pmid: "35949196"
title: "A administração de Tributirina melhora o desenvolvimento e a saúde intestinal em bezerros leiteiros pré-desmame alimentados com substituto do leite."
authors: "Liu S, Wu J, Wu Z, Alugongo GM, Zahoor Khan M, Li J, Xiao J, He Z, Ma Y, Li S, Cao Z"
journal: "Animal nutrition (Zhongguo xu mu shou yi xue hui)"
pubdate: "2022 Sep"
doi: "10.1016/j.aninu.2022.06.004"
source: "PMC Full Text"

A administração de Tributirina melhora o desenvolvimento e a saúde intestinal em bezerros leiteiros pré-desmame alimentados com substituto do leite.

Autores

Liu S, Wu J, Wu Z, Alugongo GM, Zahoor Khan M, Li J, Xiao J, He Z, Ma Y, Li S, Cao Z

Periodico

Animal nutrition (Zhongguo xu mu shou yi xue hui) (2022 Sep)

Conteudo

Administração de tributirina melhora o desenvolvimento e a saúde intestinal em bezerros leiteiros pré-desmame alimentados com substituto do leite

O butirato e seus derivados possuem diversos benefícios nutricionais e biológicos para mamíferos, porém seus efeitos em bezerros leiteiros não foram bem caracterizados. Este estudo avaliou os efeitos da administração de tributirina na imunidade sanguínea, funções imunológicas e de barreira intestinais, e composição microbiana de bezerros leiteiros pré-desmame. Vinte bezerros machos Holandeses recém-nascidos foram distribuídos aleatoriamente em um grupo controle (sem suplementação de tributirina, CON; n = 10) ou um grupo de tratamento (suplementado com tributirina a 2 g/L de leite, TRB; n = 10). Os resultados mostraram que a frequência de diarreia foi significativamente reduzida pela administração de tributirina do dia 29 ao 56 (P < 0,001) e durante todo o período (P = 0,003, dia 1 ao 56), embora não tenham sido observados efeitos significativos no desempenho de crescimento. Para os metabólitos sanguíneos, a administração de tributirina reduziu significativamente a concentração de interleucina-1β (IL-1β) no dia 28 (P = 0,001) e tendeu a reduzir a concentração de amiloide sérica A no dia 56 (P = 0,079), enquanto os parâmetros de estresse oxidativo sérico não foram afetados. Para o desenvolvimento intestinal, a administração de tributirina aumentou a altura das vilosidades (P < 0,001) e a relação altura das vilosidades/profundidade das criptas (P = 0,046) no jejuno, e a altura das vilosidades no íleo (P = 0,074). Além disso, as expressões gênicas do receptor toll-like 2 (TRL2, P = 0,045) e IL-1β (P = 0,088) foram reguladas negativamente, enquanto a expressão gênica da claudina-4 (P = 0,022) foi regulada positivamente no jejuno após a administração de tributirina. No íleo, as expressões gênicas da claudina-4 (P = 0,029) e do receptor acoplado à proteína G 41 (P = 0,019) foram reguladas positivamente no grupo TRB em comparação com CON. Não foram encontradas abundâncias significativamente maiores de microbiota no jejuno ou no íleo dos bezerros do grupo CON. No grupo TRB, a suplementação com tributirina aumentou significativamente a abundância de bactérias produtoras de ácidos graxos de cadeia curta (AGCC), incluindo Ruminococcaceae, Lachnospiraceae, Prevotella e Rikenellaceae (LDA > 3,5, P < 0,05), que foi negativamente associada à expressão de genes inflamatórios (TLR2 e IL-1β), mas positivamente associada a genes de barreira intestinal (claudina-4) e parâmetros morfológicos (P < 0,05). Em conclusão, a suplementação de tributirina no substituto do leite pode melhorar o desenvolvimento e a saúde intestinal de bezerros leiteiros pré-desmame, estimulando a colonização de bactérias produtoras de AGCC, melhorando as funções de barreira intestinal e suprimindo as respostas inflamatórias.
Resumo gráfico
Ácidos graxos de cadeia curta (AGCCs), os principais metabólitos produzidos pela fermentação bacteriana de alimentos indigestíveis no trato gastrointestinal (TGI), podem ativar diretamente receptores acoplados à proteína G, inibir histonas desacetilases e servir como substratos energéticos. Portanto, possuem funções metabólicas importantes e são cruciais para a saúde intestinal. Os AGCCs mais abundantes no intestino são acetato, propionato e butirato, entre os quais o butirato tem recebido atenção especial devido aos seus efeitos benéficos na homeostase intestinal. Estudos anteriores mostraram que o butirato é indispensável na modulação da imunidade da mucosa intestinal, respostas inflamatórias e funções de barreira intestinal.
Bezerros na fase pré-desmame são altamente suscetíveis a doenças e morte. De acordo com uma pesquisa recente nos EUA, cerca de 30% das mortes em bezerros pré-desmame foram causadas por doenças digestivas, o que destaca a importância de melhorar a saúde intestinal. O butirato tem sido suplementado na alimentação na forma de sais de butirato (cálcio, sódio, potássio ou magnésio) ou butirinas para melhorar a saúde e o desempenho de crescimento de bezerros leiteiros. A maioria dos estudos realizados até agora caracterizou principalmente os efeitos do butirato sobre a eficiência da digestão de nutrientes, funções morfológicas intestinais e atividade de enzimas digestivas de bezerros leiteiros. Vários estudos em leitões e aves mostraram que a suplementação com butirato pode melhorar a expressão de proteínas de junção oclusiva da mucosa intestinal, diminuir a malondialdeído (MDA), o fator de necrose tumoral alfa (TNF-α), a interleucina-6 (IL-6) e a interleucina-1β (IL-1β), e aumentar as concentrações de interleucina-10 (IL-10) no soro ou na mucosa intestinal. No entanto, poucas tentativas foram feitas para entender como o butirato exógeno afeta a imunidade da mucosa intestinal, as respostas inflamatórias e a função de barreira intestinal de bezerros leiteiros pré-desmame. Além disso, os micróbios intestinais desempenham um papel importante no desenvolvimento do sistema imunológico do hospedeiro, metabolismo e saúde. Alguns estudos documentaram que a administração de butirato pode modificar a estrutura, composição e função da microbiota em aves e leitões. Até agora, poucos estudos relataram os efeitos do butirato sobre a microbiota de bezerros leiteiros. demonstraram que bezerros suplementados com substituto de leite enriquecido com butirato (MR) melhoraram a comunidade microbiana. No entanto, como a microbiota intestinal de bezerros suplementados com butirato afeta a função imune e de barreira intestinal ainda não foi bem caracterizada.
