pmid: "37108584"
title: "Efeito do Resveratrol em Marcadores de Estresse Oxidativo e Sirtuína 1 em Adultos Idosos com Diabetes Tipo 2."
authors: "García-Martínez BI, Ruiz-Ramos M, Pedraza-Chaverri J, Santiago-Osorio E, Mendoza-Núñez VM"
journal: "International journal of molecular sciences"
pubdate: "2023 Apr 18"
doi: "10.3390/ijms24087422"
source: "PMC Full Text"

Efeito do Resveratrol em Marcadores de Estresse Oxidativo e Sirtuína 1 em Adultos Idosos com Diabetes Tipo 2.

Autores

García-Martínez BI, Ruiz-Ramos M, Pedraza-Chaverri J, Santiago-Osorio E, Mendoza-Núñez VM

Periodico

International journal of molecular sciences (2023 Apr 18)

Conteudo

Efeito do Resveratrol nos Marcadores de Estresse Oxidativo e Sirtuína 1 em Idosos com Diabetes Tipo 2
O diabetes tipo 2 (DT2) afeta grande parte da população adulta e compromete sua qualidade de vida. Por isso, compostos naturais com propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias e hipoglicemiantes têm sido utilizados como adjuvantes. Entre esses compostos, destaca-se o resveratrol (RV), um polifenol que tem sido estudado em diversos ensaios clínicos, cujos resultados são controversos. Realizamos um ensaio clínico randomizado com 97 idosos com DT2 para avaliar o efeito do RV sobre marcadores de estresse oxidativo e sirtuína 1, utilizando doses de 1000 mg/dia (GE1000, n = 37) e 500 mg/dia (GE500, n = 32) em comparação com um placebo (GP, n = 28). Marcadores bioquímicos, de estresse oxidativo e níveis de sirtuína 1 foram medidos no início e após seis meses. Observamos um aumento estatisticamente significativo (p < 0,05) na capacidade antioxidante total, no gap antioxidante, na porcentagem de indivíduos sem estresse oxidante e nos níveis de sirtuína 1 no GE1000. No GP, observamos um aumento significativo (p < 0,05) nos níveis de lipoperóxidos, isoprostanos e proteína C reativa. Também foi observado um aumento no escore de estresse oxidativo e na porcentagem de indivíduos com estresse oxidativo leve e moderado. Nossos achados sugerem que 1000 mg/dia de RV exerce um efeito antioxidante mais eficiente do que 500 mg/dia.

1. Introdução
   O diabetes tipo 2 (DT2) é uma doença metabólica e crônica que surge devido à ineficiência do organismo no uso e/ou produção de insulina, hormônio envolvido no metabolismo da glicose, o que desencadeia hiperglicemia. O DT2 é um problema de saúde pública no mundo. Nesse sentido, estima-se uma prevalência de 10,5% (536,6 milhões de pessoas), projetando um aumento para 12,2% (783,2 milhões) até 2045 na população de 20 a 79 anos, sendo significativamente maior em idosos. Isso é preocupante, pois, a longo prazo, a hiperglicemia dá origem ao aparecimento de complicações micro e macrovasculares que afetam a funcionalidade de órgãos como olhos, rins e coração, o que impacta negativamente a qualidade de vida das pessoas com DT2, além de representar um enorme ônus para o sistema de saúde. Foi demonstrado que a hiperglicemia que caracteriza o DT2 é parcialmente responsável pela produção excessiva de radicais livres (RL) e/ou espécies reativas de oxigênio (ERO), que causam danos oxidativos às biomoléculas, uma vez que o excesso de glicose no sangue se auto-oxida e gera ERO; portanto, se não forem neutralizadas pelos sistemas antioxidantes, alteram a fisiologia das células, cujo distúrbio bioquímico é definido como estresse oxidativo (EO). O excesso de ERO interfere na condução nervosa e altera a funcionalidade das células renais, favorecendo o aparecimento de neuropatia e nefropatia, complicações altamente recorrentes no DT2. Além disso, a produção e o acúmulo elevados de ERO também ocorrem durante o processo de envelhecimento, razão pela qual os níveis de EO são significativamente maiores em idosos com DT2.
   Nesse contexto, opções terapêuticas alternativas têm sido propostas para atenuar o dano oxidativo e, assim, retardar o início das complicações do DM2. Nesse sentido, um dos mais amplamente utilizados é o resveratrol (RV), um composto da família dos estilbenos que, devido à sua natureza polifenólica, é capaz de doar elétrons para FR e ROS, razão pela qual é considerado um poderoso antioxidante. A esse respeito, várias investigações mostraram que o RV pode ser útil no tratamento de doenças crônicas não transmissíveis, cuja fisiopatologia envolve OS e inflamação, como ocorre com doenças neurodegenerativas, cardiovasculares e metabólicas, uma vez que também possui propriedades anti-inflamatórias. Os mecanismos terapêuticos do RV são amplamente atribuídos à sua capacidade de ativar a sirtuína 1 (SIRT1), uma enzima desacetilase que, uma vez ativada, estimula a proteína quinase ativada por AMP (AMPK) e é a interação entre ambas as proteínas que consegue melhorar a biogênese e a função mitocondrial, aumentar a sensibilidade à insulina, atenuar o dano oxidativo e regular a homeostase metabólica. Em alguns estudos, realizados em modelos animais com DM2, foi demonstrado que o RV exerce efeitos antioxidantes, anti-inflamatórios e até hipoglicêmicos; no entanto, ensaios clínicos mostraram resultados controversos. Tais discrepâncias foram atribuídas a diferenças na idade e nas condições de saúde dos participantes, na duração das intervenções e nas doses utilizadas, que variam de 10 mg/dia a 3000 mg/dia. Nesse sentido, em uma revisão sistemática e meta-análise realizada por nosso grupo de pesquisa, constatamos que doses superiores a 100 mg/dia têm efeito hipoglicêmico, embora esse efeito seja maior com doses de 500–1000 mg/dia. Isso sugere que as propriedades terapêuticas do RV ocorrem de forma dose-dependente, portanto o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração oral de RV na dose de 500 mg/dia em comparação com 1000 mg/dia sobre marcadores de SIRT1 e SIRT1 em idosos com DM2.

2. Resultados

A Figura 1 apresenta o esquema geral do estudo.

2.1. Parâmetros Clínicos (IMC e Pressão Arterial)

A Tabela 1 apresenta os dados sobre as características clínicas e antropométricas dos três grupos de estudo. Não foram observadas diferenças entre os grupos ao final do acompanhamento de 6 meses.

