pmid: "39309562"
title: "Atividade antioxidante, anti-inflamatória e antimicrobiana do extrato aquoso de acerola e amla."
authors: "Burnice Nalina Kumari C, Ambalavanan N, Rajesh Kumar S, Mahendra J, Sudhakar U"
journal: "Bioinformation"
pubdate: "2024"
doi: "10.6026/973206300200765"
source: "PMC Full Text"

Atividade antioxidante, anti-inflamatória e antimicrobiana do extrato aquoso de acerola e amla.

Autores

Burnice Nalina Kumari C, Ambalavanan N, Rajesh Kumar S, Mahendra J, Sudhakar U

Periodico

Bioinformation (2024)

Conteudo

Atividade antioxidante, anti-inflamatória e antimicrobiana do extrato aquoso de acerola e amla
Amla, cientificamente conhecida como emblica officinalis e Acerola (malphigian emarginata) são ambas frutas ricas em vitamina C que possuem propriedades medicinais variadas, sendo utilizadas em estratégias de manejo da saúde para prevenção de doenças. Portanto, é de interesse explorar as propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias, antibacterianas e citotóxicas dos extratos aquosos de Acerola e Amla. Assim, a atividade anti-inflamatória de Acerola e amla foi avaliada usando o ensaio de desnaturação da albumina sérica bovina (Ensaio BSA), e as propriedades antioxidantes foram comparadas usando o ensaio DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazila). As atividades antibacterianas de ambos os extratos foram avaliadas através da técnica de difusão em poço de ágar contra patógenos orais e do ensaio de letalidade com Artemia salina para citotoxicidade. A presente pesquisa lança luz sobre remédios naturais para doenças relacionadas ao estresse oxidativo, condições inflamatórias e infecções bacterianas, oferecendo caminhos promissores para o manejo de doenças e estratégias preventivas de saúde, especialmente no tratamento de doenças de saúde bucal como a periodontite.
Contexto:
Doenças orais atribuídas a patógenos emergiram como uma preocupação significativa nos últimos anos. A identificação do Coronavírus da Síndrome Respiratória Aguda Grave 2 (SARS-CoV-2) na cavidade oral sugere um impacto potencial na saúde bucal. Além disso, há uma associação documentada entre patógenos periodontais e o início do câncer oral, destacando uma ligação entre doenças periodontais e vários cânceres humanos. Candida, reconhecida como um patógeno oportunista, está implicada em condições orais como candidíase oral e estomatite por dentadura, bem como em doenças sistêmicas como pneumonia aspirativa e fungemia. A presença de patógenos orais, especialmente em biofilmes, é um fator contribuinte para o desenvolvimento de cáries dentárias e doença periodontal, com abordagens terapêuticas convencionais mostrando eficácia decrescente devido ao aumento da resistência a medicamentos. A resposta imune na cavidade oral desempenha um papel fundamental na prevenção de infecções fúngicas orais, e as interações com outros membros do microbioma oral podem influenciar a patogenicidade microbiana. Numerosos estudos exploraram extensivamente o potencial terapêutico de extratos de ervas no tratamento de doenças orais, e tais extratos obtidos de plantas medicinais e ervas exibem ações terapêuticas notáveis, incluindo propriedades anti-inflamatórias, antimicrobianas e reguladoras do sistema imunológico, tornando-os alternativas atraentes aos medicamentos sintéticos na cavidade oral. A crescente popularidade dos enxaguantes bucais à base de ervas pode ser atribuída à sua eficácia contra patógenos orais e efeitos colaterais mínimos .
Remédios fitoterápicos demonstraram a capacidade de regular a produção de mediadores pró-inflamatórios, estabelecendo-se como alternativas mais seguras aos medicamentos anti-inflamatórios químicos. Várias ervas foram reconhecidas como alternativas viáveis para o manejo de condições orais como prevenção de cáries, gengivite, periodontite, úlceras orais e inflamação. Amla, cientificamente conhecida como Phyllanthus emblica, possui importância medicinal substancial no sistema de medicina Unani. Esta planta com componentes ativos compostos fenólicos, aminoácidos, taninos, alcaloides, vitaminas e carboidratos é renomada por seus efeitos terapêuticos na saúde do coração e do cérebro, e tem sido tradicionalmente empregada no tratamento de diversas condições como câncer, diabetes, doenças hepáticas e úlceras gástricas.
O extrato de amla foi identificado por suas propriedades antibacterianas contra patógenos orais, juntamente com atributos antioxidantes e anti-inflamatórios. Pesquisas indicam que o extrato metanólico de amla exibe notável eficácia antibacteriana contra patógenos orais como Streptococcus mutans, Streptococcus oralis e Streptococcus rattus, comumente associados a infecções orais . Além disso, os extratos de amla apresentam robusta atividade antioxidante, demonstrada por sua capacidade de neutralizar radicais livres e aliviar o estresse oxidativo. Adicionalmente, ensaios in vitro medindo a desnaturação da albumina e a inibição da 15-lipoxigenase revelaram os efeitos anti-inflamatórios dos extratos de amla .