Tributirina (éster 1,2,3-propanotriílico do ácido butanoico), uma fonte de butirato, não possui odor desagradável em comparação com os sais de butirato. Em comparação com os sais de butirato, a tributirina é mais eficaz, age diretamente nas células, tem meia-vida plasmática mais longa do butirato após administração oral e exibe farmacocinética mais favorável. Neste estudo, nosso objetivo foi investigar os efeitos da administração oral de tributirina no desempenho de crescimento, na imunidade sanguínea e intestinal, e na função de barreira intestinal de bezerros leiteiros pré-desmame. Além disso, avaliamos os efeitos da tributirina na microbiota do intestino delgado e a relação entre a microbiota e os parâmetros relacionados à imunidade. Nossa hipótese foi que a tributirina melhoraria o desenvolvimento e a saúde intestinal e alteraria a diversidade da microflora intestinal de bezerros leiteiros pré-desmame.
Materiais e métodos
O experimento animal foi conduzido de acordo com o Regulamento de Administração de Animais de Laboratório (Revisão de 2017) promulgado pelo Decreto nº 676 do Conselho de Estado da China. O protocolo de cuidado animal foi aprovado pelo Comitê de Cuidado e Uso de Animais da Universidade Agrícola da China (Pequim, China), e todos os esforços foram feitos para minimizar o sofrimento animal.
Animais e tratamentos
Diagrama do delineamento experimental. CON = controle, suplementado sem tributirina; TRB = tributirina, suplementado com 2 g/L de leite.
Fig. 1
Coletamos e designamos os animais com base em um delineamento em blocos completos casualizados de acordo com a data de nascimento. Vinte bezerros machos Holandeses recém-nascidos (peso ao nascer = 40,7 ± 2,10 kg; média ± DP) da Fazenda de Ensino e Pesquisa de Laticínios (Pequim, China) foram divididos em 10 blocos de 2 bezerros (diferença de idade dentro de 2 dias). Cada bloco de animais foi aleatoriamente designado para um grupo controle (CON) ou tratamento (TRB) (Fig. 1). Os bezerros do grupo CON foram alimentados com sucedâneo lácteo sem suplementação de tributirina (n = 10), enquanto os bezerros do grupo TRB foram alimentados com sucedâneo lácteo suplementado com produtos de tributirina (pó sólido desprotegido [35:65, tributirina:dióxido de silício] fornecido pela Guangdong VTR Biotechnology Co., Ltd, Guangdong, China) a 2 g/L (contendo 35% de tributirina pura) de sucedâneo lácteo (n = 10). Todos os bezerros tiveram transferência passiva bem-sucedida de imunidade (proteína total sérica ≥5,5 g/dL).
Cada bezerro recebeu 4 L de colostro pasteurizado (avaliado por refratômetro Brix, > 22%) usando uma mamadeira de alimentação por sonda esofágica de 4 L dentro de 1 hora após o nascimento. Do d 2 ao 56, os bezerros foram alojados em abrigos individuais (1,5 m × 2,0 m; largura × comprimento) cercados por grades de ferro (revestidas por cloreto de polivinila). A distância entre os abrigos era de aproximadamente 80 cm, de modo que os bezerros podiam ouvir e ver outros bezerros em abrigos vizinhos, mas não podiam ter contato nariz a nariz ou boca a boca. Cada abrigo era forrado com palha, que era trocada semanalmente. O substituto do leite (MR) foi misturado na proporção de 1:7 com água morna (cerca de 42 °C) e fornecido em baldes (sem tetinas). Nenhum antibiótico, probiótico, prebiótico ou butirato foi incluído no MR (FrieslandCampina Co., Ltd, Amersfoort, Países Baixos). Os bezerros foram alimentados com MR duas vezes ao dia às 07:00 e 15:00 com 4 L/d do d 2 ao 3, 6 L/d do d 4 ao 10 e 8 L/d do d 11 ao 42. O desmame foi realizado reduzindo o volume de leite a partir do d 43. Os bezerros foram alimentados com 6 L/d do d 43 ao 49 e 4 L/d do d 50 ao 56. Para todos os bezerros TRB, produtos comerciais de tributirina foram adicionados ao MR manualmente e misturados vigorosamente antes de alimentar os bezerros imediatamente. Os bezerros tiveram livre acesso a água e starter peletizado a partir do d 3. Todos os utensílios e instalações de alimentação foram limpos diariamente.
Medições de crescimento, consumo de ração e verificação de diarreia
Composição química dos alimentos experimentais (com base na MS).
Tabela 1
Composição de nutrientes1, % Substituto do leite Starter2 MS 96.0 89.5 PB 22.0 19.5 Extrato etéreo 20.0 2.79 Lactose 39.7 – Amido – 29.1 Cinza bruta 9.0 8.15 FDN – 21.8 FDA – 6.77
Os valores nutritivos são as médias dos resultados da análise das amostras coletadas a cada semana. MS = matéria seca, PB = proteína bruta, FDN = fibra em detergente neutro, FDA = fibra em detergente ácido.
Fornecido pela Cargill Inc. (China) e continha milho, farelo de milho, farelo de gérmen de milho, farelo de milho spray, farelo de trigo, farinha de trigo, farelo de soja, levedura e melaço como ingredientes principais.
O peso corporal (PC) e as estruturas corporais, incluindo altura na cernelha e perímetro torácico, foram medidos nos dias 1, 14, 28, 42 e 56 (Fig. 1). O consumo de starter foi registrado antes de cada alimentação matinal com base na quantidade oferecida e recusada. Amostras do starter (Tabela 1) foram coletadas e analisadas a cada duas semanas quanto ao teor de matéria seca (MS), proteína bruta (PB), extrato etéreo, cinzas brutas, fibra em detergente neutro (FDN) e fibra em detergente ácido (FDA), seguindo os métodos de [referência]. O teor de amido do starter foi determinado conforme descrito por [referência]. O substituto do leite (MR) foi coletado e analisado mensalmente para análises de PB, gordura e lactose utilizando um analisador automático de leite por infravermelho próximo (Foss, Hillerød, Dinamarca) no Beijing DHI Testing Center (Pequim, China). A verificação de diarreia foi determinada pela pontuação fecal. As pontuações foram registradas após a alimentação matinal com leite todos os dias, com base em um sistema de pontuação de fluidez de 1 a 4, de acordo com as diretrizes descritas por [referência]. As pontuações foram: 1 = firme, bem formado (não duro); 2 = macio, consistência de pudim; 3 = líquido, massa de panqueca; e 4 = líquido, respinga, suco de laranja polposo. Todas as pontuações fecais foram coletadas por um observador treinado independente, observando as fezes no chão ou na cauda e nos quartos traseiros do bezerro. Um dia diarreico foi definido quando a pontuação fecal era >2. A frequência de diarreia foi calculada com a seguinte equação: Frequência de diarreia = [(número de bezerros com diarreia × dias de diarreia)/(número total de bezerros × dias de ensaio)] × 100%. Os bezerros com diarreia foram tratados conforme os protocolos estabelecidos pelo veterinário da fazenda, sem uso de antibióticos. Em vez disso, foram tratados com 30–50 g/d de caulim (misturado ao MR, duas vezes ao dia) nos primeiros 2 dias e, em seguida, observados por 1 dia; se a diarreia persistisse, o bezerro receberia tratamento com caulim por mais 3 dias no máximo. Para alguns bezerros desidratados, foi administrada solução de NaCl a 0,9% por via intravenosa até a recuperação completa.