2.2. Parâmetros Bioquímicos

Em relação aos parâmetros bioquímicos, foi observada uma diminuição estatisticamente significativa (p < 0,05) nos níveis de triglicerídeos no EG1000 após a intervenção (basal, 170 ± 69 vs. seis meses, 147 ± 46 mg/dL). Da mesma forma, foi encontrado um aumento significativo (p < 0,05) nos valores de PCR no PG após 6 meses de acompanhamento (basal, 0,37 ± 0,4 vs. seis meses, 0,48 ± 0,5 mg/dL); como pode ser visto na Tabela 2, nenhuma alteração foi observada no restante dos parâmetros bioquímicos avaliados.

2.3. Marcadores de OS
Um aumento estatisticamente significativo (p < 0,05) foi encontrado na concentração de lipoperóxidos e 8-isoprostanos no GP após a intervenção (LPO: basal, 0,219 ± 0,07 vs. seis meses, 0,282 ± 0,07 µmol/L; 8-Iso: basal, 61 ± 24 vs. seis meses, 76 ± 35 pg/mL). Também observamos um aumento significativo (p < 0,05) na CAT e no GAP no EG1000 após o tratamento com RV (CAT: basal, 1003 ± 247 vs. seis meses, 1225 ± 249 µmol/L; GAP: basal 283 ± 242 vs. seis meses, 434 ± 234). Da mesma forma, a atividade da SOD diminuiu no GP (basal, 171 ± 15 vs. seis meses, 167 ± 10 UI/L; p < 0,05). Um aumento estatisticamente significativo no escore de estresse oxidativo (EEO) também foi encontrado (basal, 1,9 ± 1 vs. seis meses, 2,8 ± 1; p < 0,05). O restante dos marcadores avaliados não apresentou alterações significativas após seis meses (Tabela 3).

Em relação ao índice de EO (IEO), foi encontrado um aumento na porcentagem de indivíduos sem EO no EG1000 (basal, 13 vs. seis meses, 35%; p < 0,05). Da mesma forma, as porcentagens de EO moderado (EOM) e EO grave (EOG) diminuíram (EOM: basal, 27 vs. seis meses, 13%; EOG: basal, 22 vs. seis meses, 83%; p < 0,05) após a intervenção. No EG500, foi encontrado um aumento significativo (p < 0,05) na porcentagem de indivíduos sem EO (basal, 10 vs. seis meses, 28%). No GP, observamos uma diminuição significativa na porcentagem de indivíduos sem EO (basal, 21 vs. seis meses, 7%; p < 0,05) e em indivíduos com EO leve (basal, 43 vs. seis meses, 29%; p < 0,05), enquanto a porcentagem de indivíduos com EO moderado aumentou após a intervenção (basal, 29 vs. seis meses, 54%; p < 0,05), conforme visto na Tabela 4.
2.4. Concentração de SIRT1
Em relação à concentração de SIRT1, observamos um aumento estatisticamente significativo no EG1000 (basal, 1,5 ± 1 vs. seis meses, 3,1 ± 2 ng/mL; p < 0,05) após seis meses de acompanhamento, conforme mostrado na Figura 2.
2.5. Eventos Adversos
Nenhum dos participantes relatou eventos adversos atribuíveis à administração de RV.
3. Discussão
Nas últimas décadas, o RV tem sido um dos nutracêuticos mais estudados em diversos grupos de pesquisa. Nesse sentido, em alguns experimentos realizados in vitro e em modelos animais, foram demonstrados seus efeitos antioxidante, anti-inflamatório, hipoglicêmico, neuroprotetor, antienvelhecimento e até antineoplásico, razão pela qual é reconhecido como um produto de origem natural com grande potencial como agente terapêutico para doenças cardiovasculares, neurodegenerativas e metabólicas, entre as quais se destaca o DM2, cuja prevalência, incidência e letalidade têm implicações familiares, sociais e econômicas. O DM2 representa um grande ônus para os sistemas de saúde devido à sua alta frequência de complicações, o que aumenta a necessidade de atendimento hospitalar e afeta gravemente os recursos das pessoas com diabetes e suas famílias, além de deteriorar sua qualidade de vida. Apesar dos esforços da comunidade médica com os tratamentos convencionais, não foi possível reduzir a prevalência e a incidência do DM2 nem o desenvolvimento de complicações micro e macrovasculares em indivíduos diabéticos, razão pela qual tratamentos antioxidantes e anti-inflamatórios complementares têm sido propostos. A esse respeito, embora esses efeitos do RV tenham sido demonstrados em modelos animais com diabetes induzida, as evidências em ensaios clínicos mostram resultados inconsistentes, de modo que a pesquisa sobre os potenciais efeitos benéficos do RV em humanos é um tópico relevante e atual.

