanol e antibióticos.
Todas as culturas celulares foram rotineiramente mantidas a 37 °C em uma incubadora com 5% de CO₂ e repicadas antes de atingir 80% de confluência. A contaminação por micoplasma foi verificada rotineiramente usando um kit de detecção baseado em PCR.
Em todos os experimentos, a mistura e os extratos de referência foram ressuspensos em dimetilsulfóxido (DMSO) e diluídos no meio de cultura correspondente. A concentração final de DMSO em todas as amostras tratadas não excedeu 0,1% v/v, um limiar conhecido por ser não citotóxico e comumente utilizado em ensaios baseados em células. Esta mesma concentração de DMSO (0,1% v/v) foi utilizada no grupo de controle veicular, que serviu como controle de solvente em todos os ensaios.
2.6. Análise Estatística
A análise estatística foi conduzida utilizando GraphPad Prism 10.1.0 (Boston, MA, EUA) foi utilizado para análise estatística. Especificamente, para o experimento que avalia a atividade anti-androgênica, as comparações foram realizadas usando múltiplos testes t não pareados, enquanto para os experimentos sobre a atividade da 5α-redutase tipo II em fibroblastos prostáticos com diferentes tipos de extratos de Serenoa repens comparados com PhytoBPH-Mix, o teste ANOVA unidirecional seguido pelo teste de comparações múltiplas de Dunnett. A análise de variância ANOVA bidirecional foi utilizada, e comparações múltiplas foram feitas pelos testes múltiplos de Tukey foram aplicados para os experimentos de atividade antimicrobiana contra E. coli. - Resultados
3.1. Atividade Anti-Androgênica
Como tanto a 5α-redutase tipo I quanto a tipo II são superexpressas no tecido da hiperplasia prostática benigna (HPB), uma nova formulação fitoterápica (PhytoBPH-Mix), contendo extratos de Serenoa repens e Pygeum africanum e outros, foi comparada a extratos vegetais isolados. Experimentos foram conduzidos em células epiteliais prostáticas e fibroblastos prostáticos para verificar a capacidade de inibir as enzimas. Essa capacidade foi avaliada como uma redução na quantidade de di-hidrotestosterona (DHT) convertida. Conforme relatado na Figura 1, tanto os extratos de Serenoa repens quanto de Pygeum africanum suprimiram significativamente a atividade da 5α-redutase. Esse efeito foi particularmente notável nas células epiteliais prostáticas, que expressam ambas as isoformas tipo I e tipo II (isoenzima predominante no tecido prostático adulto). Notavelmente, a mistura de extratos exibiu inibição superior de ambas as isoformas em comparação com os extratos isolados, sugerindo um mecanismo funcionalmente aditivo ou combinado, provavelmente devido a interações em múltiplos alvos em vias enzimáticas e mediadas por receptores distintas. A inibição dupla da 5α-redutase poderia levar a uma vantagem no tratamento da HPB, uma vez que foi demonstrado que inibidores duplos, como a dutasterida, são mais eficazes do que a inibição seletiva. Assim, devido ao seu amplo direcionamento enzimático, a formulação pode ser um candidato fitoterápico promissor para o manejo abrangente da HPB. A Serenoa repens, conhecida como saw palmetto, é amplamente utilizada como agente fitoterápico no tratamento da HPB, inibindo a 5α-redutase tipo I e II, bem como a proliferação de fibroblastos. Como os métodos de extração podem alterar os perfis lipídicos e de esteróis das preparações botânicas, afetando assim a eficácia biológica, neste trabalho foram avaliados vários extratos de Serenoa repens. A extração com Sc-CO₂ produziu um produto com aproximadamente 90% de ácidos graxos livres e esterificados, demonstrando inibição superior da 5α-redutase tipo II em comparação com extratos hidroalcoólicos (55% ou 90% de teor lipídico). A análise estatística confirmou que o extrato de Serenoa repens obtido por SC-CO₂ e a mistura correspondente PhytoBPH-Mix demonstraram inibição significativamente maior da 5α-redutase tipo II em comparação com os extratos hidroalcoólicos. Nenhuma diferença significativa foi observada na inibição da 5α-redutase tipo II entre os extratos hidroalcoólicos com diferentes teores de ácidos graxos (Figura 2). Esses achados estão alinhados com estudos anteriores que relatam uma inibição mais forte do tipo II para extratos de SC-CO₂ ricos em lipídios.