Amostras de sangue de todos os bezerros foram coletadas antes da alimentação matinal nos dias 28 e 56, e 8 amostras individuais foram selecionadas aleatoriamente para análise. O sangue foi amostrado por punção venosa jugular usando tubos de coleta a vácuo sem anticoagulante. As amostras de sangue foram então centrifugadas a 3.500 × g por 15 min a 4 °C para separação do soro, e em seguida foram aliquotadas e armazenadas em microtubos de 1,5 mL a −20 °C para análise posterior. Para investigar o estado imunológico e a resposta inflamatória de bezerros leiteiros, as concentrações de imunoglobulinas séricas (Ig; incluindo IgA, IgG e IgM) foram medidas por um analisador bioquímico automático (Hitachi 7600, Hitachi High-Technologies Corporation, Tóquio, Japão). Além disso, as concentrações de amiloide sérico A (SAA), haptoglobina (HP), IL-1β, IL-10 no soro foram medidas usando kits ELISA (Beijing Kangjia Hongyuan Biotechnology Co., Ltd., Pequim, China) em um instrumento de enzima-imunoensaio (Multiskan MK3, ThermoFisher Scientific Co., Ltd., Franklin, EUA). Biomarcadores do estado oxidativo, incluindo MDA, capacidade antioxidante total (T-AOC), superóxido dismutase total (T-SOD) e glutationa peroxidase (GSH-Px), foram analisados de acordo com as instruções do fabricante do kit (Jiancheng Bioengineering Institute, Nanquim, China).

Abate e coleta de amostras

No último dia do período experimental (d 56), 12 bezerros (6 por tratamento) foram selecionados aleatoriamente e sacrificados humanamente 2 h após a alimentação matinal com uma injeção de cloridrato de xilazina através do cateter jugular, a 0,1–0,15 mL/100 kg de PV (Huamu Animal Health Products Co., Ltd, Jilin, China). A exsanguinação foi realizada quando o bezerro atingiu um plano cirúrgico de anestesia, e a cavidade abdominal foi imediatamente aberta. O esôfago e o reto foram primeiro ligados e, em seguida, cada segmento foi identificado e amarrado para evitar potencial contaminação cruzada. Em seguida, segmentos intestinais de 15 cm do jejuno e íleo foram amostrados, respectivamente. O íleo foi definido como 30 cm proximal à junção íleo-cecal; o jejuno distal foi definido como 30 cm proximal ao ramo colateral da artéria mesentérica cranial; e o jejuno proximal foi definido como 100 cm distal ao esfíncter pilórico. Posteriormente, os tecidos do jejuno e íleo foram cortados em três segmentos. Um segmento foi fixado em paraformaldeído a 4% (Sigma, EUA) para análise microscópica histomorfométrica. Os outros dois segmentos foram abertos e lavados com tampão PBS estéril gelado (pH 7,2) até que a solução estivesse limpa e incolor, e então a mucosa foi raspada suavemente com lâminas de vidro estéreis. As amostras de mucosa foram colocadas em tubos estéreis livres de RNAase e imediatamente congeladas em nitrogênio líquido e transferidas para um freezer a −80 °C para posterior identificação da expressão gênica e análise microbiana.
Os segmentos intestinais fixados foram removidos do paraformaldeído a 4% e desidratados através de uma série graduada de etanol (50%, 70%, 80%, 90% e 100%), clarificados com xileno e embebidos separadamente em blocos de parafina na direção vertical. Para cada bloco, foram cortados cortes de 3 a 4 μm de espessura com o micrótomo LEICA RM2235 e corados com hematoxilina e eosina de acordo com as instruções do fabricante (Leica Microsystems GmbH, Simi Valley, Califórnia, Estados Unidos). As imagens foram obtidas usando microscopia de luz com ampliação de 40× (CK×53, Olympus Co., Tóquio, Japão). Cinco campos microscópicos por amostra foram selecionados para medir a altura das vilosidades (da ponta das vilosidades até a junção cripta-vilosidade) e a profundidade das criptas (a profundidade da invaginação entre vilosidades adjacentes) usando um analisador de imagens (Image Pro Plus 6.0, Media Cybernetics, Inc., MD, EUA).

Análise de PCR quantitativo em tempo real
O RNA total da mucosa do íleo e jejuno foi extraído por um kit de extração de RNA (Sinogene Biotech co., Ltd., China) de acordo com o protocolo. As amostras de RNA foram tratadas com DNase I antes da síntese de cDNA (Tabela do Apêndice 1). A transcrição reversa foi realizada com 1 μg de RNA usando um kit de síntese de cDNA (K1641, Thermo Fisher Scientific, Inc., EUA) para sintetizar o cDNA. A expressão gênica da mucosa foi determinada por PCR quantitativo de transcrição reversa (RT-qPCR), que foi realizado de acordo com as instruções do SYBR Premix Ex Taq II (TaKaRa, Shiga, Japão) em um sistema LightCycler 480II (Roche Applied Science, Indianapolis, IN, Estados Unidos). As amplificações foram realizadas em triplicata para cada amostra. Os sistemas e programas de reação da transcrição reversa e RT-qPCR são mostrados nas Tabelas do Apêndice 2 a 4. Os iniciadores para RT-qPCR (Tabela do Apêndice 5) foram sintetizados pela Beijing Tianyi Huiyuan Biological Technology Co., Ltd (Pequim, China). A expressão relativa dos genes alvo em relação ao gene de referência (β-actina) foi calculada de acordo com o método 2−ΔΔCt.