Por outro lado, também foi proposto que o RV poderia exercer um efeito hipotensor devido à sua capacidade de induzir a produção de óxido nítrico (NO), um potente vasodilatador produzido no endotélio vascular. No entanto, esse efeito só foi observado em pessoas hipertensas. De acordo com o exposto, em nosso ensaio clínico, não observamos tal efeito, o que sugere que o RV poderia ter um efeito modulador específico que responde a valores elevados de pressão arterial. Também foi relatado que o RV estimula o coativador do receptor gama-1α, ativado por proliferadores peroxissomais (PGC-1α), um fator de transcrição que regula genes que modulam o armazenamento de gordura corporal; assim, por meio dessa via, poderia induzir perda de peso e diminuir o IMC. Esse efeito foi observado em estudos realizados com indivíduos com obesidade (IMC > 30 kg/m²); no entanto, em nosso estudo, não foi observada diminuição do IMC porque nossa população não apresentava obesidade. Portanto, esse resultado também sugere um efeito modulador específico do RV na lipólise, semelhante ao observado na pressão arterial.
Em relação ao efeito do RV sobre o controle do DM2, foi demonstrado que o RV reduz os níveis de glicose no sangue devido ao aumento da expressão do transportador de glicose (GLUT4) nas células musculares esqueléticas, melhorando sua captação, uso e armazenamento. Também foi proposto que o RV protege as células das ilhotas de Langerhans do dano oxidativo, aumenta sua viabilidade, restaura as funções secretoras das células β e normaliza a secreção de insulina, o que gradualmente restaura a via de sinalização da insulina e contribui para o controle glicêmico. Nesse sentido, em alguns ensaios clínicos, foi relatado que, com doses entre 200 e 1000 mg/dia de RV, os níveis de glicose, insulina, HbA1c e resistência à insulina são reduzidos em indivíduos com DM2 com menos de 50 anos. Da mesma forma, em dois ensaios clínicos randomizados duplo-cegos controlados por placebo realizados em indivíduos com mais de 60 anos, usando doses de 500 e 800 mg/dia, respectivamente, um efeito hipoglicemiante foi demonstrado após 4 e 8 meses de tratamento. Esse efeito em idosos tem sido consistente, conforme relatado nas metanálises publicadas por Hausenblas et al. (2014) e Liu et al. (2014). Em contraste, em nosso estudo, não observamos alterações significativas nos níveis de glicose e HbA1c após 6 meses de tratamento, resultados que coincidem com o relatado em dois ensaios clínicos randomizados duplo-cegos, nos quais doses de 150 mg/dia de RV foram administradas por 30 dias em indivíduos com DM2 com menos de 50 anos. Esses resultados podem ser devidos à dose e à duração das intervenções, que podem ser insuficientes para observar os efeitos hipoglicemiantes do RV. Os resultados do nosso ensaio clínico também coincidem com os obtidos em dois ensaios clínicos randomizados duplo-cegos nos quais doses de 500 e 1000 mg/dia de RV foram administradas por 6 meses e 5 semanas, respectivamente, ambos em indivíduos com mais de 60 anos, nos quais não foram encontradas alterações significativas na sensibilidade à insulina, controle glicêmico, níveis de glicose ou HbA1c. Da mesma forma, na metanálise conduzida por Jeyaraman et al. (2020), eles também não encontraram efeito hipoglicemiante em indivíduos com 60 anos ou mais. Os achados dos estudos mencionados concordam com o observado em uma revisão sistemática e metanálise realizada pelo nosso grupo de pesquisa, na qual se constatou que os efeitos do RV são notavelmente menores em pessoas com mais de 60 anos em comparação com pessoas mais jovens, uma vez que, paralelamente à baixa biodisponibilidade do RV, adultos com mais de 60 anos apresentam problemas de absorção em nível intestinal e têm capacidade reduzida de metabolizar o RV, além do EO relacionado ao envelhecimento, razão pela qual foi sugerido que doses elevadas e intervenções de maior duração (6 meses ou mais) sejam utilizadas nessa faixa etária.
Em relação ao efeito hipolipemiante, observamos uma diminuição estatisticamente significativa na concentração sérica de triglicerídeos no EG1000, o que pode ser atribuído à capacidade do RV de diminuir a absorção de ácidos graxos e a lipogênese de novo, além de aumentar a mobilização de gordura e induzir a β-oxidação de ácidos graxos. Esse efeito hipolipemiante é consistente com o observado na metanálise realizada por Cao et al. (2022), que constataram que a administração oral de RV reduz significativamente os níveis séricos de triglicerídeos.

