pmid: "36110485"
title: "Efeitos Individuais e Sinérgicos do Óleo de Melaleuca e do Extrato de Nim na Aderência de Candida albicans ao Forrador Macio de Prótese Dentária."
authors: "Singhania A, Sathe S, Ranka R, Godbole S"
journal: "Cureus"
pubdate: "2022 Aug"
doi: "10.7759/cureus.27869"
source: "PMC Full Text"

Efeitos Individuais e Sinérgicos do Óleo de Melaleuca e do Extrato de Nim na Aderência de Candida albicans ao Forrador Macio de Prótese Dentária.

Autores

Singhania A, Sathe S, Ranka R, Godbole S

Periodico

Cureus (2022 Aug)

Conteudo

Efeitos Individuais e Sinérgicos do Óleo da Árvore do Chá e do Extrato de Nim na Adesão de Candida albicans a Forros Macios de Próteses Dentárias

Contexto
A inflamação está presente na estomatite por prótese dentária. A etiologia da estomatite por prótese dentária é complexa, mas há evidências de que é causada pelo crescimento de Candida albicans em biofilmes em sua superfície.

Objetivo
Este estudo teve como objetivo examinar e avaliar a eficácia de vários produtos fitoterápicos, como óleo da árvore do chá e extratos de nim, na adesão de Candida albicans a forros macios de próteses dentárias.

Método
Cada parede da placa de cultura de tecido foi preenchida com 30 blocos acrílicos revestidos com forros macios, seguido pela adição de 0,1 ml da suspensão padronizada de Candida albicans, que foi então deixada para incubar por 48 horas. Cada espécime foi colocado em uma solução desinfetante por 10 minutos. Uma colônia foi contada após 0,1 ml da solução ser plaqueada em uma placa de ágar dextrose Sabouraud (SDA) e cultivada por 72 horas. Os dados foram comparados usando um teste de análise de variância (ANOVA) de uma via.

Resultados
A média de unidades formadoras de colônias (UFC) por ml para a combinação de óleo da árvore do chá e extrato de nim foi a menor (0,40), seguida pelo óleo da árvore do chá (2,30), seguida pelo extrato de nim (30,33). Os blocos tratados foram eficazes na redução do crescimento de Candida albicans.

Conclusão
A combinação de óleo da árvore do chá e extrato de nim reduziu significativamente o crescimento de Candida albicans, sugerindo uma nova forma de tratamento antifúngico intraoral eficaz.

Introdução
Devido ao aumento da expectativa de vida, as populações idosas são mais prevalentes em países desenvolvidos. Esse aumento na população idosa pode resultar em mais pessoas necessitando de próteses removíveis. Devido à exposição limitada aos efeitos purificadores da saliva, o ambiente sob uma prótese é favorável ao crescimento de Candida albicans (C. albicans).