O DNA genômico total da mucosa intestinal foi extraído utilizando o método modificado de batimento repetido de contas e coluna, conforme descrito por. Resumidamente, aproximadamente 0,2 g de amostra de tecido foram adicionados a tubos de batimento de contas e, em seguida, submetidos ao batimento de contas, seguido de purificação em coluna utilizando um Kit de Isolamento de DNA PowerSoil (Mo Bio Laboratories, Inc., Carlsbad, CA, EUA). A região V3 a V4 do gene 16S rRNA foi amplificada utilizando os primers F338 (5′- ACTCCTACGGGAGGCAGCAG -3′) e R806 (5′- GGACTACHVGGGTWTCTAAT -3′) usando o seguinte programa: 95 °C por 5 min, 20 ciclos de 95 °C por 30 s, 50 °C por 30 s, 72 °C por 40 s, e a etapa de extensão final de 72 °C por 7 min e manutenção a 4 °C. Os amplicons foram extraídos de géis de agarose a 2% e purificados utilizando um Kit EZNA Cycle Pure (Omega Bio-Tek, Norcross, GA, EUA) seguindo as instruções do fabricante. A qualidade e a quantidade dos produtos de PCR purificados foram avaliadas utilizando um NanoDrop 1000 (NanoDrop Technologies, Wilmington, DE, EUA). O sequenciamento paired-end (2 × 250 pb) foi realizado na plataforma Illumina HiSeq 2500 (Illumina, San Diego, CA, EUA) para leituras paired-end de 300 pb na Biomarker Biotechnology Co., Ltd (Pequim, China).

Os dados de sequência foram analisados utilizando o pacote Quantitative Insights into Microbial Ecology 2 (QIIME 2) (https://qiime2.org). A filtragem de qualidade foi realizada sob condições específicas de filtragem (Phred score <20; leituras <220 pb) para obter as tags limpas de alta qualidade de acordo com o QIIME 2. Os singletons e as sequências quiméricas foram identificados e removidos pelo UCHIM (versão 8.1), e as sequências com um nível de similaridade superior a 97% foram agrupadas em unidades taxonômicas operacionais (UTOs) utilizando o USEARCH (versão 10; http://drive5.com/uparse/). A caracterização taxonômica foi denominada de acordo com o banco de dados bacteriano SILVA (Release 132, http://www.arb-silva.de). Os índices de diversidade alfa (Chao 1, Shannon, Simpson e espécies observadas) e a cobertura de Good foram calculados pelo QIIME 2. Para a diversidade beta, a análise de coordenadas principais (PCoA) dos perfis microbianos foi conduzida utilizando matrizes de distância UniFrac em R (http://www.rstudio.com). O PICRUSt 2 foi executado para analisar as vias KEGG diferencialmente abundantes (nível 3).
Com base no PROC POWER e no procedimento GLMPOWER no SAS, foi obtido um tamanho amostral com poder de 0,8 sob P < 0,05. As análises estatísticas foram realizadas utilizando o bezerro como unidade experimental. A homogeneidade das variâncias e a normalidade dos dados foram testadas primeiro utilizando o procedimento UNIVARIATE do SAS (versão 9.2, SAS Institute Inc., Cary, NC, EUA). A instrução PROC MIXED do SAS foi utilizada com medidas repetidas no tempo para PV, medidas de estrutura corporal, ganho médio diário (GMD) e parâmetros sanguíneos. O modelo incluiu os efeitos fixos de tempo, tratamento e interação tempo × tratamento, e o bezerro dentro do tratamento como efeito aleatório. Os graus de liberdade foram calculados utilizando a opção de aproximação de Kenward-Roger do procedimento MIXED. As estruturas de covariância (estrutura de covariância simples, simetria composta, estrutura autorregressiva heterogênea de primeira ordem, estrutura de ante-dependência de primeira ordem, geral completa [não estruturada]) das medidas repetidas intrasujeito foram escolhidas com base no critério de informação de Akaike. Os dados de frequência de diarreia foram resumidos por período (d 1 a 28, d 29 a 56) e analisados utilizando o teste de Qui-quadrado. O teste V de Cramer foi utilizado para testes de força estatística do Qui-quadrado. Parâmetros morfológicos e expressão gênica do intestino delgado (jejuno e íleo) também foram analisados utilizando um modelo de efeitos mistos, mas com o tratamento como único efeito fixo, e o animal dentro do tratamento como efeito aleatório. Um teste de Kruskal–Wallis foi utilizado para analisar indicadores de diversidade alfa. Diferenças de P < 0,05 foram consideradas significativas e 0,05 ≤ P < 0,10 foram consideradas como tendência. Bactérias intestinais foram comparadas utilizando análise de tamanho de efeito por discriminante linear (LEfSe) e diferenças significativas foram consideradas para escore LDA > 3,5 e valor de P < 0,05. Correlações de postos de Spearman foram realizadas entre metabólitos sanguíneos, expressão gênica, parâmetros morfológicos e a abundância relativa de gêneros bacterianos associados à mucosa do jejuno e íleo. Correlações significativas foram definidas como −0,5 < ρ < 0,5 e P < 0,05, onde ρ é definido como o coeficiente de correlação de postos de Spearman.
Resultados
Desempenho de crescimento, consumo de starter e frequência de diarreia
Efeitos da administração de tribirina no desempenho de crescimento e diarreia de bezerros pré-desmame (n = 10) (A) Peso corporal (PV) (média ± EPM). (B) Altura da cernelha (média ± EPM). (C) Perímetro torácico (média ± EPM). (D) Ganho médio diário (GMD) (média ± EPM). (E) Frequência de diarreia. CON = controle, sem suplementação de tribirina; TRB = tribirina, suplementado com 2 g/L de leite.
Fig. 2
Efeitos da administração de tribirina no consumo de starter de bezerros.
Tabela 2
Consumo de starter, g/d Tratamento1 EPM Valor-p CON TRB Tratamento Tempo Tratamento × Tempo d 3–28 45,0 68,8 13,4 0,18 <0,001 – d 28–56 624,4 690,0 83,8 0,59 <0,001 – d 3–56 334,0 379,3 54,0 0,56 <0,001 0,66
CON = substituto do leite suplementado sem tributirina, TRB = substituto do leite suplementado com 2 g/L de tributirina.
Como mostrado na Fig. 2, a suplementação com tributirina não teve efeitos significativos no PC, medidas corporais e GMD. Os bezerros do grupo TRB apresentaram uma frequência de diarreia significativamente menor do d 29 ao 56 (0 vs. 6,70%, P < 0,001) e durante todo o período (6,70% vs. 12,5%, P = 0,003) em comparação com os bezerros do grupo CON. O consumo de ração inicial de todos os bezerros aumentou significativamente com a idade (P < 0,001), enquanto não foram encontradas diferenças significativas no consumo de ração inicial entre os tratamentos do d 3 ao 28, do d 29 ao 56 e durante todo o período (Tabela 2).