Esse efeito potencializado persistiu quando o extrato de Sc-CO₂ foi incorporado ao PhytoBPH-Mix, que demonstrou cerca de 15% mais eficácia na inibição da 5α-redutase tipo II em comparação com a formulação à base de extrato hidroalcoólico. Esses achados corroboram estudos anteriores que enfatizam a bioatividade superior do extrato de Serenoa repens obtido por CO₂. Além disso, o PhytoBPH-Mix, que também inclui Urtica dioica, apresentou atividade inibitória ainda mais forte do que qualquer extrato isolado, provavelmente devido a um efeito combinado entre Serenoa repens, Pygeum africanum e Urtica dioica. De fato, embora o mecanismo de ação específico ainda não esteja claro, ele pode envolver a inibição combinada da atividade catalítica da 5α-redutase, a redução da ativação do receptor androgênico e a modulação da disponibilidade intracelular de esteroides. A ação aditiva pode envolver fitoesteróis bioativos, como o β-sitosterol, que são conhecidos por modular o metabolismo androgênico e a sinalização inflamatória por meio da interferência na ligação ao receptor androgênico e da supressão da transcrição dependente de NF-κB. A inibição observada da 5α-redutase é maior com o PhytoBPH-Mix do que com os extratos individuais, refletindo provavelmente um efeito aditivo ou complementar dos componentes do PhytoBPH-Mix.
3.2. Atividade Anti-Inflamatória
Para avaliar os efeitos anti-inflamatórios, células VCaP (células prostáticas imortalizadas) foram tratadas com concentrações crescentes (0,5–3,0 µg/mL) de extratos vegetais individuais (Serenoa repens, Pygeum africanum, Protium heptaphyllum) e da combinação PhytoBPH-Mix. Essas concentrações foram selecionadas para manter a viabilidade celular e evitar efeitos confundidores relacionados à citotoxicidade ou respostas ao estresse não específicas, bem como artefatos físicos no meio de cultura. Conforme relatado na Figura 3, todos os extratos diminuíram significativamente a secreção de IL-6 e TNF-α. Na concentração mais baixa testada (0,5 µg/mL), as reduções no TNF-α não foram estatisticamente significativas para alguns extratos individuais, enquanto a mistura demonstrou a supressão mais potente e dependente da dose da atividade inflamatória em todas as concentrações testadas. Conforme relatado na literatura, Serenoa repens reduz a expressão de vários mediadores inflamatórios e inibe vias de sinalização upstream, como NF-κB e MAPK. Além disso, os componentes selênio e licopeno, conhecidos por sinergizar com Serenoa repens, podem suprimir ainda mais as cascatas inflamatórias ao eliminar espécies reativas de oxigênio e reduzir a ativação redox-dependente de fatores de transcrição inflamatórios. Além disso, a coadministração de Serenoa repens e Urtica dioica demonstrou reduzir a produção de IL-6 e inibir a translocação nuclear de NF-κB. Com base nesses dados, o PhytoBPH-Mix pode exercer um mecanismo de ação semelhante ao dos componentes isolados, embora essa hipótese deva ser confirmada por estudos experimentais futuros.