Um microrganismo comensal típico encontrado na cavidade oral humana é a C. albicans. A parte posterior da língua e outros locais orais são onde ela é mais prevalente, e o filme que cobre as superfícies dentárias é onde ela é secundariamente colonizada. Uma condição benigna comum conhecida como estomatite por prótese dentária associada a Candida (DS) afeta regularmente pessoas que usam próteses. É um distúrbio inflamatório crônico que causa eritema nos tecidos orais que suportam uma prótese removível. A candidíase oral tem sido tratada com uma variedade de medicamentos antifúngicos potentes, tanto tópicos quanto internos. Anfotericina B e nistatina são dois medicamentos antifúngicos tópicos populares, enquanto fluconazol e cetoconazol estão disponíveis como medicamentos antifúngicos sistêmicos. Embora as formas farmacêuticas sistêmicas possam ser eficazes contra infecções mucosas, elas não fornecem uma cura para a superfície tecidual de próteses infectadas por Candida.
Numerosas plantas medicinais têm sido utilizadas como agentes antifúngicos, incluindo o óleo da árvore do chá, o extrato aquoso de nim e o óleo essencial de eucalipto globulus. A árvore do chá é comumente conhecida como Melaleuca alternifolia (M. alternifolia). Ela exibe um amplo espectro de atividade antimicrobiana e é eficaz contra outras leveduras patogênicas e bactérias gram-positivas e gram-negativas. O nim é uma árvore medicinal cientificamente denominada Azadirachta indica (A. indica). Extratos de A. indica podem suprimir eficazmente vários fungos humanos, incluindo Geotrichum, Trichosporon, Candida, Epidermophyton, Trichophyton e Microsporum. O objetivo deste estudo foi comparar os efeitos individuais e sinérgicos de M. alternifolia e A. indica no crescimento de C. albicans.
Materiais e métodos
Um total de 90 amostras foram confeccionadas em cera para modelagem usando um molde cortado a laser com dimensões de 4 mm x 4 mm x 2 mm e, em seguida, transformadas em amostras de resina acrílica termopolimerizável (Figura 1).
Amostras de acrílico termopolimerizável
Um material de reembasamento de prótese macio (GC Corporation, Tóquio, Japão) foi aplicado a cada bloco com uma espessura de cerca de 2 mm para fornecer uma camada uniforme quando colocado no molde de dimensões 4 mm x 4 mm x 4 mm, após ser limpo por polimento com pedra-pomes e, em seguida, com água corrente. O excesso de material foi então cortado usando uma lâmina BP após ter sido deixado em repouso por 10 minutos para obter 90 amostras (Figura 2).
Amostras reembasadas com forro macio
O estudo consistiu em três grupos de 30 amostras cada; as amostras do grupo 1 foram imersas em óleo da árvore do chá, as amostras do grupo 2 foram imersas em extrato alcoólico de nim e as amostras do grupo 3 foram imersas em uma combinação de óleo da árvore do chá e extrato de nim.
Uma suspensão de 10 ml do crescimento foi preparada em um tubo de ensaio adicionando-se crescimento de Candida do meio SDA usando uma alça bacteriológica a uma solução salina estéril e colocada em um ciclomixer por 60 segundos. A suspensão foi então padronizada para conter 1,5 x 10^8 unidades formadoras de colônias, usando o padrão de turbidez 0,5 de McFarland, igualando a turbidez. Uma amostra (bloco acrílico com forro macio) foi colocada em cada poço da placa de cultura de tecidos. Usando uma seringa descartável de 2 ml, 1,5 ml de caldo Sabouraud dextrose foi adicionado a cada poço, e 0,1 ml da suspensão padronizada de Candida albicans foi adicionado com o auxílio de uma micropipeta a cada poço. As placas foram seladas e incubadas na estufa por 48 horas a 37°C (Figura 3).
Amostra acrílica colocada no poço da placa de cultura de tecidos
Dez ml de cada solução desinfetante foram colocados em tubos de ensaio de 20 ml usando uma pipeta, e 30 amostras foram imersas na solução correspondente por 10 minutos, de acordo com o grupo mencionado (Figura 4).
10 ml de cada desinfetante