Parâmetros séricos imunológicos e antioxidantes
Efeitos da administração de tributirina nos parâmetros sanguíneos imunológicos e relacionados à inflamação de bezerros pré-desmame (n = 8) (A a C) Imunoglobulina G (IgG), A (IgA), M (IgM). (D) Haptoglobina (HP). (E) Amiloide sérica A (SAA). (F) Interleucina 1β (IL-1β). (G) Interleucina 10 (IL-10). CON = controle, suplementado sem tributirina; TRB = tributirina, suplementado com 2 g/L de leite.
Fig. 3
A concentração de IgA tendeu a diminuir com a administração de tributirina no d 56 (P = 0,077), enquanto nenhum efeito significativo foi observado nas concentrações de IgG e IgM (Fig. 3A–C). Um efeito tratamento × semana (P = 0,002) foi observado para IL-1β durante todo o período, e a administração de tributirina reduziu significativamente a concentração de IL-1β no d 28 (P = 0,001), mas não foram encontradas diferenças significativas no d 56. A concentração de SAA tendeu a diminuir no d 56 (P = 0,079), enquanto não foram encontradas diferenças significativas em HP e IL-10 (Fig. 3D–G) no TRB em comparação ao grupo CON. Não foram encontradas diferenças significativas nas concentrações sanguíneas dos parâmetros antioxidantes séricos, incluindo T-AOC, T-SOD, GSH-Px e MDA entre os tratamentos no d 28 ou 56 (dados não mostrados).
Morfologia do intestino delgado
Efeitos da administração de tributirina na morfologia intestinal de bezerros no d 56 (n = 6). Microscopia de luz da altura das vilosidades e profundidade das criptas do jejuno (A) e íleo (B) em bezerros. (C) A relação altura das vilosidades/profundidade das criptas (V/C) do jejuno e íleo. (D) A morfologia intestinal do jejuno e íleo. VH = altura das vilosidades; CD = profundidade das criptas; CON = controle, suplementado sem tributirina; TRB = tributirina, suplementado com 2 g/L de leite.
Fig. 4
Como mostrado na Fig. 4, a tributirina aumentou a altura das vilosidades (P < 0,001) e a relação altura das vilosidades/profundidade das criptas (V/C) (P = 0,046), mas não teve efeitos significativos na profundidade das criptas do jejuno. Além disso, a altura das vilosidades do íleo tendeu a ser maior no grupo TRB em comparação ao grupo CON (P = 0,074).
Parâmetros imunológicos e antioxidantes intestinais
Efeitos da administração de tributirina no receptor Toll-like 2 (TLR2), nas expressões gênicas de junções estreitas e no receptor 41 acoplado à proteína G (GPR 41) de bezerros no dia 56 (n = 6). (A a C) Expressão gênica no jejuno; (D a F) Expressão gênica no íleo. ZO-1 = zonula oclusora 1; IL-1β = interleucina 1β; IL-10 = interleucina 10. CON = controle, suplementado sem tributirina; TRB = tributirina, suplementado com 2 g/L de leite.
Fig. 5
As funções imunológicas e de barreira intestinal no jejuno e íleo de bezerros no dia 56 foram avaliadas (Fig. 5). Os resultados mostraram que a administração de tributirina reduziu significativamente a expressão gênica do receptor Toll-like 2 (TLR2, P = 0,045) e tendeu a reduzir a expressão gênica de IL-1β (P = 0,088), mas não teve efeito significativo na expressão gênica de IL-10 no jejuno. Além disso, a administração de tributirina aumentou significativamente a expressão gênica de claudina-4 (P = 0,022), embora não tenham sido encontradas diferenças significativas nas expressões gênicas de zonula oclusora 1 (ZO-1), ocludina ou claudina-1 no jejuno. No íleo, a administração de tributirina não teve efeitos significativos nas expressões gênicas, incluindo TLR2, IL-1 e IL-10. Embora não tenham sido observados efeitos significativos nas expressões gênicas de ZO-1, ocludina ou claudina-1 no íleo, a expressão gênica de claudina-4 foi significativamente elevada no grupo TRB (P = 0,029). A expressão gênica do receptor 41 acoplado à proteína G (GPR 41) foi significativamente aumentada no íleo (P = 0,019), porém nenhum efeito significativo foi encontrado no jejuno.
Perfis de composição da microbiota intestinal e diferenças taxonômicas
Efeitos da administração de tributirina na composição da microbiota intestinal de bezerros no dia 56 (n = 6). (A) Diagrama de Venn do jejuno. (B) Diagrama de Venn do íleo. (C) Diversidade alfa no jejuno. (D) Diversidade alfa no íleo. CON = controle, suplementado sem tributirina; TRB = tributirina, suplementado com 2 g/L de leite.
Fig. 6
Efeitos da administração de tributirina na diversidade beta da microbiota intestinal de bezerros no dia 56 (n = 6). Diversidade beta da análise de coordenadas principais (PCoA) baseada nas distâncias UniFrac não ponderadas do jejuno (A); diversidade beta da PCoA baseada nas distâncias UniFrac não ponderadas do íleo (B). CON = controle, suplementado sem tributirina; TRB = tributirina, suplementado com 2 g/L de leite.
Fig. 7
Um total de 758.772 e 710.338 sequências efetivas foram obtidas das amostras jejunais (n = 6 por tratamento) e ileais (n = 6 por tratamento), respectivamente. Com base em 97% de similaridade de sequência, 3.777 e 3.706 OTUs foram identificadas no jejuno e íleo, respectivamente. No jejuno, apesar das 1.845 OTUs comuns, 203 OTUs foram isoladas exclusivamente no grupo CON e 1.729 OTUs estavam presentes no grupo TRB (Fig. 6A). Além disso, 2.293 OTUs comuns foram identificadas no íleo, e 520 OTUs foram isoladas exclusivamente no grupo CON e 893 OTUs estavam presentes no grupo TRB (Fig. 6B). Os índices de diversidade α mostraram que a administração de tribuirina aumentou significativamente o índice de Shannon (P = 0,045) e tendeu a aumentar o índice de Simpson (P = 0,086), mas não foram encontradas diferenças significativas nos índices Chao 1 e ACE na microbiota jejunal (Fig. 6C). A administração de tribuirina não teve efeitos significativos sobre os mesmos índices na microbiota ileal (Fig. 6D). A análise de coordenadas principais (PCoA) baseada nas distâncias UniFrac não ponderadas mostrou que as bactérias tenderam a se separar entre os 2 tratamentos no jejuno (R = 0,235, P = 0,075), enquanto uma grande similaridade foi encontrada no íleo (Fig. 7).