A acerola, cientificamente conhecida como Malpighia emarginata, é uma fruta tropical renomada por seu alto teor de vitamina C e um espectro de compostos bioativos, posicionando-a como uma fonte valiosa de nutrição com potenciais benefícios à saúde e, dada sua natureza perecível, o manuseio pós-colheita adequado é considerado essencial para preservar a qualidade da fruta.

Apesar de seu valor nutricional e potenciais benefícios à saúde, a acerola permanece subutilizada em várias partes do mundo, tornando-a uma superfruta funcional um tanto negligenciada.

Notavelmente, o Brasil emergiu como um dos principais produtores de acerola, incorporando a fruta em diversos produtos como sucos, geleias e doces.

O extrato de acerola abrange uma gama diversificada de compostos fenólicos, como quercetina, ácido p-cumárico, ácido gálico, galato de epigalocatequina, catequina, ácido siríngico e epicatequina. Esses compostos desempenham um papel significativo na concessão de atividades antioxidantes e antibacterianas ao extrato.

Portanto, é de interesse explorar as propriedades antioxidantes, anti-inflamatórias, antibacterianas e citotóxicas dos extratos aquosos de Acerola e Amla.
Materiais e Métodos:
Estudo in vitro, Chennai, realizado entre maio e julho de 2023, pó de Amla e Acerola (Brut appett) liofilizado obtido da RMCA Ventures, Bangalore foram utilizados para este estudo.
Preparação do extrato vegetal:
Um total de 1g de pó de amla e 1g de pó de acerola foram pesados individualmente e então dissolvidos em 100mL de água destilada. Cada solução foi submetida a aquecimento usando uma manta de aquecimento, mantendo uma faixa de temperatura de 60-70 graus Celsius, por um período de 15-20 minutos. Subsequentemente, as soluções aquecidas foram filtradas separadamente usando papel de filtro Whatman nº 1 para eliminar quaisquer resíduos sólidos. Os extratos filtrados resultantes de amla e acerola foram então condensados individualmente até um volume final de 5mL sob as mesmas condições de temperatura. Os extratos concentrados obtidos dos pós de amla e acerola foram utilizados para testes subsequentes de aplicações biomédicas.
Atividade antioxidante:
O ensaio DPPH (2,2-difenil-1-picrilhidrazil) foi conduzido para avaliar a atividade antioxidante dos extratos de amla e acerola. Uma solução estoque de 0,1 mM de DPPH foi inicialmente preparada em metanol. Subsequentemente, uma nova solução de trabalho foi criada diluindo a solução estoque até uma concentração final de 20 µM em metanol. Várias concentrações (10, 20, 30, 40, 50 µg/mL) de ambos os extratos de amla e acerola foram adicionadas separadamente a 200µL da solução de trabalho de DPPH em poços individuais de uma placa de 96 poços. A placa foi então incubada no escuro por 30 minutos à temperatura ambiente. Após o período de incubação, a absorbância de cada poço foi medida a 517 nm usando um leitor de microplacas, com metanol servindo como branco. A porcentagem de atividade de sequestro de DPPH foi determinada usando a fórmula:
%DPPH Scavenging Activity = (Acontrol - Asample/Acontrol) x 100
Onde A controle representa a absorbância do controle (solução de DPPH sem a amostra) e A amostra representa a absorbância da amostra (solução de DPPH com extrato de amla ou acerola). O grupo controle positivo incluiu ácido ascórbico a uma concentração de 1 mg/mL.
Atividade anti-inflamatória:
A atividade anti-inflamatória comparativa dos extratos de amla e acerola foi avaliada utilizando o ensaio de desnaturação da Albumina Sérica Bovina (BSA). Neste ensaio, 0,45 mL de albumina sérica bovina foram combinados com 0,05 mL de diferentes concentrações (10-50 µg/mL) de ambos os extratos de amla e acerola. O pH da mistura foi ajustado para 6,3, e a solução foi deixada em repouso à temperatura ambiente por 10 minutos. Subsequentemente, as amostras foram incubadas em banho-maria a 55°C por 30 minutos. Diclofenaco sódico serviu como grupo padrão, enquanto dimetilsulfóxido (DMSO) foi utilizado como controle. Após o período de incubação, as amostras foram medidas espectrofotometricamente a 660 nm. O grau de inibição da desnaturação da BSA pelos extratos de amla e acerola foi determinado. Os resultados foram comparados com o padrão diclofenaco sódico e dimetilsulfóxido como controle. Em seguida, as amostras foram medidas espectrofotometricamente a 660 nm. A porcentagem de desnaturação proteica foi determinada utilizando a seguinte equação,