No presente estudo, também foi observado um aumento significativo na PCR no PG após o acompanhamento, o que pode ser devido à inflamação crônica de baixo grau decorrente da hiperglicemia que caracteriza o DM2. Nesse sentido, foi demonstrado que a hiperglicemia promove a formação excessiva de produtos finais de glicação avançada (AGEs), e estes ativam o fator nuclear κB (NFκB), que desencadeia a transcrição de genes promotores de citocinas pró-inflamatórias e, por sua vez, estas estimulam a produção de PCR no fígado, razão pela qual a proteína está elevada em indivíduos com DM2, como observado no PG. Em contraste, no EG1000, não foram observadas alterações significativas após a administração de RV, uma vez que este é capaz de bloquear a ativação do NFκB e prevenir o aumento da produção de PCR.
Em relação aos marcadores de OE, foi demonstrado que o RV exerce efeitos antioxidantes por meio de dois mecanismos: (i) por meio da interação direta com RL e EROs e (ii) por meio de sua capacidade de aumentar a atividade de enzimas antioxidantes. Nesse sentido, o primeiro mecanismo se deve à natureza polifenólica do RV, principalmente ao grupo hidroxila livre na posição 4, uma vez que a extração de seu hidrogênio permite a mobilização de elétrons por toda a estrutura química do RV e confere a ele características redox, que permitem sua interação com FR e EROs, tornando-o um excelente sequestrador de hidroxila, peróxido e superóxido; como consequência dessa atividade, pode minimizar ou prevenir a oxidação de ácidos graxos poli-insaturados que são abundantes nas membranas celulares, protegendo-as do dano oxidativo. Em consonância com isso, os resultados de dois ensaios clínicos randomizados duplo-cegos encontraram uma diminuição significativa nos níveis de malondialdeído (MDA), um biomarcador direto de peroxidação lipídica em membranas, com doses de 200 e 500 mg/dia de RV em indivíduos com DM2. Em nosso ensaio clínico, observamos uma diminuição estatisticamente significativa nos níveis de LPO (MDA) no EG1000 e um aumento no mesmo marcador no GP, o que é consistente com o efeito antioxidante do RV relatado em outros estudos. Da mesma forma, observamos um aumento significativo na concentração de 8-isoprostano (8-Iso) no GP e uma diminuição significativa no EG1000, demonstrando o efeito antioxidante do RV; o 8-Iso é formado como um produto secundário da peroxidação lipídica, cuja molécula é semelhante em estrutura às prostaglandinas e é atualmente considerado o padrão-ouro para medir o dano oxidativo às membranas, o que está de acordo com os resultados observados no GP. O segundo mecanismo do RV é por meio do aumento da atividade de enzimas antioxidantes (SOD, GPx, Cat), responsáveis por eliminar o excesso de FR e EROs para prevenir o dano oxidativo. Essas três enzimas trabalham juntas para proteger as células das EROs. Primeiro, a SOD dismuta o ânion superóxido em peróxido de hidrogênio e, posteriormente, a GPx e a Cat o degradam em oxigênio e água. Esse efeito é alcançado por meio de sua interação com o fator nuclear eritroide 2 (Nrf2), um fator de transcrição que modula a expressão de genes que contêm elementos de resposta antioxidante (AREs). A ativação da via Nrf2/ARE promove a expressão de genes antioxidantes e estimula a produção das enzimas SOD, GPx e Cat, cuja função é eliminar as EROs.
Nesse sentido, observou-se que o RV ativa o Nrf2 por meio da ativação da AMPK, que, por sua vez, estimula a via Nrf2/ARE e, como resultado, aumenta a produção de enzimas antioxidantes. Em nosso estudo, encontramos um aumento não significativo na atividade da SOD no EG1000 e uma diminuição estatisticamente significativa no PG, o que está de acordo com o exposto acima, bem como com os resultados de dois ensaios clínicos randomizados duplo-cegos nos quais foi observado um aumento na atividade da SOD com tratamentos com RV nas doses de 500 e 800 mg/dia, e uma diminuição na atividade da enzima foi observada nos grupos tratados com placebo. Os autores desses estudos também relataram que a TAC foi elevada após a administração de RV, como ocorreu no EG1000 do nosso ensaio clínico. Além disso, observamos que, após o acompanhamento, a lacuna antioxidante (GAP) aumentou no EG1000. O GAP é um cálculo que fornece informações sobre a atividade antioxidante de componentes plasmáticos além do ácido úrico e da albumina, como α-tocoferol, ácido ascórbico, transferrina e outros antioxidantes obtidos da dieta, por exemplo, o RV, o que explica o aumento do GAP no EG1000 após seis meses de administração oral de 1000 mg/dia de RV.
Em relação ao escore de estresse oxidativo (OSS), foi observado um aumento estatisticamente significativo no GP e uma diminuição no EG1000. Nesse sentido, a diminuição do OSS é resultado de um aumento no TAC e no GAP, que contrabalançam as ERO e atenuam os danos oxidativos às membranas, refletidos na diminuição dos níveis de LPO e 8-isoprostano. Embora a atividade das enzimas SOD e GPx não tenha aumentado significativamente com o valor do OSS, podemos inferir que as enzimas antioxidantes avaliadas atuam de forma integral e eficiente para contrabalançar altas concentrações de ERO. Em relação ao índice de estresse oxidativo (OSI), foi encontrada uma diminuição na porcentagem de indivíduos com EO moderado e severo no EG1000, enquanto no GP, as proporções de indivíduos sem EO e com EO leve diminuíram, e a de EO moderado aumentou. Isso é consistente com o que foi relatado na literatura, uma vez que o grupo que recebeu 1000 mg/dia de RV apresentou um efeito antioxidante maior em comparação com os indivíduos que receberam o tratamento de 500 mg/dia.
Também observamos um aumento estatisticamente significativo nas concentrações de SIRT1 no EG1000, o que é consistente com o mecanismo proposto do RV. Nesse sentido, a SIRT1 tem efeito na regulação da autofagia, mitofagia, biogênese mitocondrial, expressão de enzimas antioxidantes e supressão do NFκB, entre outros. Da mesma forma, a produção, expressão e atividade da SIRT1 podem ser modificadas pelo RV de forma alostérica, de modo que um aumento nos níveis de SIRT1 fornece informações indiretas sobre os efeitos do RV. Por outro lado, quando a SIRT1 é estimulada, ela desacetila e ativa a proteína quinase LKB1, que fosforila e ativa a AMPK, atenuando assim o dano oxidativo, melhorando a resistência à insulina e restaurando a homeostase energética. Em relação ao papel da SIRT1 no metabolismo energético, evidências científicas sugerem que ela aumenta a fosforilação oxidativa por meio da desacetilação do PGC-1α e, assim, funciona como um regulador da biogênese mitocondrial no fígado e no músculo; o PGC-1α controla a expressão de genes que regulam a biogênese e a atividade mitocondrial, diminuindo o acúmulo de lipídios e aumentando a captação de glicose, melhorando assim o metabolismo energético. Em relação ao efeito antioxidante do RV por meio da SIRT1, foi demonstrado que a SIRT1 estimula a AMPK, e esta regula negativamente a NADPH oxidase, a enzima responsável pela produção de EROs, e induz um aumento na expressão da SOD, cujo resultado final é uma diminuição do EO. A SIRT1 também regula a acetilação dos fatores de transcrição da família FOXO, envolvidos não apenas no metabolismo de lipídios e glicose, mas também na resposta ao EO. Nesse aspecto, foi observado que a interação SIRT1–AMPK estimula a atividade transcricional do FOXO3, e a expressão da SOD dependente de manganês (MnSOD) é induzida em células que superexpressam FOXO3. Da mesma forma, a atividade transcricional do FOXO3 desencadeia a inibição da NADPH oxidase e, portanto, a produção de EROs é reduzida; assim, por meio da SIRT1 e do FOXO3, o RV diminui a quantidade de EROs e aumenta a expressão da MnSOD, mecanismos pelos quais atenua o EO. Além disso, foi proposto que o complexo formado pela interação SIRT1-FOXO3-PGC-1α ativa o Nfr2; como foi apontado, este é um regulador transcricional da expressão de genes envolvidos na resposta antioxidante, pois promove a produção de MnSOD e outras enzimas que fornecem proteção antioxidante às mitocôndrias.