Bactérias intestinais diferenciais do jejuno (A) e íleo (B) entre CON e TRB. As diferenças significativas foram testadas pela análise de efeito de tamanho da análise discriminante linear (LEfSe) com pontuação de análise discriminante linear (LDA) > 3,5 e valor de P < 0,05. CON = controle, suplementado sem tribuirina; TRB = tribuirina, suplementado com 2 g/L de leite.
Os perfis de composição da microbiota do intestino delgado foram mostrados no Apêndice Fig. 1 e 2. Características discriminatórias foram observadas na abundância relativa bacteriana nos níveis de filo e gênero com um limiar idêntico que significava que a abundância relativa em um grupo era superior a 0,5%. Os filos bacterianos dominantes incluíram Bacteroidetes, Firmicutes e Proteobacteria tanto no jejuno quanto no íleo. No nível de gênero no jejuno, Prevotella_7, Intestinibacter e Escherichia-Shigella foram a microbiota dominante no grupo CON, enquanto Bacteroidales_S24-7_group, Rikenellaceae_RC9_gut_group e Lachnospiraceae_NK4A136_group foram a microbiota dominante no grupo TRB. No íleo, Escherichia-Shigella, Nicotiana_otophora e Turicibacter foram a microbiota dominante no grupo CON. Da mesma forma, Bacteroidales_S24-7_group, Rikenellaceae_RC9_gut_group e Lachnospiraceae_NK4A136_group foram a microbiota dominante no íleo do grupo TRB. A análise LEfSe com valores de LDA de táxons superiores a 3,5 foi realizada para comparação de abundância diferencial entre o grupo CON e TRB (Fig. 8A e B). Nenhuma abundância significativamente maior de microbiota foi encontrada no jejuno ou íleo dos bezerros no grupo CON. No jejuno, os bezerros no grupo TRB apresentaram abundâncias significativamente maiores das famílias Rikenellaceae e Ruminococcaceae em comparação com aqueles no grupo CON (LDA >3,5, P < 0,05), e Rikenellaceae_RC9_gut_group foi o gênero mais abundante no grupo TRB, seguido por Lachnospiraceae_NK4A136_group (LDA >3,5, P < 0,05). No íleo, as famílias Ruminococcaceae e Lachnospiraceae apresentaram abundâncias significativamente maiores no grupo TRB (LDA >3,5, P < 0,05), e Bacteroidales_S24_7_group e Lachnospiraceae_NK4A136_group foram os dois gêneros mais abundantes (LDA >3,5, P < 0,05). Além disso, vários táxons foram mais abundantes tanto no jejuno quanto no íleo do grupo TRB, incluindo Ruminococcus_1, Ruminococcaceae_UCG_013, Ruminococcaceae_UCG_010, Ruminococcaceae_UCG_005, Lachnospiraceae_NK4A136_group, Alloprevotella (LDA >3,5, P < 0,05).
Análise de correlação de Spearman entre microbiota, parâmetros sanguíneos e genes associados à função imune intestinal e de barreira
Análise de correlação de Spearman entre microbiota e genes associados à função imune intestinal e de barreira, parâmetros sanguíneos e parâmetros morfológicos no jejuno (A) e íleo (B). Genes significativamente diferentes (receptor do tipo Toll 2 [TLR2], interleucina 1β [IL-1β], claudina-4, receptor acoplado à proteína G 41 [GPR 41]), parâmetros sanguíneos (IL-1β, amiloide sérico A [SAA]) e parâmetros morfológicos (altura das vilosidades, VH) foram analisados com gêneros microbianos significativamente diferentes no jejuno e íleo. ∗P < 0,05, ∗∗P < 0,01, ∗∗∗P < 0,001.
Fig. 9
Conforme mostrado na Fig. 9A, Ruminococcaceae e Lachnospiraceae apresentaram correlação negativa com as expressões gênicas de TLR2 e IL-1β no jejuno e com a concentração sanguínea de IL-1β (P < 0,05), mas correlação positiva com a expressão gênica de claudina-4 e a altura das vilosidades (P < 0,01). Rikenellaceae apresentou correlação negativa com a expressão gênica de TLR2 e IL-1β sanguínea (P < 0,05), mas forte correlação positiva com a altura das vilosidades do jejuno (P < 0,01). Além disso, Prevotella foi correlacionada negativamente com a concentração sanguínea de IL-1β (P < 0,05), mas positivamente com a altura das vilosidades do jejuno (P < 0,001). A expressão gênica de GPR 41 e a SAA sanguínea não apresentaram correlações significativas com nenhum táxon da microbiota. Em comparação com o jejuno, menos correlações foram observadas entre gêneros microbianos e genes associados à função imune e de barreira intestinal, parâmetros sanguíneos e morfológicos no íleo (Fig. 9B). As expressões gênicas de TLR2 e IL-1β e a concentração de SAA no sangue não foram correlacionadas com nenhum gênero no íleo. Os gêneros significativamente enriquecidos Ruminococcaceae e Lachnospiraceae no íleo do grupo TRB foram correlacionados negativamente com a concentração sanguínea de IL-1β (P < 0,05).
Estudos anteriores mostraram que a suplementação de butirato pode melhorar o desenvolvimento do rúmen ao aumentar a concentração de butirato no rúmen e afetar positivamente as funções morfológicas e metabólicas das células epiteliais ruminais. Além disso, e determinaram que o butirato também poderia estimular o desenvolvimento do intestino delgado ao aumentar o comprimento das vilosidades, a espessura da mucosa e a atividade de enzimas (como lactase, maltase, etc.) e ao diminuir a apoptose em bezerros. Esses efeitos positivos do butirato no GIT podem eventualmente levar a um melhor desempenho de crescimento de bezerros leiteiros. No entanto, estudos mostraram diferenças nos efeitos do butirato sobre o desempenho de crescimento. e relataram que o butirato aumentou o PC, o GMD ou o crescimento estrutural durante o período pré-desmame, enquanto encontraram tal efeito principalmente após o desmame. Não observamos diferenças significativas no desempenho de crescimento e no consumo de starter entre os tratamentos no presente estudo, o que é semelhante aos nossos achados em bezerras leiteiras durante o período pré-desmame. As razões para a incongruência entre os estudos podem ser atribuídas às doses de butirato aplicadas, à duração da suplementação e ao manejo dos animais (por exemplo, estratégias de alimentação com leite). Talvez a ação do butirato durante o período pré-desmame tenha estimulado o desenvolvimento do GIT, pois descobrimos que a suplementação de tributirina aumentou o comprimento das vilosidades intestinais e a relação V/C no jejuno, bem como o comprimento das vilosidades no íleo, o que é consistente com os achados de. Portanto, esses efeitos positivos do butirato no desenvolvimento do GIT podem se traduzir em maior desempenho no período pós-desmame, mas não no período pré-desmame. Quanto à diarreia, os bezerros do grupo TRB tiveram uma frequência reduzida de diarreia do d 29 ao 56 e durante todo o período, mas não mostraram nenhuma vantagem na redução da frequência de diarreia do d 1 ao 28. Os bezerros são mais suscetíveis à diarreia durante as semanas 2 a 3 após o nascimento, o que pode ser suprimido pela alimentação com butirato na primeira semana após o nascimento, conforme relatado redução de fezes amolecidas do d 8 ao 14, melhora no desenvolvimento do rúmen e intestino delgado (d 26) quando o butirato foi suplementado a partir do d 5. Um melhor desenvolvimento do GIT pode ajudar a reduzir os efeitos negativos da diarreia no GIT. No presente estudo, observamos uma diminuição numérica na frequência de diarreia (13,4% vs. 18,4%) do d 1 ao 28 em bezerros suplementados com tributirina, o que foi inconsistente com o estudo de.