3.3. Atividade Antimicrobiana
Considerando a ocorrência frequente de inflamação bacteriana crônica na histopatologia da HBP, foi realizado um ensaio de curva de morte bacteriana contra E. coli para avaliar a atividade antimicrobiana do PhytoBPH-Mix. O ensaio de curva de morte contra E. coli foi conduzido na presença de células epiteliais prostáticas VCaP para reproduzir um ambiente mais fisiologicamente relevante, levando em conta as interações hospedeiro-patógeno que podem influenciar a sobrevivência bacteriana e a eficácia antimicrobiana, refletindo a interação entre bactérias e tecido prostático frequentemente observada na HBP com inflamação bacteriana crônica. A atividade do PhytoBPH-Mix foi comparada com uma dose equivalente (0,7 mg/mL) do extrato isolado de Epilobium. O Epilobium foi utilizado como referência devido à sua atividade antimicrobiana bem documentada, particularmente contra Escherichia coli, um patógeno-chave na inflamação prostática crônica e infecções do trato urinário, para avaliar a capacidade da mistura completa de exercer um efeito antibacteriano mais amplo ou aditivo. Conforme mostrado na Figura 4, a nova mistura reduziu a viabilidade de E. coli mais rapidamente do que o Epilobium isolado, indicando um efeito antimicrobiano mais forte sob as condições experimentais. Especificamente, o PhytoBPH-Mix foi capaz de superar a mesma dose do extrato de Epilobium isolado em 40% nos dias 1 e 3, e em 25% no dia 7. Esses achados sugerem um efeito antibacteriano cumulativo e de amplo espectro, provavelmente devido aos constituintes fenólicos presentes no Epilobium e em outros extratos vegetais, potencializados pelo fitocomplexo completo presente na mistura. Polifenóis como os elagitaninos rompem as membranas bacterianas, levando ao estresse oxidativo intracelular e citotoxicidade. A eficácia observada do PhytoBPH-Mix aponta, portanto, para uma nova estratégia integrativa que combina atividades antiandrogênicas, anti-inflamatórias e antimicrobianas, abordando simultaneamente múltiplas vias fisiopatológicas da HBP. - Discussão
Este estudo investigou as atividades antiandrogênica, anti-inflamatória e antimicrobiana da mistura multicomponente, que contém extratos bem caracterizados de Serenoa repens (extrato de CO₂ supercrítico), Pygeum africanum, Epilobium, selênio, licopeno e outros botânicos. A formulação foi projetada para integrar ingredientes com propriedades complementares relevantes para a HBP e associadas aos SLUTS, atuando na modulação de múltiplas vias relacionadas à HBP em um único fitocomplexo. Nos ensaios antiandrogênicos, tanto o PhytoBPH-Mix quanto o extrato de CO₂-SC de Serenoa repens mostraram inibição significativamente maior da 5α-redutase tipo II em comparação com extratos hidroalcoólicos, confirmando relatos anteriores de que extratos ricos em lipídios são particularmente eficazes na modulação do metabolismo androgênico. Nenhuma diferença significativa foi detectada para a inibição do tipo I, sugerindo que o enriquecimento com ácidos graxos impacta principalmente a atividade do tipo II. Os resultados refletem efeitos aditivos, com a possibilidade de sinergia limitada em alvos moleculares específicos. Isso reforça o valor da combinação de extratos de alta qualidade em uma única mistura. Nos modelos anti-inflamatórios, realizados tanto em células epiteliais prostáticas (VCaP) quanto em células imunorresponsivas (THP-1 e RAW 264.7), o PhytoBPH-Mix reduziu a liberação de IL-6 e TNF-α induzida por LPS de maneira dependente da concentração. Os experimentos conduzidos em THP-1 e RAW 264.7 foram exploratórios e, portanto, não foram incluídos no conjunto de dados quantitativos, mas foram utilizados para confirmar a responsividade da mistura em modelos imunocompetentes. As reduções foram geralmente maiores do que com os extratos individuais testados, destacando o potencial da combinação de fitoconstituintes como ácidos graxos, fitoesteróis e polifenóis presentes em todos os componentes botânicos para atingir a inflamação por meio de mecanismos complementares, alcançando uma cobertura mais ampla de vias do que as abordagens com um único agente. O selênio e o licopeno, incluídos por seus papéis documentados como antioxidantes e anti-inflamatórios, podem potencializar ainda mais esses efeitos. O ensaio de morte microbiana ao longo do tempo contra E. coli revelou um efeito mais rápido e pronunciado para a mistura do que para o Epilobium isoladamente em concentrações equivalentes. O Epilobium foi escolhido como comparador devido às suas propriedades antibacterianas conhecidas, permitindo avaliar o benefício adicional proporcionado pela formulação completa.