Em seguida, cada espécime foi transferido para tubos contendo 1 ml de solução fisiológica estéril, e os tubos foram agitados em um ciclomixer por 60 segundos para dispersar as células aderidas. A subcultura direta da suspensão pode resultar em crescimento confluente de Candida albicans, e a contagem de colônias pode ser impossível, portanto, para obter uma contagem de colônias adequada, a suspensão inicial foi diluída 10, 100 e 1.000 vezes na solução fisiológica.
0,1 ml de cada suspensão foi retirado usando uma micropipeta e plaqueado em uma placa de ágar Sabouraud dextrose. Um total de quatro placas para cada amostra foi plaqueado, ou seja, solução não diluída, diluição 1:10, diluição 1:100 e diluição 1:1000. Após 72 horas de incubação a 37°C, o número de colônias em cada placa de cada desinfetante, ou seja, não diluído, 1:10, 1:100 e 1:1000, foi contado usando um contador de colônias digital, e o número de unidades formadoras de colônias/ml foi calculado (Figuras 5, 6, 7).
Colônias na diluição normal, 10, 100, 1000 do óleo da árvore do chá
Colônias na diluição normal, 10, 100, 1000 do extrato de nim
Colônias na diluição normal, 10, 100, 1000 da combinação de óleo da árvore do chá e extrato de nim
Contagem de colônias: fator de diluição/volume da placa de cultura
Resultados
O teste ANOVA de um fator foi utilizado para analisar o resultado usando o IBM Corp. Lançado em 2017. IBM SPSS Statistics for Windows, Versão 25.0. Armonk, NY: IBM Corp. Na diluição com extrato de nim, a contagem de colônias foi (30,33 ± 4,99) (valor-p 0,001), e então a contagem de colônias diminui com o óleo da árvore do chá (2,30±1,18) (valor-p 0,001). A menor contagem de colônias foi observada com a combinação de óleo da árvore do chá e extrato de nim (0,40±0,77) (valor-p 0,001). A análise post hoc mostrou que a comparação do grupo do óleo da árvore do chá com o grupo do extrato de nim foi estatisticamente significativa (valor-p 0,001), enquanto a comparação do grupo do óleo da árvore do chá com o grupo do óleo da árvore do chá e extrato de nim não foi estatisticamente significativa (valor-p 0,396). Um resultado estatisticamente significativo foi observado quando o grupo do extrato de nim foi comparado com o grupo do óleo da árvore do chá e extrato de nim (valor-p 0,001) (Tabela 1).
Comparação entre óleo da árvore do chá, extrato de nim e combinação de óleo da árvore do chá e extrato de nim
  N Média Desvio Padrão F valor-p   Óleo da árvore do chá 30 2,30 1,18       Extrato de nim 30 30,33 4,99   Óleo da árvore do chá e extrato de nim   30   0,40   0,77   Análise post hoc usando LSD GRUPO GRUPO valor-p   Óleo da árvore do chá Extrato de nim 0,001* Óleo da árvore do chá e Extrato de nim 0,396   Extrato de nim   Óleo da árvore do chá e Extrato de nim   0,001*
Discussão
Com o tempo, houve um aumento gradual da população idosa. Como resultado, os idosos são agora um grupo de pessoas que necessitam de cuidados especiais e modelos de atendimento odontológico que resultem em níveis assistenciais preventivos, reabilitadores, curativos e humanizados. Além de melhorar a mastigação, os objetivos do tratamento para pacientes desdentados que usam próteses artificiais incluem conforto, estética, melhora da fala e ajudá-los a recuperar a confiança. O material usado para fazer dentaduras é metálico ou não metálico. A maioria das dentaduras completas é fabricada com resina acrílica. As vantagens do uso de resina acrílica são sua facilidade de manipulação e custo-benefício. Enquanto a desvantagem é que elas apresentam uma superfície porosa adicional e dura, com alta taxa de adsorção, permitindo microtraumas locais, que causam reações inflamatórias e favorecem o crescimento de fungos, bem como a adesão e o desenvolvimento de placa.
A estomatite associada à dentadura, também conhecida como candidíase atrófica crônica ou candidíase eritematosa, é o tipo mais prevalente de infecção oral por cândida na qual se observa crescimento fúngico. Ela afeta significativamente os usuários de dentaduras e pode ser tratada por vários métodos preventivos e terapêuticos, como limpeza da dentadura, remoção das dentaduras à noite e medicamentos antifúngicos. Os efeitos negativos dos medicamentos antifúngicos, apesar de sua eficácia, são diversos e incluem toxicidade, interações medicamentosas, recorrência, desenvolvimento de resistência fúngica e alto custo. Assim, os produtos naturais surgiram, uma vez que a resistência é observada pelo uso de vários efeitos antifúngicos, antibacterianos, antioxidantes e anti-inflamatórios.