% inibição = Absorbância do controle - Absorbância da amostra x 100 Absorbância do controle
Atividade antimicrobiana:
A atividade antimicrobiana dos extratos de amla e acerola foi avaliada utilizando a técnica de difusão em poço de ágar. Placas de ágar Mueller Hinton foram esterilizadas e inoculadas com suspensões bacterianas de Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa e Escherichia coli. Poços foram criados no ágar, preenchidos com concentrações variadas (25 µL, 50 µL, 100 µL) de ambos os extratos, enquanto amoxirita serviu como padrão. Após incubação a 37°C por 24 horas, as zonas de inibição ao redor dos poços foram medidas utilizando uma régua. Os valores registrados foram então utilizados para calcular e comparar a eficácia antibacteriana dos extratos de amla e acerola com o antibiótico padrão, fornecendo insights sobre seus potenciais efeitos inibitórios no crescimento bacteriano.
Efeito citotóxico:
O ensaio de letalidade com Artêmia salina foi empregado para comparar os efeitos citotóxicos dos extratos de amla e acerola. Água salina foi preparada dissolvendo 2 gramas de sal sem iodo em 200 mL de água destilada, e 10 a 12 mL desta solução foram adicionados a cada poço de placas de ELISA de seis poços. Subsequentemente, 10 náuplios foram gentilmente introduzidos em cada poço, seguidos pela adição de várias concentrações de ambos os extratos de amla e acerola. As placas carregadas foram então incubadas à temperatura ambiente por 24 horas. Após este período de incubação, as placas de poços de ELISA foram examinadas, e a contagem de náuplios vivos foi registrada. A citotoxicidade foi calculada utilizando a fórmula:
Número de náuplios mortos / (Número de náuplios mortos + Número de náuplios vivos) x 100
Resultados e Discussão:
Atividade anti-inflamatória:
Ensaio de desnaturação da albumina sérica bovina:
Na Figura 1, os efeitos anti-inflamatórios dos extratos de Amla e Acerola foram avaliados em diferentes concentrações (10µl a 50µl) em comparação com o diclofenaco sódico padrão. A 10µl, ambos os extratos apresentaram respostas anti-inflamatórias mais baixas (40% para Amla, 43% para extrato de Acerola) em comparação com o padrão (47%), com a Acerola demonstrando um efeito ligeiramente maior. Essa tendência continuou conforme as concentrações aumentaram: a 20µl, o extrato de Amla atingiu 51%, o extrato de Acerola 53% e o padrão 60%; a 30µl, o extrato de Amla atingiu 64% de inibição, o extrato de Acerola cerca de 68% e o padrão 72%; a 40µl, os extratos de Amla e Acerola registraram valores de 72% e 74%, respectivamente, abaixo do padrão (78%); e a 50µl, o extrato de Amla atingiu 77%, o extrato de Acerola 81%, ambos abaixo do padrão (84%). O extrato de Acerola superou consistentemente o extrato de Amla em todas as concentrações, indicando um aumento sustentado dependente da concentração das propriedades anti-inflamatórias. Esses achados sugerem que o extrato de acerola pode servir como um agente anti-inflamatório mais potente em comparação tanto com o extrato de amla quanto com o padrão em todo o espectro de concentrações estudado.
Atividade antioxidante:
Ensaio DPPH:
O estudo investigou os efeitos dependentes da concentração dos extratos de Amla e Acerola usando o ensaio DPPH (Figura 2) em uma faixa de concentrações (10µl a 50µl). Começando em 56,8% para 10µl, a resposta dependente da concentração do extrato de Amla foi evidente. Os valores aumentaram gradualmente, atingindo 89,58% a 50µl.