Talvez, o desenvolvimento intestinal melhorado devido à suplementação com tributerina não tenha conseguido amenizar completamente os efeitos negativos da diarreia em nosso estudo. No entanto, devido à inacessibilidade do intestino delgado, não pudemos delinear os efeitos da tributerina no desenvolvimento intestinal durante o primeiro mês deste estudo. Os efeitos positivos nos parâmetros sanguíneos e no desenvolvimento do intestino delgado no d 56 em nosso estudo apontam para efeitos residuais da suplementação com tributerina desde a primeira semana até fases posteriores da vida. Além disso, levando em consideração o baixo desempenho dos bezerros CON e o nível mais baixo de IL-1β nos bezerros TRB no d 28, a suplementação com tributerina, pelo menos parcialmente, reverte os efeitos negativos da diarreia.
O papel do butirato na anti-inflamação, imunidade mucosal, integridade intestinal e funções de barreira tem sido investigado em várias espécies de mamíferos. Em humanos e animais de fazenda, o butirato demonstrou inibir citocinas pró-inflamatórias incluindo IFN-γ, TNF-α, IL-1β, IL-6 e IL-8, e regular positivamente IL-10 e TGF-β. O mecanismo mais estudado subjacente à ação anti-inflamatória do butirato é a inibição do fator nuclear kappa B (NF-κB), que controla a expressão de uma variedade de genes que codificam citocinas e enzimas pró-inflamatórias, moléculas de adesão, fatores de crescimento, proteínas de fase aguda e receptores imunes. No presente estudo, a expressão gênica de IL-1β foi suprimida no jejuno, enquanto sua concentração no sangue foi reduzida pela suplementação de tributirina no d 28, embora apenas uma redução numérica tenha sido encontrada no d 56. Além disso, a concentração de SAA no sangue diminuiu com a suplementação de tributirina. A SAA, uma das mais importantes APPs bovinas, pode ser usada como um biomarcador respondendo a infecção, inflamação e trauma. Ela aumenta no sangue durante a reação de fase aguda, mas está presente em níveis baixos em animais saudáveis. Esses resultados juntos indicaram um efeito positivo da suplementação de tributirina na redução da inflamação em bezerros leiteiros, o que é semelhante ao encontrado em leitões e frangos de corte. Também descobrimos que a expressão gênica de TLR-2 foi regulada negativamente. O TLR-2 desempenha um papel importante na ativação do NF-κB através das vias de sinalização TLR–NF-κB, portanto, a expressão gênica reduzida de TLR-2 confirmou ainda mais a ação anti-inflamatória do butirato em bezerros leiteiros. O GPR 41, um dos receptores mais importantes de AGCCs, foi elevado no íleo de bezerros que receberam tributirina neste estudo. Consistentemente, a abundância relativa da microbiota produtora de AGCCs aumentou em bezerros suplementados com tributirina, o que pode ter aumentado a produção de AGCCs e, eventualmente, contribuído para a regulação positiva do GPR 41. O GPR 41, acompanhado pelo GPR 43, pode ativar as vias de sinalização da quinase regulada por sinal extracelular 1/2 e da proteína quinase ativada por mitógeno p38 em células epiteliais para induzir a produção rápida de quimiocinas e citocinas durante as respostas imunes e, eventualmente, mediar a imunidade protetora e o reparo tecidual.
O butirato também é bem conhecido por manter a integridade intestinal e a função de barreira. Proteínas de junção íntima, como ocludina e claudinas, podem se ligar às proteínas da zônula oclusiva e formar a barreira primária contra patógenos. No nível celular, foi documentado que o butirato poderia melhorar a função da barreira epitelial intestinal por meio da regulação positiva da transcrição da proteína de junção íntima claudina-1. Quando adicionado à ração, o butirato também poderia melhorar a transcrição de proteínas de junção em aves. Da mesma forma, também encontramos expressão gênica aumentada de claudina-4 tanto no jejuno quanto no íleo do grupo TRB, o que sugeriu que a barreira física intestinal que protege os intestinos contra infecção patogênica foi aprimorada em bezerros leiteiros. Os efeitos positivos do butirato na integridade intestinal e na função de barreira podem, eventualmente, levar a uma menor frequência de diarreia em bezerros suplementados com tribuirina no presente estudo e em outros estudos.
O papel da microbiota intestinal no desenvolvimento e na saúde do trato gastrointestinal (TGI) em diferentes espécies animais tem sido amplamente reconhecido. A manipulação da microbiota intestinal durante o início da vida, um fator-chave que influencia a saúde intestinal, é uma abordagem para melhorar a saúde intestinal de bezerros. O butirato e seus derivados têm sido amplamente utilizados como aditivos alimentares para proteger a saúde intestinal dos animais. No entanto, pesquisas limitadas foram conduzidas sobre os mecanismos microbianos que contribuem para os efeitos protetores do butirato no intestino. Em consonância com o presente estudo, pesquisas anteriores mostraram que a diversidade alfa microbiana era semelhante, enquanto a diversidade beta era diferente em suínos e aves suplementados com ou sem butirato. Esses resultados indicam um efeito potencial da suplementação com butirato na estrutura da microbiota intestinal. Assim como em nosso estudo, foi relatado que Lachnospiraceae aumentou com a suplementação de butirato. Ao mesmo tempo, também descobrimos que a abundância de Ruminococcaceae foi significativamente maior no grupo TRB, e ambas apresentaram forte correlação negativa com a expressão de genes relacionados à inflamação, mas correlação positiva com a expressão de genes relacionados à função de barreira e à altura das vilosidades. Lachnospiraceae e Ruminococcaceae são duas das famílias mais abundantes na ordem Clostridiales e compartilham um papel comum na degradação de polissacarídeos complexos em ácidos graxos de cadeia curta que podem ser usados como fonte de energia pelo hospedeiro, o que contribui para o desenvolvimento das células epiteliais intestinais e da estrutura morfológica. Além disso, Lachnospiraceae e Ruminococcaceae têm sido associadas positivamente a controles saudáveis e caracterizadas como bactérias comensais anti-inflamatórias. Como tal, Lachnospiraceae e Ruminococcaceae mostraram-se esgotadas na doença inflamatória intestinal e na doença de Crohn, respectivamente. O mecanismo anti-inflamatório dessas duas bactérias está altamente relacionado às suas propriedades de produção de butirato (AGCC). Além disso, Prevotella também foi aumentada em bezerros suplementados com tributirina neste estudo e correlacionou-se negativamente com a expressão do gene IL-1β, mas positivamente com a expressão do gene claudina-4 e a altura das vilosidades do jejuno. Prevotella é conhecida por fermentar polissacarídeos dietéticos complexos para produzir energia para o desenvolvimento intestinal. Além disso, Prevotella pode produzir acetato, que é posteriormente utilizado por outras espécies microbianas para produzir butirato e, assim, contribui para a maturação da imunidade da mucosa e ajuda a manter o equilíbrio anti/pró-inflamatório. Os resultados do presente estudo destacaram ainda mais os efeitos positivos no desenvolvimento e na saúde intestinal das três bactérias acima em bezerros.