A realização do ensaio na presença de células VCaP criou um modelo mais próximo do microambiente prostático, capturando interações hospedeiro-patógeno que podem influenciar a eficácia antimicrobiana in vivo. Embora as propriedades individuais dos extratos botânicos e suplementos aqui utilizados sejam bem documentadas, a novidade deste trabalho reside na sua combinação específica dentro do PhytoBPH-Mix. De fato, ele integra componentes com perfis farmacológicos complementares, potencialmente produzindo efeitos aditivos. Dado que os extratos vegetais contêm naturalmente uma rica variedade de moléculas bioativas, suas ações biológicas são provavelmente multifatoriais, envolvendo vias endócrinas, imunes, oxidativas e microbianas. Espera-se que a biodisponibilidade dos principais constituintes do PhytoBPH-Mix varie, conforme relatado para fitocomplexos semelhantes, e isso pode moldar sua atividade clínica geral. A extrapolação direta entre concentrações in vitro e níveis plasmáticos humanos é inerentemente limitada, particularmente para formulações fitoterápicas complexas. No entanto, a exposição plasmática não reflete necessariamente a disponibilidade no tecido prostático. Vários constituintes do PhytoBPH-Mix, incluindo ácidos graxos, fitoesteróis, triterpenos e licopeno, são altamente lipofílicos e demonstraram acumular-se no tecido prostático em níveis que excedem as concentrações plasmáticas. A faixa de µg/mL aqui utilizada é consistente com estudos mecanicistas in vitro sobre fitocompostos individuais relacionados à HPB e foi selecionada para avaliar a modulação do alvo, em vez da exposição sistêmica. Os presentes resultados sugerem que a formulação tem o potencial de abordar múltiplos alvos mecanicistas na HPB, incluindo a conversão de andrógenos, a produção de citocinas inflamatórias, o estresse oxidativo e a persistência bacteriana. Embora esses modelos sejam apropriados para investigações mecanicistas, a validação in vivo será necessária para confirmar esses resultados. Pesquisas futuras, expandindo-se para a caracterização fitoquímica, farmacologia comparativa e avaliação clínica, definirão ainda mais seu papel ao lado das estratégias terapêuticas estabelecidas. - Conclusões
Este estudo demonstra a eficácia pré-clínica de uma nova formulação fitocomplexa multicomponente (PhytoBPH-Mix), combinando Serenoa repens, Pygeum africanum, Urtica dioica, Epilobium e Protium heptaphyllum, juntamente com cofatores antioxidantes-chave (licopeno, selênio, zinco e vitamina E). A lógica do PhytoBPH-Mix reside na cobertura de vias, apoiando uma estratégia multialvo alinhada à fisiopatologia multifatorial da HBP. A mistura mostrou inibir simultaneamente ambas as isoformas da 5α-redutase, alcançando reduções de até 35–40% na conversão de DHT. Além disso, o PhytoBPH-Mix atenuou significativamente a liberação de citocinas inflamatórias (IL-6 em 45% e TNF-α em 50%) em linhagens celulares de próstata e exibiu um efeito antimicrobiano dependente do tempo contra E. coli, superando a atividade de controles de extrato único. Esses efeitos se devem à contribuição de diferentes fitocomponentes, provavelmente mediada pela modulação da sinalização androgênica, respostas inflamatórias e crescimento microbiano por meio de vias complementares envolvidas na HBP. Importante, este é o primeiro relato integrado a mostrar a inibição simultânea da 5α-redutase, modulação de citocinas inflamatórias e supressão microbiana por uma mistura fitocomplexa específica in vitro. Em resumo, o PhytoBPH-Mix demonstrou atividades antiandrogênicas, anti-inflamatórias e antimicrobianas in vitro, consistentes com as contribuições complementares de seus componentes botânicos e suplementares. Esses achados fornecem uma base preliminar para futuras investigações por meio de ensaios clínicos controlados para validar sua eficácia, dosagem ideal e perfil de segurança. Se confirmado in vivo, essa mistura poderá representar uma alternativa segura e eficaz ou adjuvante à farmacoterapia convencional no manejo da HBP, potencialmente minimizando os efeitos adversos associados aos α-bloqueadores e inibidores sintéticos da 5α-redutase.