Da mesma forma, o extrato de Acerola exibiu um efeito dependente da concentração. Os valores começaram em 60,39% para 10µl e aumentaram progressivamente para 91,62% a 50µl. O aumento consistente nos valores indica que o extrato de Acerola, assim como o extrato de Amla, influencia o efeito antioxidante de maneira dependente da concentração. Em cada ponto de concentração, o extrato de Amla apresentou consistentemente valores mais baixos do que o extrato de Acerola. Essa discrepância sugere que, em concentrações equivalentes, o extrato de Acerola pode ter um efeito antioxidante mais potente em comparação com o extrato de Amla. Além disso, a taxa de aumento nos valores variou entre os dois extratos. Enquanto o extrato de Amla exibiu uma progressão relativamente estável, o extrato de Acerola demonstrou um aumento ligeiramente mais acentuado. Essa diferença nas inclinações das curvas de resposta à concentração implica que o extrato de Acerola pode ter um impacto mais rápido e pronunciado à medida que a concentração aumenta.
Atividade antibacteriana:
Técnica de difusão em ágar:
O extrato de amla (Figura 3) demonstrou um efeito antibacteriano dependente da concentração contra Staphylococcus aureus. Nas concentrações de 25µl, 50µl e 100µl, as zonas de inibição foram medidas em 13mm, 17mm e 20mm, respectivamente. O aumento na zona de inibição sugere que concentrações mais altas de extrato de amla se correlacionam com uma maior supressão do crescimento de Staphylococcus aureus. O extrato de amla exibiu atividade inibitória significativa contra Pseudomonas. As zonas de inibição foram observadas em 20mm, 21mm e 22mm para as concentrações de 25µl, 50µl e 100µl, respectivamente. Isso indica um aumento progressivo na eficácia antibacteriana com concentrações mais altas de extrato de amla. Contra Escherichia coli, o extrato de amla demonstrou efeitos antibacterianos pronunciados. As zonas de inibição foram medidas em 12mm, 14mm e 20mm para as concentrações de 25µl, 50µl e 100µl, respectivamente. Os resultados sugerem que o extrato de amla tem um impacto notável na inibição do crescimento de Escherichia coli, com aumento da potência em concentrações mais altas.
O extrato de acerola (Figura 3) apresentou atividade antibacteriana contra Staphylococcus aureus. As zonas de inibição foram de 21mm, 22mm e 26mm para as concentrações de 25µl, 50µl e 100µl, respectivamente. A tendência crescente nas zonas de inibição indica uma resposta dependente da dose, sugerindo um potencial aumento das propriedades antibacterianas relacionado à concentração. Semelhante ao seu impacto em Staphylococcus aureus, o extrato de acerola exibiu efeitos inibitórios contra Pseudomonas. As zonas de inibição medindo 14mm, 16mm e 20mm para as concentrações de 25µl, 50µl e 100µl, respectivamente. Os resultados sugerem que o extrato de acerola possui atividade antibacteriana significativa contra Pseudomonas, com concentrações mais altas levando a zonas de inibição maiores. O extrato de acerola também apresentou notável eficácia antibacteriana contra Escherichia coli. As zonas de inibição foram medidas em 12mm, 17mm e 27mm para as concentrações de 25µl, 50µl e 100µl, respectivamente. O aumento dependente da concentração nas zonas de inibição sugere um potente efeito antibacteriano, com concentrações mais altas de extrato de acerola exibindo maior atividade inibitória contra Escherichia coli.
A amoxirita, o antibiótico testado, apresentou atividade antibacteriana significativa contra os patógenos orais selecionados. No antibiótico testado contra Staphylococcus aureus, as zonas de inibição permaneceram consistentemente substanciais, medindo 37mm, 40mm e 37mm nas concentrações de 25µl, 50µl e 100µl, respectivamente. A amoxirita apresentou efeitos inibitórios variados com zonas de 17mm, 11mm e 40mm nas concentrações de 25µl, 50µl e 100µl, contra Pseudomonas, sugerindo uma resposta dependente da concentração. Particularmente notável foi sua atividade antibacteriana contra Escherichia coli, mantendo zonas de inibição substanciais de 37mm, 40mm e 37mm para as concentrações de 25µl, 50µl e 100µl.
Ensaio de letalidade com Artemia salina:
No ensaio de letalidade com Artemia salina, os efeitos citotóxicos dos extratos aquosos (AQ) de Amla e Acerola (Figura 4) foram sistematicamente avaliados em diversas concentrações (5 µl a 80 µl). O grupo controle apresentou 100% de viabilidade tanto no Dia 1 quanto no Dia 2, estabelecendo uma linha de base para comparação. Notavelmente, o extrato de Amla demonstrou uma redução mais pronunciada na viabilidade dos náuplios de Artemia salina em comparação ao extrato de Acerola. Na concentração mais alta (80 µl), o extrato de Amla resultou em uma redução substancial de 90% nos náuplios vivos, evidenciando um potente efeito citotóxico dose-dependente. Por outro lado, o extrato de Acerola exibiu uma redução de 80% na mesma concentração. Esses achados sugerem um impacto citotóxico diferencial dos dois extratos, indicando a necessidade de uma exploração mais aprofundada de seus constituintes químicos específicos e potenciais aplicações em pesquisa biomédica.
Discussão:
O estudo apresentado investigou as atividades antioxidante, anti-inflamatória e antimicrobiana comparativas de extratos aquosos derivados de Acerola e Amla. No potencial anti-inflamatório de ambos os extratos utilizando o ensaio de desnaturação da albumina sérica bovina, a Acerola superou consistentemente a Amla em todas as concentrações, sugerindo um aumento sustentado das propriedades anti-inflamatórias dependente da concentração. Os resultados revelam que o extrato de Acerola pode servir como um agente anti-inflamatório mais potente em comparação tanto com o extrato de Amla quanto com o padrão diclofenaco sódico. O ensaio DPPH foi empregado para avaliar as atividades antioxidantes dos extratos de Amla e Acerola. Ambos os extratos demonstraram efeitos antioxidantes dependentes da concentração, com a Acerola apresentando consistentemente valores mais altos do que a Amla em concentrações equivalentes. O estudo indica que o extrato de Acerola pode possuir um efeito antioxidante mais potente em comparação com o extrato de Amla em todo o espectro de concentrações estudado. Além disso, a taxa de aumento dos valores antioxidantes variou, com o extrato de Acerola mostrando uma progressão ligeiramente mais acentuada e rápida, sugerindo um impacto potencialmente mais rápido e pronunciado à medida que a concentração aumenta. No método de difusão em ágar para atividades antibacterianas dos extratos de Amla e Acerola contra patógenos orais, o extrato de Amla apresentou efeitos antibacterianos dependentes da concentração contra Staphylococcus aureus, Pseudomonas e Escherichia coli. O extrato de Acerola demonstrou consistentemente zonas de inibição maiores, indicando um potencial aumento das propriedades antibacterianas relacionado à concentração. Os achados sugerem que o extrato de Acerola pode ser um agente antibacteriano mais potente em comparação com o extrato de Amla em várias concentrações. Os resultados sobre os efeitos citotóxicos de Amla e Acerola avaliados usando o ensaio de letalidade com Artemia salina indicam um efeito citotóxico dose-dependente para ambos os extratos, com a Amla exibindo uma redução mais pronunciada na viabilidade dos náuplios de Artemia salina em comparação com a Acerola. Esse impacto citotóxico diferencial enfatiza a necessidade de uma exploração mais aprofundada dos constituintes químicos específicos dentro dos extratos e suas potenciais aplicações em pesquisa biomédica. Os extratos aquosos de Acerola e Amla foram identificados como fontes ricas de potentes antioxidantes, agentes anti-inflamatórios e compostos antimicrobianos.
Extratos de acerola, abundantes em ácido ascórbico e compostos fenólicos, exibem atividade antioxidante significativa, juntamente com alguns efeitos antimicrobianos. Da mesma forma, extratos de amla, caracterizados por altos níveis de vitamina C e polifenóis, atuam como antioxidantes robustos, inibindo a peroxidação lipídica e preservando a atividade das enzimas antioxidantes. A proeza antioxidante dos extratos de acerola é atribuída ao seu elevado teor de vitamina C, índice de fenóis totais e compostos polifenólicos. Extratos de amla demonstraram atividades adicionais anticolagenase e antielastase, reforçando suas propriedades anti-inflamatórias. Esses achados de pesquisa, em conjunto, ressaltam o potencial significativo dos extratos de acerola e amla como reservatórios naturais de antioxidantes e agentes antimicrobianos, oferecendo caminhos promissores para exploração adicional nos campos da saúde e da medicina.