Os mecanismos mencionados explicam como a SIRT1 mitiga o estresse oxidativo (EO) e previne danos oxidativos às células, o que tem sido evidenciado em culturas celulares, onde foi observado que uma superexpressão moderada de SIRT1 protege as células do EO, enquanto uma deficiência em SIRT1 induz um aumento na produção de espécies reativas de oxigênio (EROs). No entanto, a relação entre SIRT1 e EO é mais complexa do que parece, uma vez que a SIRT1 está envolvida em processos celulares dependentes do redox, de modo que, assim como a SIRT1 pode influenciar o estado redox das células, o estado redox é capaz de alterar a produção e a atividade enzimática da SIRT1 por meio de modificações pós-traducionais (fosforilações, S-nitrosilações e carbonilações). Em alguns casos, essas alterações podem ser prejudiciais às células e influenciar a patogênese de doenças crônicas que envolvem o estresse de retículo endoplasmático (SG); tal é o caso do diabetes tipo 2 (T2D). Nesse sentido, a ativação da SIRT1 pelo resveratrol (RV) induz os mecanismos antioxidantes propostos apenas se condições redox adequadas forem alcançadas, uma vez que a SIRT1 é uma proteína sensível ao estado redox, e se este não propiciar as condições adequadas, a ativação pelo RV é insuficiente para exercer efeitos antioxidantes. Considerando o exposto, os resultados de nossa investigação demonstram um efeito antioxidante mais eficiente do RV em doses de 1000 mg/dia em comparação com doses de 500 mg/dia, o que também coincide com um aumento nos níveis de SIRT1 induzido pelo RV.
Existem vários alimentos e bebidas que contêm RV: (i) 150 mL de vinho tinto contém até 2,15 mg; (ii) 250 mL de suco de uva tinto contém 1,25 mg; (iii) 250 g de uvas vermelhas desidratadas contém 1,6 mg; (iv) 150 g de morangos congelados contém 1,56 mg; (v) 125 g de mirtilos contém 2,41 mg; e (vi) 250 g de amendoim contém 1,3 mg. O consumo diário desses alimentos pode fornecer <10 mg de RV, o que é insuficiente para exercer efeitos terapêuticos. Nesse sentido, nosso estudo não controlou a quantidade de RV consumida através da dieta; no entanto, o RV obtido dos alimentos não atinge quantidades suficientes para influenciar os resultados obtidos. Além disso, considerando que os participantes são diabéticos, o consumo dos referidos alimentos teria que ser avaliado, uma vez que a maioria deles contém açúcar, e seu consumo pode desencadear a elevação dos níveis de glicose no sangue.
Por fim, nenhum dos participantes relatou eventos adversos durante a intervenção. Nesse sentido, o RV é considerado um composto seguro para consumo humano, pois não exerce efeitos secundários ou tóxicos em doses relativamente altas (1000–2000 mg/dia). Na verdade, com doses de 2,5 a 5 g/dia, ocorrem apenas efeitos gastrointestinais leves, como náuseas, vômitos e diarreia.
4. Materiais e Métodos
Foi realizado um ensaio clínico randomizado duplo-cego, previamente aprovado pelo Comitê de Bioética e Biossegurança da Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM) FES Zaragoza (FESZ/DEPI/CI/037/20) e registrado no ISRCTN (ISRCTN15172592).
4.1. População e Desenho do Estudo
Foi feito um chamado através de redes sociais para recrutar a população do estudo de acordo com os seguintes critérios de seleção: homens e mulheres entre 60 e 74 anos de idade, com diagnóstico clínico de DM2 tratados com metformina e/ou glibenclamida como agente hipoglicemiante, sem danos renais ou hepáticos, residentes na Cidade do México. Um total de 213 candidatos concordaram em participar do estudo, dos quais 124 atenderam aos critérios de inclusão estabelecidos e assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido (Figura 1). Peso, altura, índice de massa corporal (IMC) e pressão arterial foram medidos para todos os participantes que ingressaram no estudo. Amostras de sangue também foram coletadas para avaliar parâmetros bioquímicos, como glicose, HbA1c, colesterol total, colesterol HDL, triglicerídeos, ácido úrico, ureia e hemograma completo, bem como para a medição de marcadores de EO (lipoperoxidação; 8-isoprostanos; atividades das enzimas antioxidantes superóxido dismutase, glutationa peroxidase e catalase; e capacidade antioxidante total), níveis de SIRT1 e proteína C reativa (PCR).
Após realizar as medições basais de todos os parâmetros clínicos e bioquímicos, uma pessoa externa à nossa equipe de pesquisa designou aleatoriamente os 124 participantes utilizando a ferramenta online "randomizer.com", integrando os seguintes 3 grupos de estudo: (i) grupo experimental 1000 mg/dia (GE1000), n = 40 participantes que receberam 1000 mg/dia de trans-resveratrol, divididos em 2 cápsulas, cada uma contendo 500 mg; (ii) grupo experimental 500 mg/dia (GE500), n = 43 participantes que receberam 500 mg/dia de trans-resveratrol, divididos em 2 cápsulas, cada uma contendo 250 mg; (iii) grupo placebo (GP), n = 41 participantes que receberam diariamente 2 cápsulas idênticas em aparência às dos outros dois grupos, mas cujo conteúdo era um placebo (Figura 1). Os tratamentos foram realizados com trans-resveratrol sintético (>99% de pureza) e uma mistura de microcelulose cristalina com estearato de magnésio como agentes antiaglomerantes, dispersantes e estabilizantes. A referida mistura de excipientes foi utilizada como placebo, uma vez que ambos os compostos são considerados "seguros para consumo humano" pela FDA, além de inertes. Os tratamentos para os três grupos de estudo foram preparados pela "Productos Naturales Anáhuac S.A. de C.V." A randomização e a atribuição aos grupos foram cegas para os participantes e para o pessoal responsável pela investigação até que a análise final de todos os dados coletados durante o estudo fosse realizada. Os tratamentos (cápsulas) foram entregues aos participantes em uma apresentação idêntica em forma, cor, tamanho e peso, independentemente do grupo ao qual foram administrados. Além disso, estavam contidos em frascos opacos rotulados com os nomes dos participantes, que eram entregues mensalmente por uma pessoa não relacionada à investigação. As entregas foram feitas por 6 meses, e a adesão ao tratamento foi verificada pela contagem das cápsulas restantes nos frascos. Durante a intervenção, a equipe de pesquisa manteve contato telefônico com os participantes para identificar possíveis efeitos indesejados. Após 6 meses, todas as medições iniciais foram realizadas novamente; no entanto, durante o acompanhamento, 27 participantes abandonaram o estudo por vários motivos, de modo que apenas 97 dados foram analisados (GE1000 n= 37, GE500 n= 32, GP n = 28), conforme apresentado na Figura 1.
4.2. Medição dos Parâmetros Clínicos (Peso, Altura, IMC e Pressão Arterial)
O peso dos participantes em roupas íntimas foi medido usando uma balança calibrada (Torino, Tecno Logica Mexicana, Cidade do México, México®). Para medir a altura, os participantes foram colocados em pé com os calcanhares juntos, mantendo as nádegas, ombros e cabeça em contato com um estadiômetro de alumínio graduado em milímetros (SECA®, Hamburgo, Alemanha), com os olhos voltados para frente e o plano de Frankfurt paralelo ao chão. O IMC foi calculado dividindo o peso (expresso em kg) pelo quadrado da altura (expressa em metros) (IMC = kg/m2). A pressão arterial foi determinada de acordo com as disposições da NOM-030-SSA-1999 para prevenção, detecção, diagnóstico, tratamento e controle da hipertensão arterial. Cada participante foi solicitado a sentar em uma cadeira com encosto, com um braço descoberto e flexionado sobre um apoio. Um estetoscópio e um esfigmomanômetro acoplado a uma coluna de mercúrio foram usados para medir a pressão arterial sistólica e diastólica.