Neste estudo, quando os blocos de acrílico revestidos com condicionadores de tecido moles foram imersos no Grupo 1 (Óleo de melaleuca) por 10 minutos, as unidades formadoras de colônias observadas foram extremamente baixas, mostrando apenas 2,30+/-1,18 (Tabela 1) com um valor de p de 0,001. Em uma dosagem de 0,25%, o TTO pode bloquear o desenvolvimento de tubos germinativos e a conversão micelial, retardando o crescimento de C. albicans. O TTO contém terpinen-4-ol, que aumenta a permeabilidade das células de levedura ao romper a barreira da estrutura da membrana microbiana, aumenta a fluidez da membrana e impede que o meio se torne muito ácido, o que impede a respiração dos fungos. Este estudo foi apoiado por Pachava KR em 2015, onde a média de unidades formadoras de colônias em discos acrílicos tratados com óleo de melaleuca foi verificada após um dia, 30 dias e 60 dias, e a colonização foi menor nos discos tratados com óleo de melaleuca com um valor de p de 0,001. Vankadara SK em 2017 conduziu um estudo no qual a colonização e inibição de Candida albicans foi verificada em materiais de revestimento de dentadura disponíveis comercialmente, submetendo-os a várias concentrações e doses de óleo de melaleuca, e uma menor zona de inibição foi observada com um volume de 2 ml e concentração de 40% de óleo de melaleuca no condicionador de tecido GC Soft. G Mahalakshmi em 2020 conduziu um estudo no qual o óleo de melaleuca foi adicionado ao condicionador de tecido mole de dentadura, e o crescimento de Candida albicans reduziu significativamente para 1,8 × 10^6, 2,6 × 10^6, 32,9 × 10^6 após 1, 30 e 60 dias. P Kumar, em seu estudo de 2020, comparou a atividade antifúngica da CIM dos três óleos medindo a zona média de inibição e chegou à conclusão de que para o tratamento da estomatite protética, as propriedades antimicóticas de M. alternifolia, C. nucifera e A. indica combinadas com o condicionador de tecido Visco-gel podem ser empregadas.
Quando os blocos acrílicos revestidos com condicionadores de tecido foram imersos no Grupo 2 (extrato de nim) por 10 minutos, as unidades formadoras de colônias foram reduzidas para 30+/-4,99 com um valor p de 0,001, o que comprova sua propriedade antifúngica (Tabela 1). O fitoquímico mais ativo no nim é a azadiractina. As folhas de nim podem ter uma ação antiaderente que impede a aderência inicial do microrganismo e tem impacto na formação de biofilme e na hidrofobicidade da superfície celular, o que diminui a colonização por C. albicans. Devido à menor concentração de componentes bioativos no extrato aquoso de nim, este último tem um impacto fungicida mais forte. Em seu estudo em 2011, Aarati N comprovou que o extrato alcoólico de folhas foi mais eficaz do que o extrato aquoso de nim contra S. mutans, Enterococcus faecalis e C. albicans. Kumar SM em 2018 conduziu um estudo onde o efeito inibitório de Candida albicans foi verificado em condicionador de tecido para prótese dentária com adição de alho e nim, e tanto o alho quanto o nim mostraram efeitos positivos e ajudaram a reduzir o crescimento de C. albicans. G Krishnaveni conduziu um estudo semelhante em 2021, onde blocos acrílicos revestidos com condicionador de tecido foram imersos em soluções desinfetantes, como água destilada, óleo de melaleuca 100%, extrato de nim 100%, clorexidina 2% e hipoclorito de sódio 0,5%, e observou que o óleo de melaleuca e o extrato de nim tiveram o maior efeito inibitório no crescimento de Candida albicans em todas as diluições; no entanto, a eficácia do extrato de nim reduziu com o aumento da diluição. AlHamdan E conduziu um estudo em 2022 onde próteses totais removíveis acrílicas revestidas com condicionador de tecido foram fabricadas e imersas no grupo 1: 5 µm de Rosa Bengala (RB), grupo 2: extrato de nim, grupo 3: óleo de melaleuca (TTO) e grupo 4: soluções de CHX 0,12%, respectivamente, e concluiu que a contagem de C. albicans revelou uma queda significativa com CHX, TTO e extrato de nim, exceto RB (p<0,05).