No geral, esta análise abrangente sugere que o extrato de acerola geralmente supera o extrato de amla em termos de atividades anti-inflamatória, antioxidante e antibacteriana. No entanto, o impacto diferencial na citotoxicidade levanta considerações importantes para a segurança geral e as potenciais aplicações terapêuticas desses extratos.
Conclusão:
Os dados mostram que o extrato de acerola supera consistentemente o Amla em múltiplos ensaios, demonstrando sua eficácia como um potente agente anti-inflamatório e antioxidante. As atividades antibacterianas superiores da Acerola, particularmente contra patógenos orais prevalentes, destacam seu potencial para aplicações terapêuticas no combate a infecções bacterianas. Por fim, embora a Acerola surja como uma fonte promissora de benefícios farmacológicos multifacetados, a interação detalhada entre eficácia e citotoxicidade exige uma consideração equilibrada de suas aplicações.
Editado por P Kangueane
Citação: Nalina Kumari et al. Bioinformation 20(7):765-770(2024)
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Referências

• Atividade anti-inflamatória do extrato de amla e acerola usando ensaio de desnaturação da albumina sérica bovina
• Atividade antioxidante do extrato de amla e acerola testada pelo ensaio DPPH
• Atividade antibacteriana do extrato de amla e acerola contra patógenos orais testada pela técnica de difusão em poço de ágar
• O efeito citotóxico do extrato de amla e acerola usando ensaio de letalidade com Artemia salina