4.3. Mensuração dos Parâmetros Bioquímicos
Após jejum de 8 a 10 h, amostras de sangue foram obtidas com equipamento vacutainer em tubos (Beckton-Dickinson, NJ, EUA) com anticoagulante EDTA para realizar hemograma completo e quantificar a porcentagem de HbA1c. Da mesma forma, amostras foram coletadas sem anticoagulante para testes bioquímicos (glicose, colesterol total, HDL-colesterol, triglicerídeos, ácido úrico, ureia). O hemograma foi realizado com amostra de sangue total em um analisador hematológico (Spincell, Spinreact, Girona, Espanha). A mensuração dos parâmetros bioquímicos e da PCR foi realizada com amostras de soro usando um autoanalisador (Selectra Junior, Siemens, Munique, Alemanha) através de técnicas colorimétricas e de turbidimetria, respectivamente. A HbA1c foi medida em amostras de sangue anticoaguladas com EDTA por turbidimetria no autoanalisador Selectra Junior.

4.4. Mensuração dos Marcadores de Estresse Oxidativo (OS)
O sangue foi coletado em tubos heparinizados para a mensuração dos marcadores de OS.

4.4.1. Lipoperoxidação (LPO)
Esta determinação foi realizada em uma amostra de plasma heparinizado, conforme descrito por Jentzsch. Utilizamos o malondialdeído (MDA) como marcador de peroxidação lipídica, pois é um dos principais bioprodutos da oxidação de ácidos graxos poli-insaturados, bem como a principal molécula reativa do ácido tiobarbitúrico (TBA). Cada molécula de MDA contida na amostra reage com duas moléculas de TBA para formar um composto de cor rosa, cuja absorbância é medida a 535 nm. Para obter a concentração de MDA, a absorbância foi interpolada em uma curva de calibração.

4.4.2. 8-Isoprostano (8-Iso)
Para medir a concentração de 8-isoprostano, utilizamos amostras de plasma obtidas de sangue com EDTA. Também utilizamos o kit EIA de 8-isoprostano (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI, EUA). A base desta medição é a competição entre o 8-isoprostano e um conjugado de 8-isoprostano–acetilcolinesterase pela ligação de um certo número de anticorpos específicos para o 8-isoprostano. A quantidade de traçador de 8-isoprostano permanece constante, mas os níveis de 8-isoprostano na amostra variam de modo que a quantidade de traçador que se liga ao anticorpo específico do 8-isoprostano é inversamente proporcional à concentração de 8-isoprostano na amostra. O complexo anticorpo–8-isoprostano se liga a um segundo anticorpo e, após a adição do substrato correspondente, forma-se um composto de cor amarela, que é medido espectrofotometricamente a 412 nm. A intensidade da cor é inversamente proporcional à quantidade de 8-isoprostano presente na amostra analisada.
4.4.3. Superóxido Dismutase (SOD)
Para medir a atividade da SOD, foram utilizadas uma amostra de sangue heparinizado e o kit comercial Ransod (Randox Laboratories Ltd., Crumlin, Reino Unido). O método baseia-se no que foi descrito por McCord e Fridovich, no qual a reação entre xantina e xantina oxidase (XOD) produz radicais superóxido que reagem com 2-(4-iodofenil)-3-(4-nitrofenol)-5-feniltetrazólio para formar formazana vermelha. A SOD presente na amostra neutraliza os radicais superóxido e inibe a formação de formazana vermelha, portanto a atividade da enzima é diretamente proporcional ao grau de inibição. A cinética da reação foi medida espectrofotometricamente a 505 nm.
4.4.4. Glutationa Peroxidase (GPx)
Para medir a GPx, foi utilizado o método relatado por Plagia e Valentine. Foram necessárias uma amostra de sangue heparinizado e o kit comercial Ransel (Randox Laboratories Ltd., Crumlin, Reino Unido). A GPx presente na amostra a ser analisada catalisa a oxidação da glutationa (GSH) via hidroperóxido de cumeno na presença de glutationa redutase (GR) e NADPH; em seguida, a glutationa oxidada (GSSG) é convertida em sua forma reduzida com a oxidação concomitante de NADPH em NADP+. Esta reação causa uma diminuição na absorbância, que foi medida a 340 nm em um espectrofotômetro.
4.4.5. Catalase (Cat)
Para quantificar a atividade desta enzima, foi utilizado o método descrito por Aebi, no qual H2O2 é usado como substrato e a diminuição contínua de sua concentração é monitorada utilizando sua decomposição devido à ação da enzima. A diminuição da absorbância a 240 nm foi medida, uma vez que tal diminuição é proporcional à atividade da catalase.
4.4.6. Razão SOD/GPx
O cálculo foi feito utilizando os valores obtidos para cada enzima. É um modelo teórico que fornece informações sobre as interações bioquímicas das enzimas.
4.4.7. Capacidade Antioxidante Total (TAC)
Nesta técnica, foram utilizadas uma amostra de plasma heparinizado e um kit comercial de status antioxidante total (Randox Laboratories Ltd., Crumlin, Reino Unido). Para a medição, a enzima peroxidase é combinada com H2O2 e 2,2′-azido-dietilbenzotialinsulfonato; isso resulta na produção do cátion ABTS+, que apresenta uma coloração verde-azulada. Os antioxidantes contidos na amostra suprimem essa coloração, sendo esta proporcional à concentração de antioxidantes. A cinética da reação foi medida a 600 nm. Todas as medições espectrofotométricas foram realizadas em um espectrofotômetro Multiskan Go Microplate (Thermo Scientific, Denver, CO, EUA).
4.4.8. Cálculo do GAP
Aplicamos a seguinte fórmula para calcular o gap antioxidante (GAP):
4.4.9. Cálculo do Escore de Estresse Oxidativo (OSS)
Neste cálculo, utilizamos pontos de corte previamente estabelecidos pelo nosso grupo de pesquisa para os seguintes marcadores: LPO ≥ 0,340 mmol/L, SOD ≤ 170 UI/mL, GPx ≤ 5500 UI/L, Cat ≤ 0,9 mmol/L, SOD/GPx ≥ 0,023 e GAP ≤ 190 mmol/L. Para cada dado fora dos valores de corte, foi atribuído um ponto, e foi feita uma soma para obter o OSS. O valor do OSS é diretamente proporcional aos níveis de EO.
4.4.10. Índice de EO (OSI)
Este índice foi obtido categorizando o OSS da seguinte forma:
0 pontos: Sem EO;
1–2 pontos: EO Leve;
3–4 pontos: EO Moderado;
5–6 pontos: EO Grave.
4.5. Medição da SIRT1
A quantificação da SIRT1 foi realizada utilizando a técnica de ELISA sanduíche duplo. Utilizamos um anticorpo monoclonal anti-SIRT1 humano e um anticorpo de detecção biotinilado. Amostras e anticorpos biotinilados foram adicionados aos poços da placa de ELISA e, em seguida, lavados com tampão. Depois, o conjugado avidina-peroxidase foi adicionado aos poços, e o substrato correspondente foi adicionado. A mistura da reação ficou azul e depois tornou-se amarela com a adição de ácido. A absorbância do composto colorido foi lida a 450 nm em um espectrofotômetro Multiskan Go Microplate (Thermo Scientific, Denver, CO, EUA).
4.6. Análise Estatística
Foram calculadas frequências e porcentagens para variáveis qualitativas, média e desvio padrão para variáveis quantitativas. As comparações foram feitas usando as medidas repetidas de ANOVA e McNemar, com um intervalo de confiança de 95%. Um valor de p < 0,05 foi considerado uma indicação de um teste estatisticamente significativo. Todas as análises estatísticas foram realizadas utilizando o software SPSS 21.
5. Conclusões
Nossos achados sugerem que o consumo de RV em uma dose de 1000 mg/dia exerce um efeito antioxidante mais eficiente do que uma dose de 500 mg/dia, o que coincide com um aumento estatisticamente significativo nos níveis de SIRT1 em adultos mais velhos com DM2. Isso fornece evidências sugerindo que o consumo de RV em doses de pelo menos 1000 mg/dia por 6 meses ou mais poderia ser um tratamento adjuvante que reduz a incidência de complicações micro e macrovasculares ligadas ao DM2.
Aviso/Nota do Editor: As declarações, opiniões e dados contidos em todas as publicações são de responsabilidade exclusiva do(s) autor(es) e colaborador(es) individual(is) e não do MDPI e/ou do(s) editor(es). O MDPI e/ou o(s) editor(es) se isentam de responsabilidade por qualquer dano a pessoas ou propriedades resultante de quaisquer ideias, métodos, instruções ou produtos mencionados no conteúdo.