Neste estudo, foram testados efeitos sinérgicos entre os dois componentes, o que nunca havia sido feito antes. Quando os blocos acrílicos revestidos com condicionadores de tecido foram imersos no Grupo 3 (TTO-nim combinado) por 10 minutos, as unidades formadoras de colônias diminuíram, e não foram observadas colônias após uma diluição de 1:1000, e o valor p observado foi de 0,001 (Tabela 1). A ausência de colônias com o uso de TTO-nim combinado como desinfetante comprova seu efeito fungicida e sua eficácia aprimorada em comparação com outros desinfetantes. Isto comprova que o sinergismo entre TTO e nim demonstra propriedade fungicida.

De acordo com a literatura, a abordagem sinérgica dos óleos essenciais parece ser mais vantajosa e eficaz quando comparada à sua aplicação isolada. Esta combinação pode ser entre dois ou mais óleos essenciais, ou pode ser entre antibiótico e óleo essencial. Rathod T em 2017 comprovou a ação sinérgica do Fluconazol com ambos os óleos essenciais, A. indica e Citrus reticulata, e demonstrou propriedades antifúngicas contra C. albicans.
No presente estudo, verificamos o crescimento apenas de Candida albicans porque, entre os fungos encontrados na cavidade oral, cerca de 80% dos microrganismos recuperáveis da mucosa oral de usuários de próteses dentárias consistem em Candida albicans. A forma mais comum de infecção oral por Candida, que afeta um grande número de usuários de próteses, é a estomatite associada ao uso de próteses, também conhecida como candidíase atrófica crônica ou candidíase eritematosa. As várias modalidades de tratamento para estomatite induzida por próteses incluem reembasamento com condicionadores de tecido, manutenção de boa higiene oral, remoção das próteses à noite e uso de várias substâncias antifúngicas como hipoclorito de sódio, clorexidina, fluconazol e anfotericina B. Devido às desvantagens mencionadas dos medicamentos antifúngicos, em nosso estudo, comparamos a eficácia antifúngica de diferentes produtos naturais, que têm relativamente menos efeitos colaterais.
À luz dos resultados encorajadores do estudo, os produtos naturais podem ser empregados como substitutos com menos propensão a efeitos colaterais para medicamentos químicos no tratamento de C. albicans. Esses resultados incentivam pesquisas adicionais tanto sobre as numerosas interações sinérgicas entre óleos vegetais ou óleos vegetais e medicamentos antifúngicos, quanto sobre a eficácia de vários outros óleos vegetais contra C. albicans.
O estudo teve as seguintes limitações: testou apenas Candida albicans como o microrganismo causador da estomatite por prótese. O efeito de outras microfloras na estomatite por prótese não foi avaliado. Estudos in vivo adicionais em larga escala devem ser conduzidos para confirmar os achados sobre a eficácia dos desinfetantes.
Conclusões
Como apresentam resistência a todos os medicamentos antifúngicos, as cepas resistentes de C. albicans tornaram-se uma fonte significativa de riscos à saúde. Os efeitos medicinais e fitoterápicos das plantas podem oferecer uma possível liderança antifúngica contra cepas resistentes de C. albicans. Para a produção de enxaguantes bucais fitoterápicos e desinfetantes de próteses, são necessárias formulações padronizadas dessas plantas medicinais com atividade antibacteriana. Portanto, dentro das limitações do estudo, as seguintes conclusões foram tiradas: que a contagem de colônias e as unidades formadoras de colônias foram menores no óleo de melaleuca-neem combinado em cada diluição, e não foram observadas colônias no óleo de melaleuca-neem combinado quando comparado com outros desinfetantes.