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Contribuições dos Autores
Conceitualização, P.D.G.; metodologia, L.L. e G.F.; validação, C.A., M.R.S. e C.D.S.; investigação, C.A. e C.D.S.; redação—preparação do rascunho original, G.L. e P.D.G.; revisão e edição, L.L. Todos os autores leram e concordaram com a versão publicada do manuscrito.
Declaração do Comitê de Revisão Institucional
Não aplicável.
Declaração de Consentimento Informado
Não aplicável.
Declaração de Disponibilidade de Dados
Os dados apresentados neste estudo estão disponíveis mediante solicitação ao autor correspondente.
Conflitos de Interesse
Os autores declaram que dois autores (L.L. e G.L.) são funcionários da Anvest Health s.r.l., que forneceu as matérias-primas botânicas utilizadas neste estudo. A empresa não teve nenhum papel na execução do estudo, na análise dos dados ou na interpretação dos resultados. Todo o trabalho experimental e a avaliação dos dados foram conduzidos de forma independente na Universidade de Salerno.
Referências
O papel do receptor de andrógeno no desenvolvimento da próstata e na hiperplasia prostática benigna: uma revisão
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Atividade antimicrobiana de polifenóis e extratos polifenólicos naturais em isolados clínicos
Efeito do tratamento com extratos de Serenoa repens, Pygeum africanum e PhytoBPH-Mix na atividade da 5α-redutase tipo I em células epiteliais prostáticas (a) e na 5α-redutase tipo II em células fibroblásticas prostáticas (b), avaliada como redução na quantidade de diidrocortisona (DHT) convertida. Os dados são expressos como média ± DP; n = 6. ****; *** denota p < 0,0001 e p < 0,001.
Efeito do tratamento com diferentes tipos de extratos de Serenoa repens em comparação com PhytoBPH-Mix (10 µg/mL) na atividade da 5α-redutase tipo II em fibroblastos prostáticos, avaliado como uma redução na quantidade de diidrocortisona (DHT) convertida. Foram testados extratos hidroalcoólicos de Serenoa repens (55% e 90% de ácidos graxos livres e esterificados), extrato de Serenoa repens em CO2 supercrítico (90% de ácidos graxos livres e esterificados), PhytoBPH-Mix_55 e PhytoBPH-Mix_90 contendo extratos hidroalcoólicos de Serenoa repens (55% e 90% de ácidos graxos livres e esterificados) e PhytoBPH-Mix_SC-CO2 contendo extrato de Serenoa repens em CO2 supercrítico (90% de ácidos graxos livres e esterificados). Os dados são expressos como média ± DP; n = 6; as comparações foram realizadas usando ANOVA de uma via, e os testes de comparações múltiplas foram feitos pelo teste de Dunnett, **** denota p < 0,0001).
Níveis de IL-6 (a) e TNF-α (b) após tratamento de células VCaP com os extratos individuais, Serenoa repens SC-CO2, Pygeum africanum, Protium heptaphyllum e PhytoBPH-Mix. A linha tracejada representa os níveis basais. As concentrações dos produtos individuais testados estão nas abscissas e as citocinas nas ordenadas.
Atividade antimicrobiana contra E. coli avaliada por um ensaio de tempo de morte em 1, 3 e 7 dias de incubação. O tratamento com PhytoBPH-Mix foi comparado com Epilobium e uma solução salina, e DMSO (0,1% v/v) foi usado como controle. O eixo x representa UFC ou unidades formadoras de colônias. Os dados são expressos como média ± DP e são representativos de pelo menos seis experimentos independentes; as comparações foram realizadas usando uma análise de variância Two-way ANOVA e as comparações múltiplas foram feitas pelos testes múltiplos de Tukey. ***, **, * denotam p < 0,001, p < 0,01 e p < 0,05, respectivamente, Epilobium vs. controle, e PhytoBPH-Mix vs. Controle.
Composição dos pós.
Componente Quantidade (mg) Serenoa repens 400 Pygeum africanum 100 Urtica dioica 80 Epilobium angustifolium L. 50 Protium heptaphyllum 50 Tomate 18,5 Zinco 12,5 Vitamina E 10 Selênio 0,042