Contribuições dos Autores
Conceptualização, V.M.M.-N. e E.S.-O.; metodologia, B.I.G.-M. e M.R.-R.; análise formal, B.I.G.-M. e V.M.M.-N.; investigação, J.P.-C.; redação—preparação do rascunho original, B.I.G.-M. e V.M.M.-N.; redação—revisão e edição, J.P.-C. e M.R.-R.; visualização, E.S.-O.; aquisição de financiamento, M.R.-R. Todos os autores leram e concordaram com a versão publicada do manuscrito.

Declaração do Comitê de Revisão Institucional
O estudo foi conduzido de acordo com a Declaração de Helsinque e aprovado pelo Comitê de Bioética e Biossegurança da Universidad Nacional Autónoma de México (UNAM) FES Zaragoza (FESZ/DEPI/CI/037/20).

Declaração de Consentimento Informado
O consentimento informado foi obtido de todos os sujeitos envolvidos no estudo.

Declaração de Disponibilidade de Dados
Os dados apresentados neste estudo estão disponíveis mediante solicitação aos autores correspondentes.

Conflitos de Interesse
Os autores declaram não haver conflito de interesse.

Referências
Classificação e diagnóstico de diabetes: Padrões de cuidado médico em diabetes-2018
IDF Diabetes Atlas: Estimativas globais, regionais e por país da prevalência de diabetes para 2021 e projeções para 2045
Epidemiologia do diabetes e complicações relacionadas ao diabetes
Mecanismos moleculares que ligam estresse oxidativo e diabetes mellitus
Compreendendo a neuropatia diabética: Foco no estresse oxidativo
Estresse oxidativo, envelhecimento e doenças
Estresse oxidativo no envelhecimento—Questões do coração e da mente
Resveratrol: Da biossíntese e biodisponibilidade aprimoradas ao direcionamento de múltiplas doenças crônicas
Ação benéfica do resveratrol: Como e por quê?
Resveratrol: Um composto natural milagroso para o tratamento de doenças
Benefícios para a saúde e mecanismos moleculares do resveratrol: Uma revisão narrativa
Benefícios para a saúde da administração de resveratrol
Uma revisão sistemática sobre as propriedades antioxidantes naturais do resveratrol
Uma revisão abrangente das perspectivas de saúde do resveratrol
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Efeitos antidiabéticos do resveratrol: O caminho a seguir em sua utilidade clínica
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Efeito hipoglicemiante do resveratrol: Uma revisão sistemática e meta-análise
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A suplementação de resveratrol melhora o controle glicêmico no diabetes mellitus tipo 2
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A suplementação de resveratrol diminui a glicemia sem alterar os monócitos CD14+ CD16+ circulantes e citocinas inflamatórias em pacientes com diabetes tipo 2: um estudo randomizado, duplo-cego, controlado por placebo
Tratamento com resveratrol como adjuvante ao manejo farmacológico no diabetes mellitus tipo 2 — revisão sistemática e meta-análise
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O efeito do resveratrol no perfil lipídico sanguíneo: uma meta-análise de dose-resposta de ensaios clínicos randomizados
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Ácido ferúlico e berberina, via SIRT1 e AMPK, podem atuar como promotores de limpeza celular para longevidade saudável
Efeitos regulatórios do resveratrol nas enzimas antioxidantes: Um mecanismo de inibição do crescimento e indução de apoptose em células cancerígenas
A regulação de genes antioxidantes pela SirT1 depende da formação de um complexo FOXO3a/PGC-1α
Regulação redox de SIRT1 na inflamação e senescência celular
Resveratrol – pílulas para substituir uma dieta saudável?
Efeitos do resveratrol na saúde: Resultados de ensaios de intervenção humana
Análise melhorada do malondialdeído em fluidos corporais humanos
Superóxido dismutase: Uma função enzimática para a eritrocupreína
Estudos sobre a caracterização quantitativa da eritrócito glutationa peroxidase
Catalase in vitro
Status antioxidante total no plasma e fluidos corporais