Número de registro de direitos autorais - L-90895/2020
Ética Humana
O consentimento foi obtido ou dispensado por todos os participantes deste estudo
Ética Animal
Sujeitos animais: Todos os autores confirmaram que este estudo não envolveu sujeitos ou tecidos animais.
Referências
Importância da Candida albicans para usuários de próteses dentárias. Uma revisão da literatura
Estomatite por prótese - uma atualização clínica
Uma nova forma de administração intraoral de medicamentos antifúngicos para o tratamento de candidose oral induzida por prótese
Atividade in vitro dos óleos essenciais de Melaleuca alternifolia (Melaleuca) e Eucalyptus globulus na formação de biofilme oral de Candida em polimetilmetacrilato
Efeito do extrato aquoso de Neem (Azadirachta indica A. Juss) na hidrofobicidade, formação de biofilme e adesão em resina composta por Candida albicans
Óleo de Melaleuca alternifolia (Árvore do Chá): uma revisão das propriedades antimicrobianas e outras propriedades medicinais
Neem: uma bênção nas terapias médicas e odontológicas: uma revisão
Condições de saúde bucal e qualidade de vida de idosos usuários do Sistema Único de Saúde
A adesão de Candida albicans na superfície de diferentes materiais de base de prótese (um estudo in vitro)
Biofilme de Candida albicans em prótese dentária e seu significado clínico
Alternativas terapêuticas de compostos naturais no tratamento da estomatite por Candida associada a próteses
O modo de ação antimicrobiana do óleo essencial de Melaleuca alternifolia (óleo de árvore do chá)
Efeitos antifúngicos do óleo de Melaleuca alternifolia (árvore do chá) e seus componentes sobre Candida albicans, Candida glabrata e Saccharomyces cerevisiae
Eficácia antimicrobiana de cinco óleos essenciais contra patógenos orais: Um estudo in vitro
Avaliação antifúngica in vitro de amaciante de prótese incorporado com óleo de árvore do chá: Uma nova abordagem terapêutica para estomatite por prótese
Efeito de Melaleuca alternifolia misturada com condicionadores de tecido em doses variadas na colonização e inibição de Candida albicans: Um estudo in vitro
Eficácia antifúngica do óleo de árvore do chá misturado com amaciante de prótese na estomatite por prótese
A influência de Azadirachta indica, Melaleuca alternifolia e Cocos nucifera na cepa de Candida albicans em condicionador de tecido em diferentes intervalos de tempo
Atividade antifúngica de diferentes extratos de folhas de neem e do nimonol contra alguns patógenos humanos importantes
Avaliação da eficácia antibacteriana e anticandidiásica do extrato aquoso e alcoólico de neem (Azadirachta indica) um estudo in vitro
Eficácia antifúngica e propriedades mecânicas de amaciantes de prótese contra Candida albicans após a incorporação de alho e neem: Um estudo in vitro
Avaliação de desinfetantes na adesão de Candida albicans a amaciante de prótese dentária
Amaciante de prótese dentária e desinfecção microbiana com agentes contemporâneos e convencionais
Atividade anticandidiásica e anticandidiásica sinérgica e composição química dos óleos essenciais de Citrus reticulata e Azadirachta indica
Avaliação da colonização por espécies de Candida e estomatite relacionada a próteses em usuários de prótese total
Fitomedicamentos para estomatite por Candida associada a próteses
Comparação da eficácia antimicrobiana de própolis, Morinda citrifolia, Azadirachta indica (Neem) e hipoclorito de sódio a 5% no biofilme de Candida albicans formado em substrato dentário: Um estudo in vitro