Rikenellaceae, Porphyromonadaceae e Christensenellaceae também apresentaram maior abundância no jejuno e íleo de bezerros do grupo TRB. No entanto, nenhuma associação foi observada entre elas e os genes associados à função imune e de barreira intestinal ou parâmetros sanguíneos. Rikenellaceae, uma família recentemente estabelecida na ordem Bacteroidales, está posicionada próxima a Porphyromonadaceae e foi encontrada positivamente correlacionada com a produção de acetato e butirato. Tanto Rikenellaceae quanto Porphyromonadaceae foram relatadas como enriquecidas em grupos saudáveis, mas suprimidas naqueles com maior inflamação. Além disso, Christensenellaceae foi recentemente descoberta como altamente correlacionada com Rikenellaceae e associada ao metabolismo de vários açúcares e à produção de acetato e butirato. Em uma meta-análise de doença inflamatória intestinal que incluiu mais de 3000 indivíduos, Christensenellaceae foi relatada como um dos cinco táxons considerados a assinatura de um intestino saudável. Portanto, a maior abundância de Rikenellaceae, Porphyromonadaceae e Christensenellaceae no grupo TRB pode indicar seus efeitos protetores no intestino delgado de bezerros leiteiros, embora o mecanismo precise ser mais estudado.
Resumo gráfico do efeito da administração de tribirina no desenvolvimento e saúde intestinal de bezerros leiteiros pré-desmame. A administração oral de tribirina estimulou a colonização de bactérias produtoras de SCFA, melhorou as funções de barreira intestinal, suprimiu a resposta inflamatória e, consequentemente, melhorou o desenvolvimento e a saúde intestinal de bezerros leiteiros pré-desmame. TLR2 = receptor toll-like 2, IL-1β = interleucina 1β, GPR 41 = receptor acoplado à proteína G 41, SAA = amiloide sérica A. fator nuclear kappa B = NF-κB.
Fig. 10
Neste estudo, aplicamos o sequenciamento de amplicons do gene 16S rRNA e técnicas de biologia molecular e demonstramos os efeitos positivos da suplementação de butirato exógeno no MR sobre o desenvolvimento e saúde intestinal de bezerros leiteiros (Fig. 10). No entanto, o número de bezerros (6 bezerros por grupo) utilizado pode não ter sido adequado para testar apropriadamente os efeitos da tribirina no desenvolvimento intestinal. Estudos em coortes maiores, possivelmente em diferentes estágios fisiológicos (pré ou pós-desmame), por meio de técnicas avançadas, como metagenômica shotgun combinada com metabolômica, aumentarão ainda mais nossa compreensão e fornecerão insights sobre os mecanismos subjacentes à relação entre a microbiota intestinal e os genes associados à função imune e de barreira intestinal em bovinos leiteiros. Além disso, descobrimos que a suplementação com tribirina teve um efeito maior no desenvolvimento e saúde do jejuno em comparação ao íleo. Da mesma forma, foram descritos efeitos mais positivos (melhora na morfologia e nas atividades enzimáticas) da suplementação com butirato no jejuno, em vez do íleo. As discrepâncias na morfologia, fisiologia e composição microbiana entre o jejuno e o íleo podem explicar isso.
Conclusões
A administração oral de tributirina poderia reduzir a concentração de IL-β e SAA no sangue, e diminuir a expressão gênica de TLR2 e IL-1β, mas aumentar a expressão gênica de claudina-4 e GPR 41 em bezerros leiteiros pré-desmame. Além disso, a administração de tributirina melhorou os parâmetros morfológicos do intestino delgado. Ademais, a suplementação de tributirina aumentou significativamente a abundância de bactérias produtoras de AGCC, incluindo Ruminococcaceae, Lachnospiraceae, Prevotella e Rikenellaceae, que foram negativamente associadas à expressão gênica inflamatória, mas positivamente associadas aos genes de barreira intestinal e parâmetros morfológicos. Portanto, a suplementação de tributirina estimulou a colonização de bactérias produtoras de AGCC, melhorou a função de barreira intestinal, suprimiu a resposta inflamatória e, consequentemente, melhorou o desenvolvimento e a saúde intestinal de bezerros leiteiros pré-desmame.
Contribuições dos autores
Zhijun Cao: Conceituação, Supervisão, Aquisição de financiamento; Shuai Liu e Junda Wu: Investigação, Curadoria de dados, Análise formal, Elaboração do rascunho original; Zhaohai Wu, Jinghui Li, Gibson Maswayi Alugongo, Jianxin Xiao, Zhiyuan He e Yulin Ma: Investigação, Revisão e edição, Visualização; Shengli Li: Revisão e edição.
Declaração de interesse concorrente
Declaramos que não temos relações financeiras e pessoais com outras pessoas ou organizações que possam influenciar inapropriadamente nosso trabalho, e não há interesse profissional ou outro interesse pessoal de qualquer natureza ou tipo em qualquer produto, serviço e/ou empresa que possa ser interpretado como influenciador do conteúdo deste artigo.
Referências
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Dados suplementares
Os seguintes são os dados suplementares deste artigo:
Revisão por pares sob responsabilidade da Associação Chinesa de Ciência Animal e Medicina Veterinária.
Dados complementares a este artigo podem ser encontrados online em https://doi.org/10.1016/j.aninu.2022.06.004.