Fluxograma geral do estudo. Abreviações: EG1000, grupo suplementado com 1000 mg/dia de RV; EG500, grupo suplementado com 500 mg/dia de RV; PG, grupo placebo.
Concentração de SIRT1 nos grupos de estudo: basal e após seis meses. Os dados são apresentados como média ± EP. Um aumento estatisticamente significativo (1,5 ± 0,15 vs. 3,1 ± 0,20 ng/mL; p < 0,05) no EG1000 é observado após o acompanhamento.
Parâmetros clínicos (IMC e pressão arterial) no início e após seis meses nos grupos de estudo.
Parâmetro EG1000 (n = 37) EG500 (n = 32) Placebo (n = 28) Basal Seis meses Basal Seis meses Basal Seis meses Idade (anos) 66 ± 6 63 ± 7 64 ± 5 IMC (kg/m2) 27.6 ± 4.4 27.7 ± 4.2 27.8 ± 3.6 27.9 ± 4.0 28.3 ± 3.4 27.9 ± 3.0 PAS (mmHg) 127 ± 16 124 ± 12 128 ± 17 127 ± 14 127 ± 10 123 ± 10 PAD (mmHg) 84 ± 6 82 ± 9 84 ± 13 86 ± 8 82 ± 7 82 ± 9
IMC: índice de massa corporal, PAS: pressão arterial sistólica, PAD: pressão arterial diastólica. Os dados são apresentados como média ± DP. ANOVA de medidas repetidas.
Parâmetros bioquímicos dos grupos de estudo no basal e após seis meses.
Parâmetros EG1000 (n = 37) EG500 (n = 32) Placebo (n = 28) Basal Seis meses Basal Seis meses Basal Seis meses Hemoglobina (g/dL) 14 ± 1 14 ± 2 14 ± 1 15 ± 2 14 ± 2 14 ± 2 Hematócrito (%) 45 ± 4 45 ± 4 45 ± 6 46 ± 5 45 ± 6 46 ± 5 Glicose (mg/dL) 169 ± 73 186 ± 83 185 ± 65 203 ± 77 189 ± 74 184 ± 67 Ureia (mg/dL) 33 ± 8 36 ± 14 33 ± 14 33 ± 15 36 ± 11 38 ± 17 Creatinina (mg/dL) 0.92 ± 0.2 0.92 ± 0.2 0.96 ± 0.2 1.0 ± 0.33 0.95 ± 0.2 1.01 ± 0.3 Ácido úrico (mg/dL) 4.5 ± 1.6 4.0 ± 1.3 4.4 ± 1.8 3.8 ± 0.9 5.1 ± 1.9 4.6 ± 1.4 Colesterol total (mg/dL) 200 ± 44 202 ± 69 196 ± 41 211 ± 70 198 ± 42 210 ± 47 Triglicerídeos (mg/dL) 170 ± 69 147 ±46 * 219 ± 115 221 ± 122 197 ± 85 205 ± 62 HDL-colesterol (mg/dL) 61 ± 26 56 ± 16 54 ± 16 53 ± 15 54 ± 17 52 ± 11 Albumina (g/dL) 4.3 ± 0.3 4.8 ± 0.6 4.4 ± 0.4 4.9 ± 0.5 4.3 ± 0.3 4.8 ± 0.5 PCR (mg/dL) 0.23 ± 0.3 0.22 ± 0.4 0.22 ± 0.2 0.33 ± 0.3 0.37 ± 0.4 0.48 ± 0.5 * HbA1c (%) 7.9 ± 2.0 7.8 ± 1.8 8.0 ± 2.0 8.1 ± 1.5 7.7 ± 2.2 8.0 ± 1.7
HbA1c: hemoglobina glicosilada; PCR: proteína C reativa. Os dados são apresentados como média ± DP. ANOVA de medidas repetidas. Teste de Tukey como post hoc, * p < 0,05.
Marcadores de estresse oxidativo nos grupos de estudo: basal e após seis meses.
Parâmetros EG1000 (n = 37) EG500 (n = 32) Placebo (n = 28) Basal Seis meses Basal Seis meses Basal Seis meses LPO (µmol/L) 0.230 ± 0.08 0.212 ± 0.04 0.236 ± 0.09 0.229 ± 0.06 0.219 ± 0.07 0.282 ± 0.07 * 8-Iso (pg/mL) 60 ± 25 45 ± 27 56 ± 29 53 ± 38 61 ± 24 76 ± 35 † GPx (UI/L) 7181 ± 3794 8362 ± 2910 8219 ± 3616 8926 ± 3010 7635 ± 2988 7329 ± 3049 Cat (×104 UI/gHb) 3.0 ± 1 2.9 ± 1 2.9 ± 1 2.7 ± 1 2.9 ± 1 2.3 ± 1 TAC (µmol/L) 1003 ± 247 1225 ± 249 * 1016 ± 216 1014 ± 269 1004 ± 202 993 ± 217 SOD (U/L) 167 ± 15 173 ± 12 172 ± 16 178 ± 10 171 ± 15 167 ± 10 † Razão SOD/GPx 0.030 ± 0.01 0.023 ± 0.01 0.027 ± 0.01 0.026 ± 0.01 0.026 ± 0.01 0.023 ± 0.01 GAP 283 ± 242 434 ± 234 ‡ 288 ± 221 202 ± 284 276 ± 175 205 ± 229 OSS 2.5 ± 1 1.3 ± 1 2.0 ± 1 1.7 ± 1 1.9 ± 1 2.8 ± 1 *
LPO: lipoperóxidos; 8-Iso: isoprostanos; GPx: glutationa peroxidase; Cat: catalase; TAC: capacidade antioxidante total; SOD: superóxido dismutase; OSS: escore de estresse oxidativo. Os dados são apresentados como média ± DP. ANOVA de medidas repetidas. Teste de Tukey como post hoc, * p < 0,05 placebo vs. EG1000; † p < 0,05 placebo vs. (EG1000 e EG500); ‡ p < 0,05 EG1000 vs. (EG500 e placebo).
Índice de estresse oxidativo nos grupos de estudo: basal e após seis meses.
EG1000 (n = 37) EG500 (n = 32) Placebo (n = 28) Basal Seis meses Basal Seis meses Basal Seis meses Sem EO 5 (13%) 13 (35%) * 3 (10%) 9 (28%) * 6 (21%) 2 (7%) * EO leve 14 (38%) 18 (49%) 19 (59%) 15 (47%) 12 (43%) 8 (29%) * EO moderado 10 (27%) 5 (13%) * 9 (28%) 8 (25%) 8 (29%) 15 (54%) * EO grave 8 (22%) 1 (3%) * 1 (3%) 0 (0%) 2 (7%) 3 (10%)
EO: estresse oxidativo. Teste de McNemar, * p < 0,05 basal vs. após seis meses.